24
Stomatologiya
Отечественный препарат Лизак как местное анти
-
септическое средство широко применяется в отоларин
-
гологии и стоматологии. Одним из опосредованных
механизмов его эффективного действия при инфекци
-
онно- воспалительной патологии ротоглотки является
нейтральное или стимулирующее влияние на факто
-
ры врожденного иммунитета (Марушко Ю.В. и соавт.,
2010; Мельников О.Ф. и соавт., 2013). Вместе с тем
для рационального комплексного лечения воспали
-
тельных процессов необходимы знания о более широ
-
ком спектре иммуномодулирующих эффектов препара
-
та. Наиболее четкие данные получены в исследованиях
in vitro, когда клетки освобождены от всей гаммы воз
-
можных негативных влияний, что наблюдается при ис
-
следовании in vivo (Мельников О.Ф., 1981).
Материалы и методы
На основании этих предпосылок нами было изуче
-
но влияние препарата Лизак на уровень концентрации
ИССЛЕДОВАНИЕ
ВЛИЯНИЯ ПРЕПАРАТА
ЛИЗАК НА КЛЕТОЧНЫЕ И
ГУМОРАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ
ИММУНИТЕТА
В УСЛОВИЯХ iN vitRo
О.Ф. Мельников, Т.А. Заяц, М.Д.
Тимченко, Б.Н. Биль, Т.Б. Земляк
ГУ «Институт отоларингологии им.
А.И. Коломийченко НАМН Украины», г. Киев
в ротоглоточном секрете (РС) защитных гуморальных
факторов: секреторного IgA (sIgA), α- и λ-интерферонов
при инкубации in vitro различных концентраций препа
-
рата Лизак с РС от 10 детей с диагнозом гипертрофии
глоточной миндалины II-III степени, которым по меди-
цинским показаниям была проведена аденотомия, и от
10 практически здоровых детей в возрасте 8-12 лет. Ро
-
тоглоточный секрет получали и обрабатывали в соот
-
ветствии с методическими рекомендациями Института
отоларингологии им. А.И. Коломийченко НАМН Укра
-
ины (2008). Использовали две концентрации препарата.
ВД – высокая до- за: 1 таблетка препарата, измельчен
-
ная в 10 мл раствора Хенкса и профильтро- ванная че
-
рез стерилизующий фильтр Millipore (Чехия). МД – ма
-
лая доза: раствор препарата, полученный при омывании
таблетки в течение 5 мин в 10 мл раствора Хенкса с по
-
следующими аналогичными манипуляциями с жид- кой
фазой.
Обе дозы использовали по 0,2 мл смешивая их с 0,2
мл РС и выдерживая в течение различных промежутков
времени в условиях термостата при 37°С. Время кон
-
такта – от 0,5 до 2 ч. Гуморальные факторы определяли
с помощью иммуноферментного метода (анализатор
LabLine, Австрия).
Кроме того, изучали влияние препарата Лизак на ак
-
тивность цитотоксических клеток глоточной миндали
-
ны в отношении ксеногенных эритроцитарных мише
-
ней в условиях in vitro. Растворы препарата добавляли
к клеткам глоточных миндалин по 0,1 мл раствора на 1
мл инкубационной среды (бесцветный раствор Хенкса
с добавками – L-глутамин, 5% эмбриональная телячья
сыворотка RPMI-1640) и инкубировали в течение 18
ч с эндотелиальными клетками. Степень разрушения
определяли спектрофотометрически по содержанию
гемоглобина в надосадочной жидкости и оценивали
уровень деструкции мишеней согласно рекомендациям
О.Ф. Мельникова и Т.А. Заяц (1999). Всего выполнено
11 проб с клетками глоточных миндалин, удаленных по
25
терапевтическая стоматология
причине их гипертрофии. Кроме того, в ряде проб (n=7)
определяли влияние препарата на содержание провос
-
палительного цитокина – интерлейкина-1
β
(ИЛ-1) и
противовоспалительного цитокина – интерлейкина 10
(ИЛ-10). Время инкубации в условиях in vitro при тем
-
пературе 37°С и 5% атмосфере СО2 (термостат Nuve-EC
160, Турция) составляло 18 ч, после чего в надосадоч
-
ной жидкости определяли содержание интерлейкинов с
помощью набора реактивов. Результаты статистически
обработаны с применением непараметрического крите
-
рия «U» (Гублер Е.В., 1978).
Результаты и обсуждение
Установлено, что препарат Лизак в исследованных
концентрациях и во всех временных интервалах инку
-
бации с РС не изменял концентрации sIgA (рис. 1), α- и
λ-интерферонов (табл.) по сравнению с исходным уров
-
нем, т.е. не оказывал
негативного влияния на гумо
-
ральные защитные факторы РС.
На фоне применения препарата в ВД не отмечены
существенные изменения уровня исходной цитолити
-
ческой активности клеток миндалин, а при использова
-
нии МД значительно (в 2,5 раза, р<0,01) повышалась
их деструктивная активность (рис. 2), что может сви-
Таблица. Влияние препарата Лизак в различных дозах на содержание
α
- и
λ
-интерферонов в РС детей с гипертрофией глоточной миндалины
Групп
ы
Концентрация интерферонов в пг/мл
α
-интерферон
λ
-интерферон
М
ПК
n
p
M
ПК
n
p
К
10,0
7-11,2
11
–
41,6
22-
54,0
11
–
ВД
9,6
6,5-
12,0
11
>0,05
39,6
24-55,0
11
>0,05
МД
10,2
7-11,0
11
>0,05
42,5
22,0-
56,0
11
>0,05
Примечание: М – среднее значение, ПК – пределы колебаний значений
(мин. – макс.); n – количество постановок; р – достоверность различий по
отношению к контролю (К).
26
Stomatologiya
детельствовать в пользу иммуностимулирующего дей
-
ствия МД препарата Лизак на клеточные факторы про
-
тивовирусного иммунитета. В аналогичных условиях
культивирования препарат Лизак в обеих применяемых
концентрациях снижал уровень провоспалительного
цитокина ИЛ-1 и не влиял на содержание в культуре
клеток миндалин противовоспалительного цитокина
ИЛ-10 (рис. 3).
Таким образом, в исследованиях in vitro, посвящен
-
ных оценке влияния препарата Лизак на количество се
-
креторного IgA и интерферонов в РС, показано отсут
-
ствие воздействия на структуру этих субстанций даже
в условиях увеличенного временного контакта с препа
-
ратом – 1 и 2 ч.
Выводы
1. Препарат Лизак в высоких и низких дозах не
изменял уровень концентрации секреторного IgA, ин
-
терферонов при культивировании in vitro образцов РС
с препаратом в течение от 0,5 до 2 ч.
2. Низкие дозы препарата Лизак стимулировали
естественную цитотокси- ческую активность клеток
глоточных миндалин.
3. В обеих дозах препарат Лизак снижал содер
-
жание провоспалительного цитокина – интерлейки
-
на-1
β
(ИЛ-1) и не влиял на уровень противовоспали-
тельного цитокина ИЛ-10 в культуре клеток миндалин.
Литература
1. Гублер Е.В. Математические методы анализа
и распознавания патологических процессов. – Л.: Меди
-
цина, 1978. – 294 с.
2. Лайко А.А. Гіпертрофія лімфаденоїдної тка
-
нини глотки / А.А. Лайко, Д.І. Заболотний, А.Л. Коса
-
ковський, В.В. Березнюк, Д.Д. Заболотна та ін. – К.:
Логос, 2009. – 175 с.
3. Дослідження ротоглоткового секрету у хво
-
рих на хронічні за- пальні та алергічні захворювання
верхніх дихальних шляхів: метод. рекомендації / Д.І.
Заболотний, О.Ф. Мельников, С.В. Тимченко, Д.Д. Забо
-
лотна. – К., 2008. – 28 с.
4. Мельников О.Ф. Иммунологические аспекты
генеза хронического тонзиллита и регуляции функцио
-
нальной активнос- ти небных миндалин: дисс. д-ра мед.
наук: 14.00.16. – К.: Ин-т физиологии АН УССР, 1981.
– 294 с.
5. Мельников О.Ф., Заяц Т.А. Сравнительная
оценка радиоизотопного и спектрофотометрического
методов регистрации цитолиза // Лаб. диагностика. –
1999. – № 2. – С. 32-34.
6. Мельников О.Ф., Марушко Ю.В., Тимченко
М.Д., Добриди М.Г. Оценка состояния местного имму
-
нитета в ротоглотке у детей с хроническим тонзил
-
литом и острым фарингитом при терапии с исполь
-
зованием препарата Лизак: материалы традиционной
весенней сессии общества оториноларингологов Укра
-
ины, Севастополь, 2013 // Журн. вушн., нос. та горл.
хвороб. – 2013. – № 6. – С. 180-181.
7. Marushko Yu., Melnikov O., Movchan O., Lysovets
O. Content of antimicrobial peptides in oropharyngeal
secretions of children suffering from acute respiratory
diseases / Х Anniversary Ukrainian-Polish-Belorussian
Conference «Physiology and Pathology of Respiration:
Advances in basic research and clinical applications». –
Kiev, 2013 // Фізіологічний журнал. – 2013. – Т. 59. – №
4. – С. 22.
