Роздал 3. Ветеринарна м)кробюлопя
123
ALGORITHM OF ACTIVIT1E OF THE SPECIALISTS IN THE VETERINARY SYSTEM OF KAZAKHSTAN IN DIFFERENT
SITUATIONS OF ESPECIALLY DANGEROUS INFECTIONS ORIGIN
Mamadaliev S.M., Orynbaev M.B., Savinkov A.F., Belousov V.Yu., Rystayeva R.A., Kerimbaev A.A.
Rl of Biological Safety Problems of MSS, Republic of Kazakhstan
- gcnthm of activities of specialists in the veterinary system of Kazakhstan in different situations of origin of especially dangerous
infections is ■ in the paper.
О
519.616.615.724.8.559.59
РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
НОВОГО ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПРЕПАРАТА
Мамадулаее
Г.Х.
Узбекский научно-исследовательский институт ветеринарии,
г.
Самарканд
Нуриддинова
Н.
Узбекский национальный
университет
им. М.
Улугбека, г. Ташкент
: "оледние годы
наблюдается
тенденция распространения
лекарственно-устойчивых микобактерий, что
является
одной
«
т '-ин
неэффективности проводимой специфической
химиопрофилактики.
Так,
среди больных туберкулезом возросло
<
людей,
выделяющих микобактерии
с
множественной
устойчивостью к противотуберкулезным препаратам
[1,
4].
Педики различают МЛУ-туберкулез и
ШЛУ-туберкулез. МЛУ-туберкулез
-
особая форма заболевания
с
множественной
» з:
геенной устойчивостью.
Развиваются случаи устойчивости микобактерий туберкулёза как минимум
к
двум
самым мощ-
*
“оотивотуберкулезным препаратам.
--
туберкулез
-
форма заболевания
с
широкой лекарственной устойчивостью.
При
этом к свойствам МЛУ-туберкулеза
Ж
сееляется
и невосприимчивость
и
к антибиотикам-фторхинолонам и, как минимум, к одному из
трех
инъекционных препа-
Ғе
второго
ряда лечения.
Появление
лекарственно-устойчивых популяций микобактерий обусловлено биологическим законом отбора и
приспособ—
-
микроорганизмов
при лечении антибактериальными препаратами. Нерациональное лечение приводит
к тому, что
боль-
1
-
"юди
остаются носителями устойчивых популяций микобактерий, это способствует
размножению устойчивых мутантов
2
Т
создает риск распространения инфекции среди здоровых людей и животных, и появления новых форм лекарственно-
г:
чивых возбудителей туберкулеза.
/
следования
ВОЗ,
охватившие 35 стран мира
(1994-1
997 гг.) показали высокую частоту устойчивости микобактерий тубер-
■ та
к противотуберкулезным препаратам.
: -
ггывая актуальность этой проблемы, была поставлена задача создания и разработки нового лекарственного средства, об-
жэощего
не только антибактериальной, но и им му
но
модулирующей активностью, на
основе
местного
растительного сырья.
z связи
с этим, целью нашего
исследования
явилось изучение эффективности
нового противотуберкулезного препарата -
базид-
МАСКГ».
Этот
препарат был разработан
совместно
сучеными Ташкентского национального университета для спе- . о ческой
химиотерапии и химиопрофилактики туберкулеза человека и животных.
■«'=-ериаль!
и
методы.
При создании препарата
«Тубазид-МАСКГ» была впервые использована
технология молекулярного
капсулиро-
э*
- для
получения супрамолекулярных
комплексов тубазида,
фтивазида
с производными глицирризиновой
кислоты
и некоторых
поли-
ЕМЮС
носителей.
глученный
супрамолекулярный комплексный
препарат
«Тубазид-МАСКГ» (комплексное соединение)
представляет собой
аморфный
т: т-ок
желтовато-белого цвета. Температура плавления препарата равна 195-С (Т = +195°С), он растворим в воде с образованием геля
■. г-тентрации 1 %
и более), а также растворим в водно-этаноловом растворе (1:1).
_"я определения специфической активности препарата
воспользовались
бактериологическим методом, путем выращивания микобакте-
>а>
-а
питательных
средах
с различным содержанием концентрации
препарата.
При
этом применяли 2 метода:
_ прямой метод - посев соответственно обработанных колоний туберкулёза с различными концентрациями препарата на питательные среды.
:
непрямой
метод
-
пересев
культур
микобактерий
туберкулеза на
среды,
содержащие различные концентрации
препарата.
Перед опытом
готовили рабочие
разведения препарата
в
следующих концентрациях:
' Однопроцентный раствор препарата на дистиллированной воде.
Z
Однопроцентный раствор препарата на
этаноле.
2 двухпроцентный раствор препарата на дистиллированной воде.
- Двухпроцентный
раствор препарата на
этаноле.
; -ачестве эталона изучения специфической активности препарата использовали штамм микобактерий M.tuberculosis - МБТ Humanis
_Г’.!м
МБТ
М.
bovis.
2ля
осуществления прямого бактериологического метода
предварительно бактериальную
массу штамма
МБТ
Humanis
и
М.
bovis
поедали в
пробирки, где
содержались
указанные концентрации препарата.
После
этого бактериальную суспензию на растворе препарата нг.бировали
в
термостате при
37°С
в течение
3-5
часов и 1-х суток. С истечением срока инкубации
бактериальную
массу
дважды
отмывали физиологическом
растворе путем центрифугирования.
Из
осадка центрифугата
делали посевы на
питательные
среды Гельберга.
ри непрямом методе бактериологического
исследования
специфической
активности
препарата из культуры
МБТ
Humanis и М.
bovis тзлали
пересевы на
питательные среды Гельберга
с
содержанием
препарата
в
вышеуказанных концентрациях,
Элее проводили
эксперименты по изучению специфической
активности препарата «Тубазид-МАСКГ» на 24 морских свинках,
которые
'-
~у
разделены на
8 групп
по
3
головы в
каждой.
.еред опытом морские
свинки
были исследованы на
туберкулез аллергическим методом.
Туберкулин
вводили
морским
свинкам в
дозе - ~Е
внутрикожно. Перед введением препарата участок кожи готовили - выстригали шерсть и обрабатывали 70 %-ным спиртом. Учет ре- а проводили через
48 часов после введения туберкулина. В результате проведенного исследования не было отмечено положительно аеапщующих
на
ППД-туберкулин
животных.
’осле этого
всех
морских свинок
заражали вирулентными
штаммами микобактерий
М. bovis
и M.tuberculosis в
дозе
0,03 мг/кг, подкожно.
ВЕТЕРИНАРНА МЕДИЦИНА
випуск
94, 2010р
124
Результаты
исследований.
Для
изучения непосредственного влияния препарата на штаммы
МБТ
Humanis и
МБТ
М.
bovis
в
стерильных условиях
были
приготовлены 0,5; 1,0 и
2,0
%-
ные растворы препарата.
Вышеуказанные штаммы в
приготов
ленных
растворах были инкубированы при 37°С
в
термостате
в
течение 30 минут, 1
и 2
часов, затем
обработаны
по
методу
Гон-
Левенштейн-Сумиоши
и
высажены на питательные среды Гельберга (первый
метод).
Одновременно
растворы
препара
тов
различной концентрации были высеяны непосредственно
на
питательные среды
Гельберга
(второй
метод). В
качестве
контроля
на
питательные
среды были
высеяны штаммы МБТ-Humanis и
МБТ
М. bovis без
добавления
препарата. Наблюдения велись
90
дней.
В
результате исследований обнаружено, что
в
обоих
методах
обработанный препаратом различных концентраций штамм
микобактерий не образуют
на
питательных средах бактериальную массу, тогда как
в
контрольной группе во
всех
пробирках был
рост
микобактерий туберкулёза. Штаммы,
обработанные препаратом
не обнаружены
и
бактериоскопически (увеличение 12 х 90 и
12
х 100), тогда
как в контрольных
мазках
обнаружены
туберкулезные палочки.
Как
показали бактериологические исследования препарат
«Тубазид-МАСГК» оказал бактерицидное
и бактериостатическое
действие на штаммы микобактерии туберкулеза.
Эксперименты по определению специфической активности препарата ставили на морских свинках, предварительно иссле-
дованных
на туберкулез аллергическим методом. Для этого
использовали
ППД-туберкулин
Курской
биофабрики в соответствии с
наставлением. Положительно
реагирующих
животных выявлено
не
было.
Было
изучено влияние препарата
на
морфологию внутренних органов животных, восприимчивых к туберкулезу.
Предварительно все животные проходили карантинное наблюдение
в течение
месяца, затем
животные отбирались
для
экспе-
риментальных исследований.
Все животные
содержались
в
одинаковых условиях вивария
и
получали одинаковый рацион.
Все опытные
животные были
разделены на 8
групп: животные 1-й,
2-
й
и
3-
й
группы были
заражены МБТ-
Humanis, получали
препарат
в дозе 5,
10 и
20
мг/кг,
животные 4-й,
5-
й
и 6-й группы заражали штаммом
МБТ
bovis и
препарат
задавали в
доза =
5,
10 и
20 мг/кг;
7-
й группе животных после заражения для сравнения
задавали
препарат изониазид
в дозе
10 мг/кг.
8-
я
и 9-я
группы
служили контролем: и
соответственно
заражали М. bovis и M.tuberculosis. Контрольные животные
после
заражения
не
получили
препарат.
После заражения опытным
животным
препарат
вводили через
день
в
течение 3
месяцев. После
завершения опыта
все
опытные
и контрольные животные
в состоянии
наркоза
этаминалом
натрия были
обезглавлены.
У них вскрыва
ли
грудо-брюшную
полость
и осматривали органы:
желудок,
тонкую кишку,
печень,
почки, селезенку, сердце,
легкие
и др.
Как показали результаты исследований,
все
животные, получавшие препарат, не заболели туберкулезом,
а
животные
кон-
трольных групп
(не получавшие
препарат) заболели. Инфицирование и болезнь были установлены при вскрытии животные
контрольной
группы.
У них обнаружена
генерализованная
форма туберкулеза с
казеозным
распадом, поражены паренхиматозные
органы
-
легкие,
печень, почки,
селезенка. После соответствующей гистологической обработки тканевые
срезы
был/
окрашены
гемотоксилин-эозином и просмотрены под световым микроскопом Zeleica фирмы
Leitz
Biomed (Португалия).
Гистологическая
картина легкого
подопытных животных, зараженных туберкулезом после
лечения
препаратом «Тубазид-
МАСКГ» в
дозе 10 мг/кг:
под
микроскопом выявляется поперечный срез доли легкого. На гистопрепарате отчетливо выделя
ется
хорошо сохранившаяся висцеральная, плевра в
виде
тонкой соединительной пластинки, покрытой сверху плоскими кпе" ками.
Легочная ткань представлена многочисленными альвеолами, просвет которых
умеренно
расширен, стенка
их
тонка- и изнутри
выстлана уплощенными эпителиальными клетками,
ядра
которых также имеют
вытянутую
форму. Межальвеоляр
ные
перегородки
представлены умеренно развитыми соединительно-тканными элементами,
содержащими
единичные
кле
точные
элементы.
В
толще этой ткани
расположены
многочисленные
кровеносные
капилляры,
в просвете
которых выявляются форменные элементы
крови. Мелкие бронхи выстланы однослойным кубическим реснитчатым эпителием,
цитоплазма
их окрашена оксифильно, ядра
имеют удлиненную форму. В
более
крупных бронхах стенки их имеют аналогичное
строение
однако
в
просвете их выявляется
клеточный
детрит, слизь
и
цилиндры.
В средних
и крупных бронхах хорошо
выделяются
все оболочки, эпителий многорядный
мерцательный, с
примесью
бока-
ловидных
клеток,
собственная пластинка
содержит
большое число
кровеносных
сосудов, подслизистая и фиброзно-хрящевая
оболочки имеют обычное строение.
Следует отметить,
что
наряду
с
обычным строением, отдельные участки представлены спавшейся легочной тканью, цент-
ральная
часть
которой состоит
из
разросшейся соединительной
ткани,
которая густо инфильтрирована лимфогистиоцитарнь -
ми
элементами.
Других,
патоморфологических изменений,
не
выявлено.
В
целом, анализ проведенных исследований
позволяет
заключить, что при
введении
препарата «Тубазид-МАСКГ», структура
легкого
значительно лучше сохранена, чем при
введении
изониазида. При этом легочная ткань
имеет
такую же структуру,
ка*
обычно
в
норме,
но
содержит небольшие участки
со
спавшимися альвеолами
и
разросшейся
соединительной тканью, инфильтри-
рованной лимфогистиоцитарными элементами, что свидетельствует о рубцевании ранее патологически измененных участков.
Сравнительное изучение по морфологии внутренних органов печени, почки,
селезенки
и легкого
в
сериях
опытов с введе
нием
противотуберкулезного препарата позволило
установить,
что более высоким лечебным эффектом обладает комплек:- ное
соединение «Тубазид-МАСКГ» в сравнении с изониозидом.
В
контрольной
группе животных легочная ткань диффузно поражена, в состоянии хронического воспалительного процес
са,
большая часть
альвеол спавшаяся
или
замещена
соединительной
тканью, местами
выявляются
свежие очаги некроза
В
целом,
вся ткань диффузно инфильтрирована лимфогистиоцитарными элементами.
В
седьмой группе животных,
где в
качестве лечебного
средства
применялся изониазид,
легочная ткань
выглядела
не
сколько
лучше, чем
при
применении испытуемого препарата. В легких большинство альвеол умеренно расширены и
име-:
-
обычное
строение.
Вместе с
тем,
в
обширных участках ткани
легкого
обнаруживали
признаки
хронического воспалительно::
явления,
где
просветы альвеол
не выявляли
и они замещены соединительной тканью, более
того,
инфильтрированы
клеточ
ными элементами.
Следует отметить,
что пораженные участки
постепенно
переходят в нормальную окружающую ткань.
Таким образом,
во
внутренних органах
зараженных
туберкулезом животных, после введения препарата «Тубазиг- МАСКГ»
патологические изменения, характерные для туберкулеза, не обнаружены,
и
наоборот,
во
внутренних
органах
(печени, легких,
селезенке, почках и местах заражения) животных контрольной группы выявлены характерные для туберкулеза некротические
изменения.
Роздш 3. Ветеринарна м/кробюлопя
125
J
тытах на
лабораторных животных показано, что наиболее эффективной лечебной дозой препарата «Тубазид-МАСКГ»
■1
I.
л 10
мг\кг.
5&воды.
*
Е ходе
экспериментальных исследований нового препарата против туберкулеза было установлено, что данный суп-
Ж
--
..тярный
комплекс «Тубазид-МАСКГ» обладает бактериостатическими и бактерицидными свойствами
в
отношении
» :
ых
штаммов
МВТ М. bovis и М.tuberculosis в концентрациях
1,0 %
и 2,0
%.
I
_ Результаты проведенных гистологических исследований позволяют заключить, что «Тубазид-МАСКГ» в дозах 10 мг/кг и ■»х
является
безопасным средством.
1.
тгановлено,
что длительное его применение не вызывает заметных структурных деструкций
или
повреждений,
и
этот
жгнзат
может
быть рекомендован для дальнейших клинических испытаний.
-
5 опытах на лабораторных животных показано, что наиболее эффективной лечебной дозой препарата «Тубазид-МАСКГ»
оя
10 мг/кг.
Список
литературы
Клиенко, М.Т. Биологические особенности микобактерий туберкулеза, полирезистентных к противотуберкулезным препаратам /
Клименко
II
Проблемы
туберкулеза. - 1984 - № 12. - С. 60-63.
2.
Мамадуллаев, Г.Х. Проблемы лекарственной устойчивости микробактерий-туберкулеза
//Мониторинг
распространения
и
предотвращения особо опасных болезней животных //Материалы Международн. научн.
конф
- Самарканд, 2001. С.
101-103. 3.
Першин, Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии
-
М„
“Медицина”
-
1971. - С. 171-184.
Пмлиак,
А.А.
и
др. Тенденция в развитии лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза
II
Проблемы туберкулеза.
-
1985.
-
№8
1 -9-51 5. Суркова, Л.К., Дюсьмикеева, М.И., Василевский, А.Г. Определение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза в .«
_
беркулезного воспаления // Рубрика 76.29.53. НИИ пульмонологии и фтизиатрии М3 РФ. 2003.
RESULTS OF STUDY OF SPECIFICAL ACTIVITY OF NEW PREPARATION AGAINST TUBERCULOSIS
Mamadullaev G.H.,
Uzbek Scientific Research Institute of Veterinary. Samarkand,
Nuriddinova N.
Uzbek National
University named after M. Ulugbek, Tashkent
fcute
of
laboratory test of new preparation Tubazid-MASKG against tuberculosis are presented
in
the
article.
Specifically activity
of preparation
t
яоед. bacteriological
and histological test on the different laboratorial animals.
*e-=
was determined
that preparation Tubazid-MASKG has specifically
activity
against mycobacterium of
tuberculosis,
harmless
for laboratorial
»rj
-
and not cause structural
changes
in
organism.
ПРОТИМ1КРОБНА AKTHBHICTb СТИРИЛОВИХ БАРВНИК1В
HA OCHOBI ПОХ1ДНИХ ОКСОТЕТРАГ1ДРОАКРИДИН1В
Мельник M.B., Яремчук Д.О., Волянський А.Ю., Кучма 1.Ю., Маргтросян I.O., Маланчук С.Г.,
Вальчук C.I., М1з1н В.В., Балута I.M., Черняева Т.А., Руденко Л.М.
1вано-Франк1вська
державна
медична академ/я,
м.
1вано-Франк1вськ,
ДУ
«iHcmumym
мжробюлогн
i 1мунологп
1м.
1.1.
Мечикова
АНМ Укра!ни», м.
Харк1в,
В1тебський
медичний
университет МОЗ Беларусь
м.
В/'тебськ
2
"эямований синтез б!олог!чно активних речовин та створення програм ефективного пошуку вимагае реальних дослщжень
ж—
<м1кробноТ активност!
потенфально
активних клас!в
сполук
та Гх похщних, що
мютять pi3Hi
функфональн! групп.
Здомо,
що похщн! х1нол1ну проявляють протимжробну
активнють
до ргзного роду патогенних м!кроорган1зм1в
[1,2].
Речо
ва
що
мютять
акридинове юльце можна розглядати як похщн!
х!нол!ну, а отже,
I як потенфально
бюлопчно
активы речо-
а-
1
Синтез
акридинв, як!
мютять
р!знг активы
групи,
зд!йснений взаемодгею ряду
вторинних
ароматичних
ам!н!в
з фор- агъдепдом I
цикл!чним
1
,3-
дикетоном
-
д!медоном в
прйсутност!
м!неральних
кислот I
нтробензолу, що служить одночасно
хзчинником !
оксидником
[3].
В
одержаних таким чином солей оксотетрагщроакридиыю
(1-
9) вже
означена протимжробна
аг-/вн1сть
[4].
1)
метиленову
трупу,
приеднану
до
а-положення шридинового
к!льця, що
прояв
ляв
С-Н-кислотн! властивост!; 2) електроф!льне
а-
положення
шридинового
к!л
ьця; 3) електрофшьний атом
вуглецю
карбон!льноТ групи.
Наявысть
електроф!льного
он!евого
атома азоту
в
катюнах солей (1-9) приводить до
нер!вном!рного розподшу електронноГ
густини.
Розрахунок останньоТ
методом
Хюккеля,
проведений
нами
[5],
показав,
що ci-1 у-
положения п!ридинового
к!льця
характер
изуються м!н1мальною
тт-електронною
густиною. Метильн!
та метиленов!
групи, приеднан!
до
таких
положены,
проявляючи властивост! СН-кислот, набувають
шдвищено!
реакфйноТ здатност!.
У
зв’язку з цим проведено дослщження взаемоди вище вказаних солей азотис- тих
гетероцикл!в з п-диметилам!нобензальдепдом (ДМАБА). Реакфю проводи
ли в
ргзних
розчинниках:
в
спиртах з каташтичними юлькостями птеридину чи эеоедовищ!
останнього за наведеною схемою:
Ш
1
Ш
11
и
!i.
I'
п
Я
A
i'i
V
h
l rt Ф
L
I
.: J
Q
515.281:547.8351.012.1
Сэслщження електронноТ будови [5] кат!он1в солей оксотетрапдроакридин1ю (1-9) виявили в них три реакфйн! центри:
т.-етаноламну, а
також без катал!затор!в
у шридин!
та
оцтовому анпдрид! [6].
Встановлено,
що
реакфя перебюае
тшьки в
