Каламуш мияси синаптосомаларидаги Са2+-транспортига полифенол (рутан, госситан) ва алкалоид (дезоксипеганин) таъсирини тавсифлаш

Нозимжон Хошимов

doi:10.71337/inlibrary.uz.autoabstract.77044

Авторы

Нозимжон Хошимов
Институт биоорганической химии имени А.Садыкова

DOI:

https://doi.org/10.71337/inlibrary.uz.autoabstract.77044

Ключевые слова:

Болезнь Альцгеймера болезнь Паркинсона амиотропный латеральный склероз болезнь хантингтона спинномозжечковые атаксии кальциевые каналы кальциевая сигнализация митохондрии трансгенные мыши клинические испытания имаджинг мемантин димебон рилузол

Аннотация

Актуальность и востребованность темы диссертации. В настоящее время во всем мире отмечается неуклонный рост числа социально значимых нейродегенеративных заболеваний вследствие нарушения кальциевого гомеостаза нервных клеток1,2. Биологически активные соединения являются перспективными источниками при создании эффективных нейропротекторных препаратов для лечения нейродегенеративных заболеваний, а также заболеваний центральной/периферической нервной системы, повреждающиеся при патогенезе токсикологической и наркологической интоксикаций.
На сегодняшний день во всем мире в научных исследованиях, проведенных в этом направлении выявлено, что нейродегенеративные заболевания вызваны дисфункцией ионно-транспортных систем и рецепторных комплексов, которые представляют функциональную активность клеток симпатической/парасимпатической нервной системы мозга. Са2’ является центральным компонентом в процессах передачи сигналов и возбудимости/регенерации в нервных клетках, особенно в синаптосомах мозга [Са2+],п, что приводит к серьезным патологическим состояниям. С этой точки зрения изучение механизмов фармакологической коррекции Са2+ - транспорта биологически активных веществ в синаптосомах в патологических состояниях имеет актуальное научно-практическое значение.
В настоящее время в нашей стране проведены масштабные реформы по улучшению материально-технической базы диагностики и лечения заболеваний нервной системы, обеспеченности фармацевтическими препаратами. В области профилактики и лечения нейродегенеративных заболеваний достигнуты определенные результаты в части производства эффективных нейропротекторных препаратов на основе местного сырья. Необходимо отметить, что, разработкам современных методов диагностики заболеваний, в основе которых лежит нарушение Са2+- гомеостаза, нейродегенеративных заболеваний, патологий связанных с изменением нервных клеток, при токсикологических и наркологических интоксикациях, уделено недостаточное внимание. Внедрение комплексных мер в этом направлении послужит ориентиром для дальнейшего развития фармацевтической промышленности, а также для улучшения предоставления доступных и высококачественных лекарств населению и поставщикам медицинских услуг, перечисленных в Стратегии действий для дальнейшего развития Республики Узбекистан. В этом отношении, играет важную роль создание нейропротекторных препаратов, на основе местного сырья, конкурентоспособных на мировом рынке.
Данное диссертационное исследование в определенной степени служит выполнению задач, предусмотренных в Постановлении Президента Республики Узбекистан от 28 ноября 2011г № ПП-1652 «О мерах по дальнейшему углублению реформирования системы здравоохранения», Указе Президента Республики Узбекистан от 7 февраля 2017 г № УП-4947 «О стратегии действий по дальнейшему развитию Республики Узбекистан», а также в других нормативно-правовых документах, принятых в данной сфере.
Целью исследования является характеристика механизма действия ругана, госситана и дезоксипеганина в условиях in vitro на транспорт Са2+ в синаптосомах головного мозга крыс, а также обоснование их нейропротекторных свойств.
Научная новизна диссертационного исследования состоит в следующем:
выявлено с помощью Са2+- чувствительного зонда - хлортетрациклина повышение проницаемости пресинаптической мембраны при низких концентрациях глутамата, а также возрастание концентрации [Са2+],„ в синаптосомах мозга крыс;
обосновано протекторное действие рутана в условиях хронической алкогольной интоксикации на динамику [Са2+],„ в нервных клетках;
установлена конкуренция между госситаном и нифедипином за счет регулирования дигидропиридин-чувствительных кальциевых каналов;
выявлено антитоксическое действие алкалоида дезоксипеганина подобно глутамату в условиях хронической алкогольной интоксикации путем модуляции активности NMDA-рецепторов;
доказано действие дезоксипеганина на выход Са2+ из внутреннего депо тромбоцитов, обусловленное снижением активности [Са2+]/л, а также релаксантное действие на гладкомышечные клетки за счет блокирования Са2\-канала.
Выводы
1. Установлено, что в контрольной группе глутамат (10-100 мкМ) увеличивает интенсивность флуоресценции в суспензии синаптосомах головного мозга крыс и уровень Са2+-проницаемости пресинаптической мембрана, следовательно и концентрацию [Са2+],„.
2. Выявлено, что хроническая алкогольная интоксикация способствует повышению активности ГАМК- и NMDA-рецепторов, что в свою очередь, приводит к патологическому изменению концентрации [Са2+],„.
3. Впервые выявлено, что при хронической алкогольной интоксикации руган возможно конкурентно с L-глутаматом, а госситан неконкурентно с L-глутаматом оказывают положительное действие на динамику [Са2+],„ в нервных клетках.
4. Алкалоид дезоксипеганин (10-100 мкМ) аналогично L-глутаматом, в условиях хронической алкогольной интоксикации путем модуляции активности NMDA-рецепторов оказывает антитоксическое действие.
5. Впервые установлено, что антиагрегационное действие алкалоида дезоксипеганина (100 мкМ) в тромбоцитах за счет снижения активности вне и внутриклеточного Са2+-транспорта выражается в снижении концентрации [Са2+],„. Это имеет важное значение в качестве дополнительного подтверждения факта снижения концентрации [Са2+],„ в синаптосомах под действием алкалоида дезоксипеганина.
6. Релаксантное действие дезоксипеганина (10-50 мкМ) в условиях in vitro на активность изометрического сокращения препарата аорты крыс связано с уменьшением концентрации [Са2+]„, за счет блокирования Ca2+i_-канала клеток гладких мышц. Эти данные могут служить дополнительным потдверждением того, что дезоксипеганин уменьшает концентрацию [Са2+],„ в синаптосомах.
7. Обнаружено, что на основании проведенных экспериментов в условиях in vitro, с использованием биологически активных веществ, таких как рутан, госситан и дезоксипеганин можно регулировать патологические изменения в ГАМК- и NMDA-рецепторах при разных состояниях алкогольной интоксикации.

МИКРОБИОЛОГИЯ ИНСТИТУТИ ВА ЎЗБЕКИСТОН МИЛЛИЙ

УНИВЕРСИТЕТИ ҲУЗУРИДАГИ ИЛМИЙ ДАРАЖАЛАР БЕРУВЧИ

DSc.27.06.2017. B.38.01 РАҚАМЛИ

ИЛМИЙ КЕНГАШ

БИООРГАНИК КИМЁ ИНСТИТУТИ

ХОШИМОВ НОЗИМЖОН НУМОНЖОНОВИЧ

КАЛАМУШ МИЯСИ СИНАПТОСОМАЛАРИ Са

2+

–

ТРАНСПОРТИГА ПОЛИФЕНОЛ (РУТАН, ГОССИТАН)

ВА АЛКАЛОИД (ДЕЗОКСИПЕГАНИН)

ТАЪСИРИНИ ТАВСИФЛАШ

03.00.08 – Одам ва ҳайвонлар физиологияси

БИОЛОГИЯ ФАНЛАРИ БЎЙИЧА ФАЛСАФА ДОКТОРИ (PhD)

ДИССЕРТАЦИЯСИ АВТОРЕФЕРАТИ

Тошкент – 2018

2

УДК: 576.32.36:612.82:616. –009.8

Фалсафа доктори (PhD) диссертацияси автореферати мундарижаси

Оглавление автореферата диссертации доктора философии (PhD)

Contents of dissertation abstract of doctor of philosophy (PhD)

Хошимов Нозимжон Нумонжонович

Каламуш мияси синаптосомаларидаги Са

2+

-транспортига полифенол (рутан,

госситан) ва алкалоид (дезоксипеганин) таъсирини тавсифлаш

...........................................…

3

Хошимов Нозимжон Нумонжонович

Характеристика действия полифенолов (рутана, госситана) и алкалоида
(дезоксипеганина) на транспорт Са

2+

в синаптосомах мозга крыс

...........................................

21

Khoshimov Nozimjon Numonjonovich

Characteristics of the action of polyphenols (rutan, gossitan) and alkaloid (desoxypeganin)
on the transport of Ca

2+

in the brain synaptosomes of rats

..................................................................

39

Эълон қилинган ишлар рўйхати

Список опубликованных работ
List of published works

……………………………………………………...........................................…...

43

3

МИКРОБИОЛОГИЯ ИНСТИТУТИ ВА ЎЗБЕКИСТОН МИЛЛИЙ

УНИВЕРСИТЕТИ ҲУЗУРИДАГИ ИЛМИЙ ДАРАЖАЛАР БЕРУВЧИ

DSc.27.06.2017. B.38.01 РАҚАМЛИ

ИЛМИЙ КЕНГАШ

БИООРГАНИК КИМЁ ИНСТИТУТИ

ХОШИМОВ НОЗИМЖОН НУМОНЖОНОВИЧ

КАЛАМУШ МИЯСИ СИНАПТОСОМАЛАРИ Са

2+

–

ТРАНСПОРТИГА ПОЛИФЕНОЛ (РУТАН, ГОССИТАН)

ВА АЛКАЛОИД (ДЕЗОКСИПЕГАНИН)

ТАЪСИРИНИ ТАВСИФЛАШ

03.00.08 – Одам ва ҳайвонлар физиологияси

БИОЛОГИЯ ФАНЛАРИ БЎЙИЧА ФАЛСАФА ДОКТОРИ (PhD)

ДИССЕРТАЦИЯСИ АВТОРЕФЕРАТИ

Тошкент – 2018

4

5

КИРИШ (фалсафа доктори (PhD) диссертацияси аннотацияси)

Диссертация мавзусининг долзарблиги ва зарурати

. Бугунги кунда

дунёда нерв ҳужайраларида Са

2+

-гомеостазининг бузилишидан келиб

чиқувчи, ижтимоий аҳамиятга эга бўлган нейродегенератив касалликлар
сонининг барқарор ҳолатда ортиб бориши кузатилмоқда

1,2

.

Нейродегенератив

касалликларни, шунингдек, токсикологик ва наркологик заҳарланиш
патогенезида зарарланувчи марказий/периферик нерв тизимини даволашда
ўсимликлардан ажратиб олинган биологик фаол бирикмалар самарали
нейропротектор, антитоксик препаратларни яратишда истиқболли манбалар
сифатида фойдаланилади.

Ҳозирги кунда жаҳон миқёсида ушбу йўналишда амалга оширилган

илмий тадқиқотларда нейродегенератив касалликлар бош мия симпатик ва
парасимпатик нерв тизими ҳужайраларининг функционал фаоллигини
ифодалаб берувчи ион-транспорт тизимлари ва рецепторлар комплексининг
дисфункцияси асосида келиб чиқиши аниқланган. Нерв ҳужайраларида
сигнал трансдукцияси ва қўзғалиш/тормозланиш жараёнларини бошқаришда
Са

2+

–транспорти марказий компонентлардан бири бўлиб, бош мия

синаптосомаларида [Са

2+

]

in

гомеостази дисфункцияси жиддий патологик

ҳолатларга сабаб бўлиши қайд қилинган. Шу нуқтаи назардан, патологик
шароитда бош мия синаптосомаларида Са

2+

-транспортини биологик фаол

моддалар ёрдамида фармакологик коррекциялаш механизмларини тадқиқ
қилиш масаласи долзарб, илмий–амалий аҳамиятга эга ҳисобланади.

Ҳозирги кунда республикамизда нерв тизими касалликларига ташхис

қўйиш

ва

даволаш

муассасаларининг

моддий-техник

базасини

такомиллаштириш, фармацевтик препаратлар билан таъминлаш йўналишида
сезиларли ислоҳотлар амалга оширилди. Мазкур йўналишда амалга
оширилган дастурий чора-тадбирлар асосида муайян натижаларга, жумладан,
нейродегенератив

касалликларни даволаш ва профилактика қилиш

мақсадида самарали нейропротектор дори воситаларини яратиш йўналишида
муайян ютуқларга эришилди. Такидлаш жоизки, нерв ҳужайралари Са

2+

-

гомеостазининг бузилишидан келиб чиқувчи, нейродегенератив касалликлар,
токсикологик ва наркологик заҳарланиш оқибатида нерв ҳужайраларининг
ўзгариши орқали бўладиган касалликларни ташҳислашнинг замонавий
усулларини ишлаб чиқиш борасидаги тадқиқот ишларини олиб бориш катта
аҳамиятга эгадир. Ўзбекистон Республикасини янада ривожлантириш бўйича
Ҳаракатлар стратегиясида «фармацевтика саноатини янада ривожлантириш,
аҳоли ва тиббиёт муассасаларининг арзон, сифатли дори воситалари билан
таъминлаш» вазифаси белгилаб берилган. Бу ўринда

маҳаллий хом ашёлар

асосида жаҳон бозорида рақобатлаша оладиган нейропротектор дори
воситаларини яратиш муҳим аҳамият касб этади.

Ўзбекистон Республикаси Президентининг 2011 йил 28 ноябрдаги ПҚ-

1652-сон «Соғлиқни сақлаш тизимини ислоҳ қилишни янада чуқурлаштириш

1

The World Health Organization (www.who.int/gho/publications/world_health_statistics)

2

World Federation of Neurology (www.wfneurology.org)

6

чора-тадбирлари тўғрисида» ги Қарори ва 2017 йил 7 февралдаги ПФ-4947-
сон «Ўзбекистон Республикасини янада ривожлантириш бўйича Ҳаракатлар
стратегияси тўғрисида» ги Фармони ҳамда мазкур фаолиятга тегишли бошқа
меъёрий-ҳуқуқий ҳужжатларда белгиланган вазифаларни амалга оширишга
ушбу диссертация тадқиқоти муайян даражада хизмат қилади.

Тадқиқотнинг

республика

фан

ва

технологиялари

ривожланишининг асосий устувор йўналишларига мослиги.

Мазкур

тадқиқот Республика фан ва технологиялар ривожланишининг VI. «Тиббиёт
ва фармакология» устувор йўналишига мувофиқ бажарилган.

Муаммонинг ўрганилганлик даражаси

.

In vitro

ва

in vivo

шароитида

нерв ҳужайралари функционал фаоллигида [Са

2+

]

in

динамикасининг аҳамияти

ва регуляция механизмларини ўрганиш йўналишида иш олиб борган бир
қатор олимлар, жумладан, Bhandage A.K. (2016) ишларида марказий нерв
тизимида ионотроп/метаботроп каскадлар орқали таъсир кўрсатувчи асосий
қўзғатувчи/тормозловчи нейротрансмитерлардан бири бўлган – γ–аминомой
кислота

(ГАМК)

таъсирида

фаоллашувчи

ГАМК–рецепторининг

фармакологик регуляция механизмлари тадқиқ қилинган. Бунда глутамат
ионотроп каскад орқали – глутамат рецептори (

i

Glu–AMPA/каинат ва

NMDA–рецептори), ГАМК эса, ГАМК–А–рецептори орқали таъсир
кўрсатиши аниқланган. Tagliaferri S. (2010) томонидан нерв ҳужайраларида
глутамат рецепторининг [Са

2+

]

in

–гомеостазидаги аҳамияти таҳлил қилинган.

Remiro P.B. (2013) томонидан этанол интоксикацияси шароитида нерв
ҳужайраларида

[Са

2+

]

in

концентрациясининг

ўзгариш

динамикаси

тавсифланган. Kaur P. (2008) томонидан нейротоксик таъсир шароитида
каламуш бош мия синаптосомалари функционал фаоллиги ўзгаришининг
молекуляр механизмлари аниқланган. Rosa R.M. ва бошқалар (2007),
Тарасенко А.С. ва бошқалар (2010) томонидан каламуш бош мия
синаптосомалари фаоллигининг глутамат рецептори орқали регуляция
механизмлари тадқиқ қилинган. Ўсимликлардан ажратиб олинган биологик
фаол моддаларнинг каламуш бош мия синаптосомаларида Са

2+

–транспортига

таъсири Кухта В.К. ва бошқалар (2010) томонидан илмий асосланган ва нерв
ҳужайраларида сигнал трансдукцияси/узатилиши жараёнида Са

2+

ионлари

марказий мессенжер сифатида аҳамиятга эга ҳисобланиши қайд қилинган.

Республикамиз миқёсида каламуш бош мия синаптосомаларига

алкалоидлар ва токсинларнинг Са

2+

-транспортига таъсирини ўрганиш

йўналишида П.Б.Усманов, Дж.Каликулов ва бошқалар (1985) томонидан
илмий тадқиқотлар амалга оширилган, бироқ нейропротектор дори
воситаларига талаб юқорилиги ва ўсимликлардан ажратиб олинаётган
биологик фаол моддаларнинг нерв тизимига таъсири тўлиқ тадқиқ
қилинмаганлиги учун, ушбу йўналишида тадқиқотларни амалга ошириш
долзарб, илмий-амалий аҳамиятга эга.

Диссертация тадқиқотининг диссертация бажарилган олий таълим

ёки

илмий–тадқиқот

муассасасининг

илмий–тадқиқот

ишлари

режалари билан боғлиқлиги.

Диссертация тадқиқоти Биоорганик кимё

институтининг илмий–тадқиқот ишлари режасининг ФА–А10–Т086

7

«Алкоголизм ва унга боғлиқ асоратларни даволаш ва профилактика
қилишнинг янги услубларини ишлаб чиқиш» (2012–2014) мавзусидаги илмий
лойиҳа доирасида бажарилган.

Тадқиқотнинг мақсади

рутан, госситан ва дезоксипеганиннинг

in vitro

шароитида назорат ва сурункали алкогол интоксикациясида бош мия
синаптосомаси

Са

2+

-транспортига

таъсирини

тавсифлаш

ҳамда

нейропротектор хоссаларини асослашдан иборат.

Тадқиқотнинг вазифалари:

глутамат таъсирида каламуш бош мияси синаптосома мембранасининг

Са

2+

ионлари учун ўтказувчанлик даражаси ҳамда [Са

2+

]

in

концентрациясига

таъсирини аниқлаш;

сурункали алкогол интоксикацияси шароитида ГАМК- ва NMDA-

рецептор

фаоллигининг

бузилиши

орқали

синаптосома

[Са

2+

]

in

концентрациясининг ўзгаришини аниқлаш;

рутан, госситан ва дезоксипеганиннинг назорат гуруҳида каламуш бош

мияси синаптосомаларида глутамат, NMDA-, ГАМК-рецепторлари орқали
Са

2+

-транспортига таъсир механизмини тавсифлаш;

рутан,

госситан

ва

дезоксипеганиннинг

сурункали

алкогол

интоксикацияси шароитида каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

-

транспорти бошқарилиш механизмларини тадқиқ қилиш ва нейропротектор
хоссасини асослаш;

дезоксипеганиннинг бошқа ҳужайралар (тромбоцитлар ва қон томир

силлиқ мускул ҳужайраларида) Са

2+

-транспортига таъсирини қиёсий таҳлил

қилиш.

Тадқиқотнинг объекти

ўсимликлардан ажратиб олинган - рутан,

госситан полифеноллари ва дезоксипеганин алкалоиди, каламуш бош мияси
синаптосомалари суспензияси, тромбоцитлар суспензияси, аорта қон томир
препарати ҳисобланади.

Тадқиқотнинг предмети

сурункали ва ўткир алкогол интоксикацияси

шароитида

рутан, госситан ва дезоксипеганиннинг каламуш бош мияси

синаптосомаларида Са

2+

-транспортига таъсирини тавсифлашдан иборат.

Тадқиқотнинг

усуллари.

Тадқиқот

давомида

дифференциал

центрифугалаш, спектрофотометрия, флуоресценция услублари,

in vitro

шароитида каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

-транспорти

динамикасини баҳолаш имконини берувчи USB 2000 (Ocean Optics Inc.,
АҚШ) аппарат/дастур таъминоти, олинган натижаларни қайта ишлашда
OriginPro 7.5 (OriginLab Corporation, АҚШ) математик–статистик таҳлил
дастур пакетидан фойдаланилди.

Тадқиқотнинг илмий янгилиги

қуйидагилардан иборат:

Са

2+

-сезгир зонд - хлортетрациклин ёрдамида глутаматнинг қуйи

концентрацияси таъсирида пресинаптик мембрананинг ўтказувчанлик
даражасини ошириши ва каламуш мияси синаптосомаси [Са

2+

]

in

концентрациясининг ортиши аниқланган;

8

сурункали алкогол интоксикациясида рутан глутаматнинг нерв

ҳужайраларида [Са

2+

]

in

оширувчи таъсирига протектор таъсир кўрсатиши

асосланган;

дигидропиридинга сезгир кальций каналларини бошқаришда госситан

полифеноли ва нифедипин ўртасида рақобатлашиш типида таъсирга эга
эканлиги аниқланган;

сурункали алкогол интоксикацияси шароитида дезоксипеганин

алкалоиди глутамат сингари NMDA–рецептори фаоллигини модуляциялаши
орқали антитоксик таъсир кўрсатиши аниқланган;

дезоксипеганиннинг тромбоцитларда ички деполардан чиқувчи Са

2+

-

транспортини сусайтириши орқали [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтириши,

шунингдек қон томир силлиқ мускул ҳужайраларида унинг релаксант
таъсири Са

2+

L

–канали блокадаси билан боғлиқлиги исботланган.

Тадқиқотнинг

амалий

натижалари

.

Рутан,

госситан

ва

дезоксипеганиннинг каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

–

транспортига таъсирини тавсифлашда олинган натижалар потенциал
нейропротектор препаратларни ишлаб чиқишда илмий асос сифатида
фойдаланилади. Олинган натижалар алкогол интоксикациясида биологик
фаол моддаларнинг антитоксик таъсир механизмлари бўйича мавжуд назарий
билимлар

диапазонини

кенгайтиради.

Рутан,

госситан

ҳамда

дезоксипеганиннинг

in vitro

шароитида каламуш мияси синаптосомалари

суспензиясида флуоресценция интенсивлигига таъсири бўйича аниқланган
ҳолатлар амалий жиҳатдан, тадқиқ қилинган моддаларнинг нерв
ҳужайраларида ГАМК –, NMDA–рецептор орқали [Са

2+

]

in

динамикаси

модуляцияси асосида нейропротектор таъсирга эга бўлган фармакологик
препаратларни ишлаб чиқиш имконини беради.

Тадқиқот

натижаларининг

ишончлилиги.

Тадқиқот

ишида

фойдаланилган замонавий физиологик усуллар ва аппаратлар, дастурий
таъминотлар, шунингдек уларнинг замонавий биофизикавий-биокимёвий
тадқиқот усулларини қўллаш орқали олинганлиги билан тасдиқланади. Ҳар
бир тадқиқот тажрибалари энг камида 4-6 марта ўтказилган. Олинган
маълумотларни қайта ишлаш Стьюдент критерийси ёрдамида ўртача
қийматнинг ишончлилик интервали оралиқ қийматларини ҳисоблаган ҳолда
OriginPro 7.5 (OriginLab Corporation, АҚШ) компьютер дастурида статистик
таҳлил қилинди.

Тадқиқот натижаларининг илмий ва амалий аҳамияти.

Тадқиқот

натижаларининг илмий аҳамияти – бош мия синаптосомаларида [Ca

2+

]

in

гомеостазининг Са

2+

-транспорти ва NMDA-рецепторларининг функционал

фаоллигини фармакологик регуляция механизмлари бўйича назарий
билимлар диапазонини кенгайтириши билан изоҳланади.

Тадқиқот натижаларининг амалий аҳамияти рутан, госситан ва

дезоксипеганиннинг каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

-

транспортига

таъсир

механизмлари

бўйича

аниқланган

ҳолатлар

нейропатологиялар,

жумладан

алкогол

интоксикацияси

шароитида

9

фармакологик коррекция мақсадида препаратлар ишлаб чиқишда
фойдаланилиши мумкинлиги билан изоҳланади.

Тадқиқот натижаларининг жорий қилиниши.

Рутан, госситан ва

дезоксипеганиннинг каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

-

транспортига таъсирини аниқлаш бўйича олинган натижалар асосида:

нейродегенератив жараёнларни молекуляр даражадаги ривожланиш

механизмларини нейропротектор препаратлар ёрдамида коррекциялашдан
доривор

воситаларни

фармакологик

тавсифлашда

фойдаланилган

(Ўзбекистон Республикаси Соғлиқни сақлаш вазирлиги фармацевтика
тармоғини ривожлантириш агентлигининг «Дори воситалари, тиббий
буюмлар ва тиббий техника экспертизаси ва стандартлаштириш давлат
маркази» 2018 йил 27 мартдаги № 29/09-1058 - сон маълумотномаси).
Натижада давлат марказининг фармакологик ва токсикологик тадқиқотлар
лабораториясида нейростимуляцияловчи доривор воситаларни специфик
фаоллигини аниқлаш имконини берган;

рутан, госситан ва дезоксипеганиннинг каламуш бош мияси

синаптосомаларида Са

2+

-транспортига таъсиридан ФА–А11–Т057 рақамли

«Табиий ва синтетик биологик фаол моддаларни юқори самарали скрининг
марказини ташкил этиш» лойиҳасида гипоксияда каламуш бош мияси
синаптосома мембраналари Са

2+

-транспортига ҳамда NMDA-рецепторига

таъсир механизмларини аниқлашда фойдаланилган (Фан ва технологиялар
агентлигининг

2017

йил

21

ноябрдаги

ФТА-02-11/1148-сон

маълумотномаси). Натижада гипоксияда синаптосома мембранаси Са

2+

-

транспорти

блокланиши

ва

NMDA-рецептори

орқали

[Са

2+

]

in

концентрациясининг камайиши асосида нейропротектор хоссаларини
тавсифлаш имконини берган.

Тадқиқот

натижаларининг

апробацияси.

Мазкур

тадқиқот

натижалари 7 та халқаро ва 1 та республика илмий–амалий анжуманларида
муҳокамадан ўтказилган.

Тадқиқот натижаларининг эълон қилиниши.

Диссертация мавзуси

бўйича жами 13 та илмий иш чоп этилган, шулардан, Ўзбекистон
Республикаси Олий аттестация коммиссиясининг диссертацияларнинг асосий
илмий натижаларини чоп этишга тавсия этилган илмий журналларда 5 та
мақола, шундан 3 та республика ва 2 таси хорижий журналларда нашр
этилган.

Диссертациянинг ҳажми ва тузилиши.

Диссертация таркиби кириш,

бешта боб, хулосалар, фойдаланилган адабиётлар рўйхатидан иборат.
Диссертациянинг ҳажми 114 бетни ташкил этган.

ДИССЕРТАЦИЯНИНГ АСОСИЙ МАЗМУНИ

Кириш

қисмида ўтказилган тадқиқотларнинг долзарблиги ва зарурати

асосланган, тадқиқотнинг мақсади ва вазифалари, объект ва предметлари
тавсифланган, республика фан ва технологиялари ривожланишининг устувор
йўналишларига мослиги, тадқиқотнинг илмий янгилиги ва амалий

10

натижалари баён қилинган, олинган натижаларнинг илмий–амалий аҳамияти
очиб берилган, тадқиқот натижаларини амалиётга жорий қилиш, нашр
этилган ишлар ва диссертация тузилиши бўйича маълумотлар келтирилган.

Диссертациянинг

«Нерв

тизими

ҳужайраларида

[Ca

2+

]

in

гомеостазининг регуляция механизмлари»

деб номланган биринчи бобида

замонавий адабиётлар асосида нерв тизими ҳужайраларида [Ca

2+

]

in

гомеостазининг регуляция механизмлари, бош мия нерв ҳужайраларида Са

2+

–

транспорт тизимлари ва Са

2+

–гомеостазининг глутамат ва NMDA–

рецепторлари орқали бошқарилиш механизмлари, глутамат, NMDA- ва
AMPA–рецепторининг

структура тузилиши ва функцияси, этанол

интоксикацияси механизми бўйича маълумотлар келтирилган.

Диссертациянинг

«Каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

–

транспортини ўрганиш услублари»

деб номланган иккинчи бобида

тадқиқотларни олиб бориш босқичлари, уларнинг бажарилишида
фойдаланилган материаллар ва усуллар, хусусан сурункали алкогол
интоксикациясининг экспериментал моделини тузиш, меъёр ва алкогол
интоксикациясида дифференциал центрифугалаш усули ёрдамида каламуш
бош миясидан синаптосома суспензиясини ажратиш, флуоресценция
услубида синаптосомалардаги [Ca

2+

]

in

динамикасини баҳолаш, қўшимча

тадқиқотларда гемостаз тизими ва қон томир силлиқ мускул ҳужайраларида
[Ca

2+

]

in

динамикасини таъсирини қиёсий таҳлил қилиш учун тромбоцитларни

ажратиш, тромбоцитлар агрегацияси, унинг функционал фаоллигини
ўрганиш, аорта қон томир препаратининг механик фаоллигини қайд қилиш
услуби, натижаларни статистик қайта ишлаш услуби ёритилган.

Диссертациянинг

«Каламуш бош мияси синаптосомаларида Са

2+

–

транспортининг глутамат рецептори орқали регуляцияси»

деб номланган

учинчи бобида Са

2+

–сезгир флуоресценция зондлари ёрдамида каламуш бош

мия синаптосомалари суспензиясида флуоресценция сигналининг (

F

3

40

/

F

380

)

интенсивлигини ўзгаришини қайд қилиш асосида синаптик мембранада
жойлашган глутамат рецептори активацияси орқали [Ca

2+

]

in

динамикаси

ўзгаришларини таҳлил қилиш бўйича тажрибалар натижалари келтирилган.
Са

2+

–сезгир зонд – хлортетрациклин (ХТЦ) ёрдамида тажрибаларда Са

2+

ионларини комплекс боғлаб олувчи – этиленгликоль (бис–аминоэтил эфир)–
N, N–тетрасирка кислота (ЭГТА) (1 мМ) билан инкубация ([Ca

2+

]

out

=0 мМ)

қилинганида флуоресценция интенсивлиги назоратга нисбатан 5% га
камайиши аниқланди. ЭГТА (1 мМ) инкубациясида L–глутамат (10–50 мкМ)
таъсирида флуоресценция интенсивлиги 5–10% га ортиши кузатилди ва бу
синаптик мембрананинг Са

2+

ионлари учун ўтказувчанлик даражасини

ортиши, бу эса ўз навбатида цитозолга Са

2+

ионларининг кириши, шунингдек

ҳужайра ички «

депо

»сидан чиқишини кучайиши ҳисобига [Ca

2+

]

in

концентрациясини ортиши билан изоҳланади (1–расм). Синаптосома
суспензияси муҳитига L–глутамат (100 мкМ) қўшилганда ХТЦ–
флуоресценция сигналининг интенсивлиги икки фазали типда, яъни 1–фазада
инкубация муҳитида KCl (30 мМ) инкубацияси шароитида кузатилган
ҳолатга ўхшаш, дастлаб нисбатан тезкор (5–10 секунд давомида) ўзгариши ва

11

қайтадан олдинги ҳолатга қайтиши, навбатдаги 2–фазада эса, нисбатан секин
ортиб бориши кузатилди. Бунда 1–фаза L–глутамат концентрациясига (10–
100 мкМ) пропорционал бўлиб, пресинаптик мембрана деполяризацияси,
[Ca

2+

]

in

концентрацияси ортиши таъсирида кўп сонли везикулаларнинг

экзоцитоз жараёнини юзага келтириши натижасида флуоресценция
интенсивлигини «

чақнаш

» типида ўзгариши билан изоҳланади. L–глутамат

концентрацияси ошириб борилганида 1– ва 2–фаза ўртасидаги

лаг

–фазанинг

давомийлик даврининг қисқариши аниқланди. Шунингдек, L–глутамат 100
мкМ концентрацияда қўшилганда такрорий флуоресценция кузатилмади.

L–глутамат (10–50 мкМ) ва KCl (35 мМ) эритмасининг синаптосомалар

суспензиясининг флуоресценция интенсивлигига солиштирма таъсири
таҳлил қилинди.

Ф

лу

оре

сцен

ци

я

ин

тенси

вли

ги

(F

340

/F

380

)

0

25

50

75

100

**

*

4

3

2

1

Ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

(1) Назорат
(2) ЭГТА (1мМ)
(3) Глутамат (50 мкМ)
(4) ЭГТА (1мМ)

Вақт (секунд)

Назорат

Глутамат (10 мкМ)

Глутамат (25 мкМ)

Глутамат (50 мкМ)

ЭГТА (1мМ)

1–расм. Каламуш бош мияси синаптосомалари суспензияси ЭГТА (1 мМ) билан

инкубация қилинганида L–глутамат (10–50 мкМ) таъсиридаги флуоресценция
интенсивлигининг ўзгариши.

А. Оригинал расм. L–глутамат (50 мкМ) таъсирида

флуоресценция интенсивлигининг ортиши. Ишончлилик даражаси.*- Р<0,05; **- Р<0,01;
***- Р<0,001. (

n

=6).

Флуоресценциянинг икки фазали типда ўзгаришининг сабабини

синаптосомада L–глутамат таъсирида цитозолда [Са

2+

]

in

концентрациясининг

2 босқичли характерда ортиши ва везикулалардан Н

+

ажралишини кучайиши

билан изоҳлаш мумкин. Цитозолда [Са

2+

]

in

концентрациясининг ортиши

Са

2+

–каналларининг фаоллашиши ва Na

+

/Са

2+

–алмашувчининг реверсион

типда фаолият кўрсатиши ҳисобига амалга ошиши қайд қилинади (Siesjo and
Bengtsson, 1989). Шунингдек, [Са

2+

]

in

концентрацияси Са

2+

ни ташқи

муҳитдан кириши билан бирга, саркоплазматик ретикулум (СР) ва
митохондриядан чиқиши ва Са

2+

ионларининг цитозолда камайиш

механизмлари фаоллигини сусайиши ҳисобига ҳам ортиши мумкин. ЭГТА (1
мМ) билан инкубация қилинганида ([Са

2+

]

out

=0 мМ) L–глутамат (100 мкМ)

таъсирида ХТЦ–флуоресценциясида

«

тезкор

» типда кузатиладиган 1–фазани

сақланиши, бироқ «

чақнаш

» типидаги ўзгариш кузатилмади. Аналогик ҳолат

КСl (35 мМ) таъсирида ҳам қайд қилинди. Cа

2+

–канали блокатори – Cd

2+

(25

мМ) билан инкубация қилинган шароитда ҳам L–глутамат (100 мкМ)/КСl (35
мМ) таъсирида ХТЦ–флуоресценцияси интенсивлиги ортиши кузатилмади.

12

Маълумки, L–глутамат (100 мкМ) таъсирида ХТЦ–флуоресценцияси
интенсивлигини ўзгариши NMDA– ва глутамат рецепторининг активацияси
орқали цитозолда [Са

2+

]

in

концентрациясини ортиши билан боғлиқ бўлиб,

КСl (35 мМ) инкубацияси таъсирида эса, мембранани деполяризацияланиши
натижасида Cа

2+

–канали фаоллашиши ҳисобига [Са

2+

]

in

концентрацияси

ортиши қайд қилинади. Шунингдек, тажрибаларда L–глутамат (100 мкМ)
инкубациясида синаптосомалар суспензиясида ХТЦ–флуоресценциясининг
1–фазада нисбатан «

тезкор

» типда ўзгариши асосан, постсинаптик

мембранада жойлашган α–амино–3–гидрокси–5–метил–4–изоксазолпропион
кислота (АМПА)/каинат рецепторини активацияси орқали амалга ошишини
тахмин қилиш мумкин. АМПА/каинат рецептор ГАМК–ергик трансмиссион
сигнал трансдукциясида муҳим ўрин тутиши аниқланган (Mayer et al., 1989;
Cossart et al., 2001; Lerma, 2006; Fiszman et al., 2007; Mathew et al., 2008).
Cа

2+

–канали блокатори – Cd

2+

(25 мМ) (Mayer et al., 1989) билан инкубация

қилинганида L–глутамат (100 мкМ) таъсирида ХТЦ–флуоресценцияси
интенсивлигида

«

тезкор

» типда кузатилувчи 1–фаза сақланиши, Cd

2+

(25

мМ) таъсирида NMDA–рецептор орқали цитозолга Cа

2+

ионларини кириши

блокланганида АМПА/каинат рецепторлар фаоллигини сақланиб қолиши
билан изоҳланиши мумкин.

Тажрибаларда глицин (10–100 мкМ) инкубацияси L–глутамат (100 мкМ)

таъсирида NMDA–рецепторнинг фаоллашишини кучайтирувчи таъсир
кўрсатиши аниқланди. Шунингдек, NMDA–рецепторнинг специфик
блокатори – стрихнин (5 мМ) инкубацияси шароитида глициннинг (100 мкМ)
инкубацияси L–глутамат (100 мкМ) таъсиридаги ХТЦ– флуоресценциясини
кучайтирувчи таъсири кузатилмайди. Тажриба натижалари асосида, глицин
ва L–глутамат NMDA–рецепторнинг турли хил функционал сайтлари билан
боғланишини тахмин қилиш мумкин.

Диссертациянинг

«Назоратда ва алкогол интоксикацияси шароитида

каламуш бош мияси синаптосомаларида [Са

2+

]

in

динамикасига рутан,

госситан ва дезоксипеганиннинг таъсири»

деб номланган тўртинчи бобида

ГАМК–рецепторининг

активатор/блокаторлари

ёрдамида

алкогол

интоксикацияси шароитида рутан, госситан ва дезоксипеганиннинг
синаптосомаларда

Са

2+

–транспортига

таъсири

тадқиқ

қилинганда,

тажрибаларда этанол (5–10 мМ) инкубацияси шароитида флуоресценция
интенсивлиги назоратга нисбатан сусайиши аниқланди (2А–расм). Бундай
шароитда L–глутамат (50 мкМ) таъсирида флуоресценция интенсивлиги
сезиларли даражада ўзгармади ва ўз навбатида, бу ҳолат мембрананинг Са

2+

ионларига нисбатан ўтказувчанлик даражаси қиймати ҳам ўзгармаслигидан
далолат беради. Тажрибаларда ГАМК–рецептори блокатори – пикротоксин
(5–50 мкМ) инкубацияси шароитида флуоресценция интенсивлигининг ортиб
бориши аниқланди (2Б–расм).

Пикротоксин (5–50 мкМ) аллостерик характерда ГАМК–рецепторини

блоклаганида NMDA–рецептори фаоллашади. Тажрибалардан олинган
натижалар сурункали алкогол интоксикацияси таъсирида ГАМК–
рецепторининг фаоллигини ортиши, ўз навбатида цитозолга Са

2+

13

ионларининг киришини фаоллашиши, натижада [Са

2+

]

in

концентрацияси

ортишини кўрсатади. Тадқиқотларда этанол NMDA–рецепторининг
функционал фаоллигини модуляция қилиш орқали глутаматергик
нейротрансмиссия дисфункциясига олиб келиши қайд қилинган (Lima–
Landman and Albuquerque, 1989; White et al., 1990). Сурункали алкогол
интоксикациясининг таъсир механизмларидан бири айнан, NMDA–
рецепторининг функциясини ўзгариши билан боғлиқлиги таъкидланади
(Simson et al., 1991; Gulya et al., 1991; Parsons et al., 1998).

0

25

50

75

100

125

* *

*

* *

*

Ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

Назорат
Глутамат (50мкМ)
Пикротоксин (5мкМ)
Пикротоксин (50мкМ)

Ф

лу

оре

сценци

я инт

енсив

ли

ги

(

F

340

/F

380

)

Вақт (секунд)

Назорат

Этанол

А

Б

2–расм. А. Этанолнинг (100 мМ) синаптосома суспензиясида флуоресценцияга

таъсири

(Оригинал расм).

Б. ГАМК–рецептори блокатори – пикротоксиннинг (5–50

мкМ)

каламуш

мияси

синаптосомалари

суспензиясида

флуоресценция

интенсивлигига таъсири

. Ишончлилик даражаси. *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001.

(

n

=6).

Сурункали алкогол интоксикациясида глутамат секрециясини кучайиши

таъсирида «

эксайтотоксик таъсир

» юзага келиши тасдиқланган (Dahchour

and Witte, 2000). Сурункали алкогол интоксикацияси таъсирида глутамат
секрецияси кучаяди ва NMDA–рецепторини фаоллашиши орқали
нейротоксик таъсир қайд қилинади. Тажрибаларда сурункали алкогол
интоксикациясида инкубация муҳитига ГАМК–рецептори агонистлари –
диазепам ва фенобарбитал (50–100 мкМ) қўшилганида ГАМК–
рецепторининг тормозловчи таъсири ортади ва мос равишда, [Са

2+

]

in

концентрацияси ҳам камайиши қайд қилинади. Олинган ушбу натижалар
сурункали

алкогол

интоксикацияси

таъсирида

ГАМК–рецепторини

фаоллашиши, АМРА/каинат рецептори фаоллигининг модуляцияси орқали
глутаматергик нейротрансмиссия дисфункцияси билан изоҳланиши мумкин.
Сурункали алкогол интоксикациясида L–глутамат (50 мкМ) ва глицин (5
мкМ) синаптосома суспензиясида ХТЦ–флуоресценция интенсивлигини
сезиларсиз даражада ошириши аниқланди. Олинган натижалар асосида,
сурункали алкогол интоксикацияси таъсирида NMDA–рецепторнинг
функционал суббирликларининг L–глутамат ва глицинга нисбатан
сезувчанлик даражаси кескин сусайишини тахмин қилиш мумкин.
Шунингдек, сурункали алкогол интоксикацияси давридан кейин, тажриба
ҳайвонлари организмига этанол киритиш тўхтатилиши шароитида
ҳайвонларда безовталик ҳолати юзага келиши аниқланди. Ушбу ҳолатдаги

14

синаптосома суспензиясида ХТЦ–флуоресценция интенсивлиги назорат
гуруҳига нисбатан сезиларли даражада ортиши аниқланди.Шундай қилиб,
этанол таъсирида NMDA–рецептори функцияси бузилиши қайд қилиниб,
сурункали

алкогол

интоксикацияси

тўхтатилганида

синаптосома

суспензиясида ХТЦ–флуоресценция интенсивлигининг назорат гуруҳига
нисбатан ортишини глутаматергик тизим фаоллиги реактивацияси билан
изоҳлаш мумкин. Навбатдаги тажрибаларда глутамат рецептори блокатори –
МК–801 (5 мкМ) билан инкубация қилинганида сурункали алкогол
интоксикацияси

шароитида

синаптосомалар

суспензиясида

ХТЦ–

флуоресценцияси интенсивлиги назоратга нисбатан 20% га камайиши,
шунингдек глутамат рецептори блокатори – аргиолобатин (10 мкМ)
инкубацияси шароитида бу кўрсаткич назоратга нисбатан 35% га камайиши
аниқланди. Олинган натижалар сурункали алкогол интоксикацияси NMDA–
рецептори функционал суббирликларига комплекс таъсир кўрсатишидан
далолат беради.

Маълумки, сурункали алкогол интоксикацияси таъсирида синапс

терминалларида

глутамат

секрецияси

кучайиши

ҳисобига

нерв

ҳужайраларида – «

эксайтотоксик таъсир

» ёки «

қўзғалган аминокислоталар

орқали токсик таъсир

» деб номланган патологик ҳолат юзага келади.

Глутаматнинг эксайтотоксик таъсири NMDA–рецепторининг специфик
антагонисти – N–метил–D–аспартат таъсирига аналогик типда амалга ошади,
деб тахмин қилинади. Глутамат NMDA–рецептори билан боғланганида
цитозолда [Са

2+

]

in

концентрацияси кескин ортади, бу эса ўз навбатида

Паркинсон касаллигида кузатилгани каби, нерв ҳужайраларининг
эксайтотоксик таъсир оқибатида нобуд бўлиши жараёни ишга тушади.
Шунингдек, глутамат орқали амалга ошувчи сигнализация каскади
функциясининг ўзгариши эпилепсия, Альцгеймер каби нейропатологиялар
ривожланишида ҳам асосий ўрин тутиши тахмин қилинади.

Дастлаб, АҚШда вирусга қарши препарат сифатида синтезланган –

«Амантадин» препарати (Симметрел) NMDA–рецептори антагонисти типида
таъсир кўрсатиши, эксайтоксик таъсир реакциялар каскадини блоклаши
аниқланган ва бу препарат нейроклиник амалиётда Паркинсон касаллиги
терапиясида самарали фойдаланилади (Schwab and Poshanzer, 1969). Ушбу
маълумотлар асосида, навбатдаги тажрибаларда сезиларли даражада
антивирус хоссага эга бўлган – рутан ва госситаннинг эксайтотоксик
таъсирга қарши таъсир кўрсатиш хоссасига эга бўлиши мумкинлиги
ўрганилди. Тажрибаларда назорат гуруҳида рутан (10–100 мкМ)
синаптосомалар

суспензиясида

ХТЦ–флуоресценция

интенсивлигига

сезиларли даражада таъсир кўрсатмаслиги, шунингдек L–глутамат (50 мкМ)
билан инкубация қилинганида рутан (50 мкМ) ХТЦ–флуоресценция
интенсивлигини сусайтириши аниқланди. Рутан (10 мкМ) билан инкубация
қилинганида ХТЦ–L–глутамат комплексининг флуореценция интенсивлиги
сусайиши аниқланди. Бунда рутан концентрацияга (10–100 мкМ) боғлиқ
ҳолатда L–глутаматнинг таъсирини сусайтириши қайд қилинди. Олинган
ушбу натижалар рутан ва L–глутаматнинг рақобатлашиш типида таъсир

15

кўрсатишини тахмин қилиш имконини беради. Навбатдаги тажрибаларда
сурункали алкогол интоксикациясида рутан (50 мкМ) флуоресценция
интенсивлигини бирозгина ошириши аниқланди. Шунингдек, ГАМК (100
мкМ) билан инкубацияси қилинганида синаптосомалар суспензияси
муҳитига L–глутамат (50 мкМ) қўшилиши NMDA–рецептори фаоллигини
сусайиши ва ўз навбатида, [Са

2+

]

in

концентрацияси камайганида рутан (10–

100 мкМ) флуоресценция интенсивлигини сусайтириши аниқланди (3А–
расм). ГАМК–рецептор антагонисти – пикротоксин (50 мкМ) инкубацияси
шароитида рутан (10–100 мкМ) ГАМК–ХТЦ комплексининг флуоресценция
интенсивлиги сезиларли даражада сусайиши аниқланди. Олинган натижалар
рутан [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтирган шароитда ГАМК–рецептор

фаоллигига антагонист сифатида таъсир кўрсатмаслигидан далолат беради
(3Б–расм).

0

25

50

75

100

*

**

Ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

Назорат
Рутан(10 мкМ)+Пикротоксин(50 мкМ)
Рутан(100 мкМ)+Пикротоксин(50 мкМ)

0

25

50

75

100

Концентрация (мкМ)

*

**

* *

*

* *

*

* *

*

100

75

50

25

10

Ф

л

уо

ре

сц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

Рутан(10-100мкМ)+глутамат(50мкМ)+ГАМК (100мкМ)

А

Б

3–расм. А. Рутаннинг (10–100 мкМ) ГАМК (100 мкМ) инкубацияси шароитида

синаптосомалар суспензияси муҳитига L–глутамат (50 мкМ) қўшилган ҳолатда

ХТЦ–флуоресценция интенсивлигига таъсири. Б. ГАМК–рецептор антагонисти –
пикротоксин (50 мкМ) инкубациясида рутаннинг (10–100 мкМ) ГАМК–ХТЦ
комплекси флуоресценция интенсивлигига таъсири.

Ишончлилик даражаси.*- Р<0,05;

**- Р<0,01; ***- Р<0,001. (

n

=6).

Тажрибаларда рутан (50 мкМ) инкубацияси шароитида ГАМК–

рецептори агонистлари – диазепам ва фенобарбиталнинг (10–100 мкМ)
флуоресценция интенсивлигига таъсирини кучайиши аниқланди (4А– расм).

Госситан

полифеноли

(10

мкМ)

ХТЦ–L–глутамат

глутамат

комплексининг флуоресценция интенсивлигини сезиларли даражада
сусайтириши аниқланди. Шунингдек, рутандан фарқ қилиб, госситан (10–100
мкМ) концентрация диапазонида L–глутамат таъсирини сезиларли даражада
ўзгартирмаслиги аниқланди (4Б–расм). Олинган натижалар госситаннинг L–
глутамат билан рақобатлашиш типида таъсир кўрсатмаслиги, эҳтимол
NMDA–рецептор орқали таъсир кўрсатиши мумкинлигини тахмин қилиш
имконини беради.

Каламушлар организмига этанол киритилишини тўхтатилиши, яъни

сурункали алкогол интоксикациясидан кейин госситан концентрацияга (10–
100 мкМ) боғлиқ L–глутамат (50 мкМ) фонида синаптосомалар
суспензиясида ХТЦ–флуоресценциясини сусайтириши аниқланди. Олинган

16

натижалар госситан полифенолининг сурункали алкогол интоксикациясидан
кейинги даврда синаптосомаларда [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтирувчи

таъсир кўрсатишидан далолат беради.

0

25

50

75

100

Ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

Назорат
Госситан(10 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(25 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(50 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(75 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(100 мкМ)+глутамат(50 мкМ)

0

25

50

75

100

75

50

25

10

Концентрация (мкМ)

*

**

* *

*

Ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

Назорат
Диазепам(10-100 мкМ)
Диазепам(10-100 мкМ)+рутан(50 мкМ)
Фенобарбитал(10-100 мкМ)
Фенобарбитал(10-100 мкМ)+рутан(50 мкМ)

А

Б

4–расм. А. Рутан (50 мкМ) инкубациясида ГАМК–рецептори агонистлари –

диазепам ва фенобарбиталнинг (10–100 мкМ) флуоресценция интенсивлигига
таъсири

.

Б. Сурункали алкогол интоксикацияси давридан кейин госситаннинг

концентрацияга (10–100 мкМ) боғлиқ ҳолатда L–глутамат (50 мкМ) фонида
синаптосомалар суспензиясида ХТЦ–флуоресценциясига таъсири.

Ишончлилик

даражаси.*- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001. (

n

=6).

Рутан ва госситан (100 мкМ) сурункали алкогол интоксикацияси

давридан кейин синаптосомалар суспензиясида ХТЦ–флуоресценцияси
интенсивлигини сезиларли даражада камайтириши аниқланди (5А–расм).
Са

2+

–канали блокатори нифедипин (0,01 мкМ) инкубацияси шароитида

госситан (10–100 мкМ) ХТЦ–флуоресценция интенсивлигини сезиларли
даражада ошириши аниқланди (5Б–расм).

0

25

50

75

100

125

*

**

*

4

3

2

1

Ф

л

уо

р

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

(1) Назорат
(2) Госситан(50 мкМ)
(3) Нифедипин(0,01мкМ)
(4) Госситан(100мкМ)+нифедипин(0,01мкМ)

0

20

40

60

80

100

120

* *

*

* *

*

* *

*

Ф

л

уо

р

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

в

л

и

ги

(

%

)

Назорат
ААС
Госситан(100мкМ)ААС
Рутан(100мкМ)ААС

А

Б

5–расм. А. Сурункали алкогол интоксикацияси давридан кейин рутан (100

мкМ) ва госситаннинг (100 мкМ) синаптосомалар суспензиясида ХТЦ–
флуоресценцияси қийматига таъсири.

Б. Са

2+

–канали блокатори нифедипин (0,01

мкМ) инкубацияси шароитида госситаннинг (100 мкМ) синаптосома суспензиясида
ХТЦ–флуоресценция интенсивлигига таъсири.

Ишончлилик даражаси.*- Р<0,05; **-

Р<0,01; ***- Р<0,001. (

n

=6).

17

Олинган натижалар госситаннинг синаптосомаларда Са

2+

–канали

фаоллигини блоклаши орқали таъсир кўрсатишидан далолат беради.

Дезоксипеганин

алкалоидининг

глутаматергик

нейромедиатор

тизимининг функционал фаоллигини модуляциялаш орқали [Са

2+

]

in

динамикасига таъсирини баҳолаш учун синаптосомалар суспензияси
флуоресценция интенсивлигига таъсири ўрганилди. Дезоксипеганин паст
концентрацияда (1–10 мкМ) ХТЦ–флуоресценциясига сезиларли таъсир
кўрсатмаслиги, 50–100 мкМ концентрацияда флуоресценция интенсивлигини
камайтириши аниқланди. Глутамат (50 мкМ) инкубацияси шароитида
дезоксипеганин концентрацияга (10–100 мкМ) боғлиқ ХТЦ–флуоресценция
интенсивлигини камайтириши аниқланди (6–расм). Шундай қилиб,
дезоксипеганин концентрацияга (10–50 мкМ) боғлиқ ХТЦ–L–глутамат
комплекси инкубацияси шароитида флуоресценцияси интенсивлигини
сусайтириши аниқланди. Олинган тажриба натижалари дезоксипеганин ва L–
глутаматнинг ГАМК–рецепторга рақобатлашиш типида регуляцион
боғланиш сайтига эгалигини тахмин қилиш имконини беради. Маълумки,
глицин глутамат таъсирини кучайтириши, АР5 ва AV–2–1 токсини эса,
ГАМК–рецептор фаоллигини сусайтириши, яъни глутаматга рақобатлашиш
типида таъсир кўрсатиши аниқланган. Шунингдек, Mg

2+

ионлари глутаматга

рақобатлашиш типида бўлмаган характерда ГАМК–рецептори антагонисти
сифатида

таъсир

кўрсатиши

қайд

қилинади.

Умумий

ҳолатда,

нейропротектор хоссага эга бўлган МК–801 препарати, аргиолобатин каби
ГАМК–рецептор модуляторларининг таъсир механизмларини ўрганиш
терапевтик нуқтаи назардан муҳим аҳамиятга эга ҳисобланади.

Дезоксипеганин (50 мкМ) NMDA–рецептор агонисти глициннинг (10

мкМ) таъсирини сезиларли даражада кучайтириши, ўз навбатида бунда
[Са

2+

]

in

концентрациясини ортиши тахмин қилинди. Яъни, бу ҳолатда

дезоксипеганин агонист/антагонист типида таъсирга эгалиги кузатилади.
Дезоксипеганиннинг NMDA–рецепторига таъсири Mg

2+

ионлари ва

аргиолобатин ёрдамида ўрганилди. Бунда Mg

2+

(1 мМ) каламуш мияси

синаптосомалари суспензиясида L–глутамат–ХТЦ инкубацияси шароитида
флуоресценция

интенсивлигини

сезиларли

даражада

сусайтириши

аниқланди.

Шунингдек,

дезоксипеганин

(100

мкМ)

олдиндан

инкубацияланганидаа Mg

2+

(1 мМ) флуоресценция интенсивлигига сезиларли

даражада таъсир кўрсатмаслиги қайд қилинди. Ушбу ҳолатга ўхшаш типда,
дезоксипеганин (100 мкМ) инкубацияси шароитида аргиолобатин (5 мкМ)
ҳам флуоресценция интенсивлигига таъсир кўрсатмаслиги аниқланди.
Олинган ушбу тажриба натижалари дезоксипеганин алкалоидининг NMDA–
рецептори фаоллигига бевосита таъсир кўрсатади, деб тахмин қилиш
имконини беради.

18

0

25

50

75

100

*

**

*

100

75

50

25

10

Ф

л

уо

р

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

в

л

и

ги

(

%

)

Дезоксипеганин(10-100мкМ)+глутамат(50мкМ)

6–расм. Дезоксипеганиннинг (10–100 мкМ) синаптосома суспензиясида

флуоресценция интенсивлигига таъсири.

Ишончлилик даражаси.*- Р<0,05; **- Р<0,01;

***- Р<0,001. (

n

=6).

Дезоксипеганин

(10–50

мкМ)

инкубацияси

синаптосомалар

суспензиясида ХТЦ–флуоресценция интенсивлигини сезиларли даражада
ошириши аниқланди. L–глутамат (50 мкМ) инкубациясида эса,
дезоксипеганин (10–50 мкМ) флуоресценция интенсивлигини сезиларли
даражада камайтириши аниқланди. Сурункали алкогол интоксикацияси
шароитида дезоксипеганин (10–50 мкМ) флуоресценция интенсивлигини
камайтириши ва ўз навбатида, бу ҳолат [Са

2+

]

in

концентрацияси камайишидан

далолат беради. Олинган натижалар ушбу алкалоид асосида алкогол
интоксикациясига

қарши

терапевтик

таъсирга

эга

фармакологик

нейропротектор препарат ишлаб чиқиш истиқболлари юқорилигини
кўрсатади. Шунингдек, дезоксипеганин (100 мкМ) инкубацияси таъсирида
сурункали алкогол интоксикациясидан кейинги даврда каламушлар миясидан
ажратиб олинган синаптосомалар суспензияси ХТЦ–флуоресценция
интенсивлиги сезиларли даражада ўзгариши аниқланди. Навбатдаги
тажрибаларда дезоксипеганин алкалоиди концентрацияга (10–100 мкМ)
боғлиқ равишда тромбин, адреналин (1 мкМ) ва АДФ (10 мкМ) таъсирида
юзага келтирилган тромбоцитлар агрегациясини сусайтириши аниқланди.
Бунда дезоксипеганин (100 мкМ) АДФ (10 мкМ) таъсирида юзага
келтирилган тромбоцитлар агрегациясини нисбатан кучли даражада
сусайтириши (назоратга нисбатан 50% га) кузатилди. Олинган натижалар
дезоксипеганиннинг [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтиришидан далолат

беради. Тажрибаларда Са

2+

–канали блокатори верапамил (0,01 мкМ) ва

аденилатциклаза ферменти блокатори – форсколин (10 мкМ) инкубацияси
шароитида дезоксипеганиннинг (50 мкМ) АДФ (10 мкМ) таъсирида юзага
келтирилган тромбоцитлар агрегациясини сусайтирувчи таъсири сезиларли
даражада кучайиши аниқланди (7А–расм). Олинган натижалар тахлили
асосида, дезоксипеганин аденилатциклаза фаоллигини сусайтириши орқали
[Са

2+

]

in

концентрациясини камайтиришини тахмин қилиш мумкин.

Дезоксипеганиннинг антиагрегацион таъсирини Са

2+

–сезгир флуоресцент

зондлар – Fura–2/АМ ва ХТЦ ёрдамида таҳлил қилинди. Бунда [Са

2+

]

out

=0 мМ

ва [Са

2+

]

out

=2,5 мМ шароитда АДФ таъсирида юзага келтирилган

тромбоцитлар

агрегациясида

Fura–2/АМ

ва

ХТЦ–флуоресценцияси

19

интенсивлиги дезоксипеганин (100 мкМ) таъсирида сезиларли даражада
сусайиши аниқланди (7Б–расм). Олинган натижалар дезоксипеганиннинг
антиагрегацион таъсири тромбоцитларда ташқаридан кирувчи ва ҳужайра
ички деполаридан чиқувчи Са

2+

–транспорти фаоллигини сусайтириши

орқали [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтиришини тахмин қилиш имконини

беради.

0

25

50

75

100

* *

*

* *

*

**

* *

*

А

гр

ег

ац

и

я

да

ра

ж

ас

и

(

%

)

Назорат АДФ(10мкМ)
Верапамил(0,01мкМ)
Форсколин(10мкМ)
Дезоксипеганин(50 мкМ)+верапамил(0,01мкМ)
Дезоксипеганин(50 мкМ)+форсколин(10мкМ)

0

25

50

75

100

***

* *

*

Ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

я

и

н

те

н

си

вл

и

ги

(

%

)

Назорат АДФ(10мкМ)
Fura-2 AM [Ca

2+

]

out

=2,5 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

Fura-2 AM [Ca

2+

]

out

=0 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

ХТЦ [Ca

2+

]

out

=2,5 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

ХТЦ [Ca

2+

]

out

=0 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

А

Б

7–расм. А. Дезоксипеганиннинг (50 мкМ) Са

2+

–канали блокатори верапамил

(0,01 мкМ) ва аденилатциклаза ферменти активатори – форсколин (10 мкМ)
инкубацияси шароитида дезоксипеганиннинг (50 мкМ) АДФ (10 мкМ) таъсирида
юзага келтирилган тромбоцитлар агрегациясига таъсири. Б. Дезоксипеганиннинг
(100 мкМ) [Са

2+

]

out

=0 мМ ва [Са

2+

]

out

=2,5 мМ шароитда АДФ таъсирида юзага

келтирилган тромбоцитлар агрегациясида Fura–2/АМ ва ХТЦ–флуоресценцияси
интенсивлигига таъсири.

Ишончлилик даражаси.*- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001.

(

n

=6).

Дезоксипеганин (10–50 мкМ)

in vitro

шароитида KCl (50 мМ) таъсирида

юзага келтирилган каламуш аорта қон томири препаратининг изометрик
қисқариш фаоллигига сезиларли даражада релаксант таъсир кўрсатиши
аниқланди. Шунингдек, дезоксипеганиннинг вазорелаксант таъсири [Са

2+

]

out

концентрациясига боғлиқ ҳолатда амалга ошиши ва дигидропиридинга
сезгир Са

2+

L

–канали блокатори – нифедипин (0,01 мкМ) таъсирини

кучайтириши аниқланди. Олинган натижалар дезоксипеганин қон томир
силлиқ мускул ҳужайралари плазмалеммасида жойлашган потенциалга
боғлиқ Са

2+

L

–каналини блоклаши орқали [Са

2+

]

in

концентрациясини

камайтиришидан далолат беради. Ушбу натижалар дезоксипеганиннинг
синаптосомаларда [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтиришини тасдиқловчи

қўшимча маълумот ҳисобланади.

Ҳозирги вақтда экспериментал нейрологияда ўсимликлардан ажратиб

олинган биологик фаол моддалар асосида самарали нейропротектор хоссага
эга бўлган фармакологик препаратларни яратиш устувор йўналишлардан
бири ҳисобланади. Айниқса, ушбу нуқтаи назардан полифункционал
фармакологик таъсир спектрига эга бўлган алкалоидлар ва полифенол
бирикмалар истиқболли агентлар ҳисобланади (Shikov et al., 2014).

20

ХУЛОСАЛАР

1.

Назорат гуруҳида глутамат (10–100 мкМ) таъсирида каламуш бош

мияси синаптосомалари суспензиясида флуоресценция интенсивлиги, ҳамда
пресинаптик мембрананинг Са

2+

ионлари учун ўтказувчанлик даражасини

ортиши, бунинг натижасида эса [Са

2+

]

in

концентрациясининг ошиши қайд

этилди.

2.

Сурункали алкогол интоксикациясида ГАМК– ва NMDA–рецепторлар

фаоллигининг ортиши, бу эса ўз навбатида [Са

2+

]

in

концентрациясининг

патологик ўзгаришини юзага келтириши исботланди.

3.

Илк бор сурункали алкогол интоксикациясида рутан L–глутамат

таъсирига рақобатлашиш асосида таъсир этиши мумкинлиги, госситан эса –
L–глутамат таъсирига рақобатлашишга эга бўлмаган характерда нерв
ҳужайраларида [Са

2+

]

in

динамикасига ижобий таъсир кўрсатиши қайд этилди.

4.

Дезоксипеганин алкалоиди (10–100 мкМ) L–глутаматга аналогик

типда, NMDA–рецептори фаоллигини модуляциялаши орқали сурункали
алкогол интоксикациясида антитоксик таъсир кўрсатиши аниқланди.

5.

Илк бор дезоксипеганин алкалоидининг (100 мкМ) антиагрегацион

таъсири тромбоцитларда ташқаридан кирувчи ва ҳужайра ички деполаридан
чиқувчи Са

2+

–транспортини сусайтириши орқали [Са

2+

]

in

концентрациясини

камайтириши аниқланди ва бу ҳолат дезоксипеганин алкалоидининг
синаптосомаларда [Са

2+

]

in

концентрациясини камайтиришини қўшимча

тасдиқловчи маълумот сифатида аҳамиятга эга ҳисобланади.

6.

Дезоксипеганиннинг (10–50 мкМ)

in vitro

шароитида каламуш аорта

қон томири препаратининг изометрик қисқариш фаоллигига релаксант
таъсири силлиқ мускул ҳужайраларида Са

2+

L

–каналини блоклаши орқали

[Са

2+

]

in

концентрациясини камайтиришидан далолат беради ва бу натижалар

дезоксипеганиннинг

синаптосомаларда

[Са

2+

]

in

концентрациясини

камайтиришини қўшимча тасдиқловчи маълумот ҳисобланади.

7.

Рутан, госситан ва дезоксипеганин каби биологик фаол моддалар

ёрдамида

in vitro

шароитида ўтказилган тажрибалар асосида алкоголдан

турлича заҳарланиш оқибатида ГАМК– ва NMDA–рецепторларида келиб
чиққан патологик ўзгаришларни бошқариш мумкинлиги қайд этилди.

21

НАУЧНЫЙ СОВЕТ DSc.27.06.2017. B.38.01 ПО ПРИСУЖДЕНИЮ

УЧЕНЫХ СТЕПЕНЕЙ ПРИ ИНСТИТУТЕ МИКРОБИОЛОГИИ

И НАЦИОНАЛЬНОМ УНИВЕРСИТЕТЕ УЗБЕКИСТАНА

ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ

ХОШИМОВ НОЗИМЖОН НУМОНЖОНОВИЧ

ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕЙСТВИЯ ПОЛИФЕНОЛОВ

(РУТАНА, ГОССИТАНА) И АЛКАЛОИДА (ДЕЗОКСИПЕГАНИНА)

НА ТРАНСПОРТ Са

2+

В СИНАПТОСОМАХ МОЗГА КРЫС

03.00.08 – Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ ДОКТОРА ФИЛОСОФИИ (PhD)

ПО БИОЛОГИЧЕСКИМ НАУКАМ

Ташкент - 2018

22

23

ВВЕДЕНИЕ (аннотация диссертации доктора философии (PhD))

Актуальность и востребованность темы диссертации.

В настоящее

время во всем мире отмечается неуклонный рост числа социально значимых
нейродегенеративных заболеваний вследствие нарушения кальциевого
гомеостаза нервных клеток

1,2

. Биологически активные соединения являются

перспективными

источниками

при

создании

эффективных

нейропротекторных

препаратов

для

лечения

нейродегенеративных

заболеваний, а также заболеваний центральной/периферической нервной
системы,

повреждающиеся

при

патогенезе

токсикологической

и

наркологической интоксикаций.

На сегодняшний день во всем мире в научных исследованиях,

проведенных в этом направлении выявлено, что нейродегенеративные
заболевания вызваны дисфункцией ионно-транспортных систем и
рецепторных

комплексов,

которые

представляют

функциональную

активность клеток симпатической/парасимпатической нервной системы
мозга. Сa

2+

является центральным компонентом в процессах передачи

сигналов и возбудимости/регенерации в нервных клетках, особенно в
синаптосомах мозга [Са

2+

]

in

, что приводит к серьезным патологическим

состояниям. С этой точки зрения изучение механизмов фармакологической
коррекции Са

2+

- транспорта биологически активных веществ в синаптосомах

в патологических состояниях имеет актуальное научно-практическое
значение.

В настоящее время в нашей стране проведены масштабные реформы по

улучшению материально-технической базы диагностики и лечения
заболеваний нервной системы, обеспеченности фармацевтическими
препаратами.

В области профилактики и лечения нейродегенеративных

заболеваний достигнуты определенные результаты в части производства
эффективных нейропротекторных препаратов на основе местного сырья.
Необходимо отметить, что, разработкам современных методов диагностики
заболеваний, в основе которых лежит нарушение Са

2+

– гомеостаза,

нейродегенеративных заболеваний, патологий связанных с изменением
нервных клеток, при токсикологических и наркологических интоксикациях,
уделено недостаточное внимание. Внедрение комплексных мер в этом
направлении

послужит

ориентиром

для

дальнейшего

развития

фармацевтической промышленности, а также для улучшения предоставления
доступных и высококачественных лекарств населению и поставщикам
медицинских услуг, перечисленных в Стратегии действий для дальнейшего
развития Республики Узбекистан. В этом отношении,

играет важную роль

создание нейропротекторных препаратов, на основе местного сырья,
конкурентоспособных на мировом рынке.

1

The World Health Organization (www.who.int/gho/publications/world_health_statistics)

2

World Federation of Neurology (www.wfneurology.org)

24

Данное диссертационное исследование в определенной степени служит

выполнению задач, предусмотренных в Постановлении Президента
Республики Узбекистан от 28 ноября 2011г № ПП-1652 «О мерах по
дальнейшему углублению реформирования системы здравоохранения»,
Указе Президента Республики Узбекистан от 7 февраля 2017 г № УП-4947
«О стратегии действий по дальнейшему развитию Республики Узбекистан», а
также в других нормативно-правовых документах, принятых в данной сфере.

Соответствие исследования приоритетным направлениям развития

науки и технологий республики.

Данное исследование выполнено в

соответствии с приоритетными направлениями развития науки и технологий
республики VI «Медицина и фармакология».

Степень изученности проблемы.

Проведены многочисленные

исследования о роли [Са

2+

]

in

в динамике функциональной активности

нервных клеток

in vitro

и

in vivo

и в изучении механизмов их регулирования.

Bhandage A.K. (2016) исследовал механизмы фармакологической регуляции
ГАМК-рецепторов, которые активировались γ -аминомасляной кислотой
(ГАМК), одним из основных двигательных / нейротрансмиттеров, влияющих
на центральную нервную систему через ионотропные / метаболические
каскады. Глутаминовый ионотропный каскад через - рецептор глутамата
(iGlu-AMPA / универсум и NMDA-рецептор) и ГАМК находятся под
влиянием ГАМК-A-рецептора.

Tagliaferri S. (2010) проанализировал

важность глутаматного рецептора [Са

2+

]

in

в гомеостазе в нервных клетках.

Remiro P.B. (2013) охарактеризовал динамику изменений концентрации
[Са

2+

]

in

в нервных клетках при интоксикации этанолом.

Kaur P. (2008) выявил

молекулярные механизмы функциональной активности мозговых синаптосом
крыс при нейротоксическом эффекте.

Rosa R.M. и другие (2007), Тарасенко

А.С. и другие (2010) исследовали механизмы регуляции функции синаптосом
мозга крыс через рецептор глутамата.

Кроме того, Кухта В.К и другие. (2010)

научно

обосновали

влияние

биологически

активных

веществ,

экстрагированных из растений на транспорт Сa

2+

у крыс, на

цереброспинальных синаптосомах головного мозга, при этом была
установлена важная роль ионов Сa

2+

как центрального мессенджера в

процессе трансдукции и передачи сигнала в нервных клетках.

В нашей республике П.Б.Усмановым, Д.Каликулоым и др. (1985)

проведены исследования по изучению влияния алкалоидов и токсинов на
транспорт Сa

2+

на синаптосомах мозга крыс, однако из-за высокого спроса на

нейропротекторные препараты, а также в связи с тем, что влияние
биологически активных веществ растительного происхождения на нервную
систему пока еще недостаточно изучено, исследования в этом направлении
представляются актуальными и имеют научно-практическое значение.

Связь темы диссертации с научно-исследовательскими работами

института, где выполнена диссертация.

Диссертационное исследование

выполнено в рамках плана научно-исследовательских работ прикладного
проекта Института биоорганической химии АН РУз ФА-А10-Т086

25

«Разработка новых методов профилактики и лечения алкоголизма и
связанных с ним осложнений» (2012-2014).

Целью исследования

является характеристика механизма действия

рутана, госситана и дезоксипеганина в условиях

in vitro

на транспорт Сa

2+

в

синаптосомах головного мозга крыс, а также обоснование их
нейропротекторных свойств.

Задачи исследования:

исследование действия глутамата в синаптосомах головного мозга крыс

на Са

2+

-проницаемость пресинаптической мембраны и концентрацию [Са

2+

]

in

;

определение нарушения активности ГАМК- и NMDA-рецепторов и

изменение концентрации [Са

2+

]

in

в синапотосомах мозга крыс при

хронической алкогольной интоксикации;

характеристика

механизма

действия

рутана,

госситана

и

дезоксипеганина на регуляцию транспорта Сa

2+

глутамат-, NMDA-, ГАМК-

рецепторами в синаптосомах мозга крыс в контрольной группе;

обоснование корректирующего действия рутана, госситана и

дезоксипеганина на регуляцию транспорта Сa

2+

в синаптосомах мозга крыс в

условиях хронической алкогольной интоксикации и обоснование
нейропротекторных свойств;

сравнительный анализ влияния дезоксипеганина на транспорт Сa

2+

в

тромбоцитах, синаптосомах мозга крыс и сосудистых гладкомышечных
клетках.

Объектом исследования

являются полифенолы

- рутан, госситан и

алкалоид дезоксипеганин, выделенные из растений, суспензия синаптосом
мозга крыс, суспензия тромбоцитов, препарат аорты кровеносных сосудов.

Предметом исследования

является исследование влияния рутана,

госситана и дезоксипеганина на транспорт Сa

2+

в синаптосомах головного

мозга крыс в условиях острой и хронической алкогольной интоксикации у
крыс.

Методы исследования.

В ходе исследования использованы методы

дифференциального

центрифугирования,

спектрофотометрии,

флуоресценции, аппаратное/программное обеспечение USB 2.000 (Ocean
Optics Inc., США), которое оценивает динамику транспорта Сa

2+

в

синаптосомах мозга крыс в условиях

in vitro

, программный пакет

математического и статистического анализа с использованием OriginPro 7.5
(OriginLab Corporation, США) для обработки результатов.

Научная новизна диссертационного исследования

состоит в

следующем:

выявлено с помощью Са

2+

- чувствительного зонда - хлортетрациклина

повышение проницаемости пресинаптической мембраны при низких
концентрациях глутамата, а также возрастание концентрации [Са

2+

]

in

в

синаптосомах мозга крыс;

обосновано протекторное действие рутана в условиях хронической

алкогольной интоксикации на динамику [Са

2+

]

in

в нервных клетках;

26

установлена конкуренция между госситаном и нифедипином за счет

регулирования дигидропиридин-чувствительных кальциевых каналов;

выявлено антитоксическое действие алкалоида дезоксипеганина

подобно глутамату в условиях хронической алкогольной интоксикации
путем модуляции активности NMDA-рецепторов;

доказано действие дезоксипеганина на выход Са

2+

из внутреннего депо

тромбоцитов, обусловленное снижением активности [Са

2+

]

in

, а также

релаксантное действие на гладкомышечные клетки за счет блокирования
Са

2+

L

–канала.

Практические результаты исследования

заключаются в следующем:

Полученные научные результаты по изучению действия рутана,

госситана и дезоксипеганина на транспорт ионов Сa

2+

в синаптосомах

головного мозга крыс используются в качестве научной основы при
разработке

потенциальных

терапевтических

нейропротекторных

фармакологических препаратов. Полученные результаты расширяют
диапазон теоретических знаний о механизмах антитоксического действия
биологически активных веществ в условиях алкогольной интоксикации.
Кроме того, результаты по изучению механизма действия рутана, госситана и
дезоксипеганина на интенсивность флуоресценции суспензий синаптосом
мозга крыс в условиях

in vitro,

с практической точки зрения, позволяют

разработать

фармакологические

препараты

с

нейропротекторными

свойствами, действующих путем модуляции динамики [Са

2+

]

in

с помощью

ГАМК-, NMDA-рецепторов нервных клеток.

Достоверность результатов исследования

подтверждается тем, что

они получены с применением современных биофизических методов и
приборов, программных продуктов. Каждый эксперимент проводился как
минимум в 4-6 кратном повторении. Для статистической обработки
достоверности различий в сравниваемых показателях использовали
коэффициент Стьюдента,

компьютерную программу

OriginPro 7.5; (Origin

Lab Corporation, США).

Научная и практическая значимость результатов исследования.

Научная значимость результатов исследования обусловлена тем, что

определение механизмов фармакологической регуляции функциональной
активности NMDA-рецепторы и Са

2+

-транспорты гомеостаза [Ca

2+

]

in

в

синаптосомах головного мозга методом флуоресценции расширяет диапазон
теоретических знаний.

Практическое значение результатов исследования состоит в том, что

факты, установленные по механизму действия рутана, госситана и
дезоксипеганина на транспорт Сa

2+

в синаптосомах головного мозга крыс

могут служить для фармакологической коррекции и лечения заболеваний
нервной системы, в частности, состояния хронической и острой алкогольной
интоксикации, и могут использоваться в разработке новых эффективных
препаратов.

27

Внедрение результатов исследования.

На основании полученных

данных по изучению действия рутана, госситана и дезоксипеганина на
транспорт кальция в синаптосомах головного мозга крыс:

полученные результаты по исследованию механизмов развития

нейродегенеративных процессов на молекулярном уровне и их коррекция
при

помощи

нейропротекторных

препаратов

использованы

в

фармокологической классификации лекарственных препаратов (справка №
29/09-1058 ГУП Гос. центра экспертизы и стандартизации лекарственных
средств изделий медицинского назначения и медицинской техники МЗ РУз
от 27 марта 2018 г.). В результате появилась возможность исследования
специфической активности лекарственных препаратов - нейростимуляторов в
лаборатории фармакологических и токсикологических исследований
государственного центра;

действия рутана, госситана и дезоксипеганина на Са

2+

-транспорт в

синаптосомах головного мозга крыс использованы в рамках проекта ФА–
А11–Т057 «Создание центра высокоэффективного скрининга биологически
активных соединений природного и синтетического происхождения» для
Са

2+

- транспорта мембран синаптосом головного мозга крыс при гипоксии и

при определении механизма действия на NMDA-рецептор (справка ФТА-02-
11/1148 Агентства науки и технологии от 21 ноября 2017 г.). В результате
установлено на основе блокирования Са

2+

-транспорта мембран синаптосом

при гипоксии уменьшения [Са

2+

]

in

через NMDA–рецептор постсинаптических

мембран, можно охарактеризовать нейропротекторные свойства.

Апробация результатов

исследования.

Результаты исследований были

обсуждены на 4 международных и 1 республиканской научно-практических
конференциях.

Опубликованность результатов исследования.

По теме диссертации

опубликовано 13 печатных работ, из них 5 научных статей, в том числе 3 в
республиканских и 2 в зарубежных журналах, рекомендованных Высшей
аттестационной комиссией Республики Узбекистан для публикации
основных научных результатов диссертации.

Структура и объем диссертации.

Структура диссертации состоит из

введения, пяти глав, выводов, списка использованной литературы. Объём
диссертации составляет 114 страниц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Во введении

обосновывается актуальность и востребованность

проведенных исследований, цель и задачи исследований, характеризуются
объект и предмет исследования, показано соответствие исследования
приоритетным направлениям развития науки и технологий Республики
Узбекистан, излагаются научная новизна и практические результаты
исследования, научно-практическая значимость полученных результатов,
внедрение результатов исследования в практику, приведены сведения по
опубликованным работам и структуре диссертации.

28

В первой главе диссертации

«Механизмы регуляции гомеостаза

[Ca

2+

]

in

в нервных клетках»

, на основе анализа современной литературы

приводятся сведения о механизмах регуляции Са

2+

-гомеостаза в нервных

клетках, о механизмах регуляции Са

2+

-транспорта и Са

2+

-гомеостаза

глутамат- и NMDA-рецепторами головного мозга, о структуре и функциях
глутамат-NMDA-,

и

AMPA–рецепторов,

сведения

о

механизмах

интоксикации этанолом.

Во второй главе диссертации

«Методы изучения транспорта Са

2+

в

синаптосомах головного мозга крыс»

приведены этапы проведения

исследований, используемые материалы и методы при экспериментальном
моделировании хронической алкогольной интоксикации, методы выделения
из

головного

мозга

крысы

суспензий

синаптосом

методом

дифференциального центрифугирования в норме и при алкогольной
интоксикации, методы оценки динамики [Ca

2+

]

in

в синаптосомах, методы

выделения тромбоцитов для сравнительного анализа динамики [Ca

2+

]

in

в

системе гемостаза и в гладкомышечных клетках сердечно-сосудистой
системы, методы изучения агрегации тромбоцитов и их функциональной
активности, методы регистрации механической активности препарата аорты,
а также методы математической и статистической обработки полученных
результатов.

В третьей главе диссертации

«Регуляция Са

2+

–транспорта в

синаптосомах головного мозга крыс рецепторами глутамата»

приведены

результаты исследований по анализу изменения динамики свободного [Ca

2+

]

in

путем активации глутаматного рецептора, локализованного в синаптической
мембране,

на

основе

регистрации

изменения

интенсивности

флуоресцентного сигнала (

F

3

40

/

F

380

) в суспензии синаптосом головного мозга

крыс с помощью Са

2+

-чувствительных флуоресцентных зондов. В

экспериментах

с

использованием

Са

2+

-чувствительного

зонда

-

хлортетрациклина (ХТЦ) преинкубированого с комплексом Са

2+

-

этиленгликоль (бис–аминоэтил эфир)–N, N–тетрауксусной кислотой (ЭГТА)
(1 мМ) ([Ca

2+

]

out

=0 мМ) приводило к снижению флуоресценции на 5% по

сравнению с контролем. В условиях инкубации с ЭГТА (1 мМ)
интенсивность флуоресценции под воздействием L–глутамата (10–50 мкМ)
увеличивается на 5–10%, что обусловлено повышением проводимости
синаптических мембран для ионов Са

2+

, соответственно, перемещением

ионов Са

2+

в цитозоль, а также увеличением концентрации [Ca

2+

]

in

за счет

освобождения Са

2+

из внутриклеточных «депо» (рис.1).

В следующих экспериментах, в случае внесения в среду суспензий

синаптосом L–глутамата (100 мкМ) интенсивность флуоресцентного сигнала,
аналогична с тем, что наблюдалось в условиях инкубации с KCl (30 мМ), в
двухфазном типе, т.е. в 1-фазе, первоначально изменялась относительно
быстро (в течение 5-10 секунд) и возвращалась в исходное состояние, а в
следующей 2-фазе –повышалась относительно медленно. 1-фаза протекает
пропорционально к концентрации L–глутамата (10–100 мкМ) и обусловлена
изменением флуоресцентного сигнала по типу «всплеска» в результате

29

процесса экзоцитоза большого количества везикул под воздействием
деполяризации пресинаптической мембраны и увеличения концентрации
[Ca

2+

]

in

.

И

нт

енси

вн

ост

ь

ф

лу

оре

сцен

ци

и

(F

340

/F

380

)

0

25

50

75

100

**

*

4

3

2

1

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

(1) Контроль
(2) ЭГТА (1мМ)
(3) Глутамат (50 мкМ)
(4) ЭГТА (1мМ)

Время (секунд)

Контроль

Глутамат (10 мкМ)

Глутамат (25 мкМ)

Глутамат (50 мкМ)

ЭГТА (1мМ)

А

Б

Рис.1. Действие L–глутамата (10–50 мкМ) на интенсивность флуоресценции в

суспензии синаптосом головного мозга крыс при инкубации с ЭГТА (1 мМ).

А.

Оригинальный снимок. Б. Повышение воздействия L–глутамата (50 мкМ) на
интенсивность флуоресценции. Показатель достоверности *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***-
Р<0,001. (

n

=6).

При увеличении концентрации L–глутамата наблюдалось сокращение

периода продолжительности

лаг

–фазы между 1 и 2 фазами. Также, при

добавлении в инкубационную среду L–глутамата в концентрации 100 мкМ
повторная флуоресценция не наблюдалась.

Далее в экспериментах проводился сравнительный анализ влияния L–

глутамата (10–50 мкМ) и раствора KCl (35 мМ) на интенсивность
флуоресценции суспензии синаптосом. Наблюдаемый нами двухфазный
процесс

глутамат

индуцированного

высвобождения

протонов

из

синаптических везикул нервных терминалей мозга крыс коррелирует с
двухступенчатым повышением концентрации кальция под воздействием
глутамата.

Изменения

интенсивности

флуоресценции,

полученные

в

экспериментах, по двухфазному характеру могут быть связаны с
увеличением концентрации [Са

2+

]

in

в двух этапах в цитозоле под влиянием L–

глутамата в синаптосоме и усилением выделения из везикул ионов Н

+

.

Увеличение концентрации [Са

2+

]

in

в цитозоле происходит за счет активации

Са

2+

–каналов и реверсионном функционировании Na

+

/Са

2+

–обменника (Siesjo

and Bengtsson, 1989). Кроме того, концентрация [Са

2+

]

in

может также

увеличиться не только за счет поступления из внешней среды, но и за счет
выхода из саркоплазматического ретикулума (СР) и митохондрий, а также
ингибирования активности механизмов сокращения ионов Са

2+

в цитозоле. В

условиях инкубации с ЭГТА (1 мМ), т.е. в условиях [Са

2+

]

out

=0 мМ, 1-фаза

сохраняется, при которой под воздействием L–глутамата (100 мкМ)

30

интенсивность ХТЦ–флуоресценции изменяется по «быстрому» типу, однако
изменение интенсивности по типу «вспышки» не наблюдается. Аналогичная
тенденция наблюдалась и при воздействии КСl (35 мМ). Также преинкубация
с блокатором Cа

2+

–канала – Cd

2+

(25 мМ) не приводила к увеличению

интенсивности ХТЦ-флуоресценции при действии L–глутамата (100
мкМ)/КСl (35 мМ). Как известно, изменение интенсивности ХТЦ-
флуоресценции при действии с L–глутаматом (100 мкМ) обусловлено
увеличением концентрации [Са

2+

]

in

в цитозоле путем активизации NMDA– и

глутаматных рецепторов, а при инкубации с КСl (35 мМ) увеличение
концентрации [Са

2+

]

in

происходило за счет активизации Cа

2+

–канала в

результате деполяризации мембраны. На основе полученных данных, можно
предположить, что изменение интенсивности ХТЦ-флуоресценции в
суспензии синаптосом при инкубации с L–глутаматом (100 мкМ) в первой
фазе по относительно «быстрому» типу связано с активацией α–амино–3–
гидрокси–5–метил–4–изоксазолпропионной кислоты (АМПА)/ каинатного
рецептора, расположенного в постсинаптической мембране. Подтверждена
важная

роль

АМПА/каинатного

рецептора

в

ГАМК–ергической

трансмиссионной быстрой сигнальной трансдукции (Mayer et al., 1989;
Cossart et al., 2001; Lerma, 2006; Fiszman et al., 2007; Mathew et al., 2008).
Кроме того, сохранение в условиях инкубации с блокатором Cа

2+

–канала –

Cd

2+

(25 мМ) (Mayer et al., 1989) 1-фазы, при которой под влиянием L–

глутамата (100 мкМ) интенсивность ХТЦ–флуоресценции изменяется по
«быстрому» типу можно объяснить тем, что под влиянием Cd

2+

(25 мМ) в

условиях блокирования поступления в цитозоль ионов Cа

2+

через NMDA–

рецепторов сохраняется активность (возбуждение) АМПА/каинатных
рецепторов.

Установлено, что преинкубация с глицином (10–100 мкМ) под

действием L–глутамата (100 мкМ) усиливает активацию NMDA–рецепторов.
Кроме того, преинкубация со специфическим блокатором NMDA–рецептора
– стрихнином (5 мМ), инкубация с глицином (100 мкМ) под действием L–
глутаматом (100 мкМ) не оказывает усиливающего действия на
интенсивность ХТЦ– флуоресценции. На основе полученных результатов
можно предположить, что глицин и L–глутамат взаимодействует с
различными функциональными сайтами NMDA–рецептора.

В четвертой главе диссертации

«Влияние полифенолов рутана,

госситана и алкалоида дезоксипеганина на динамику [Са

2+

]

in

в

синаптосомах головного мозга крыс в норме и при алкогольной
интоксикации»

при изучении влияния полифенолов рутана, госситана и

алкалоида дезоксипеганина на транспорт [Са

2+

]

in

в синаптосомах в условиях

хронической алкогольной интоксикации

с помощью

активаторов/блокаторов

ГАМК–рецептора установлено значительное уменьшение интенсивности
флуоресценции при инкубации с этанолом (5-10 мМ) по сравнению с
контролем (рис.2А). Добавление в инкубационную среду 50 мкМ глутамата
не приводило к значительным изменениям интенсивности флуоресценции
соответственно, клеточного метаболизма, обусловленным в первую очередь

31

активацией мембранной проницаемости. Преинкубирование с блокатором
ГАМК-рецептора - пикротоксином (5-50 мкМ) приводило к повышению
интенсивности флуоресценции (рис.2Б).

0

25

50

75

100

125

* *

*

* *

*

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

луо

ре

сц

ен

ц

и

(

%

)

Контроль
Глутамат (50мкМ)
Пикротоксин (5мкМ)
Пикротоксин (50мкМ)

Время (секунд)

Контроль

Этанол

А

Б

Инт

енсивност

ь

ф

лу

оре

сценци

и

(F

340

/F

380

)

Рис.2. А - Влияние этанола (100 мМ) на интенсивность флуоресценции в

суспензии синаптосом мозга крыс

(Оригинальный снимок).

Б

-

влияние блокатора

ГАМК–рецептора (5–50 мкМ) на интенсивность флуоресценции в суспензии
синаптосом мозга крыс

. Показатель достоверности *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001.

(

n

=6).

Известно, что в условиях аллостерического блокирования ГАМК–

рецептора пикротоксином (5–50 мкМ) активируется NMDA–рецептор, и что
хроническая алкогольная интоксикация приводит к повышению активности
ГАМК-рецепторов, что в свою очередь приводит к повышению [Са

2+

]

in

за

счет поступления ионов Са

2+

в цитозоль, и что этанол, путем модуляции

функциональной

активности

NMDA–рецепторов,

приводит

к

глутаматергической нейротрансмиссионной дисфункции (Lima–Landman and
Albuquerque, 1989; White et al., 1990). Также отмечается, что один из
механизмов действия хронической алкогольной интоксикации обусловлен
изменением функции именно NMDA–рецептора (Simson et al., 1991; Gulya et
al., 1991; Parsons et al., 1998).

Доказано, что в результате усиления секреции глутамата при

хронической алкогольной интоксикации возникает «

эксайтотоксичность

»

(Dahchour and Witte, 2000). При хронической алкогольной интоксикации
добавление в инкубационную среду агонистов ГАМК-рецептора - диазепама
и фенобарбитала (50-100 мкМ), дозозависимо усиливают тормозящее
действие

ГАМК-рецептора

и

соответственно,

снижают

уровень

внутриклеточного [Са

2+

]

in

.

. На основании полученных нами данных можно

объяснить, что активация ГАМК–рецептора при хронической алкогольной
интоксикации обусловлена модуляцией каинат/АМРА рецептора путем
дисфункции глутаматергической нейротрансмиссии. Выявлено, что при
хронической алкогольной интоксикации L–глутамат (50 мкМ) и глицин (5
мкМ) в незначительной степени увеличивают интенсивность ХТЦ–
флуоресценции суспензии синаптосом. Согласно полученным данным,
можно предположить, что под воздействием хронической алкогольной

32

интоксикации

резко

снижается

чувствительность

функциональных

субъединиц NMDA–рецептора к L–глутамату и глицину. Кроме того, по
окончании периода хронической алкогольной интоксикации, при отмене
введения в организм экспериментальных животных этанола, у них возникает
тревожное состояние. Установлено, что в таком состоянии в суспензии
синаптосом уровень интенсивности ХТЦ–флуоресценции у опытной группы
крыс значительно выше по сравнению с контрольной группой. Таким
образом, под действием этанола нарушается функция NMDA–рецептора, а
увеличение интенсивности ХТЦ–флуоресценции в суспензии синаптосом
после отмены алкоголя можно объяснить реактивацией глутаматергической
системы. В следующих сериях экспериментов при хронической алкогольной
интоксикации при инкубации с блокатором рецептора глутамата – МК–801 (5
мкМ), при преинкубировании наблюдалось снижение на 20% интенсивности
ХТЦ-флуоресценции в суспензии синаптосом головного мозга крыс по
сравнению с контрольной группой, а также снижение этого показателя по
сравнению с контрольной группой на 35% в условиях инкубации с
блокатором рецептора глутамата – аргиолобатином (10 мкМ). Полученные
результаты свидетельствуют о комплексном воздействии хронической
алкогольной интоксикации на функциональные субъединицы NMDA–
рецепторов.

Как известно, при хронической алкогольной интоксикации за счет

усиления секреции глутамата в терминалах нервных клеток возникает
патологическое состояние, которое называется «

эксайтотоксичность

» или

эксайтотоксичность

глутамата

опосредуется

NMDA-рецепторами,

названными по специфическому антагонисту N-метил-D-аспартату. При
взаимодействии глутамата с NMDA–рецептором резко увеличивается
концентрация цитозольного [Са

2+

]

in

, что приводит к запуску процесса гибели

нервных клеток, характерного для болезни Паркинсона. Также
предполагается, что глутамат-индуцируемое изменение функции каскада
сигнализации, играет важную роль в развитии таких нейропатологий, как
эпилепсия и болезнь Альцгеймера.

Выявлено, что противовирусный препарат «Амантадин» (Симметрел)

впервые синтезированный в США, действует как антагонист NMDA–
рецептора, блокирует каскад эксайтотоксических реакций. Этот препарат
успешно применяется в нейроклинической практике для лечения болезни
Паркинсона (Schwab and Poshanzer, 1969). На основании этих данных мы
исследовали

возможное

противоэксайтотоксическое

действие

противовирусных соединений - рутана и госситана. В экспериментах
обнаружено, что в контрольной группе рутан (10-100 мкМ) в суспензии
синаптосом не приводил к значительному изменению интенсивности ХТЦ-
флуоресценции. Также, рутан (50 мкМ) при преинкубации с L–глутаматом
(50

мкМ)

снижает

интенсивность

ХТЦ–флуоресценции.

При

преинкубировании рутана (10 мкМ) наблюдалось снижение интенсивности
флуоресценции комплекса ХТЦ–L–глутамат. Предварительно полученные
результаты свидетельствуют о возможной конкуренции между рутаном и

33

глутаматом. Выявлено, что при хронической алкогольной интоксикации
рутан (50 мкМ) незначительно увеличивает интенсивность флуоресценции.
Кроме того, при инкубации с ГАМК (100 мкМ) добавление L–глутамата (50
мкМ) в суспензию синаптосом снижает активность NMDA–рецепторов, что в
свою очередь, при снижении концентрации [Са

2+

]

in

, рутан (10–100 мкМ)

снижает интенсивность флуоресценции (рис.3А).

0

25

50

75

100

*

**

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

Контроль
Рутан(10 мкМ)+Пикротоксин(50 мкМ)
Рутан(100 мкМ)+Пикротоксин(50 мкМ)

0

25

50

75

100

Концентрации (мкМ)

*

**

* *

*

* *

*

* *

*

100

75

50

25

10

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

л

уо

ре

сц

ен

ц

и

(

%

)

Рутан(10-100мкМ)+глутамат(50мкМ)+ГАМК (100мкМ)

А

Б

Рис.3. А - влияние полифенола рутан (10–100 мкМ) на интенсивность ХТЦ–

флуоресценции в условиях инкубации с ГАМК (100 мкМ) при добавлении в среду с
суспензией синаптосом головного мозга крыс L–глутамата (50 мкМ). Б- влияние
полифенола рутан (10–100 мкМ) на интенсивность флуоресценции ГАМК–ХТЦ–
комплекса в условиях инкубации с антагонистом ГАМК–рецептора –
пикротоксином (50 мкМ).

Показатель достоверности *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001.

(

n

=6).

Установлено, что в условиях инкубации с антагонистом ГАМК–

рецептора – пикротоксином (50 мкМ), рутаном (10–100 мкМ) значительно
снижает интенсивность флуоресценции ГАМК–ХТЦ комплекса. Полученные
результаты свидетельствуют о том, что рутан, снижая концентрацию [Са

2+

]

in

,

не оказывает влияние как антагонист на активность ГАМК–рецептора
(рис.3Б). В экспериментах установлено, что в случае преинкубирования
антагонистов ГАМК-рецептора - диазепама и фенобарбитала (10-100 мкМ) на
фоне препарата рутана (50 мкМ) усиливается эффект на интенсивности
флуоресценции (рис.4А).

В дальнейших экспериментах выявлено значительное снижение

интенсивности

флуоресценции

ХТЦ–L–глутамат

комплекса

под

воздействием полифенола госситана (10 мкМ). Кроме того, установлено, что
в отличие от рутана, госситан не оказывает существенного влияния на
действие L–глутамата в диапазоне рассматриваемой концентрации (10–100
мкМ) (рис. 4Б). Полученные результаты позволяют предположить, что
препарат госситан не конкурирует с L–глутаматом. Возможно, их действие
обусловлено взаимодействием с NMDA-рецепторами.

В экспериментах после отмены этанола, т.е. после окончания периода

хронической

алкогольной

интоксикации,

госситан

(10–100

мкМ)

дозозависимо снижал уровень интенсивности ХТЦ–флуоресценции в
суспензии синаптосом на фоне L–глутаматом (50 мкМ). Полученные

34

результаты свидетельствуют о том, что полифенол госситан в
постинтоксикационном периоде снижает концентрацию [Са

2+

]

in

в

синаптосомах.

0

25

50

75

100

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

Контроль
Госситан(10 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(25 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(50 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(75 мкМ)+глутамат(50 мкМ)
Госситан(100 мкМ)+глутамат(50 мкМ)

0

25

50

75

100

75

50

25

10

Концентрации (мкМ)

*

**

* *

*

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

Контроль
Диазепам(10-100 мкМ)
Диазепам(10-100 мкМ)+рутан(50 мкМ)
Фенобарбитал(10-100 мкМ)
Фенобарбитал(10-100 мкМ)+рутан(50 мкМ)

А

Б

Рис.4.А- влияние агонистов ГАМК-рецептора – диазепама и фенобарбитала (10–

100 мкМ) на интенсивность флуоресценции в условиях инкубации с рутаном (50
мкМ)

.

Б-влияние полифенола госситан в зависимости от концентрации (10-100мкМ)

на интенсивность ХТЦ–флуоресценции в суспензии синаптосом головного мозга
крыс на фоне L–глутамата (50 мкМ) после завершения периода хронической
алкогольной интоксикации.

Показатель достоверности *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***-

Р<0,001. (

n

=6).

В следующих экспериментах установлено, что после периода

хронической алкогольной интоксикации рутан и госситан (100 мкМ)
значительно снижают интенсивность ХТЦ–флуоресценции в суспензии
синаптосом (рис.5А). Далее в экспериментах было установлено, что госситан
(10–100 мкМ) при инкубировании с блокатором Са

2+

–канала - нифедипином

(0,01 мкМ) значительно повышает интенсивность ХТЦ–флуоресценции
(рис.5Б).

0

25

50

75

100

125

*

**

*

4

3

2

1

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

л

уо

р

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

(1) Контроль
(2) Госситан(50 мкМ)
(3) Нифедипин(0,01мкМ)
(4) Госситан(100мкМ)+нифедипин(0,01мкМ)

0

20

40

60

80

100

120

* *

*

* *

*

* *

*

И

н

те

н

си

в

н

ос

ть

ф

л

уо

р

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

Контроль
ААС
Госситан(100мкМ)ААС
Рутан(100мкМ)ААС

А

Б

Рис.5. А-влияние рутана (100 мкМ) и госситана (100 мкМ) на значение ХТЦ–

флуоресценции в суспензии синаптосом головного мозга крыс после периода
хронической алкогольной интоксикации.

Б-влияние полифенола госситан (100 мкМ)

на интенсивность ХТЦ–флуоресценции в суспензии синаптосом головного мозга

35

крыс в условиях инкубации с блокатором Са

2+

–канала – нифедипином (0,01 мкМ).

Показатель достоверности *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001. (

n

=6).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что действие

полифенол госситана связано с блокированием активности Са

2+

–канала в

синаптосомах.

При изучении влияния алкалоида дезоксипеганина на интенсивность

флуоресценции для оценки динамики [Са

2+

]

in

путем модуляции

функциональной активности глутаматергической нейромедиаторной системы
выявлено, что дезоксипеганин в малых концентрациях (1–10 мкМ) почти не
влияет на интенсивность ХТЦ–флуоресценции, а при концентрации 50–100
мкМ снижает интенсивность флуоресценции. Преинкубация с глутаматом
(50 мкМ) дезоксипеганин дозозависимо (10–100 мкМ) снижает
интенсивность ХТЦ–флуоресценции (рис.6).

Таким образом, при преинкубации с комплексом ХТЦ–L–глутамата,

дезоксипеганин дозозависимо (10–50 мкМ) снижает интенсивность
флуоресценции. По результатам проведенных исследований можно
предположить возможную конкуренцию между дезоксипеганином и
глутаматом за участок связывания регуляции открывания ионных каналов.

Как известно, глицин усиливает дейстие глутамата, а токсины АР5 и

AV–2–1 снижают активность ГАМК–рецептора, т. е. они конкурируют с
глутаматом. Кроме того, ионы Mg

2+

, не конкурируя с глутаматом,

воздействуют как антагонист ГАМК–рецептора. В целом, препарат МК-801 с
нейропротекторными свойствами, аналогично с аргиолобатином, с
терапевтической точки зрения имеет важное значение в изучении
механизмов действия модуляторов ГАМК–рецепторов.

0

25

50

75

100

Концентрации (мкМ)

*

**

*

100

75

50

25

10

И

н

те

н

си

в

н

ос

ть

ф

л

уо

р

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

Дезоксипеганин(10-100мкМ)+глутамат(50мкМ)

Рис.6. Влияние алкалоида дезоксипеганина (10–100 мкМ) на интенсивность

флюоресценции в суспензии синаптосом головного мозга крыс.

Показатель

достоверности *- Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001. (

n

=6).

В результате проведенных экспериментов получены данные,

позволяющие предположить, что дезоксипеганин (50 мкМ) значительно
усиливает действие агониста NMDA–рецептора – глицина (10 мкМ), что в

36

свою очередь, приводит к повышению концентрации [Са

2+

]

in

, т.е.

дезоксипеганин

проявляет

агонист/антагонистическое

действие.

В

экспериментах было изучено влияние дезоксипеганина на NMDA–рецепторы
с помощью ионов Mg

2+

и аргиолобатина, и установлено, что Mg

2+

(1 мМ) при

инкубации с комплексом L–глутамат–ХТЦ в суспензии синаптосом
головного мозга крыс значительно снижает интенсивность флуоресценции.
Кроме того, при преинкубации с дезоксипеганином (100 мкМ) Mg

2+

(1 мМ)

не оказывает существенного влияния на интенсивность флуоресценции.
Аналогично, в условиях инкубации с дезоксипеганином (100 мкМ)
аргиолобатин (5 мкМ), также не оказывает влияния на интенсивность
флуоресценции. Полученные результаты позволяют предположить, что
алкалоид дезоксипеганин непосредственно влияет на активность NMDA–
рецептора.

Установлено, что инкубация дезоксипеганина (10–50 мкМ) в суспензии

синаптосом значительно увеличивает интенсивность ХТЦ-флуоресценции. А
при преинкубации с L–глутаматом (50 мкМ) дезоксипеганин (10–50 мкМ)
существенно снижает интенсивность флуоресценции. При алкогольной
интоксикации дезоксипеганин (10–50 мкМ) снижает интенсивность
флуоресценции, что в свою очередь, способствует снижению концентрации
[Са

2+

]

in

. Полученные результаты свидетельствуют о том, что создание

нейропроректорного препарата с терапевтическим действием для лечения
алкогольной интоксикации на основе данного алкалоида в фармакологии
имеет хорошие перспективы. Установлено, что преинкубация с
дезоксипеганином (100 мкМ) суспензии синаптосом, выделенных из
головного мозга крыс в постинтаксикационном периоде, в значительной
степени изменяет интенсивность ХТЦ–флуоресценции.

Установлено, что алкалоид дезоксипеганин дозозависимо (10–100 мкМ)

ингибирует тромбин, адреналин (1 мкМ) и АДФ-индуцируемую (10 мкМ)
агрегацию тромбоцитов. При этом наиболее ингибирующим эффектом
дезоксипеганин обладал при концентрации 100 мкМ и его ингибирующие
свойства в большей степени проявляются при АДФ–индуцированной (10
мкМ) агрегации. Полученные результаты свидетельствуют о снижении
концентрации [Са

2+

]

in

под действием алкалоида дезоксипеганина.

Выявлено, что преинкубация с блокатором кальциевых каналов -

верапамила (0,01 мкМ) и активатором аденилатциклазы - форсколина (10
мкМ) в значительной степени усиливает ингибирующие эффекты
дезоксипеганина (50 мкМ) на АДФ–индуцированную (10 мкМ) агрегацию
тромбоцитов (рис.7А).

На основе анализа полученных результатов можно предположить, что

дезоксипеганин подавляет активность аденилатциклазы и снижает уровень
внутриклеточного [Са

2+

].

37

0

25

50

75

100

* *

*

* *

*

**

* *

*

С

те

п

ен

ь

аг

ре

га

ц

и

(

%

)

Контроль АДФ(10мкМ)
Верапамил(0,01мкМ)
Форсколин(10мкМ)
Дезоксипеганин(50 мкМ)+верапамил(0,01мкМ)
Дезоксипеганин(50 мкМ)+форсколин(10мкМ)

0

25

50

75

100

***

* *

*

И

н

те

н

си

вн

ос

ть

ф

лу

ор

ес

ц

ен

ц

и

(

%

)

Контроль АДФ(10мкМ)
Fura-2 AM [Ca

2+

]

out

=2,5 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

Fura-2 AM [Ca

2+

]

out

=0 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

ХТЦ [Ca

2+

]

out

=2,5 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

ХТЦ [Ca

2+

]

out

=0 mM+дезоксипеганин(100мкМ)

А

Б

Рис.7. А-влияние алкалоида дезоксипеганина (50 мкМ) на АДФ-индуцируемую

(10 мкМ) агрегацию тромбоцитов в условиях инкубации с блокатором Са

2+

–канала -

верапамилом (0,01 мкМ) и блокатором фермента аденилатциклазы – форсколином
(10 мкМ). Б- влияние алкалоида дезоксипеганина (100 мкМ) в условиях [Са

2+

]

out

=0

мМ и [Са

2+

]

out

=2,5 мМ при агрегации тромбоцитов, вызванных под действием АДФ

на интенсивность Fura–2/АМ и ХТЦ–флуоресценции.

Показатель достоверности *-

Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,001. (

n

=6).

Исследовано

антиагрегационное

влияние

дезоксипеганина

с

использованием флуоресцентных зондов Fura-2/АМ и ХТЦ. Известно, что
АДФ приводит к резкому увеличению внутриклеточной концентрации [Са

2+

]

и что дезоксипеганин (100 мкМ) в условиях [Са

2+

]

out

=0 мМ и [Са

2+

]

out

=2,5 мМ

при АДФ-индуцируемой агрегации ингибирует интенсивность Fura–2/АМ и
ХТЦ–флуоресценции

(рис.7Б).

Полученные

результаты

позволяют

предположить,

что

антиагрегационное

действие

дезоксипеганина

обусловлено снижением концентрации [Са

2+

]

in

в тромбоцитах за счет

ингибирования активности транспорта Са

2+

, поступающего и выходящего из

внутриклеточных депо.

В следующих сериях экспериментов было обнаружено, что

дезоксипеганин (10–50 мкМ) в условиях

in vitro

оказывает релаксантное

действие на KCl-индуцируемую (50 мМ) изометрическую сократительную
активность

препарата

аорты

крысы.

Также

установлено,

что

вазорелаксантное действие дезоксипеганина реализуется в зависимости от
концентрации [Са

2+

]

out

и он усиливает действие блокатора дигидропиридин-

чувствительного Са

2+

L

–канала - нифедипина (0,01 мкМ). Полученные данные

свидетельствуют о том, что дезоксипеганин снижает концентрацию [Са

2+

]

in

путем блокирования потенциал-зависимого Са

2+

L

–канала плазматических

мембран сердечно-сосудистых гладкомышечных клеток и могут служить
дополнительным потдверждением того, что дезоксипеганин уменьшает
концентрацию [Са

2+

]

in

в синаптосомах.

В настоящее время в экспериментальной нейрологии создание

эффективных фармакологических препаратов с нейропротекторными
свойствами на основе биологически активных веществ растительного
происхождения является одним из приоритетных направлений. С этой точки

38

зрения особенно перспективными агентами считаются алкалоиды и
полифенольные соединения с широким спектром полифункционального
фармакологического действия (Shikov et al., 2014).

ВЫВОДЫ

1.

Установлено, что в контрольной группе глутамат (10–100 мкМ)

увеличивает интенсивность флуоресценции в суспензии синаптосомах
головного мозга крыс и уровень Са

2+

-проницаемости пресинаптической

мембрана, следовательно и концентрацию [Са

2+

]

in

.

2.

Выявлено, что хроническая алкогольная интоксикация способствует

повышению активности ГАМК– и NMDA–рецепторов, что в свою очередь,
приводит к патологическому изменению концентрации [Са

2+

]

in

.

3.

Впервые выявлено, что при хронической алкогольной интоксикации

рутан возможно конкурентно с L–глутаматом, а госситан неконкурентно с L–
глутаматом оказывают положительное действие на динамику [Са

2+

]

in

в

нервных клетках.

4.

Алкалоид дезоксипеганин (10-100 мкМ) аналогично L–глутаматом, в

условиях хронической алкогольной интоксикации путем модуляции
активности NMDA-рецепторов оказывает антитоксическое действие.

5.

Впервые установлено, что антиагрегационное действие алкалоида

дезоксипеганина (100 мкМ) в тромбоцитах за счет снижения активности вне
и внутриклеточного Са

2+

–транспорта выражается в снижении концентрации

[Са

2+

]

in

.

Это имеет важное значение в качестве дополнительного

подтверждения факта снижения концентрации [Са

2+

]

in

в синаптосомах под

действием алкалоида дезоксипеганина.

6.

Релаксантное действие дезоксипеганина (10-50 мкМ) в условиях

in

vitro

на активность изометрического сокращения препарата аорты крыс

связано с уменьшением концентрации [Са

2+

]

in

за счет блокирования Са

2+

L

–

канала клеток гладких мышц. Эти данные могут служить дополнительным
потдверждением того, что дезоксипеганин уменьшает концентрацию [Са

2+

]

in

в синаптосомах.

7.

Обнаружено, что на основании проведенных экспериментов в

условиях in vitro, с использованием биологически активных веществ, таких
как рутан, госситан и дезоксипеганин можно регулировать патологические
изменения в ГАМК- и NMDA-рецепторах при разных состояниях
алкогольной интоксикации.

39

SCIENTIFIC COUNCIL AWARDING SCIENTIFIC DEGREES

DSc.27.06.2017.B.38.01 AT INSTITUTE OF MICROBIOLOGY AND

NATIONAL UNIVERSITY OF UZBEKISTAN

INSTITUTE OF BIOORGANIC CHEMISTRY

KHOSHIMOV NOZIMJON NUMONJONOVICH

CHARACTERISTICS OF THE ACTION OF POLYPHENOLS (RUTAN,

GOSSITAN) AND ALKALOID (DESOXYPEGANIN) ON THE

TRANSPORT OF Ca

2+

IN THE BRAIN SYNAPTOSOMES OF RATS

03.00.08 – Human and animal physiology

DISSERTATION ABSTRACT OF THE DOCTOR OF

PHILOSOPHY (PhD) ON BIOLOGICAL SCIENCES

Тashkent – 2018

40

41

INTRODUCTION (abstract of PhD thesis)

The aim of the research work

is to describe the characterization of

mechanism of effect of rutan, gossitan and desoxypeganin on the transport of Ca

2+

in the brain synaptosomes and to justify the neurotransmitter properties.

The objects of the research

are isolated from plants - rutan, gossitan

polyphenols and alkaloid desoxypeganin, rats cerebral synaptosomes suspension,
platelet suspension, aortic vascular.

The novelty of the research

consists of the following:

revealed with the help of Сa

2+

-sensitive probe CTC it was obtained the

increasing permeability of the presynaptic membrane at low concentration of
glutamate as well as increasing of concentration of [Сa

2+

]

in

in rat brain

synaptosomes;

revealed that in the conditions of chronic alcohol intoxication rutan has a

protective effect on the dynamics of [Сa

2+

]

in

in nerve cells;

the competition between gossitane and nifedipine was established due to

regulation of dihydropyridine-sensitive calcium channels;

revealed the antitoxic action of alkaloid desoxypeganine similar to glutamate,

in conditions of chronic alcohol intoxication by modulating the activity of NMDA-
receptors;

the action of desoxypeganine to the exit of Сa

2+

from inward depot of platelets

was determined by the reduction of activity of [Ca

2+

]

in

, and the relapse effect on

the vascular smooth muscle cells associated with Сa

2+

L

-channel blockade.

Implementation of the research results.

On the basis of scientific findings

on the description of the effects of rutan, gossitan and desoxypeganine on the
transport of Ca

2+

in the brain synaptosomes of rats:

the obtained results on the investigation of mechanisms of development of

neurodegenerative processes at the molecular level and their correction by
neuroprotective drugs were it is used for pharmacological classification of
medicinal products (certificate No. 29 / 09-1058 GUP State Center for Expertise
and Standardization of Medicinal Products of Medical Devices and Medical
Equipment of the Ministry of Health of the Republic of Uzbekistan 27 March
2018). As a result,` it became possible to investigate the specific activity of drugs -
neurostimulants in the laboratory of pharmacological and toxicological studies of
the State Center;

rutan, gossitan and desoxypeganin effect on the transport of Ca

2+

in the brain

synaptosomes of rats at FA-A11-T057 "Creation of a center for highly effective
screening of biologically active compounds of natural and synthetic origin" in the
hypoxia rats synaptosomes membranes Сa

2+

and the NMDA-receptor in

determining effective mechanisms was used as a comparison to the mechanism of
action (Сertificate FTA-02-11/1148 of 21 November, 2017 of the Agency of
Science and Technology of the Republic of Uzbekistan). As a result, it has been
established that on the basis of blocking the Ca

2+

transport of synaptic membranes

under hypoxia a reduction in the [Са

2+

]

in

through the NMDA-receptor of

postsynaptic membranes, one can characterize the neuroprotective properties.

42

Structure and volume of the dissertation.

The dissertation consists of

introduction, four chapters, conclusion, list of used literature and appendixes. The
volume of the thesis is 114 pages.

43

ЭЪЛОН ҚИЛИНГАН ИШЛАР РЎЙХАТИ

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

LIST OF PUBLISHED WORKS

I бўлим (I часть; I part)

1.

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э., Раимова Г.М. Исследование уровня

внутриклеточного Са

2+

в синаптосомах мозга крыс при алкогольном

абстинентном синдроме // Узбекский биологический журнал. – Ташкент,
2014. – №6. – С.15–18 (03.00.00; №5).

2.

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э. Исследование действия алкалоида

дезоксипеганина на глутаматергическую нейромедиаторную систему при
хронической алкогольной интоксикации // Инфекция, иммунитет и
фармакология. – Ташкент, 2015. – №4. – С.303–307 (03.00.00; №7).

3.

Кhoshimov N.N, Nasirov K.E., Rakhimov R.N. Research of action of

preparat rutan on various sites of GABA–receptor at chronic alcoholic intoxication
// Eastern European Scientific Journal. – Dusseldorf, 2015. – №3. – P.32–37.
(03.00.00; №2).

4.

Хошимов H.H., Насиров К.Э., Наджимова X.К. Исследование

взаимодействий ГАМК–ергической системы с NMDA–рецепторами под
действием этанола // Ежемесячный научный медицинский журнал «Интер–
медикал». Международное научное объединение «Inter–Medical». – Москва,
2015. – №6(12). – С.70–75 (03.00.00; №1).

5.

Хошимов H.H., Насиров К.Э. Действие этанола на систему гемостаза

и уровня внутриклеточного Са

2+

синаптосомах мозга крыс // Инфекция,

иммунитет и фармакология. – Ташкент, 2015. – №5. – С.338–347 (03.00.00;
№7).

II бўлим (II часть; II part)

6.

Кhoshimov N.N., Nasirov K.E., Rakhimov R.N. The research of action of

preparations rutan and gossitan on the glutamate eksitetoxic mediated by NMDA–
receptor at chronic alcoholic intoxication and cancellation of ethanol // Russian
Journal of Biological Research. – Sochi, 2015. – V.4(2). – P.60–67 (№-17. Open
Academic Journals Index

- 0.1).

7.

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э., Рахимов Р.Н. Исследование действия

препарата «госситана» на эксайтотоксичность глутамата при хронической
алкогольной интоксикации // Сборник тезисов международ. конф. молодых
ученых «Экспериментальная и теоретическая биофизика». – Пущино, 2014. –
С.128.

8.

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э. Исследование действия алкалоида

дезоксипеганина на глутаматергическую нейромедиаторную систему при
алкогольной интоксикации // Сборник тезисов международ. конф. молодых
ученых «Экспериментальная и теоретическая биофизика». – Пущино, 2014. –
С.129–130.

44

9.

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э., Рахимов Р.Н. Исследование действия

препарата «рутана» на эксайтотоксичность глутамата, опосредуемую
NMDA–рецепторами, при хронической алкогольной интоксикации //
Сборник тезисов международ. конф. молодых ученых «Экспериментальная и
теоретическая биофизика». – Пущино, 2014. – С.30– 131.

10.

Хошимов Н.Н. Исследование взаимодействий ГАМКергической

системы с NMDA–рецепторами // Материалы XVIII Международной
медико–биологической научной конференции молодых исследователей
«Фундаментальная наука и клиническая медицина. Человек и его здоровье».
– Санкт–Петербург, 2015. – С.579–580.

11.

Хошимов Н.Н. Исследование внутриклеточного Са

2+

в синаптосомах

мозга крыс при хронической алкогольной интоксикации // Материалы XVIII
Международной медико–биологической научной конференции молодых
исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина. Человек и
его здоровье». – Санкт–Петербург, 2015. – С.575–576.

12.

Khoshimov N.N., Nasirov K.E, Raimova G.M. Actions of preparation

gossitan on GABAergic system at chronic alcoholic intoxication // Материалы
научной конференции «Биоэкономика и экобиополитика». – Казань, 2015. –
№1. – C.139.

13.

Хошимов Н.Н., Камолиддинова С.Б., Айтбекова Н., Маматова З.А.

Влияние алкалоида дезоксипеганина на агрегацию тромбоцитов // Материалы
научно–практической конференции «Современные аспекты физико–
химической биологии и экотоксикологии» посвящ. 70–летию проф.
У.З.Мирходжаева. – Ташкент, 2016. – С. 247–248.

45

Автореферат «Ўзбекистон биология журнали» журнали таҳририятида

таҳрирдан ўтказилган.

Бичими 60х84

1

/

16

. Ризограф босма усули. Times гарнитураси.

Шартли босма табоғи: 3. Адади 75. Буюртма № 22.

«IMPRESS MEDIA» МЧЖ корхонасида чоп этилди.

100022, Тошкент, Қушбеги кўчаси,6.

Библиографические ссылки

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э., Раимова Г.М. Исследование уровня внутриклеточного Са2' в синаптосомах мозга крыс при алкогольном абстинентном синдроме И Узбекский биологический журнал. - Ташкент,

- №6. - С. 15-18 (03.00.00; №5).

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э. Исследование действия алкалоида дезоксипеганина на глутаматергическую нейромедиаторную систему при хронической алкогольной интоксикации // Инфекция, иммунитет и фармакология. - Ташкент, 2015. - №4. - С.303-307 (03.00.00; №7).

Khoshimov N.N, Nasirov К.Е., Rakhimov R.N. Research of action of prcparat rutan on various sites of GABA-receptor at chronic alcoholic intoxication H Eastern European Scientific Journal. - Dusseldorf, 2015. - №3. - P.32-37. (03.00.00; №2).

Хошимов H.H., Насиров К.Э., Наджимова X.K. Исследование взаимодействий ГАМК-ергической системы с NMDA-рецепторами под действием этанола // Ежемесячный научный медицинский журнал «Интер-медикал». Международное научное объединение «Inter-Mcdical». - Москва,

-№6(12). - С.70-75 (03.00.00; №1).

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э. Действие этанола на систему гемостаза и уровня внутриклеточного Са2+ синаптосомах мозга крыс // Инфекция, иммунитет и фармакология. - Ташкент, 2015. - №5. - С.338-347 (03.00.00; №7).

Khoshimov N.N., Nasirov K.E., Rakhimov R.N. The research of action of preparations rutan and gossitan on the glutamate eksitctoxic mediated by NMDA-rcccptor at chronic alcoholic intoxication and cancellation of ethanol // Russian Journal of Biological Research. - Sochi, 2015. - V.4(2). - P.60-67 (№-17. Open Academic Journals Index - 0.1).

Хошимов H.H., Насиров К.Э., Рахимов P.H. Исследование действия препарата «госситана» на эксайтотоксичность глутамата при хронической алкогольной интоксикации // Сборник тезисов международ, конф, молодых ученых «Экспериментальная и теоретическая биофизика». - Пущино, 2014. -С.128.

Хошимов Н.Н., Насиров К.Э. Исследование действия алкалоида дезоксипеганина на глутаматергическую нейромедиаторную систему при алкогольной интоксикации // Сборник тезисов международ, конф, молодых ученых «Экспериментальная и теоретическая биофизика». - Пущино, 2014. -С.129-130.

У. лошимов н.н., Насиров K.J., Нахимов н.н. исследование действия препарата «рутана» на эксайтотоксичность глутамата, опосредуемую NMDA-рецепторами, при хронической алкогольной интоксикации // Сборник тезисов международ, конф, молодых ученых «Экспериментальная и теоретическая биофизика». - Пущино, 2014. - С.30- 131.

Хошимов Н.Н. Исследование взаимодействий ГАМКергической системы с NMDA-рецепторами И Материалы XVIII Международной медико-биологической научной конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина. Человек и его здоровье». - Санкт-Петербург, 2015. - С.579-580.

Хошимов Н.Н. Исследование внутриклеточного Са2+ в синаптосомах мозга крыс при хронической алкогольной интоксикации // Материалы XVIII Международной медико-биологической научной конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина. Человек и его здоровье». - Санкт-Петербург, 2015. - С.575-576.

Khoshimov N.N., Nasirov К.Е, Raimova G.M. Actions of preparation gossitan on GABAcrgic system at chronic alcoholic intoxication // Материалы научной конференции «Биоэкономика и экобиополитика». - Казань, 2015. -№1.-С.139.

Хошимов Н.Н., Камолиддинова С.Б., Айтбекова Н., Маматова З.А. Влияние алкалоида дезоксипеганина на агрегацию тромбоцитов // Материалы научно-практической конференции «Современные аспекты физико-химической биологии и экотоксикологии» посвящ. 70-летию проф. У.З.Мирходжаева. - Ташкент, 2016. - С. 247-248.