Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Journal home page:
https://inscience.uz/index.php/socinov/index
Determination of the antimicrobial properties of an
infusion from the aerial part of lophanthus anisatus
Klara BOLTAEVA
1
Tashkent Pharmaceutical Institute
ARTICLE INFO
ABSTRACT
Article history:
Received May 2021
Received in revised form
28 May 2022
Accepted 20 June 2022
Available online
25 July 2022
The purpose of this work was to study the microbiological
purity and antimicrobial activity of the infusion from the aerial
part of lophathus anisatus. Determination of the antimicrobial
action of the infusion from the aerial part of lophanthus
anisatus was carried out by diffusion into agar against certain
types of bacteria; Escherichia coli, Bacillus subtilis,
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and yeast-
like fungi of the genus Candida. An infusion from the aerial part
of lophanthus anisatus showed antimicrobial activity against
Escherichia coli
–
22.0 mm. growth inhibition zone diameter,
Staphylococcus aureus
–
7.0 mm., Candida albicans
–
28.0 mm.
Staphylococcus epidermidis
–
10.0 mm., Bacillus subtilis
–
10 mm. On the basis of the data obtained, it can be concluded
that the studied infusion from the aerial part of lophanthus
anisatus has a pronounced antimicrobial activity against
Candida albicans, moderate antibacterial activity against some
gram-negative enterobacteria and conditionally pathogenic
microorganisms
2181-
1415/©
2022 in Science LLC.
https://doi.org/10.47689/2181-1415-vol3-iss6/S-pp195-201
This is an open access article under the Attribution 4.0 International
(CC BY 4.0) license (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.ru)
Keywords:
test culture,
inhibition,
taxonomy,
identification,
tinctorial properties,
strain,
bacilli,
cocci,
bacteria,
fungi.
Lophanthus anisatusning havo qismidan infuzionning
mikroblarga qarshi xususiyatlarini aniqlash
ANNOTATSIYA
Калит сўзлар:
test kulturasi,
inhibisyon,
taksonomiya,
identifikatsiya,
tinktorial xossalar,
Ushbu ishning maqsadi lophathus anisatusning havo
qismidan infuzionning mikrobiologik tozaligi va mikroblarga
qarshi faolligini
o‘
rganish hisoblanadi. Lophanthus anisatusning
havo qismidan infuzionning mikroblarga qarshi ta
’
sirini
aniqlash bakteriyalarning ayrim turlariga qarshi agarga
1
Lecturer, Tashkent Pharmaceutical Institute, Tashkent, Uzbekistan
Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Special Issue
–
06 (2022) / ISSN 2181-1415
196
shtamm,
tayoqchalar,
kokklar,
bakteriyalar,
zamburu
g‘
lar.
diffuziya y
o‘
li bilan amalga oshirildi; Escherichia coli, Bacillus
subtilis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis va
Candida jinsining xamirturushsimon zamburu
g‘
lari Lophanthus
anisatusning havo qismidan infuzion ichak tayoqchasiga qarshi
mikroblarga qarshi faollik k
o‘
rsatdi
–
22,0 mm.
o‘
sish
inhibisyon zonasi diametri, Staphylococcus aureus
–
7,0 mm.,
Candida albicans
–
28,0 mm. Staphylococcus epidermidis
–
10,0 mm., Bacillus subtilis
–
10 mm. Olingan ma
’
lumotlarga
asoslanib, lophanthus anisatusning havo qismidan
o‘
rganilgan
infuzion Candida albicansga qarshi aniq mikroblarga qarshi
faollikka, ba
’
zi gram-manfiy enterobakteriyalarga va shartli
patogen mikroorganizmlarga nisbatan
o‘
rtacha antibakterial
ta
’
sirga ega, degan xulosaga kelish mumkin.
Определение антимикробных свойств настоя из
надземной части lophanthus anisatus
АННОТАЦИЯ
Ключевые слова:
тест
-
культура,
ингибиция,
таксономия,
идентификация,
тинкториальные свойства,
штамм,
бациллы,
кокки,
бактерии,
грибы.
Целью
настоящей
работы
явилось
изучение
микробиологической
чистоты
и
антимикробной
активности настоя из надземной части lophanthus anisatus.
Определение антимикробного действия настоя из
надземной части lophanthus anisatus проводили методом
диффузии в агар в отношении некоторых видов бактерий,
такие как Escherichia coli, Вacillus subtilis, Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis и дрожжеподобных
грибов
рода Candida. Настой из надземной части lophanthus
anisatus показал антимикробную активность против
Escherichia coli
–
22,0 мм. диаметра зоны подавления роста,
Staphylococcus aureus
–
7,0 мм., Candida albicans –
28.0 мм.
Staphylococcus epidermidis
–
10,0
мм., Вacillus subtilis –
10 мм. На На основании полученных данных можно сделать
заключение, что изучаемый настой из надземной
части
lophanthus
anisatus
обладает
выраженной
противомикробной активностью в отношении Candida
albicans, умеренной антибактериальной активностью
против некоторых грамотрицательных энтеробактерий и
условно патогенных микроорганизмов.
ВВЕДЕНИЕ
В ходе эволюционного развития, организм человека приспосабливался к
белкам, углеводам, жирам и самым разнообразным биологически активным
веществам (витамины, макро и микроэлементы, органические кислоты и др.)
растительного происхождения, без которых невозможно нормальное течение
жизненных процессов и развитие организма в целом. В результате такого
симбиоза одни растения стали со временем служить человеку пищей, другие
–
лекарством.
Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Special Issue
–
06 (2022) / ISSN 2181-1415
197
Несмотря на большие успехи в создании синтетических лекарственных
средств, применение растительных препаратов в мировой медицинской практике
не только остаётся стабильным, но и имеет тенденцию к увеличению. Около
половины всех лекарственных препаратов, производимых в индустриально
развитых странах, получают из природного сырья.
В силу разнообразных географических и климатических условий, Узбекистан
является богатейшим регионом сосредоточения лекарственных растений, среди
которых имеются немало видов, представляющих интерес для научной медицины.
Природа создала многочисленные болезнетворные для человека факторы.
Однако против каждого болезнетворного фактора
–
от малейшего, не видимого
невооруженным глазом (микробы, вирусы, грибки, простейшие и др.), до большего
(травмы, раны и др.)
–
она вооружила человека многочисленными защитными и
лечебными механизмами. К ним относятся более 1000 биологически активных
веществ, имеющих самую разнообразную природу.
Однако лекарственная флора исследована не полностью, даже изученные
растения довольно редко применяются в клинической практике. Это объясняется
в первую очередь недостаточным знанием свойства многих лекарственных
средств, приводящих к снижению интереса к фитотерапии.
По современным представлениям, растительное лекарство
–
это цельный
биогенетически сложившийся комплекс, включающий в себя активные
биологические действующие вещества и другие вторичные метаболиты,
протеины, эфирные масла, хлорофилл, микроэлементы, неорганические соли,
витамины и т.д.
Существует мнение, что такой комплекс, сформировавшийся в живой клетке,
имеет большее сходство с человеческим организмом, чем изолированное,
химически чистое действующее вещество, легче ассимилируется и дает меньше
побочных эффектов. При этом, в современной фармакологии часто используют
некоторые биологически активные вещества растений: алкалоиды, эфирные
масла, органические кислоты, витамины, дубильные вещества, смолы, слизи,
фитонциды и т.д. Вместе с тем изучение терапевтической активности
лекарственных растений показало целесообразность их применения в лечебной
практике без химической обработки в виде настоев, отваров и т.д.
Настой из надземной части lophanthus anisatus обладают общеукрепляющим,
тонизирующим, антисептическим и противовоспалительным действием.
Лекарственные травы, содержащие комплексы антибиотических веществ,
представляют один из богатых источников получения антибиотиков для
медицинской практики. Доступная сырьевая база и результаты предварительных
фармакологических исследований, открывающие перспективы использования
настоя
из
надземной
части
lophanthus
anisatus
эффективных
противовоспалительных средств, указывают на актуальность и целесообразность
всестороннего изучения этого растения. Целью настоящей работы явилось
определение
дополнительной
фармакологической
эффективности
–
антимикробную активность настоя из надземной части lophanthus anisatus. Как
известно, лекарственные средства, не стерилизуемые в процессе производства,
могут быть контаминированы микроорганизмами и потому подлежат испытанию
на микробиологическую чистоту. Учитывая отмеченное обстоятельство, нами
исследован показатель микробиологической чистоты
надземной части lophanthus
anisatus
с целью характеристики качества отечественного сырья
.
Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Special Issue
–
06 (2022) / ISSN 2181-1415
198
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования была надземная часть lophanthus anisatus. Испытание
на микробиологическую чистоту согласно требованиям ГФ XI [1] включало
количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление
определенных
видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в
нестерильных лекарственных средствах. Его проводили официальным двухслойным
агаровым методом в чашках Петри диаметром 90
-
100 мм. Образец сырья в
количестве 10 г суспендировали в фосфатном буферном растворе (рН 7.0) так, чтобы
конечный объем суспензии был 100 мл.
Определение общего числа бактерий. Приготовленную суспензию образца
вносили в каждую из двух пробирок с 4,0 мл расплавленной и охлажденной до
температуры от 450 до 500С тиогликолевой среды. Быстро перемешивали
содержимое пробирки и переносили в чашку Петри, содержащую 15
-
20 мл
соответствующей питательной среды. Быстрым покачиванием чашки Петри
равномерно распределяли верхний слой агара. После застывания среды чашки
переворачивали и инкубировали в течение 5 суток при температуре 350С. Посевы
просматривали ежедневно. Через 48 ч и окончательно через 5 суток подсчитывали
число бактериальных колоний на двух чашках, находили среднее значение и,
умножая на показатель разведения, вычисляли число микроорганизмов в 1 г
образца. Для получения достоверных результатов учитывали только те чашки, на
которых выросло от 30
-
300 колоний.
Определение общего числа грибов. Испытание проводили описанным выше
агаровым методом, используя среду Сабуро. Посевы инкубировали в течение 5
суток при температуре от 25 до 32,50С. Через 72 ч и окончательно через 5 суток
подсчитывали общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов на двух
чашках, находили среднее значение и, умножая на показатель разведения, т.е. на
10, вычисляли число грибов в 1 г образца. На чашке учитывали все колонии
грибов, даже если их число менее 30.
Для выявления и идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae
образец сырья в количестве 10,0 г вносили в 100 мл питательной среды №3,
перемешивали и инкубировали при температуре от 30 до 350С в течение 24
-
48 ч.
Принимая во внимание наличие роста, делали пересев петлей на среды №4 (агар
Эндо) и №5 (висмут сульфит
-
агар), разлитые в чашки Петри. Посевы
инкубировали при температуре от 30 до 350С в течение 24
-
48 ч.
Поскольку после
инкубации на средах №4 и №5 не наблюдалось колоний, соответствующих
морфологической характеристике бактерий семейства Enterobacteriaceae, сделали
вывод об отсутствии их в исследуемом образце (таблица 1).
Таблица 1
Показатели микробиологической чистоты надземной части lophanthus anisatus
№
Требования нормативных документов
Результаты
испытаний
1.
Общее число аэробных бактерий (в 1г образца) –
не более 107
(суммарно).
160 КОЕ
2.
Общее число дрожжевых и плесневых грибов (в1г.образца) –
не более
105 (суммарно).
200 КОЕ
Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Special Issue
–
06 (2022) / ISSN 2181-1415
199
3.
Бактерии семейства Enterobacteriaceae –
должны отсутствовать
Отсутствуют
4.
Escherichia.coli
–
должны отсутствовать в 1 г.
Отсутствуют
5.
Бактерии рода Salmonella –
должны отсутствовать в 10 г.
Отсутствуют
Исходя из полученных данных, можно заключить, что надземная часть
lophanthus anisatus в полной мере соответствует требованиям, предъявляемым к
лекарственному растительному сырью в отношении его микробиологической
чистоты.
Изучение антимикробной активности настоя из надземной части lophanthus
anisatus проводились совместно с сотрудниками бактериологической лаборатории
ООО “Научный центр стандартизации
лекарственных средств”, согласно
требованиям ГФ XI [1] и “Руководством по контролю качества лабораторных
исследований”. Антимикробную активность определяли по чувствительности
тест
-
культур микроорганизмов методом диффузии в плотной питательной среде
[2]. В чашки Петри, установленные на столиках со строго горизонтальной
поверхностью, разливали по 15 мл. 3% мясо–пептонного агара (МПА) [3]. После
застывания агара, чашки подсушивали в термостате, затем в каждую чашку
наливали по 5 мл.1,5 % МПА смешанного с тест
-
культурой. Для лабораторных
исследований использовали 18 часовую агаровую культуру
микроорганизмов,
разведённую в стерильном физиологическом растворе, стандартизованную по
стандарту 0,5 по МакФарланду и дополнительно разведённую в 10 раз стерильным
физиологическим раствором до концентрации 107 микробных тел/мл. Посев на
плотную питательную среду осуществляли методом
“газона [4].
Использовали модифицированный луночный метод (А.М.
–
Т.
Бектемиров,
2007), после посева тест
-
штаммов микроорганизмов газоном на плотную
питательную среду, металлическим пробойником диаметром 5,0 мм. делали лунки,
в которые вносили по 0,1 мл. исследуемого препарата. Основные растворы
контрольных и испытуемых образцов готовили в стерильных растворителях с
концентрацией 1 мг/мл. [5].
Для уменьшения влияния колебаний во времени между закапыванием
растворов, используемых в опыте, после их внесения выдерживали чашки при
комнатной температуре в течение 1
-
2 часов. Чашки Петри помещали в термостат
при 370 С на 18
-
24 часа. Учёт результатов осуществляли визуально
–
по величине
зоны ингибиции роста микроорганизмов вокруг лунок. В качестве контроля
использовали изотонический раствор хлорида натрия [6].
Перед применением штаммы микроорганизмов, взятые из сохраняющей
питательной среды, дважды субкультировали на соответствующих для каждой
таксономической группы бактерий питательных
средах.[7] Тест
-
культуры
идентифицированы по культуральным, морфологическим, тинкториальным,
ферментативно
-
биохимическим
и
антигенным
свойствам.
Основные
регистрационные и паспортные данные, характеризирующие свойства тест
-
культур микроорганизмов, представлены в таблице 4.
Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Special Issue
–
06 (2022) / ISSN 2181-1415
200
Таблица 4
Перечень штаммов микроорганизмов, использованных для определения
антимикробной активности.
№
Н
аи
м
ен
ов
ан
и
е
Р
ег
и
ст
р
ац
и
он
н
ы
й
н
ом
ер
М
ор
ф
ол
ог
и
я,
Т
и
н
к
то
р
и
ал
ьн
ы
е
св
ой
ст
ва
Ф
ер
м
ен
та
ти
вн
ы
е
св
ой
ст
ва
И
ст
оч
н
и
к
вы
д
ел
ен
и
я
О
тк
уд
а
п
ос
ту
п
и
л
ш
та
м
м
1.
St. aureus
АТСС
25923
грамположи
-
тельные кокки
типичные
музей
культура
Коллекция ООО
“Научный центр
стандартизации
лекарственных
средств”
2.
St.
epidermidis
АТСС
грамположи
-
тельные кокки
типичные
музей
Коллекция ООО
“Научный центр
стандартизации
лекарственных
средств”
3.
Bacillus
subtilis
АТСС
6633
грамположи
-
тельные
палочки,стреп
-
тобациллы,цен
-
тральные
споры
типичные
музей
культура
Коллекция ООО
“Научный центр
стандартизации
лекарственных
средств”
4.
E.coli
АТСС
25922
грамотрицател
ьные палочки
типичные
музей
культура
Коллекция ООО
“Научный центр
стандартизации
лекарственных
средств”
5.
С albicans
АТСС
885653
Грамположител
ьные
почкующиеся
друзы
типичные
музей
культура
Коллекция ООО
“Научный центр
стандартизации
лекарственных
средств”
Результаты и обсуждение
Диаметр зоны ингибиции роста бактерий настоем из надземной части
lophanthus anisatus в таблице 5.
Таблица 5
Диаметр зоны ингибиции роста бактерий, в мм.
St. aureus
(мм.)
St. epidermidis
(мм.)
E.coli
(мм.)
С albi
-cans
(мм.)
Bacillus
subtilis (мм.)
Настой из надземной части
lophanthus anisatus
7,0
10,0
22,0
28,0
10,0
Контроль
6,0
6,0
6,0
6,0
6,0
Жамият
ва
инновациялар
–
Общество
и
инновации
–
Society and innovations
Special Issue
–
06 (2022) / ISSN 2181-1415
201
Как видно из таблицы 5 настой из надземной части lophanthus anisatus
оказывает антимикробное действие в отношении Candida albicans, умеренной
антибактериальной активностью против некоторых грамотрицательных
энтеробактерий и условно патогенных микроорганизмов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
На основании полученных данных можно сделать заключение, что
изучаемый настой из надземной части lophanthus anisatus обладает выраженной
противомикробной активностью в отношении Candida albicans, умеренной
антибактериальной активностью против
некоторых грамотрицательных
энтеробактерий и условно патогенных микроорганизмов
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ:
1.
Государственная фармакопея, –
М., 1990. –
Изд.
XI.
–
Вып.
2.
–
С
. 400.
2.
Болтаева
К.Ш., Рахимова
Г.К.,
Адилбекова
Д.Ю.,
Комилов
Хн.М. Изучение
антимикробной активности сухого экстракта,приготовленного из Еpilobium
angustifolium (L.) Инфекция, иммунитет и фармакология –
Ташкент 2010 –
№ 3
-4
–
С.
115.
3.
Болтаева
К.Ш., Нурмухамедов
А.А., Кодирова
Д.Э., Алиев
Х.У., Тухтаев
Ф.Х.
Изучение антимикробных и противоглистных свойств сухого экстракта полыни
горькой (ARTEMISIA ABSINTIUM L.) Журнал теоретической и клинической
медицины –
Ташкент 2014
.
–
№ 3 –
С.
306.
4.
Болтаева
К.Ш.,
А.А.
Нурмухаммедов,
Л.И.
Алимжанова,
Ф.Х.
Тухтаев,
Д.К.
Пулатова. Изучения антимикробной активности бутаноловой фракции,
выделенной из иван
-
чая, содержашего биологически активные вешества.
Фармацевтический журнал –
Ташкент 2015 –
№ 2 –
С
. 87.
5.
Абдурахманова
Н.А., Болтаева
К.Ш., Ибрагимов
А.Я., Бекчанов
Х.К. Изучение
микробиологической чистоты и антимикробной активности сухого экстракта
желчегонного сбора “Трифлос”. Инфекция, иммунитет и фармакология –
Ташкент
2020
–
С
. 16.
6.
Болтаева
К.Ш., А.А.
Нурмухамедов, Д.Н.
Шакирова. Сравнительное изучение
антимикробной активности субстанций, содержащих в своём составе наночастицы
цинка и серебра. Фармацевтический журнал –
Ташкент 2019 –
№ 2
–
С
. 115.
7.
Болтаева
К.Ш.,
Расулова
Н.Ф. Изучение антимикробной активности эфирного
масла базилика. Теория и практика современной науки№ 2 (56) –
Россия 2020.
