“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
516
ТИТРЫ АНТИТЕЛ К БАКТЕРИАЛЬНЫМ АНТИГЕНАМ ПРИ
ДИСБИОЗЕ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА
Машарипов В.У., Сримбетова Н.А.
Ташкентская медицинская академия
кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
Цель.
Изучить и оценить значение уровня сывороточных антител к
антигенам условно-патогенных энтеробактерий, фагоцитарную активность
нейтрофилов и уровень сенсибилизации к антигенам условно-патогенных
энтеробактерий у лиц с дисбиозом кишечника.
Материалы и методы
исследования
Объектом служили 120 детей с
дисбиозами толстого кишечника III-IV степени, 92 детей с диарейными
заболеваниями, 50 практически здоровых детей. Предметом исследований
было изучение нормальной микрофлоры толстого кишечника, изучение титра
антител в сыворотке крови и копрофильтратах, антиэндотоксических антител
в сыворотке крови.
В
процессе
выполнения
научной
работы
были
использованы
бактериологические,
бактериоскопические,
серологические,
иммунологические, ИФА и статистические методы.
Результаты исследования
. Для достижения поставленных задач нами
были исследованы дети в возрасте от 4 месяцев до 14 лет. Среди
обследованных детей дисбиоз толстого кишечника III - IV степени были
обнаружены у120 детей. Они были включены в основную группу. Первую
контрольную группу составили 50 практически здоровых детей. Для
сравнения всех показателей основной группы были изучены дети с
различными диарейными заболеваниями (2 контрольная группа):
бактериальной дизентерией - 11 детей; сальмонеллезом - 57 детей;
гастроинтеритами вызванными условно-патогенными энтеробактериями
(E.coli, Proteus sp., Klebsiellaе sp.) - 52 детей. Половозрастной состав всех
обследованных детей основной и обеих контрольных групп были идентичны.
Клинический диагноз диарейных заболеваний был поставлен по
анамнезу жизни и болезни, клиническим симптомам и лабораторным
исследованиям. Этиологический диагноз подтвержден бактериологически.
“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
517
Материалом для исследования послужила сыворотка крови больных и
здоровых детей. Для исследований с копрофильтратами кал брали по
общепринятой методике, затем проводили разведения с физиологическим
раствором. Разведенный в пробирке кал фильтровали, а копрофильтрат
использовали для определения антител против УПЭ в ИФА.
Для индикации антител к антигенам УПЭ использовали ИФА. В основу
метода положен принцип непрямого твердофазного иммуноферментного
теста
на
полистероле
(indirect
ELISA).
Результаты
учитывали
спектрофотометрически при длине волны 492 им.
Приготовленные комплексные бактериальные антигены доводили до
концентрации 40 мкг/мл. Эту концентрацию применяли для сенсибилизации
твердой фазы - полистироловых планшетов, производства «Медполимер», РФ.
После промывки сенсибилизированных антигенами иммунологических
планшетов промывающим раствором и высушивания в лунки вносили
исследуемые сыворотки крови, предварительно раститрованные в
забуференном физиологическом растворе от 1:25 до 1:6400. Инкубировали 60
минут, промывали, вносили коммерческий реагент антитела против IgG
человеческий, меченный пероксидазой хрена (конъюгат), тщательно
промывали и вносили в лунки проявляющие растворы – коммерческий ОФД и
пергидроль. Учет проводили визуально по окрашиванию раствора в лунках. За
титр принимали последнее разведение сыворотки, дающий окраску раствора в
лунке интенсивнее, чем в контрольных лунках панели (отрицательный
контроль).
Результаты реакции учитывали, условно разделив их на следующие
предложенные нами группы: резко положительные (титр от 1:1600 и более);
положительные (титр от 1:400 до 1:800); слабоположительные (титр от 1:100
до 1:200); сомнительные (титр от 1:25 до 1:50) и отрицательные (титр 0).
Выводы
: 1. Установлены различия по частоте встречаемости сывороточных
антител в крови у обследованных практически здоровых детей. Выявленные
титры антител к антигенам УПМ (E.coli, P.vulgaris, C.freundii, K.pneumoniae,
E.aerogenes, E.cloacae, P.aeruginosaе) имели широкий диапазон разброса в
среднем от 13 до 29%. Проведенные разделение групп обследованных на 5
показателей (резко положительные, положительные, слабо положительные,
“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
518
сомнительные, отрицательные), в зависимости от величин титра антител крови
здоровых позволяет проводить относительное нормирование.
2. Специфические антитела к антигенам УПЭ были обнаружены у 80,3%
изученных детей с дисбиозом кишечника III-IV степени, ответная иммунная
реакция организма с высокой частотой обнаружена у детей с ассоциацией
УПЭ. Выявлено, что серонегативных показателей в 2,5-3 раза меньше, чем
серопозитивных сывороток со всеми изученными антигенами УПЭ, причем
для P.aeroginosa серопозитивных сывороток было несколько выше по
отношению к антигенам УПЭ (р<0,05). С увеличением возраста изученных
детей уровень специфического иммунитета в виде антимикробных антител
достоверно возрастает (р<0,05).
3.
Предлагаемая экспериментальная тест-система из антигенов
коллекционных
штаммов
E.coli
для
метода
ИФА
отличается
чувствительностью и специфичностью с разными условно-патогенными
энтеробактериями.
4. У всех обследованных детей – с дисбиозом толстого кишечника,
гастроэнтеритами вызванными УПЭ и практически здоровых детей –
обнаружены антитела против энтеротоксина УПЭ (кроме здоровых детей до 3
лет). С увеличением возраста детей выявляемость антител повышается,
показатели сомнительных и отрицательных результатов снижаются.
Интенсивность образования противоэнтеротоксических антител в сывротке
крови было достоверно выше у детей с дисбиозами толстого кишечника
(p<0,05), чем у практически здоровых и больных детей гастроэнтеритами,
вызванными УПЭ.
5. У детей с дисбиозом толстого кишечника появляются штаммы
микрофлоры
толстого
кишечника,
вырабатывающие
протеазы
иммуноглобулин разрушающей активности. Особенно это характерно для
общей и тиоловой активности протеаз. Метод определения иммуноглобулин
протеазной активности копрофильтратов может быть использован как
дополнительный диагностический тест для диагностики дисбиоза толстого
кишечника у детей.
6. Введение в курс лечения биологического препарата нормализует
состав нормальной микрофлоры толстого кишечника, положительное влияние
биокоррекции наблюдается и при изучении sIgA в сыворотке крови и
“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
519
копрофильтратах (p<0,05), а также на концентрации сывороточных
иммуноглобулинов - IgM, IgG и IgM (p<0,005).
7. При анализе результатов ИФА обнаружено, что процент
серопозитивных сывороток с антигенами из УПЭ снизились от 1,9 раза до 2,7
раза. Наравне с процентом серопозитивных сывороток снизилась и
интенсивность образования антител против антигенов из УПЭ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Багрянцев В. И., Шубин Ф. Н., Цветков В. С. Опыт применения
иммуноферментного анализа для диагностики псевдотуберкулеза // Вопросы
микробиологии, патогенеза и лабораторной диагностики иерсиниозов: Сб.
научн. тр. — Новосибирск, 2018. — С. 53 - 56.
2.Беленький Б. Г., Балтабаева М. А., Малов И. В. Оценка специфичности
некоторых антигенных препаратов в иммуноферментном анализе//
Иерсиниозы (микробиология, эпидемиология, клиника,
патогенез,лабораторная диагностика): Тез. докл. Всесоюзн. науч,-практ. конф.
— Владивосток, 2017. — С. 83 — 84.
3. Беляков И.М. Иммунная система слизистых //Иммунология. – 2017. -
№4. - С.7-13.
4. Бондаренко А.В., Бондаренко Вл.М., Бондаренко В.М. Пути
совершенствования этиопатогенетической терапии дисбиозов //Жур.
м
и
к
р
о
б
и
о
л
.
–
2
0
1
6
.
-
5. Валенкович Л.Н., Яхонтова О.Н. О функциональном состоянии
тонкого кишечника у больных сахарным диабетом. Казан мед журн 2011; 5:
6. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А.
Дисбактериозы - актуальная проблема медицины //Вестник Росс. акад.
мед.наук. – 2007. - №3. – С.4-7.
7. Высокочувствительный иммунохимический метод определения
аутоантител к антигену эндометриальной ткани и его использование в
диагностике гинекологических заболеваний /Хохлов П.П., Михнина Е.А.,
Калинина Н.М. и соавт. //Медицинская иммунология. – 2007. – Т.9. - №2-3. –
С.268-269.
8. Гариб Ф.Ю., Шамсиев А.М., Елисеева М.Р. Иммунозависимые
болезни //Ташкент, 2010.- 72 с.
“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
520
9. Гвасалия М.М. Определение иммуноглобулинов с целью
прогнозирования течения сахарного диабета //Метод.рек. – Тбилиси. - 2011.
10.Дарсалия И.А., Цывкина Г.И. Иммунодефицитные состояния у детей
и дисбактериоз. Возможности иммунокоррекции //Материалы
Дальневосточной региональной научно-практической конференции,
Владивосток. - 2010. – С.11-14.
11.Иммуноферментный анализ антител к инсулину в сыворотке крови
человека /Сорокина Н.В., Гаврилова Е.М., Егоров А.М. и соавт. //
Лабораторное дело. – 2000. - №2. – С.25-27.
12.Иммуноферментная тест-система для определения стафилококкового
энтеротоксина типа С /Флуер Ф.С., Прохоров В,Я., Веснина А.Ф., Акатов А.К.
//Журнал микробиологии. – 2002. - №6. – С.65-68.
13. Иммуноферментный метод определения специфических антител в
слюне больных поллинозом /Манжос М.В., Шкадов С.А., Никишин А.В. и
соавт. //Клиническая лабораторная диагностика. – 2006. - №5. – С.44-45.
14. Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология //М.: Медицина;
15. Касаткина Э.П., Воронин А.А., Тараненко Л.А. Бактериологическая
диагностика дисбактериоза кишечника у детей, больных сахарным диабетом
//Метод. рек. - М. - 1996.
16. Касаткина Э.П., Воронин А.А., Тараненко Л.А. Особенности
микробиоценоза кишечника у детей, больных сахарным диабетом //Журн
м
и
к
р
о
б
и
о
л
.
–
1
9
9
6
.
17. Ким К.В., Дерябин П.Н., Коральник Б.В. Эритроцитарные
иммунореагенты
для диагностики
аутоиммунных повреждений
поджелудочной железы //Лабораторное дело. – М., Медицина. – 1991. - №11.
– С.44-47.
. Коклюшный токсин и перекрестно реагирующие антигены в
динамике культивирования Bordetella pertussis /Баснакьян И.А., Алексахина
Н.Н., Сюндюкова С.А. и соавт. // ЖМЭИ. – М., 2007. – 6. - С.54-57.
. Костинов М.П., Тарасова А.А., Зайцев Е.М. Содержание антител к
антигенам Bordetella pertussis у пациентов с ревматическими заболеваниями
“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
521
//ЖМЭИ. – М., 2007. – 6. С.61-64.
. Ковальчук Л.Р., Чередеев А.Н. Актуальные проблемы оценки
иммунной системы человека на современном этапе //Иммунология. – 2000. –
№5. – С.4-7.
. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные
нарушения у детей //М.: Медицина. - 1991.
. Куляш Г. Ю., Ляпин М. Н., Головко Е. М., Лучникова Е. А. Варианты
иммуноферментного анализа антител. Клин. лаб. диагн., 2002, 7 — 8. — С. 58
. Лебедев К.С., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике
//М.: Медицина; 2000.
. Ляшенко В.А. «Распознавание опасности повреждения» как
универсальное определение функций иммунной системы //Медицинская
иммунология. – 2007. – Т.9. - №2-3. – С.152-153.
. Микрофлора кишечника и иммунологические показатели крови у
детей, перенесших острый инфекционный энтероколит /Чащина С.Е., Карпова
Н.В., Калугина Т.В., Малявина Т.Е., Ахметова Л.И. //Жур. микробиол. – 1997.
- №1. – С.87-89.
. Юлдашева М.Д., Рахманова С.С., Машарипов В.У. Уровень
циркулирующих антител к условно-патогенным микроорганизмам у
66
практически здоровых лиц //Инфекция, иммунитет и фармакология. -
Ташкент, 2008, №3. - С.90-93.
. Нуралиев Н.А., Рахманова С.С., Машарипов В.У. Выявляемость
антител к энтеробактериям у детей с дисбиозом кишечника //Тезисы докладов
IV съезда микробиологов Узбекистана. - Ташкент, 2008. – С.180-181.
. Рахманова С.С., Машарипов В.У. Содержание антител к
условнопатогенным бактериям в сыворотке крови здоровых лиц //Тезисы
докладов IV съезда микробиологов Узбекистана. - Ташкент, 2008. – С.189-190.
. Нуралиев Н.А., Рахманова С.С., Бектимиров А.М-Т., Машарипов
О.О., Машарипов В.У. Методические основы разработки иммуноферментной
тест-системы на основе бактериальных антигенов //Методические
рекомендации. – Урганч, 2009. – 15 с.
. Рахманова С.С., Машарипов В.У. Бектимиров А.М-Т. Показатели
“JOURNAL OF SCIENCE-INNOVATIVE RESEARCH IN
UZBEKISTAN” JURNALI
VOLUME 2, ISSUE 10, 2024. OCTOBER
ResearchBib Impact Factor: 9.654/2024 ISSN 2992-8869
522
выявляемости антител к условно-патогенным энтеробактериям у детей с
дисбиозом толстого кишечника //Материалы V-Международной
научнопрактической конференции “Актуальные проблемы диагностики,
лечения и профилактики инфекционных и паразитарных заболеваний”. -
Ташкент, 2009. – С.30.
. Машарипов В.У., Машарипов О.О., Рахманова С.С., Бектимиров
А.МТ. Технология оптимизации получения растворимого микробного
антигена //Материалы V-Международной научно-практической конференции
“Актуальные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных
и паразитарных заболеваний”. - Ташкент, 2009. – С.134.
. Машарипов В.У. Изучение состояния антител к условно-патогенным
бактериям в сыворотке крови здоровых взрослых людей //Материалы
научнопрактической конференции «Актуальные вопросы клинической,
санитарной микробиологии и эпидемиологии». - Ташкент, 2009. – С.23-24.
. Нуралиев Н.А., Рахманова С.С., Машарипов В.У., Бектимиров А.МТ.
Основы выделения растворимого микробного антигена для определения
сывороточных противомикробных антител //Материалы научно-практической
конференции «Актуальные вопросы клинической, санитарной микробиологии
и эпидемиологии». - Ташкент, 2009. – С.27-28.
67
. Рахманова С.С., Нуралиев Н.А., Машарипов В.У. Сравнительное
изучение циркулирующих в крови антител к условно-патогенным
энтеробактериям у здоровых детей и взрослых //Журнал «Вестник научных
достижений». - Тернополь, Украина. – 2009. - №3. – С.43-45.
. Машарипов В.У., Рахманова С.С., Нуралиев Н.А. Уровень антител к
условно-патогенным энтеробактериям у здоровых взрослых и детей
//Научнопрактическая конференция посвященная 25-летию Института
Иммунологии АН РУз. – Ташкент, 2010. – С.72.
