Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №4 (104) 155
УДК: 577.114:615.2-092.4
ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА КАВЕРГАЛ НА ФЕНОТИП И ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ
НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ОСТРОЙ КРОВОПОТЕРЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
М.В. ЗАЛЯЛИЕВА
1
, Н.Н.МИРАХМЕДОВА
1
, З.И. АХМЕДЖАНОВА
1
, З.А. ХУШБАКТОВА
2
1 - Республиканский научный центр иммунологии МЗ РУз,
2 - Институт химии растительных веществ АН РУз (Ташкент)
ТАЖРИБА ШАРОИТИДА ЎТКИР ҚОН ЙЎҚОТИШДА КАВЕРГАЛ ДОРИ ВОСИТАСИНИНГ
НЕЙТРОФИЛ ХУЖАЙРАЛАРИНИ ФЕНОТИПИ ВА ФАГОЦИТАР ФАОЛЛИГИГА
КЎРСАТГАН ТАЪСИРИ
М.В. ЗАЛЯЛИЕВА
1
, Н.Н. МИРАХМЕДОВА
1
, З.И. АХМЕДЖАНОВА
1
, З.А. ХУШБАКТОВА
2
1 - ЎзР ФА Иммунология ва инсон геномикаси институти (Тошкент),
2 - ЎзР ФА Ўсимлик моддалари кимёси институти, (Тошкент)
THE INFLUENCE OF “CAVERGAL” ON THE PHENOTYPE AND
PHAGOCYTIC ACTIVITY OF
NEUTROPHILS DURING ACUTE BLOOD LOSS IN EXPERIMENT
M.V. ZALYALIEVA
1
, N.N. MIRAKHMEDOVA
1
, Z.I. AKHMEDJANOVA
1
, Z.A. KHUSHBABACTOVA
2
1 - Republican Scientific Center of Immunology of the Ministry of Health of the Republic of Uzbekistan,
2 - Institute of Chemistry of Plant Substances of the Academy of Sciences of Uzbekistan (Tashkent)
Ўткир қон йўқотиш сабабли кузатилган нейтропенияда маҳаллий Кавергал дори воситасинг
нейтрофил хужайраларини функционал фаоллигига кўрсатган таъсири ўрганилди. Кавергални юзаки
рецепторларга (CD16, CD45, CD95) кўрсатган мусбат ва ҳимояловчи таъсири аниқланди.
Калит сўзлар
: юзаки рецепторлар, нейтрофиллар, фагоцитар фаолият, ўткир қон йўқотиш,
тажриба.
We researched the influence of the “Cavergal” on the functional activity of neutrophils during neutro-
penia caused by acute blood loss. A positive and protective effect of a “cavergal” on surface receptors (CD16,
CD45, CD95) and phagocytic activity of neutrophils was found.
Key words
: surface receptors, neutrophils, phagocytic activity, acute blood loss.
Актуальность
. Нейтрофильные гранулоци-
ты (НГ) являются уникальной, быстрореагирую-
щей популяцией клеток иммунной системы, отно-
сящейся к врожденному иммунитету. НГ облада-
ют важными функциональными возможностями,
которые позволяют активировать и регулировать
адаптивный иммунный ответ и воспаление [1, 3,
7, 9]. В настоящее время НГ признаны антиген-
презентирующими клетками, способными к диф-
ференцировке и активации ядра – реструктуриза-
ции хроматина, экспрессии многочисленных ге-
нов, синтезу и секреции цитокинов, хемокинов,
ростовых факторов и различных пептидов [2, 3, 4,
9, 10]. Широкие функциональные возможности
НГ реализуются благодаря мощному рецепторно-
му аппарату, обеспечивающему взаимосвязь как
непосредственно в системе НГ, так и с клетками
эндотелия, эпителия, иммунной системы и раз-
личными тканями. НГ оснащены богатым репер-
туаром рецепторов, которые позволяют реагиро-
вать на малейшие изменения иммунного гомео-
стаза.
На мембране НГ экспрессируется комплекс
адгезионных молекул, рецепторов к различным
лигандам: цитокинам, иммуноглобулинам, мем-
бранным молекулам других клеток, различных
антигенных детерминант (МНС1; селектины и их
рецепторы; интегрины и их рецепторы; рецепто-
ры для хемокинов, Fc- рецепторы, CD116, CD18,
CD10, CD15, CD16, CD32, CD64 и др. [2, 3, 7, 9].
Фагоцитарная и микробицидная функции НГ, в
том числе и вирусоцидная, находятся в непосред-
ственной зависимости от фенотипических осо-
бенностей: количества и плотности экспрессиру-
емых рецепторов.
Функциональные возможности нейтро-
фильных гранулоцитов определяются их внутри-
клеточными метаболическими процессами, среди
которых ключевую роль ведут процессы свобод-
норадикального окисления и образования актив-
ных форм кислорода. Предупреждение свободно-
радикальных реакций осуществляет антиокси-
дантная система организма, препятствующая кас-
кадному радикалообразованию в иммунокомпе-
тентных клетках, прежде всего в фагоцитах [1, 6,
8]. Подобная взаимосвязь иммунной и антиокси-
дантной систем определяет надежность их сов-
местной деятельности [6, 8].
Но любое изменение одной системы обяза-
тельно приводит к изменениям в другой, что тре-
бует соответствующей коррекции. Препарат Ка-
вергал обладает антигипоксическим, кардиопро-
текторным и антисклеротическим действием.
Экспериментальными исследованиями установ-
лено, что Кавергал по антиоксидантному эффекту
и влиянию на NO-эргическую систему животных
с изадриновым некрозом был вполне сопоставим
с милдронатом [5].
Цель исследования
: изучить влияние пре-
парата Кавергал на фенотип и фагоцитарную ак-
Действие препарата кавергал на фенотип и фагоцитарную активность нейтрофилов при …
156 2018, №4 (104) Проблемы биологии и медицины
тивность нейтрофилов при острой кровопотере в
эксперименте.
Материалы и методы
. Исследования про-
ведены на 24 белых половозрелых беспородных
мышах весом 12 – 19 г. Мыши были разделены на
4 группы: 1-я – контрольная группа, интактная; 2-
я группа – группа с острой кровопотерей; 3-я
группа – проводили острую кровопотерю и через
1 час вводили Кавергал внутрибрюшинно (в/б) в
дозе 40 мг/кг; 4-я группа – вводили Кавергал за-
тем через 1 час проводили острую кровопотерю.
Всех животных забивали через 1 час после по-
следней инъекции. Подсчитывали количество
лейкоцитов и нейтрофилов. Из гепаринизирован-
ной периферической крови мышей выделяли
нейтрофилы в градиенте плотности фиколл-
верографина (d= 1,093). Выделенные нейтрофилы
отмывали и с помощью моноклональных антител
(пр-ва МедБиоСпектр, РФ) определяли поверх-
ностный рецепторы к СD16
+
, СD45
+
, СD95
+
анти-
генам. Фагоцитарную активность нейтрофилов
изучали общепринятым методом с частицами ла-
текса.
Препарат Кавергал (проантоцианидины ко-
ры дуба обыкновенного) разработан в Институте
химии растительных веществ, обладает иммуно-
тропными и антиоксидантными свойствами.
Статистическую обработку проводили ме-
тодом вариационной статистики на ПК с исполь-
зованием пакета прикладных программ Statistica
6,0.
Результаты и обсуждение
. Острая крово-
потеря во 2-й группе вызвала снижение лейкоци-
тов до 4,7±0,4 кл/мл (в контроле 8,4 ±1,9 кл/мл).
Острая кровопотеря и последующее введение Ка-
вергала характеризовались повышением числа
лейкоцитов до 7,1±0,2 кл/мл. В 4-й группе мышей
количество лейкоцитов в среднем составило
5,9±0,4 кл/мл. Относительное количество нейтро-
филов во всех опытных группах оставалось в со-
поставимых количествах – 52,7±1,9%, 53,0±2,0%,
53,1±1,7% соответственно во 2-й, 3-й и 4-й груп-
пах, в контроле 66,3± 2,6% (р<0,01). В абсолют-
ных величинах: в контроле – 5,6 ±0,2 кл/мл; во 2-й
группе – 2,5 ±0,16 кл/мл; в 3-ей – 3,8 ±0,14 кл/мл;
в 4-й – 3,13 ±0,1 кл/мл. Острая кровопотеря вы-
звала достоверное снижение абсолютного количе-
ства нейтрофилов во всех 3-х опытных группах
мышей относительно фонового контроля.
Сравнительная оценка полученных данных
показала, что острая кровопотеря вызывает дву-
кратное снижение количества нейтрофилов в пе-
риферической крови мышей (р<0,001). Острая
кровопотеря с последующим введением Каверга-
ла вызвала достоверное повышение количества
нейтрофилов (р<0,01). Предварительное введение
Кавергала с последующей кровопотерей также
вызвало достоверный рост абсолютного числа
нейтрофилов, но значимо меньший, чем в 3-ей
группе (р<0,05).
Таким образом, острая кровопотеря вызы-
вает изменения в кроветворной системе, а введе-
ние Кавергала позволило выявить прирост коли-
чества нейтрофилов.
Анализ экспрессии поверхностных рецеп-
торов нейтрофилов показал, что в относительных
величинах количество СD16
+
нейтрофилов во 2-й,
3-ей, 4-й опытных группах (2-я группа – 29,6
±4,4%; 3-я группа – 29,8 ±1,7%; 4-я группа – 22,4
±1,6%) выявлялось в одинаковых пределах, но
значимо ниже фоновых контрольных данных
(45,5 ±3,5% при р<0,01 относительно показателей
в опытных трех группах).
Анализ экспрессии СD45
+
поверхностных
рецепторов на нейтрофилах при острой кровопо-
тере выявил значимые изменения относительно
фонового контроля – 39,3 ±3,0% в первой группе,
24,0 ±4,6% во второй группе (р<0,01). В 3-й груп-
пе нами отмечено снижение количества СD45
+
нейтрофилов почти в 2 раза (20,1 ±2,4% при
р<0,01). В 4-й группе наблюдалось снижение экс-
прессии СD45
+
рецепторов в 2,1 раза относитель-
но фоновых значений (18,3 ±3,8%, р <0,01). Отме-
чен широкий размах индивидуальных значений
этого показателя во всех группах эксперимен-
тальных животных.
Экспрессия СD95
+
рецепторов на нейтро-
филах в группе фонового контроля составила 24,5
±1,0%. При острой кровопотере наблюдалось их
снижение в 1,36 раза (18,0±5,0%, р>0,05). Введе-
ние Кавергала после острой кровопотери повыси-
ло их количество, но не до контроля (22,1±2,7%, р
>0,05). Предварительное введение Кавергала с
последующей кровопотерей (4-я группа) вызвало
снижение экспрессии СD95
+
рецепторов в 1,64
раза (14,9±2,2%, р<0,01).
Таким образом, изменения мембранных ре-
цепторов нейтрофилов зависят от времени введе-
ния препарата Кавергал – до или после острой
кровопотери. Острая кровопотеря оказывает по-
вреждающее действие на нейтрофилы, связанное
с гипоксией, ведет к депрессированию рецептор-
ной функции нейтрофилов. Введение препарата
Кавергал позитивно влияет на экспрессию мем-
бранных рецепторов. Следует отметить, что ха-
рактер экспрессии маркеров цитотоксичности
(СD16
+
) после острой кровопотери во всех трех
опытных группах не зависел от введения Кавер-
гала. Введение Кавергала после острой кровопо-
тери оказывало стимулирующее влияние на экс-
прессию СD95
+
рецепторов, что объясняется его
иммуномодулирующим действием.
Профилактическое введение Кавергала,
предшествующего острой кровопотере, вызвало
снижение экспрессии СD45
+
и СD95
+
поверхност-
ных рецепторов нейтрофилов. Возможно это яв-
М.В. Залялиева, Н.Н.Мирахмедова, З.И. Ахмеджанова, З.А. Хушбактова
Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №4 (104) 157
ляется свидетельством повышения их жизнеспо-
собности посредством снижения экспрессии
СD95
+
- рецепторов на нейтрофилах и чувстви-
тельности к проапоптотическим сигналам.
Фагоцитарная активность нейтрофилов
(ФАН) в 1-й группе (фоновый контроль) состави-
ла 46,0± 1,0%. При острой кровопотере ФАН сни-
зилась до 21,0± 1,8% (2-я группа). Введение Ка-
вергала после острой кровопотери вызвало неко-
торое повышение ФАН – 27,5± 1,4%. Введение
Кавергала с последующей острой кровопотерей
повышало ФАН до показателей нормы – 47,9±
2,7%.
Таким образом, острая кровопотеря вызы-
вает нарушение функционирования нейтрофилов
– снижение ФАН в 2 раза. Препарат Кавергал
восстанавливал фагоцитарную функцию, зависи-
мую от времени введения. Так предварительное
введение препарата с последующей кровопотерей
сохраняет фагоцитарную активность в исходных
значениях, а введение Кавергала после острой
кровопотери вызывает достоверный рост ФАН
(р< 0,05), не достигающий исходного уровня.
Анализируя полученные результаты по
оценке влияния отечественного препарата
Кавергал на функциональную активность НГ на
фоне
повреждений,
вызванных
острой
кровопотерей, можно заключить, что данный
препарат проявил позитивный эффект. Кавергал
обладает стимулирующим и протективным
влиянием
на
рецепторные
функции
и
фагоцитарную активность нейтрофилов при
нейтропении, вызванной острой кровопотерей.
Полученные нами данные позволяют считать
Кавергал активным иммуномодулятором в
отношении
повреждений
функциональной
активности нейтрофилов и могут служить
перспективной
основой
для
дальнейших
исследований.
Литература:
1. Беляева А.С., Ванько Л.В., Матвеева Н.К., Кре-
четова Л.В. Нейтрофильные гранулоциты как ре-
гуляторы иммунитета. //Иммунология. – 2016; Т.
37, №2, - с. 129 -133.
2. Матосова Е.В., Андрюков Б.Г. Антимикробные
механизмы нейтрофилов как перспективные ми-
шени для фармакологической модуляции неспе-
цифической защиты организма. //Журн. микро-
биологии. 2018. - №3, - с. 96-105.
3. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова
Г.А., Ломтатидзе Л.В., Ковалева С.В., Евглевский
А.А. Нейтрофильные гранулоциты: новый взгляд
на «старых игроков» на иммунологическом поле.
//Иммунология. – 2015, 4, 257- 265.
4. Пинегин Б.В., Маянский А.Н. Нейтрофилы:
структура и функция. //Иммунология. 2007; 28;
6:374 -382.
5. Сыров В.Н., Шахмурова Г.А., Хушбактова З.А.
Сравнительная оценка влияния экдистена и ка-
вергала на процесс адаптации к прерывистому
действию высотной гипоксии. // Узбекский био-
логический журнал. 2009, №3, С. 11 – 14.
6. Тутельян А.В. Разработка системы оценки им-
мунотропных препаратов природного и синтети-
ческого происхождения на основе анализа им-
мунной
и
антиоксидантной
защиты.
//Аллергология и иммунология. 2004, т.5, №2, с.
289 – 299.
7. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г.
//Иммунология. Норма и патология. М.: Медици-
на. – 2010.
8. Bardoel B.W., Kenny E.F., Sollberger G. et al. The
balancing act of neutrophilis cell host and microbe.
//Cell Host Microbe. 2014, 15(5); p. 526-536.
9. Mantovani A., Cassatella M., Costantini C. et al.
Neutrophilis in the activation and regulation of inhate
and adaptive immunity. //Nat. Rev. Immunology.
2011. – 11(8); - 519-531.
10. Nordenfelt P., Tapper H.J. Phagosome dynamics
during phagocytosis by neutrophilis. //J. Leukos Biol.
2011. – 90(2). – 271-284.
ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА КАВЕРГАЛ НА
ФЕНОТИП И ФАГОЦИТАРНУЮ
АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ
ОСТРОЙ КРОВОПОТЕРЕ В
ЭКСПЕРИМЕНТЕ
М.В. ЗАЛЯЛИЕВА
1
, Н.Н.МИРАХМЕДОВА
1
,
З.И. АХМЕДЖАНОВА
1
, З.А. ХУШБАКТОВА
2
1 - Республиканский научный центр
иммунологии МЗ РУз,
2 - Институт химии растительных веществ
АН РУз (Ташкент)
Проведено исследование влияния отече-
ственного препарата Кавергал на функциональ-
ную активность нейтрофилов при нейтропении,
вызванной острой кровопотерей. Установлен по-
зитивный и протективный эффект Кавергала на
поверхностные рецепторы (CD16, CD45, CD95) и
фагоцитарную активность нейтрофилов.
Ключевые слова:
поверхностные рецепто-
ры, нейтрофилы, фагоцитарная активность,
острая кровопотеря, эксперимент.
