ЖУРНАЛ КАРДИОРЕСПИРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | JOURNAL OF CARDIORESPIRATORY RESEARCH
№3 | 2021
35
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ/ORIGINAL MAQOLALAR/ORIGINAL ARTICLES
Абдуганиева Эльнора Абраловна
докторант Республиканского специализированного
научно-практического центра фтизиатрии и пульмонологии
Ташкент, Узбекистан
Ливерко Ирина Владимировна
заместитель директора по науке Республиканского
специализированного научно-практического центра
фтизиатрии и пульмонологии, Ташкент, Узбекистан
ПОЛИМОРФИЗМЫ ARG506GLN ГЕНА F5, G20210A ГЕНА F2, GLU429ALA ГЕНА MTHFR, ASP919GLY ГЕНА MTR ГЕНОВ
ТРОМБОФИЛИЙ - КАК ПРЕДИКТОРЫ ТРОМБОТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ
БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ
For citation:
Abduganieva E.A., Liverko I.V. Рolymorphisms Arg506Gln of the F5 gene, G20210A of the F 2 gene, Glu429Ala of the MTHFR
gene, ASP919Gly of the MTR gene of thrombophilia genes - as predictors of thrombotic complications in patients with chronical obstructive
pulmonary disease. Journal of cardiorespiratory research. 2021, vol 2, issue 3, pp.35-39
http://dx.doi.org/10.26739/2181-0974-2021-3-6
АННОТАЦИЯ
В исследовании были проанализированы результаты исследований генов наиболее распространенных тромбофилий у больных
хронической обструктивной болезнью легких в узбекской популяции. В результате авторами были обнаружены генетические предикторы
тромботических осложнений по полиморфизму генов Arg506Gln гена F5; полиморфизм G20210A гена F2; полиморфизм Glu429Ala гена
MTHFR, среди которых обнаружено значимое преобладание мутантных аллелей, мутантных генотипов и предрасполагающей
гетерозиготной формы генотипа полиморфизмов 20210 G/A гена F2, Arg506Glu гена F5, 1298 A>C гена MTHFR.
Также авторы отметили, что, у больных ХОБЛ в узбекской популяции не обнаружено ассоциаций полиморфизма Asp919Gly гена MTR.
Ключевые слова:
тромбофилия, гены тромбофилии, хроническая обструктивная болезнь легких, полиморфизм, тромбоз.
Abduganieva Elnora Abralovna
doctoral student of the Republican
Specialized Scientific and Practical Center for
Phthisiology and Pulmonology, Tashkent, Uzbekistan
Liverko Irina Vladimirovna
Deputy Director for Science of the Republican
Specialized Scientific and Practical Center for
Phthisiology and Pulmonology, Tashkent, Uzbekistan
POLYMORPHISMS ARG506GLN OF THE F5 GENE, G20210A OF THE F2 GENE, GLU429ALA OF THE MTHFR GENE,
ASP919GLY OF THE MTR GENE OF THROMBOPHILIA GENES - AS PREDICTORS OF THROMBOTIC COMPLICATIONS IN
PATIENTS WITH CHRONICAL OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE
ANNOTATION
The study analyzed the results of studies of the genes of the most common thrombophilia in patients with chronic obstructive pulmonary disease in
the Uzbek population. As a result, the authors discovered genetic predictors of thrombotic complications by polymorphism of Arg506Gln genes of
the F5 gene; polymorphism G20210A of the F2 gene; polymorphism Glu429Ala of the MTHFR gene, among which a significant predominance of
mutant alleles, mutant genotypes, and a predisposing heterozygous form of the genotype of polymorphisms 20210 G / A of the F2 gene, Arg506Glu
of the F5 gene, 1298 A> C of the MTHFR gene was found.
The authors also noted that, in patients with COPD in the Uzbek population, no associations of the Asp919Gly polymorphism of the MTR gene
were found.
Keywords:
thrombophilia, thrombophilia genes, chronic obstructive pulmonary disease, polymorphism, thrombosis.
ЖУРНАЛ КАРДИОРЕСПИРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | JOURNAL OF CARDIORESPIRATORY RESEARCH
№3 | 2021
36
Abduganieva Elnora Abralovna
Respublika ixtisoslashtirilgan fiziologiya va рulmonologiya
ilmiy -amaliy markazining doktoranti, Toshkent, O'zbekiston
Liverko Irina Vladimirovna
Respublika ixtisoslashtirilgan ftiziatriya va
рulmonologiya ilmiy -amaliy markazi direktorining
ilmiy ishlar bo'yicha o'rinbosari, Toshkent, O'zbekiston
TROMBOFILIA F5 GENINING ARG506GLN, F2 GENINING G20210A, MTHFR GENINING GLU429ALA, MTR GENINING
ASP919 GLYPOLIMORFIZMLARI SURUNKALI OBSTRUKTIV O'PKA KASALLIGI BILAN OG'RIGAN BEMORLARDA
TROMBOTIK ASORATLARINI PREDIKTORLARI SIFATIDA
ANNOTASIYA
Tadqiqot, o'zbek populyatsiyasida surunkali obstruktiv o'pka kasalligi bo'lgan bemorlarda eng ko'p uchraydigan trombofiliya genlarini o'rganish
natijalarini tahlil qiladi. Natijada, mualliflar tomonidan F5 genining Arg506Gln, F2 genining G20210A polimorfizmi, MTHFR genining Glu429Ala
polimorfizmlarining o'pka surunkali obstruktiv kasalligi (O'SOK) bo'lgan bemorlarda trombotik asoratlar rivojlanishida ahamiyatli ekanligini va
bu aynan shu genlarda mutant allellarning, trombotik asoratlarga moyillik keltirib chiqaruvchi geterozigotali genotiplarning uchrashi bilan
isbotlanadi.
Mualliflar, shuningdek, o'zbek populyatsiyasida O'SOK bilan og'rigan bemorlarda, MTR genining Asp919Gly polimorfizmining assotsiatsiyalari
bo'lmasligi haqida xulosa qiladilar.
Kalit so'zlar:
trombofiliya, trombofiliya genlari, surunkali obstruktiv o'pka kasalligi, polimorfizm, tromboz
Тромбозы играют существенную роль в общей заболеваемости
и смертности во всех возрастных группах, в связи, с чем изучение
генов тромбофилий вызывает растущий интерес в современных
исследованиях. Сегодня тромбофилии выявляются почти у
каждого шестого жителя планеты [1]. При обострении ХОБЛ
увеличивается и риск развития венозных тромбозов и
тромбоэмболии легочной артерии (ТЭЛА), и частота их составляет
приблизительно 15% [4]. Тромбофилия является особенностью
организма,
определяющей
его
предрасположенность
к
формированию внутрисосудистых тромбов в обычных ситуациях,
даже при отсутствии иных факторов риска, и чаще всего
передающейся по наследству. Следует подчеркнуть, что
тромбофилия не является болезнью в общепринятом понимании и
может не иметь клинических проявлений, что затрудняет ее
своевременную диагностику, т. е. до развития первого эпизода
тромбообразования [2].
Цель исследования.
Изучить полиморфизмы и мутации
наиболее часто встречающих генов тромбофилий в популяции
пациентов хронической обструктивной болезнью легких, как
генетических предикторов развития тромботических состояний.
Материалы и методы.
В исследование были включены 49
пациента ХОБЛ III–IV стадии заболевания, имеющие в анамнезе
тромботические осложнения, находящиеся на стационарном
лечении в клиниках РСНПМЦ фтизиатрии и пульмонологии в
период 2018 -2019 гг. В контрольную группу вошли 46 здоровых
пациентов сопоставимых по возрасту и полу с основной группой.
Все
исследования
проведены
с
учетом
требований
Хельсинской
декларации
(Рекомендации
для
врачей
по
биомедицинским исследованиям на людях, 2000 г.), нормативных
документов Министерства здравоохранения РУз.
Генетические
методы
исследования.
ДНК-диагностику
осуществляли в отделении «Молекулярных исследований и
клеточных технологий» Республиканского специализированного
научно-практического медицинского центра гематологии.
ДНК выделяли из лейкоцитов крови стандартным фенол-
хлороформным методом (Маниатис Т.,1984) для амплификации
необходимого фрагмента гена использовали два праймера (Frank
A.,2003):
5'-ATGATCCCAAGCTGAAAGGCTA-3';
5'-
CAGGGCTCTCCGTGGAGGCTAT-3'.
Для диагностики мутационных изменений применяли ДНК,
выделенную из периферической крови стандартными методами.
Использованные методы ДНК- диагностики были основаны на
полимеразной цепной реакции (ПЦР). Первичный скрининг
мутации Leiden осуществляли по методу R.M.Bertina с соавторами
(1994) и рестриктазой Mnl 1. Мутацию G20210A в гене
протромбина определяли с помощью рестриктазы Taq1 после
введения в продукт ПЦР искусственного сайта рестрикции.
Аллельное
(гомозиготное
или
гетерозиготное)
состояние
выявленной мутации
подтверждали
с
помощью аллель-
специфических праймеров. Кровь в количестве 5 мл получали
методом венопункции в одноразовую стерильную пробирку с
антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта использовали 0,5 М
раствор EDTA в соотношении антикоагулянт: кровь 1:10. Кровь
хранили при -20˚-80˚C до выделения ДНК. ДНК выделяли из
лимфоцитов периферической крови с помощью наборов реактивов
RiboPrep 200, основанных на использовании гуанидинтиоционата
и Nucleus–сорбента (IsogeneLab.Ltd, Россия) в соответствии с
методикой, разработанной фирмой-производителем.
Для определения Лейденской мутации использовался комплект
реагентов для АС-ПЦР выявления полиморфизма Arg506Gln в гене
F5 «SNP-ЭКСПРЕСС-КАРДИОГЕНЕТИКА» предназначенный
для выявления полиморфизма Arg506Gln в гене F5 в геномной
ДНК человека, выделенной из лейкоцитов цельной крови, методом
аллель-специфической полимеразной цепной реакции (АС-ПЦР) в
режиме реального времени.
Комплект реагентов для АС-ПЦР выявления полиморфизма
20210G/A в гене F2 «SNP-ЭКСПРЕСС-КАРДИОГЕНЕТИКА»
предназначен для выявления полиморфизма 20210G/A в гене F2 в
геномной ДНК человека, выделенной из лейкоцитов цельной
крови, методом аллель-специфической полимеразной цепной
реакции (АС-ПЦР) в режиме реального времени.
Комплект реагентов для АС-ПЦР выявления полиморфизма
Glu429Ala
в
гене
MTHFR
«SNP-ЭКСПРЕСС-
КАРДИОГЕНЕТИКА»
предназначен
для
выявления
полиморфизма Glu429Ala в гене MTHFR в геномной ДНК
человека, выделенной из лейкоцитов цельной крови, методом
аллель-специфической полимеразной цепной реакции (АС-ПЦР) в
режиме реального времени.
Комплект реагентов для АС-ПЦР выявления полиморфизма
Asp919Gly в гене MTR «SNP-ЭКСПРЕСС-КАРДИОГЕНЕТИКА»
предназначен для выявления полиморфизма Asp919Gly в гене
MTR в геномной ДНК человека, выделенной из лейкоцитов
цельной крови, методом аллель-специфической полимеразной
цепной реакции (АС-ПЦР) в режиме реального времени.
Статистический
анализ
результатов
проведен
с
использованием статистических программ “ОpenEpi, Version 2,9”.
Результаты исследования.
Для изучения роли генов
тромбофилий в развитии тромботических эпизодов у больных
ХОБЛ нами были изучены полиморфизм Asp919Gly гена
тромбофилии MTR. Различия в частоте встречаемости аллелей и
генотипов полиморфизма Asp919Gly гена MTR в группе пациентов
ХОБЛ и контрольной группе представлены в таблице 1.
ЖУРНАЛ КАРДИОРЕСПИРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | JOURNAL OF CARDIORESPIRATORY RESEARCH
№3 | 2021
37
Таблица 1
Различия в частоте встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма Asp919Gly (А/G) гена MTR в объединенной группе
пациентов с ХОБЛ и контрольной выборке (модель случай-контроль)
При изучении особенностей полиморфизма Asp919Gly (А/G)
гена MTR у больных ХОБЛ не обнаружено частоты носительства
мутантного аллеля GG по сравнению с контрольной группой. В
популяции здоровых доноров узбекской национальности этот
показатель составил 2,2%. В связи с чем мы не можем утверждать
о
наличии
ассоциации
между
изучаемым
вариантом
полиморфизма гена MTR с фенотипическими проявлениями
тромбофилических состояний.
При изучении полиморфизма 20210 G/A гена F2 (табл.2) в
группе контроля и больных ХОБЛ установлены значимые
изменения частоты носительства мутантного аллеля А в
сравниваемых группах с преобладанием данного аллеля при ХОБЛ
(χ2=2,1; Р=0,1).
Изучение частоты встречаемости генотипов и аллелей
полиморфизма 20210 G/A гена F2 как указано на табл 3. различия
были установлены в частоте встречаемости гетерозиготного
генотипа G/A, который встречался в 4,6 раз чаще в группе больных
ХОБЛ в сравнении с группой контроля (χ2=2,1; Р=0,1).
Таблица 2
Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма 20210 G/A гена F2 в группе контроля и больных ХОБЛ
Таблица 3
Различия в частоте встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма 20210 G/A гена F2 в контрольной группе и группе
ХОБЛ (случай-контроль)
Из полученных данных можно предположить наличие ассоциации между вариантами полиморфизма 20210 G/A гена F2,
определяющих генетическую предрасположенность к тромботическим состояниям у больных ХОБЛ.
Таблица 4
Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма Arg506Gln гена F5 в контрольной группе и группе больных ХОБЛ
Аллели
и
генотипы
ХОБЛ, n=49
Контрольная
группа,
n= 46
χ
2
Р
RR
95% CI
OR
95% CI
N
%
N
%
А
86
87.6
80
87.0
0.03
0.7
0.9
0.444- 1.98
0.9
0.39- 2.19
G
12
12.4
12
13.0
А/А
37
75.5
35
76.1
0.08
0.8
1.0
0.818- 1.3
1.1
0.460- 2.847
А/G
12
24.5
10
21.7
0.1
0.7
1.1
0.539-2.353
1.2
0.448- 3.038
G/G
0
0
1
2.2
-
-
-
-
-
-
Группа
Частота аллелей
Частота распределения генотипов
G
A
G/G
G/A
А/A
n
%
n
%
n
%
N
%
n
%
ХОБЛ, n=50
97
97.0
3
3.0
47
94.0
3
6.0
0
0.0
Контрольная группа,
n=75
149
99.3
1
0.7
74
98.7
1
1.3
0
0.0
Аллели и
генотипы
Количество обследованных аллелей и
генотипов
χ
2
Р
RR
OR
95% CI
ХОБЛ, n=50
Контрольная
группа, n=75
G
97
149
2.1
0.1
4.5
4.6
0.4726- 44.9
A
3
1
G/G
47
74
2.1
0.1
0.9
0.8
0.0213- 2.09
G/A
3
1
2.1
0.1
4.5
4.7
0.4772- 46.75
А/A
0
0
-
-
-
-
-
Группа
Частота аллелей
Частота распределения генотипов
G
A
G/G
G/A
А/A
ЖУРНАЛ КАРДИОРЕСПИРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | JOURNAL OF CARDIORESPIRATORY RESEARCH
№3 | 2021
38
Как видно из таблицы 4, частота генотипа G/A в наших
наблюдениях преобладала в группе больных ХОБЛ и превышала
частоту встречаемости по сравнению с контрольной группой в 6,2
раз (χ2=3,5; Р=0,06).
При изучении особенностей полиморфизма Arg506Gln гена
F5 было установлено значимое изменение частоты носительства
мутантного аллеля А у пациентов с ХОБЛ (4%) по сравнению с
группой контроля (0,7%), что показало достоверное превышение
частоты данного гена в группе ХОБЛ (χ2=3,4; Р=0,06) (табл.5).
Частота встречаемости гетерозиготного генотипа G/A в группе
ХОБЛ достоверно превышала частоту в контрольной группе
(χ2=3,5; Р=0,06), что возможно говорит о роли данного гена в
развитии тромбофилических состояний при ХОБЛ.
Таблица 5
Различия в частоте встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма Arg506Gln гена F5 в контрольной группе и группе
больных ХОБЛ
(случай-контроль)
При
анализе
частоты
распределения
аллелей
полиморфизма 1298 A>C гена MTHFR как указано в табл.6
установлено, что частота мутантного аллеля С встречалась в 2,2 раз
чаще в группе больных ХОБЛ по сравнению с контрольной
группой (χ2=6,8; Р=0,01). Частота встречаемости мутантного
генотипа СС у больных ХОБЛ была в 4,5 раз выше в сравнении с
контрольной
группой
(χ2=2,1;
Р=0,1)
и
определяла
фенотипические риски развития тромботических состояний при
ХОБЛ. Гетерозиготный генотип A/С в группе ХОБЛ был в 1,9 раз
выше в сравнении с группой контроля (χ2=3,6; Р=0,06) и
определялся как предрасполагающий фактор.
Таблица 6
Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма 1298 A>C гена MTHFR группе больных ХОБЛ и контрольной
группе
Таблица 7
Различия в частоте встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма 1298 A>C гена MTHFR в основной и контрольной
группах
(case-control)
n
%
n
%
n
%
N
%
n
%
ХОБЛ, n=50
96
96.0
4
4.0
46
92.0
4
8.0
0
0
Контрольная группа n=75
149
99.3
1
0.7
74
98.7
1
1.3
0
0
Аллели и
генотипы
Количество обследованных аллелей и
генотипов
χ
2
Р
RR
OR
95% CI
ХОБЛ, n=50
Контр.
группаn=75
G
96
149
3.4
0.06
6.0
6.2
0.680-52.8
A
4
1
G/G
46
74
3.5
0.06
0.9
0.1
0.0168-1.434
G/A
4
1
3.5
0.06
6.0
6.4
0.6976, 59.3
А/A
0
0
0
0
0
0
0
Группа
Частота аллелей
Частота распределения генотипов
A
С
А/A
A/С
С/С
n
%
n
%
n
%
N
%
n
%
ХОБЛ, n=50
78
78.0
22
22.0
31
62.0
16
32.0
3
6.0
Контрольная группа n=75
135
90.0
15
10.0
61
81.3
13
17.3
1
1.3
Аллели и
генотипы
Количество обследованных аллелей и
генотипов
χ
2
Р
RR
OR
95% CI
Группа ХОБЛ, n=50
Контр. Группа,
n=75
A
78
135
6.8
0.01
2.2
2.5
1.244- 5.179
С
22
15
А/A
31
61
5.8
0.02
0.7
0.4
0.1658-0.845
A/С
16
13
3.6
0.06
1.8
2.2
0.966–5.21
С/С
3
1
2.1
0.1
4.5
4.7
0.477–46.75
ЖУРНАЛ КАРДИОРЕСПИРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | JOURNAL OF CARDIORESPIRATORY RESEARCH
№3 | 2021
39
Полученные
результаты
свидетельствуют
о
высокой
ассоциации между изучаемым вариантом полиморфизма гена
MTHFR и тромбофилическими состояниями при ХОБЛ (табл.7).
Выводы:
в
результате
анализа
ассоциации
генов
тромбофилии, определяющих фенотипические проявления
протромбогенных состояний при ХОБЛ в узбекской популяции,
было обнаружено значимое преобладание мутантных аллелей,
мутантных генотипов и предрасполагающей гетерозиготной
формы генотипа полиморфизмов 20210 G/A гена F2, Arg506Glu
гена F5, 1298 A>C гена MTHFR. Не обнаружено ассоциаций
полиморфизма Asp919Gly гена MTR.
На основании данных можно сделать вывод о значимости
изменений в генах тромбофилии F2, F5 и MTHFR в узбекской
популяции при развитии фенотипических протромботических
состояний у больных ХОБЛ.
Исследование генетических предикторов тромботических
осложнений по полиморфизму генов Arg506Gln гена F5;
полиморфизм G20210A гена F2; полиморфизм Glu429Ala гена
MTHFR требует дальнейшего изучения взаимосвязей оценки
выявленных
глубоких
нарушений
гемостазиологического
равновесия.
References/ Список литературы/ Iqtiboslar
1.
Васильев С.А. , Виноградов В.Л. , Смирнов А.Н. , Погорельская Е.П. , Маркова М.Л.Тромбозы и тромбофилии:
классификация, диагностика, лечение, профилактика. РМЖ «Медицинское обозрение». 2013;(17): 896-899.
2.
Зотова И.В., Затейщиков Д.А. Наследственная тромбофилия и венозные тромбоэмболические осложнения: правила
тестирования в клинической практике. Российскийкардиологическийжурнал. 2020;25(3S):4024.
3.
Шелест Е.А. Интенсивность внутрисосудистого микросвертывания крови у больных хронической обструктивной болезнью
легких, атеротромбозом и тромбофилиями. Автореф. дис. д-ра мед. наук. Москва. 2015; 47 с.
4.
Patel A.R.C., Donaldson G.C., Mackay A.J., Wedzicha J.A., Hurst J.R. The impact of ischemic heart disease on symptoms, health status,
and exacerbations in patients with COPD. Chest. 2012; Vol.141: 851–857.
