CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
141
РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМА G/А ГЕНА F7 ФАКТОРА В ГЕНЕЗЕ
НЕБЛАГОПОЛУЧНЫХ ЭКО
Хафизова Дилноза Баходуровна
https://doi.org/10.5281/zenodo.13141092
Резюме.
В статье представлены результаты молекулярно-
генетических исследований полиморфизма
G/А
гена F7 у 90 с
неблагополучных ЭКО у женщин с тромбофилией. Результаты
исследования показали, что что аллель А и гетеро - G/A и гомозиготные
нефункциональные А/А генотипы полиморфизма F7 являются одним из
маркерами повышенного риска развития тромбофилии у женщин
узбекской популяции. А функциональный аллель G и функционально
благоприятный генотип G/G являются функциональными генотипами в
отношении развития патологии (χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=0.03; 95%CI0.00 –
0.46 ).
Ключевые слова
: тромбофилия, генетика, полиморфизм
G/А
гена F7,
мутация, гетерозигота.
Изучение механизмов развития акушерских осложнений (СПП, СОРП,
ФПН, неразвивающиеся беременности) с учетом генетических факторов
организма возможно даст определенное понимание в патогенезе,
клиническом течении и разработки профилактических мероприятий
заболевания. [1,2,4,5,9,16,17]
Исследования, проведенные учеными Макацария А.Д., Бицадзе В.О.
(2006) посвященные роли тромбофилии, в частности, АФС, мутации
фактора V Leiden, протромбина G202 10A и MTHFR C677T, показали крайне
высокую частоту их не только у пациенток с различными
тромбоэмболическими осложнениями, но и типично акушерскими
осложнениями, такими как привычные выкидыши, тяжелые гестозы,
преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты
(ПОНРП), синдром задержки внутриутробного развития плода (СЗВРП),
антенатальная гибель плода (АГП) и др.
При этом тромбофилия как сложный интегральный фактор в
патогенезе развития гестозов была обнаружена у 80% пациенток с
гестозами. Отмечено, что среди пациенток с легкими формами гестоза
тромбофилия была выявлена у 54%, в то время как в контрольной группе
беременных с физиологическим течением беременности – у 16% (р<0,05).
Результаты исследования показали, что мутация MTHFR С677Т составила
в 56,8% случаев, в то время как в группе легких форм гестозов и у
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
142
пациенток с физиологическим течением беременности – 44 и 12%. Тогда
как, полиморфизм гена PAI-1 выявился в 49,1% . В группе беременных с
легкими формами гестозов этот полиморфизм был обнаружен у 40%, а в
контрольной группе беременных с физиологическим течением
беременности –только 16% (р<0,05). [6,7,8,10,12-15]
Также мультигенные формы тромбофилии, которые составили 72,5%,
в то время как в группе легких форм гестозов только 14%, в группе
физиологического течения беременности – 4%, причем следует отметить,
что в двух контрольных группах мультигенная тромбофилия была
представлена только полиморфизмом генов или гетерозиготной MTHFR
С677Т, но не мутацией FV Leiden или протромбина G20210A.
Антифосфолипидные антитела были выявлены у 17,3% в
ретроспективной группе, у 16,25% в проспективной группе, у 10% в группе
легких гестозов и у 4% в контрольной группе с физиологическим
течением беременности. [6,7,9,13,17,18]
Целью наших исследований явилось изучение выявляемости
полиморфизма генотипов G/А гена
F7 у женщин узбекской популяции.
Материал и методы исследования.
Всего обследованы у 118
женщин в возрасте от 20 до 39 лет. Среди 118 женщин основную группу
составили 90 (76,3%) с неудачным ЭКО у женщины с тромбофилией и 28 –
контрольную группу здоровых женщин без тромбофилией.
По
информированному
согласию
молекулярно-генетическое
исследование гена
G/А
гена F7 выполняли методом полимеразной
цепной реакции в режиме реального времени. У всех беременных
проводили обще-клинические, инструментальные, функциональные
(УЗИ), ИФА исследования. Беременные были консультированы
смежными специалистами. (терапевт, невропатолог, инфекционист,
дерматолог, эндокринолог и др.) Среди 118 пациенток основную группу
составили 90 женщин с установленным диагнозом тромбофилии и 28 –
женщин составили контрольную группу соответствующего возраста.
Молекулярно-генетическое
обследование
биоматериалов
(ДНК)
выполняли на базе клинической лаборатории ООО «Генотехнологии».
Выделение ДНК из всех биологических образцов крови проводили с
помощью набора «Рибо-преп» (Интерлабсервис, Россия).
Для выявления полиморфизма генотипа, состоящего из аллелей G>A
гена F7, из образцов ДНК были отобраны аллели-специфические
праймеры от производителя. Для генотипирования образцов ДНК
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
143
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) были проведены
исследования
200
образцов
ДНК.
Для
этого
96-ячеечный
автоматизированный усилитель «Applied Biosystems Veriti» был
оптимизирован по следующей программе: начальная денатурация
однократно при 180 сек 94°С, 94°С - 10 сек, 64°С - 10 сек, 72°С - 20 секунд в
программе мы проделали эти указанные действия 40 раз, чтобы
произошла полимеразная цепная реакция.
Статистический анализ
результатов проведен с использованием пакета статистических программ
«OpenEpi 2009, Version 2.3».
Результаты исследования.
Результаты молекулярно-генетических
исследований представлены в следующей таблице.
( таблица 1)
Таблица 1.
Частота распределения аллельных вариантов и полиморфизма
гена F7 (G/А) женщин с тромбофилией и и контрольной здоровой
группы.
N –число обследованных пациентов;
*
n - число исследованных
аллели; * - показатель достоверности по отношению к контрольной
группы ( Р<0,05)
Как видно из таблицы, сравнительный анализ частот распределения
аллелей и генотипов полиморфизма F7 (G/А) гена системы гомеостаза
среди 180 образцов ДНК у 90 с неудачным ЭКО у женщин с тромбофилией
наличие функционального аллеля G составило - 76,6% (138/180) случаев,
№
Группа
Частота аллелей
Частота распределения
генотипов
G
A
G/G
G/A
A/A
n
%
n
%
n
%
n
%
n
%
1
.
Основная
группа
n=90(180)
138
76,6 42 23,3
55
61,1
28
31,1
*
7
7,7
2
Контр. группа
n=28 ( 56)
56
100
28
100
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
144
а в контрольной группе данный аллель был выявлен – в 100% ( 56/56), что
на 1,3 раз было выше по сравнению с показателями основной группы.
(χ
2
=15.90; p<0.0001; OR=0.03; 95%CI 0.00 – 0.48). Тогда как мутантный
аллель А в основной группе определялся 23,3% случаев ( 42/180), а в
контрольной группе данный аллель в изучаемых выделенных ДНК
здоровых женщин не определялся. (χ
2
=15.90; p<0.0001; OR=34.68;
95%CI2.10 – 573.21)
Общая модель наследования гена F7 (тест хи-квадрат, df = 2)
представлена в следующей таблице ( таблица 2.)
Таблица 2.
Различия в частоте встречаемости аллелей и генотипов
полиморфизма
G/T гена F7
в группе с неудачным ЭКО у женщин с
тромбофилии и без.
Результаты молекулярно-генетических исследований генотипов
полиморфизма гена F7 показали у обследованных пациенток, что
гомозиготный вариант функциональных генотипов G/G в контрольной
группе женщин без тромбофилии определялся в 100% случаев (28/28), а
в основной группе – 61,1% (55/90) , что в 1,6 раза было ниже показателей
контрольной группы. (χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=0.03; 95%CI0.00 – 0.46) .
Тогда как гетерозиготный вариант G/А гена F7 в контрольной группе не
определялся. А в основной группе пациенток гетерозиготный вариант
G/А гена F7 определялся в 31,1% случаев ( 55/90) (χ
2
=15.48; p<0.0004;
OR=25.99; 95%CI 1.53 – 440.86) и мутантный гомозиготный вариант А/А
выявлялся у 7 пациенток, что составило 7,7%. (χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=5.12;
Аллели
и
генотипы
Частота встречаемости
аллелей и генотипов
Статистическое различие
Основная
группа
Контроль
Аллель G
138
56
χ
2
=15.90; p<0.0001; OR=34.68; 95%CI2.10 –
573.21
Аллель A
42
0
Генотип
G/G
55
28
χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=0.03; 95%CI0.00 –
0.46
Генотип
G/A
28
0
χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=25.99; 95%CI 1.53 –
440.86
Генотип
A/A
7
0
χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=5.12; 95%CI 0.28 –
92.51
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
145
95%CI 0.28 – 92.51). В контрольной группе пациенток данный генотип не
определялся.
Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что у
пациенток неудачным ЭКО с тромбофилией носительство гетеро – и
мутантного гомозиготного варианта генотипов гена F7 статистически
достоверно превышал . ( Р <0,001).
Согласно литературным данным, аллельный вариант c.1238A
(гетерозигота c.1238G/A и гомозигота c.1238А/A) гена F7 приводит к
понижению экспрессии гена и снижению уровня фактора 7 в крови,
рассматривается как протективный маркёр в отношении развития
тромбозов и инфаркта миокарда.
Учитывая особенности физиологической адаптации системы
гемостаза к беременности, абсолютное большинство генетических форм
тромбофилии клинически проявляется именно в течение гестационного
процесса и, как оказалось, не только в форме тромбозов, но и в форме
типичных акушерских осложнений.
В исследованиях бқло установлено, что в этот период в организме
матери происходит перестройка свертывающей, противосвертывающей и
фибринолитической системе, что приводит к увеличению факторов
свертывания крови на 200%. Причем, в III триместре наполовину
снижается скорость кровотока в венах нижних конечностей из-за
частичной механической обструкцией беременной маткой венозного
оттока. Тенденция к стазу крови в сочетании с гиперкоагуляцией при
физиологической беременности предрасполагает к развитию тромбозов и
тромбоэмболий. И при предсуществующей (генетической) ТФ риск
тромботических и акушерских осложнений повышается в десятки и сотни
раз, что соответствует собственными исследованиями.
Для
оценки
частоты
встречаемости
различных
генотипов
полиморфного гена F7 и потенциального влияния ряда динамических
факторов, определяющих генетическую структуру популяции, а также с
целью оценки популяционного риска развития неблагополучного ЭКО
нами проведен анализ ожидаемой и наблюдаемой частоты генотипов
изучаемого полиморфизма и соответствия распределения частот
равновесию Харди-Вайнберга (ХВ).
Таблица 3.
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
146
Ожидаемая и наблюдаемая частота распределения
генотипов по РХВ полиморфизма
F7
в основной группе
пациенток .
Генотипы
частота генотипов
χ
2
Р
Наблюдаемая
ожидаемая
G/G
61,1
53,01
0.588
0,42
G/А
31,1
39,6
0.358
А/А
7,8
7,4
0.054
Всего
100,00
100,00
0.64
Из расчета уравнением ХВ, в основной группе частота наблюдаемых
благоприятных генотипов
G/G
в 1,2 раза превышал показателей
ожидаемых частот – 61,1% и 53,01% соответственно. Гетерозиготный
вариант
G/А
наблюдаемой частоты
гена
F7
составил 31,1% , а
теоретически ожидаемая частота составило – 39,6 % соответственно, что
указывает о повышение данного показателя в 1,3 раза. ( Р <0,05). Частота
наблюдаемого мутантного гомозиготного варианта А/А гена F7
составило - 7,8% , а ожидаемого - 7,4 %, , что в 1,05 раза превышало
показателей ожидаемых ( Р> 0,05).
Таблица 4.
Ожидаемая и наблюдаемая частота распределения
генотипов по РХВ полиморфизма
F7
в контрольной группе
пациенток .
Генотипы
частота генотипов
χ
2
Р
Наблюдаемая
ожидаемая
G/G
100,0
60,6
1.000
1
G/А
0
34,51
0.000
А/А
0
4,9
0.000
Всего
100,00
100,00
0
Результаты анализа ожидаемых частот генотипов гена F7 в группе
контроля показало, что наблюдаемая частота функциональных
генотипов G/G составило – 100%, тогда как ожидаемая – 60,6%, что в 1,4
раза было ниже показателей наблюдаемых. Тогда как наблюдаемая
частота гетерозиготного варианта G/T и мутантного гомозиготного
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
147
вариантов гена F 7 составило – 0, то ожидаемая – 34,5 и 4,9 %
соответственно , что указывает о повышения определимости
носительство полиморфизма ассоциации мутантных генотипов.
Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что
распределение всех генотипов полиморфизма F7 в основной и
контрольных группах соответствует РХВ, свидетельствующие об
отсутствии влияния систематических или случайных факторов, способных
изменить генетическую структуру популяций. Изучение генетической
структуры данного маркера, выявило сравнительно высокий уровень
ожидаемой гетерозиготности и гомозиготных вариантов мутантных
аллелей в основной и контрольной группах беременных (39,6% и 34,5%
соответственно.). В обеих группах показатель D находится левее 0, то есть
является отрицательным (D<0). Выявленный факт свидетельствует о
более высоких частотах ожидаемых гетерозигот и гомозигот , а не
рассчитанных фактически частот генотипов.
При анализе распределения частот встречаемости аллелей и
генотипов данного полиморфизма в группе пациенток основной группы
обнаружены достоверные различия по сравнению с группой контроля.
Функционально неблагоприятный аллель А гена F7 более 20 раз
статистически достоверно преобладал в исследованных аллелей у
пациенток неудачным ЭКО с тромбофилией (ТФ) по сравнению с
контрольной группой без ТФ (χ
2
=15.90; p<0.0001; OR=34.68; 95%CI2.10 –
573.21 ).
Распределение частот генотипов данного полиморфизма также
выявило достоверные отличия между основной и контрольной группами
сравнения в общей выборке (Р<0.05). Выявлены ассоциации
«функционально неблагоприятных» генотипов G/А (χ
2
=15.48; p<0.0004;
OR=25.99; 95%CI 1.53 – 440.86) и А/А
(
χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=5.12; 95%CI
0.28 – 92.51
)
с развитием ТФ.
Анализируя полученные результаты молекулярно-генетических
исследований можно сказать, что аллель А и гетеро - G/A и гомозиготные
нефункциональные А/А генотипы полиморфизма F7
являются одним из
маркерами повышенного риска развития неразвивающейся беременности
при ЭКО с тромбофилии у женщин узбекской популяции. А
функциональный аллель G и функционально благоприятный генотип
G/G являются функциональными генотипами в отношении развития
патологии (χ
2
=15.48; p<0.0004; OR=0.03; 95%CI0.00 – 0.46 ).
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
148
Выводы: Таким образом, данные нашего исследования показали связь
аллеля «Т» и гетерозиготного генотипа полиморфизма гена F7 с
развитием тромбофилией у женщин узбекской популяции. При этом риск
формирования патологии при носительстве аллеля «Т» и генотипа G/А
увеличивается более 20 раз (OR=34.68 ; OR=25.99) соответственно.
Наличие у пациенток диких аллеля и генотипа полиморфизма гена F7
играет протекторную роль в отношении формирования ТФ. Полученный
результат также указывает на то, что мутантный вариантный аллель А и
гетерозиготный G/А генотип полиморфизма гена F7 прогнозирует риск
развития неблагополучного ЭКО с ТФ у женщин узбекской популяции
Литература:
1.
Александрова Н.В., Донников А.Е., Баев O.P., Сухих Г.Т. Генетические
факторы риска акушерских осложнений при самопроизвольной
беременности и беременности после вспомогательных репродуктивных
технологий. Акушерство и и гинекология. 2012; 2: 16-23.
2.
Ахмед-заде В.А. Беременность и роды при антифосфолипидном
синдроме: течение, перинатальные исходы //Медицинские новости. –
2011. – №5. – С. 81-85.
3.
Ашурова Н. Г. Характеристика гемокоагуляционной системы при
внутриутробной гибели плода. // Новости дерматовенерологии и
репродуктивного здоровья. - Ташкент, 2014. - N 3Н19014. - C. 52-54.
4.
Бицадзе В.О., Макацария А.Д., Хизроева Д.Х., Макацария Н.А., Яшенина
Е.В., Казакова Л.А. Тромбофилия как важнейшее звено патогенеза
осложнений беременности. Практическая медицина, 2012, 5: 22-29.
5.
Будыкина Т.С., Сидоркина М.И., Прокопенко Е.И., Никольская И.Г.
Эффективность применения бемипарина у беременных с хронической
болезнью почек разных стадий. Эффективная фармакотерапия, 2016, 31: 4-
11.
6.
Лахно И.В. Состояние плода под влиянием антикоагулянтной
терапии у беременных с преэклампсией. Акушерство и гинекология, 2014,
5: 27-32.
7.
Любчич Н.И., Бобоев К.Т. Изучение роли полиморфизма генов
свёртывающей системы в возникновении преждевременных родов у
женщин узбекской популяции. // Медицинская генетика – 2015 –Том
14.№5(155). – с.37-41 (14.00.00.№79).
8.
Мавлянова Н.Н. Молекулярно–генетические и аутоиммунные
механизмы развития синдрома ограничения роста плода.// Докт.
Диссертация на соискание DSc. – 2022 – 206с.
CURRENT APPROACHES AND NEW RESEARCH IN
MODERN SCIENCES
International scientific-online conference
149
9.
Майлян Э.А., Майлян Д.Э. Основы молекулярной генетики и
генетические факторы риска заболеваний. Медицинский вестник Юга
России, 2016, 1: 33-40. D0l:10.21886/2219-8075-2016-1-33-40.
10.
Макацария А.Д., Бицадзе В.О. Антифосфолипидный синдром,
генетические тромбофилии в патогенезе основных форм акушерской
патологии. // РМЖ (Русский медицинский журнал): 2006.
https://www.rmj.ru/articles/ginekologiya/ c.2-6
11.
Макацария А.Д., Бицадзе В.О. Антифосфолипидный синдром,
генетические тромбофилии в патогенезе основных форм акушерской
патологии. // РМЖ (Русский медицинский журнал): 2006.
https://www.rmj.ru/articles/ginekologiya/ c.2-6
12.
Момот А.П., Лыдина И.В., Борисова О.Г., Елыкомов В.А., Цывкина Л.П.
Экстракорпоральное оплодотворение и управление гемостазом. Проблемы
репродукции. 2012, 18(6): 47-55.
13.
Момот А.П., Лыдина И.В., Зоренко В.Ю., Борисова О.Г., Цывкина Л.П.,
Тараненко
И.А.
Факторы
риска
неудач
экстракорпорального
оплодотворения при нарушениях гемостаза и их коррекция. Гематология
и трансфузиоло-гия, 2013, 2: 18-22.
14.
Alalaf SK, Jawad RK, Muhammad PR, Ali MS, Al Tawil NG. Bemiparin versus
enoxaparin as thromboprophylaxis following vaginal and abdominal deliveries:
a prospective clinical trial. BMC Pregnancy Childbirth, 2015, 15: 72. doi:
10.1186/s12884-015-0515-2.
15.
American Society of Reproductive Medicine. Birmingham. Alabama.
Antiphospholipid Antibodies Do Not Affect IVF Success. Fertil Steril, 2008, 90:
S172-173.
16.
Bates SM, Greer IA, Pabinger I et al. Venous thromboembolism,
thrombophilia, antithrombotic therapy, and Pregnancy: American College of
Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines (8th Edition).
Chest, 2008, 133(6): 844S-886S. DOI 10.1378/ chest.08-0761.
17.
Brosens I, Pijnenborg R, Vercruysse L, Romero R. The «Great Obstetrical
Syndromes» are associated with disorders of deep placentation. Am J Obstet
Gynecol, 2011, 204(3): 193-201. doi: 10.1016/j.ajog.2010.08.009.
18.
Gohil R, Peck G, Sharma P. The genetics of venous thromboembolism. A
meta-analysis involving approximately 120,000 cases and 180,000 controls.
Thromb Haemost. 2009, 102(2): 360-370.
