Изменения активности нейтрофилов крови при экспериментальном бактериально-иммунном пародонтите и их коррекция флавонолом

  • ГосударственноеВысшее Учебное Заведение «Тернопольский государственный медицинский университет
CC BY f
44-48
35
5
Поделиться
Демкович A. (2018). Изменения активности нейтрофилов крови при экспериментальном бактериально-иммунном пародонтите и их коррекция флавонолом. Журнал вестник врача, 1(1), 44–48. извлечено от https://inlibrary.uz/index.php/doctors_herald/article/view/2693
Crossref
Сrossref
Scopus
Scopus

Аннотация

Цель исследования заключалась в оценке активности нейтрофилов крови при экспериментальном бактериально-иммунном пародонтите и выяснении влияния флавонола кверцетина на его показатели. В статье приведены результаты исследований показателей спонтанного и активированного теста с нитросиним тетразолием на 14-е сутки экспериментального бактериально-иммунного пародонтита и после коррекции его кверцетином (в тот же период эксперимента). При этом приводятся данные о характере изменений нейтрофильной активности в процессе формирования воспалительного очага в пародонтальном комплексе. Применение флавонола кверцетина, который, воздействуя на иммунные процессы, ограничивал воспалительную реакцию в тканях пародонта и приводил к снижению активности нейтрофилов относительно показателей животных, которым нс вводили этот препарат. В результате применения кверцетина показатели активности нейтрофилов приближались к величинам контрольной группы.


background image

Доктор ахборотномаси № 1—2018

43

УДК 616.314.17-008.1-06:616.155.34-085.356:547.814.5-092.9

ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ ПРИ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ БАКТЕРИАЛЬНО-ИММУННОМ ПАРОДОНТИТЕ И ИХ

КОРРЕКЦИЯ ФЛАВОНОЛОМ

А.Е. Демкович

ГВУЗ «Тернопольский государственный медицинский университет

имени И.Я. Горбачевского МЗ Украины», Тернополь, Украина

Ключевые слова:

бактериально-иммунный пародонтит, фагоцитоз, моноциты, кверцетин.

Key words:

bacterial-immune periodontitis, phagocytosis, monocytes, quercetin.

Цель исследования заключалась в оценке активности нейтрофилов крови при экспериментальном бактериаль-
но-иммунном пародонтите и выяснении влияния флавонола кверцетина на его показатели. В статье приведены
результаты исследований показателей спонтанного и активированного теста с нитросиним тетразолием на 14-
е сутки экспериментального бактериально-иммунного пародонтита и после коррекции его кверцетином (в тот
же период эксперимента). При этом приводятся данные о характере изменений нейтрофильной активности в
процессе формирования воспалительного очага в пародонтальном комплексе. Применение флавонола кверце-
тина, который, воздействуя на иммунные процессы, ограничивал воспалительную реакцию в тканях пародон-
та и приводил к снижению активности нейтрофилов относительно показателей животных, которым не вводи-
ли этот препарат. В результате применения кверцетина показатели активности нейтрофилов приближались к
величинам контрольной группы.

CHANGES OF ACTIVITY OF NEUTROPHILS OF BLOOD AT EXPERIMENTAL BACTERIAL AND

IMMUNE PERIODONTAL DISEASE AND THEIR CORRECTION BY FLAVONOL

A.E. Demkovich

І. Horbachevsky Ternopil State Medical University, Ternopil, Ukraine

The purpose of the study was to evaluate the activity of neutrophils in the blood under the condition of the experi-
mental bacterial-immune periodontitis and to clarify the effect of flavonol quercetin on its parameters. The article pre-
sents the results of research on the indices of the spontaneous and activated test with nitrosin tetrazolium on the 14

th

day of the experimental bacterial-immune periodontitis and after correction with quercetin (in the same period of the
experiment). In this case, data on the nature of changes in neutrophilic activity in the process of formation of inflam-
matory focus in the periodontal complex are given. The use of flavonol quercetin, which, acting on the immune pro-
cesses, limited the inflammatory response in the periodontal tissues and led to a decrease in neutrophil activity relative
to the rates of animals that did not receive the drug. As a result of the use of quercetin, the activity of neutrophils ap-
proached the values of the control group.

Введение.

В настоящее время отмечается значительный рост воспалительных заболе-

ваний пародонта и «омоложение» контингента пациентов с данной патологией. Пародонтит
– это сложный аутоиммунный и нейротрофический процесс. Изучению данного вопроса
посвящено значительное количество научных исследований [1]. Однако в реальной практи-
ческой работе врача-стоматолога нет, к сожалению, существенных изменений в процессе
лечения, приносящих за короткий период времени результаты (выздоровление или дости-
жение долговременной ремиссии). Пародонтит характеризуется наличием устойчивых про-
грессирующих морфофункциональных изменений с формированием хронического инфек-
ционного очага, проявляется не только на местном уровне, но и на уровне целого организма
[2].

В последнее время накоплено много подтверждений тому, что в результате заболева-

ния пародонта может возрастать риск системных болезней. Это касается, например, коро-
нарной болезни сердца, инфаркта миокарда, инсульта, артериосклероза, опасности прежде-
временных родов. Терапия заболеваний пародонта считается сложной проблемой [3]. Из-
вестные методы лечения требуют новых подходов их решений на основе патогенетически
обоснованных разработок и усовершенствований.

Актуально более глубокое и всестороннее изучение характера нарушений иммуноло-

А.Е. Демкович


background image

Доктор ахборотномаси № 1—2018

44

гических процессов в механизмах развития данной патологии как одной из важных звеньев
патогенеза [4]. В настоящее время общепризнано, что одно из ключевых звеньев в иммун-
ной системе занимает фагоцитоз, который рассматривается не только как инструмент про-
тивоинфекционного иммунитета, но и как универсальный эффектор, реагирующий на мно-
гочисленные сигналы о дестабилизации внутренней среды организма и является одной из
ключевых патогенетических звеньев развития и протекания иммунных и воспалительных
реакций [5].

Установлено, что флавонол кверцетин является мощным антиоксидантом, который

проявляет также антиишемическое, мембраностабилизирующее и иммуномодулирующее
действие, эффективно влияет на энергетический обмен в миокарде, при этом снижает по-
требность его в кислороде, проявляет антиаритмические и анаболические эффекты, имеет
значительный восстановительный потенциал [6].

Противовоспалительные и противоаллергические эффекты связаны также со способ-

ностью кверцетина подавлять кальций-АТФазу и синтез лейкотриенов. Флавонол способен
повышать содержание клеток иммунной системы в крови (фагоцитов, Т-лимфоцитов, В-
лимфоцитов), в результате чего уменьшаются проявления вторичной иммуносупрессии [7],
и может быть перспективным в плане исследования его свойств при пародонтите.

Целью данного исследования

было выяснить влияние флавонола кверцетина на по-

казатели метаболической активности нейтрофилов крови при экспериментальном бактери-
ально-иммунном пародонтите.

Методика.

Исследование проведено на белых беспородных клинически здоровых

крысах-самцах массой 150-200 г в условиях вивария. Эксперименты проводились с соблю-
дением общих правил и положений Европейской Конвенции по защите позвоночных живот-
ных, используемых для исследовательских и других научных целей (Страсбург, 1986), об-
щих этических принципов экспериментов на животных (Киев, 2001). Животные находились
в течение всего времени наблюдения на стандартном пищевом рационе, сбалансированном
по элементам пищи со свободным доступом к воде. Крысы были рандомизировано разделе-
ны на 3 группы: I – интактные животные, контроль (n = 10); II – животные с эксперимен-
тальным пародонтитом на 14-е сутки исследования (n = 8); III – животные с эксперимен-
тальным пародонтитом на 14-е сутки исследования, которым вводили кверцетин (n = 8).
Экспериментальный бактериально-иммунный пародонтит у опытных животных вызывали
путем введения в ткани пародонтального комплекса смеси микроорганизмов, разбавленной
яичным протеином [8]. Для усиления иммунного ответа одновременно проводилась инъек-
ция в лапку крысы полного адъюванта Фрейнда. У крыс третьей группы использовали водо-
растворимый препарат кверцетина (корвитин, производства Борщаговского ХФЗ) путем
инъекций (100 мг/кг массы животного) в течение 7-ми суток (с 7-ой по 14-е сутки).

На 14-е сутки, в период максимального формирования иммунно-воспалительного про-

цесса, исследуемых животных умершвляли путем кровопускания под тиопенталовым
наркозом. Для дальнейших исследований брали кровь, в которой определяли бактерицидное
действие нейтрофилов с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-
тест) [9].

При постановке спонтанного НСТ-теста фагоциты культивировались в присутствии

нитросинего тетразолия без предварительной активации клеток, при проведении индуциро-
ванного НСТ-теста – к среде культивирования добавляли активатор фагоцитарной реакции.
Реакцию оценивали путем подсчета 100 нейтрофилов на наличие в цитоплазме гранул и зе-
рен диформазана. В цитоплазме клеток, которые положительно реагировали с НСТ, зафик-
сировано выпадение гранул формазана сине-фиолетового цвета. При отрицательной реак-
ции с НСТ – гранулы формазана в цитоплазме клеток отсутствовали. Для характеристики
резервных возможностей кислород-зависимого метаболизма определяли показатель резерва
и коэффициент метаболической активации.

Полученные цифровые величины статистически обрабатывали с применением пара-

Оригинальная статья


background image

Доктор ахборотномаси № 1—2018

45

Таблица 1.

Влияние кверцетина на показатели НСТ-теста нейтрофилов крови белых крыс

с экспериментальным бактериально-иммунным пародонтитом (M

±

m)

метрических и непараметрических методов статистики с помощью программного обеспече-
ния «Excel» («Microsoft», США) и «STATISTICA» 10.0 («Statsoft», США) [10]. Достовер-
ность различий значений между независимыми количественными величинами определяли
при нормальном распределении по U-критерию Манна-Уитни [11].

Результаты и их обсуждение.

После введения экспериментальным животным в ткани

пародонта смеси микроорганизмов разбавленной протеином, развивался воспалительный
процесс с выраженными изменениями со стороны мягких тканей нижней челюсти, которые
сопровождались отеком и гиперемией слизистой оболочки и по характеру проявления были
подобны изменениям, имеющих место у человека [12 ].

НСТ-тест относят к иммунологическим исследованиям, который позволяет оценить

активность кислородно-антимикробной системы фагоцитов, а также фагоцитарную и мета-
болическую активность этих клеток [13]. Спонтанную кислородную бактерицидность фаго-
цитирующих клеток обозначают как спонтанный НСТ-тест, этот же показатель при стиму-
ляции клеток активатором фагоцитарной реакции принято обозначать как стимулированный
НСТ-тест.

Исследуя количество диформазанположительных клеток при постановке активирован-

ного НСТ-теста у крыс с экспериментальным бактериально-иммунным пародонтитом на 14-
е сутки развития воспалительного процесса в пародонтальном комплексе, было обнаружено
уменьшение количества нейтрофилов с данными свойствами в 1,47 раза (р<0,01) относи-
тельно контрольной группы. Вместе с тем при определении величины данного показателя
при спонтанном НСТ-тесте результаты оказались противоположного направления, то есть
количество диформазанположительных клеток увеличилось в 1,57 раза (р<0,01) по сравне-
нию с интактными животными (таблица 1), что является проявлением повышения кислород-
ной бактерицидности лейкоцитов.

Показатели

Контроль.

Интактные

животные

Животные с экспериментальным

пародонтитом

на 14-е сутки

исследования

на 14-е сутки

исследования +

кверцетин

Количество животных

10

8

8

Диформазанположительные клетки

в активированном тесте (%)

31,07±1,01

21,20±0,74

p

1

<0,01

27,51±0,84

p

1

<0,05; p

2

<0,01

Диформазанположительные

клетки в спонтанном тесте (%)

14,39±0,84

22,54±0,90

p

1

<0,01

16,90±0,80

p

1

<0,05; p

2

<0,01

Коэффициент метаболической

активации

29,23±1,91

20,07±0,81

p

1

<0,01

26,87±0,85

p

1

>0,05; p

2

<0,01

Показатель резерва кислород-

зависимого метаболизма

2,24±0,17

0,98±0,07

p

1

<0,01

1,62±0,09

p

1

<0,01; p

2

<0,01

Примечания: p

1

– достоверность различий по отношению к интактным животным;

p

2

– достоверность различий по отношению к животным с пародонтитом (14-е сутки).

При этом изменилась также величина коэффициента метаболической активации. Так,

на 14-е сутки развития бактериально-иммунного пародонтита он уменьшился в 1,46 раза
(р<0,01) по сравнению с контролем.

А.Е. Демкович


background image

Доктор ахборотномаси № 1—2018

46

Рис. 1

Изменения показателей НСТ-теста лейкоцитов крови крыс в условиях развития

экспериментального пародонтита и при коррекции кверцетином (в % от контроля).

Примечания: *

достоверность различий относительно интактных животных (p<0,01);

достоверность различий относительно интактных животных (p<0,05);

#

достоверность различий относительно животных с пародонтитом на 14-е сутки экс-

перимента (p<0,01).

Что касается показателя резервных возможностей кислород-зависимого метаболизма,

то при его определении была обнаружена аналогичная тенденция к уменьшению. В частно-
сти, у крыс с экспериментальным генерализованным пародонтитом он уменьшался в 2,29
раза относительно интактной группы (p<0,01).

Применение флавонола кверцетина в дозе 100 мг / кг в течение 7-ми дней внутримы-

шечно приводило к увеличению диформазанположительных клеток в индуцированном те-
сте с нитросиним тетразолием в 1,30 раза (р<0,01) в крови по сравнению с такими показате-
лями группы животных с экспериментальным пародонтитом на 14-е сутки, не получавших
этого вещества. Полученные результаты свидетельствуют о его влиянии на клеточное звено
неспецифической резистентности организма, и может быть показателем повышенной готов-
ности их к завершеннию фагоцитоза (таблица 1, рисунок 1).

Следует заметить, что при сравнении вышеупомянутого показателя активности фаго-

цитирующих клеток на 14-е сутки экспериментального пародонтита с тем, который был
определен в данный период исследования, но у животных, которым вводили кверцетин,
оказалось, что он оставался на более низком уровне относительно показателя контрольной
группы животных (в 1,13 раза, р<0,05).

*

#

*

#

0

20

40

60

80

100

120

140

160

НСТ-тест спонтанный

НСТ-тест

стимулированный

Контроль

Пародонтит 14-е
сутки

Пародонтит 14-е
сутки (коррекция)

Анализируя изменения показателей спонтанного НСТ-теста лейкоцитов крови экспе-

риментальных животных с пародонтитом, которые получали флавонол в процессе развития
воспалительной реакции, было выявлено более высокий уровень содержания диформазан-
положительных клеток (в 1,33 раза; р<0,01) по сравнению с животными, которые исследо-
вались на 14-е сутки и не получали средство. Вместе с тем данный показатель оказался бо-
лее высоким относительно показателя, который был у крыс контрольной группы (в 1,17 ра-
за; р<0,05). Применение кверцетина способствовало повышению величины коэффициента
метаболической активации и резерва кислород-зависимого метаболизма соответственно в
1,34 раза (р<0,01) и в 1,65 раза (р<0,01), относительно крыс с экспериментальным бактери-
ально-иммунным пародонтитом на 14-е сутки без коррекции, что является свидетельством
положительного влияния его на течение воспалительного процесса в пародонтальном ком-
плексе.

Оригинальная статья


background image

Доктор ахборотномаси № 1—2018

47

Исследуемый показатель коэффициента метаболической активации после проведен-

ной коррекции флавонолом оставался сниженным по сравнению с данными интактной
группы, однако результаты были статистически не достоверны (р>0,05). Показатель резерва
кислород-зависимого метаболизма также был ниже (в 1,38 раза; р<0,01) по сравнению с
данными животных в такой же срок исследования, но без введения препарата.

Таким образом, приведенные результаты исследования свидетельствуют о положи-

тельном эффекте флавонола кверцетина на активность клеточного неспецифического звена
резистентности организма, в частности на интралейкоцитарную бактерицидную систему, и
течение бактериально-иммунного воспалительного процесса в пародонтальном комплексе.

Выводы:

1. Положительный спонтанный тест с нитросиним тетразолием нейтрофилов крови

подопытных животных с бактериально-иммунным пародонтитом на 14-е сутки указывает
на повышенную кислород-зависимую бактерицидную активность их и наличие в крови ак-
тиваторов, способных повышать функциональную активность фагоцитоза.

2. Снижение показателей индуцированного НСТ-теста, резерва кислород-зависимого

метаболизма, коэффициента метаболической активации нейтрофилов в крови крыс с рас-
пространенным воспалительным процессом в пародонте на 14-е сутки эксперимента являет-
ся результатом истощения метаболических резервов данных клеток и нарушений процесса
фагоцитоза.

3. Флавонол кверцетин стабилизирует клеточное неспецифическое звено резистентно-

сти организма в процессе протекания экспериментального бактериально-иммунного паро-
донтита, что проявляется увеличением диформазанположительных клеток при активирован-
ном НСТ-тесте и снижением при спонтанном НСТ-тесте в крови подопытных животных, и
может быть одним из индикаторов стабилизации и затихания воспалительного процесса.





Использованная литература:

1. Г.И. Гордиенко, Т.М. Бородина, Т.А. Дудина, Г.А. Самсыгина Исследование поглотительной и метабо-

лической активности нейтрофилов периферической крови у детей раннего возраста // Педиатрия. 2003.
№ 5. С. 1-11.

2. А.Е. Демкович, Ю.И. Бондаренко Патогенетические основы моделирования пародонтита у животных //

Достижения клинической и экспериментальной медицины. 2015. № 1 (22). С. 54-57.

3. А.Г. Димитрова, Ю.Г. Коленко Oценка эффективности различных иммуномодуляторов в комплексном

лечении генерализованного пародонтита у лиц молодого возраста (18–25 лет) // Современная стомато-
логия.
2013. № 2. С. 38-39.

4. Е.А. Киселева, Е.А. Те, О.Ю. Николаева [и др.] Направленная иммунокоррекция хронического пародон-

тита // Клиническая стоматология. 2011. № 4. С.80-83.

5. Орлов А.И. Математика случая: Вероятность и статистика – основные факты: учебное пособие. М.: МЗ-

Пресс, 2004. 100 с.

6. Ш.Л. Шиманский, В.Н. Чиликин, И.Ю. Малышев [и др.] Фагоцитарная защита пародонта и способы ее

активации // Стоматология. 2013. Т. 92, № 5. С. 64-69.

7. D. Andrea G. Quercetin: A flavonol with multifaceted therapeutic applications? // Fitoterapia. 2015. № 106. P.

256-271.

8. Berger. R.L., Casella. G. Statistical Inference 2

nd

ed. Florida: Duxbury Press. 2001. 374 p.

9. A. Demkovych, Yu. Bondarenko, P. Hasiuk Humoral immune reactivity disorders in experimental parodontitis

and their correction by flavonol // World of Medicine and Biology. 2017. № 3 (61). P. 97-100.

10. A. Demkovych, Yu. Bondarenko, P.A. Hasiuk Oxidative modification of proteins in the process of experi-

mental periodontitis development // Interventional Medicine and Applied Science. 2017. № 9 (4). P. 218-221.

11. S.L. Miles, M. McFarland, R.M. Niles Molecular and physiological actions of quercetin: need for clinical trials

to assess its benefits in human disease // Nutrition Reviews. 2014. Vol. 72, № 11. P. 720-734.

12. V. Thumbigere-Math, B. S. Michalowicz, J. S. Hodges [et al.] Periodontal disease as a risk factor for bisphos-

phonate-related osteonecrosis of the jaw // J. Periodontol. 2014. Vol. 85, № 2. P. 226-233.

А.Е. Демкович

Библиографические ссылки

Г.И. Гордиенко, Т.М. Бородина, Т.А. Дудина, Г.А. Самсыгииа Исследование поглотительной и метаболической активности нейтрофилов периферической крови у детей раннего возраста II Педиагрия. 2003. №5. С. 1-11.

А.Е. Демкович, Ю.И. Бондаренко Патогенетические основы моделирования пародонтита у животных И Достижения клинической и экспериментальной медицины. 2015. № 1 (22). С. 54-57.

А.Г. Димитрова, Ю.Г. Колснко Оценка эффективности различных иммуномодуляторов в комплексном лечении генерализованного пародонтита у лиц молодого возраста (18-25 лет) // Современная стоматология. 2013. №2. С. 38-39.

Е.А. Киселева, Е.А. Те, О.Ю. Николаева [и др.] Направленная иммунокоррекция хронического пародонтита И Клиническая стоматология. 2011. № 4. С.80-83.

Орлов А.И. Математика случая: Вероятность и статистика - основные факты: учебное пособие. М.: МЗ-Прссс, 2004. 100 с.

Ш.Л. Шиманский, В.Н. Чиликин, И.Ю. Малышев [и др.] Фагоцитарная защита пародонта и способы се активации И Стоматология. 2013. Т. 92, № 5. С. 64-69.

D. Andrea G. Quercetin: A flavonol with multifaceted therapeutic applications? // Fitoterapia. 2015. № 106. P. 256-271.

Berger. R.L., Casella. G. Statistical Inference 2nd ed. Florida: Duxbury Press. 2001. 374 p.

A. Demkovych, Yu. Bondarenko, P. Hasiuk Humoral immune reactivity disorders in experimental parodontitis and their correction by flavonol // World of Medicine and Biology. 2017. № 3 (61). P. 97-100.

A. Demkovych, Yu. Bondarenko, P.A. Hasiuk Oxidative modification of proteins in the process of experimental periodontitis development // Interventional Medicine and Applied Science. 2017. № 9 (4). P. 218-221.

S.L. Miles, M. McFarland, R.M. Niles Molecular and physiological actions of quercetin: need for clinical trials to assess its benefits in human disease // Nutrition Reviews. 2014. Vol. 72, № 11. P. 720-734.

V. Thumbigcrc-Math, B. S. Michalowicz, J. S. Hodges [et al.] Periodontal disease as a risk factor for bisphos-phonatc-rclatcd osteonecrosis of the jaw // J. Pcriodontol. 2014. Vol. 85, № 2. P. 226-233.

inLibrary — это научная электронная библиотека inConference - научно-практические конференции inScience - Журнал Общество и инновации UACD - Антикоррупционный дайджест Узбекистана UZDA - Ассоциации стоматологов Узбекистана АСТ - Архитектура, строительство, транспорт Open Journal System - Престиж вашего журнала в международных базах данных inDesigner - Разработка сайта - создание сайтов под ключ в веб студии Iqtisodiy taraqqiyot va tahlil - ilmiy elektron jurnali yuridik va jismoniy shaxslarning in-Academy - Innovative Academy RSC MENC LEGIS - Адвокатское бюро SPORT-SCIENCE - Актуальные проблемы спортивной науки GLOTEC - Внедрение цифровых технологий в организации MuviPoisk - Смотрите фильмы онлайн, большая коллекция, новинки кинопроката Megatorg - Доска объявлений Megatorg.net: сайт бесплатных частных объявлений Skinormil - Космецевтика активного действия Pils - Мультибрендовый онлайн шоп METAMED - Фармацевтическая компания с полным спектром услуг Dexaflu - от симптомов гриппа и простуды SMARTY - Увеличение продаж вашей компании ELECARS - Электромобили в Ташкенте, Узбекистане CHINA MOTORS - Купи автомобиль своей мечты! PROKAT24 - Прокат и аренда строительных инструментов