42
РОЛЬ ПЦР МЕТОДА В ГИНЕКОЛОГИИ
Каримова М.М., факультет 1 педиатрии и народной медицины 215 группы
направлении 1 педиатрии
Научный руководитель: Абдуллаева Н.К, ассистент кафедры медицинской и
биологической химии, медицинской биологии, общей генетики, ТашПМИ
Актуальность:
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод
молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций
определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале.
ПЦР - метод молекулярной диагностики, приобрел огромное практическое
значение, особенно актуально в гинекологии и урологии. Применяется в диагностике
инфекционных заболеваний - бактериальной или вирусной природы, включающих ИИИП
(инфекции, передающиеся половым путем).
Цель:
ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей,
урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).Методом ПЦР
успешно диагностируют следующие вирусные заболевания: вирусный гепатит, СПИД,
токсоплазмоз, хламидиоз, уреаплазмоз, гонорея, герпес и др. Особенно эффективен метод
ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто
существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при
латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать
сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных
условиях. Применение ПТ ЦР-диагностики также очень эффективно в отношении
возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.
Методы результаты:
Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов,
каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до
94 - 96°C на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется
денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Когда цепи
разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной
матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и
обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2
минут. ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве
затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто
используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от
типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. После окончания
всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы
достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.
Для проведения ПЦР требуются следующие компоненты: ДНК -матрица,
содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать; два праймера,
комплементарные концам требуемого фрагмента; термостабильная ДНК-полимераза;
дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C,
T); ионы Mg2+, необходимые для работы
полимеразы; буферный раствор. ПЦР проводят в амплификаторе — приборе,
обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок.
Вывод:
Таким образом, в качестве достоинства метода ПЦР, можно перечислить
высокую чувствительность исследования, специфичность анализа, экономия времени и
широта исследуемого клинического материала, универсальность и эффективность метода
ПЦР.
Список литературы:
1.
Юлдашева, Сурая Зарифовна, and Мунаввар Холмухамедовна Тиллашайхова.
"Интеграция пищеварительно-всасывательной и иммунной функции в слизистой оболочке
43
тонкой кишки и регуляция гомеостаза." European journal of biomedical and life sciences 2 (2017): 3-
7.
2.
Yuldasheva, S., and Yu Rasul-Zade. "THE EFFECT OF FRAME-BY-FRAME MONITORING
OF EMBRYOS ON OBSTETRIC AND PERINATAL OUTCOMES IN SINGLETON PREGNANCY
IN ASSISTED REPRODUCTIVE TECHNOLOGY PROGRAMS." Science and innovation 2.D11
(2023): 273-281.
3.
Zarifovna, Yuldasheva Suraya, and Yulduz Gulyamovna Rasul-zade. "Impact of Frame-By-
Frame Monitoring of Embryos on Obstetric And Perinaaaaatal Outcomes In Singleton Pregnancies In
Assisted Reproductive Technology Programs." Journal of Advanced Zoology 44 (2023).
