Ta'limning zamonaviy transformatsiyasi
19-to’plam 3-son May 2025
231
BACILLUS THURINGEIENSIS BAKTERIYASINING QISHLOQ
XO’JALIGIDAGI NAZARIY VA AMALIY AHAMIYATI
Toshtemirova Shaxzoda Rashid qizi
Mamatqulova Iroda Ergashovna
O’zbekiston Milliy Universiteti Jizzax filiali
Gmail
:toshtemirovashaxzoda105@gmail.com
Annotatsiya
: Ushbu tezisda Bacillus thuringiensis (Bt) bakteriyasining
insektidsit xususiyatlari va qishloq xo’jaligidagi ahamiyatlari ko’rilib
chiqiladi.Ya’ni Bacillus thuringiensis (Bt) ning Kattta mum kuya (GWM) Galleria
mellonella (Lepidoptera: Pyralidae) asalari uyalariga jiddiy zarar yetkazadigan
asosiy zararkunandaga qarshi kurashishda ishlatilishi yoritilgan.
Kalit
so’zlar
:
Bacillus
thuringeiensis,
Cry
va
Cyt
-
toksin,insektidsit,ekologik xavfsizlik, , d-endotoksinlar,GWM
Kirish
:
Bacillus thuringiensis
(Bt) tuproq bakteriyasi boʻlib, oʻsish
siklining statsionar bosqichida spora hosil qiladi. Sporlar kristallarni o'z ichiga
oladi, ular asosan bir yoki bir nechta Cry va yoki Cyt oqsillarini (shuningdek, d-
endotoksinlar deb ham ataladi) kuchli va o'ziga xos insektitsid faolligiga ega. Bt
ning turli shtammlari har xil turdagi toksinlarni hosil qiladi, ularning har biri
hasharotlarning tor taksonomik guruhiga ta'sir qiladi. Shuning uchun Bt toksinlari
ekinlarni himoya qilish uchun topikal pestitsidlar sifatida ishlatilgan va yaqinda
oqsillar zararkunandalarga xos qarshilik ko'rsatish uchun transgen o'simliklarda
ifodalangan. Bt transgen ekinlari juda muvaffaqiyatli va foydali bo'lib, yuqori
hosildorlikka olib keldi .
Cry toksinlari hasharotlarning o'rta ichak oqsillarini bog'laydi, bu esa
hasharotlar hujayralarini o'ldiradigan membrana ichiga kirib boradigan teshikdan
oldingi oligomerning shakllanishiga yordam beradi.
Asosiy qism:
Katta mum kuya (GWM), Galleria mellonella (Lepidoptera:
Pyralidae) asalari uyasiga katta zarar etkazuvchi va iqtisodiy yo'qotishlarga olib
Ta'limning zamonaviy transformatsiyasi
19-to’plam 3-son May 2025
232
keladigan asosiy ari zararkunandasi hisoblanadi. Bacillus thuringiensis (Bt) bu
zararkunandaga qarshi kurashish uchun potentsial barqaror yechim sifatida
namoyon bo'ladi. Bu yerda LC50 qiymati 2 mkg/g dan past bo‘lgan GWM
lichinkalariga qarshi insektitsid faolligini va asal ari uchun past toksiklik darajasini
ko‘rsatadigan yangi Bt shtammini (BiotGm deb nomlanadi) ishlab chiqilgan va
lichinkalar uchun LC50 = 20598,78 mkg/mL va kattalar uchun nojo‘ya ta’sirLC50
= 1 mkg/mkg . GWM lichinkalari uchun joziba, BiotGm va asalarilarning joziba
bilan aloqa qilishiga yo'l qo'ymaydigan tutqichdan iborat tuzoqqa tushirish usulini
ishlab chiqilgan. Bu usul laboratoriya va dala sinovlarida GWM lichinkalari
populyatsiyasini kamaytirishini aniqlagan.
GWM lichinkalariga qarshi Bioassay dietasi Bt preparati ishlab chiqilgan.
Optimal bioassay dietasi GWM lichinkalarining an'anaviy sun'iy dietasi va
Spodoptera frugiperda sun'iy parhez formulasiga asoslangan edi. Bioassay dietasi
10 g xamirturush ekstrakti kukuni, 25 g sut kukuni, 50 g bug'doy uni, 50 g
makkajo'xori kukuni, 50 g bug'doydan iborat edi. Afzal bioassay usuli S. frugiperda
va H. armigera usullariga murojaat qilib tuzilgan. Beshta Bt mahsuloti ddH2O da
eritildi va turli konsentratsiyali gradientlarning suspenziyalarigacha suyultirildi.
Keyin yuqoridagi suyultirilgan suspenziyadan 2 ml 10 g bioassay dietasiga
qo'shiladi va teng ravishda aralashtiriladi. Dastlabki tajribalar asosida LC50 ni
aniqlash uchun quyidagi konsentratsiyalar ishlab chiqilgan: GO33A: 0.5,1,2,4 va 8
mkg/g; G033A- 0.5,1,2,4 va32 mkg/g; KN11:0.5,1,2,4 va 8 mkg/g; KN11-1 16
mkg/g; va BiotGm: 0,5, 1, 2, 4 va 8 mkg/g. Aralashtirilgan parhez ortiqcha suvni
bug'lantirish uchun xona haroratida 3 soat davomida saqlanadi. Bioassay dietasi 12
quduqli steril hujayra madaniyati plastinkasiga teng ravishda bo'lingan va qoshiq
yordamida teshikning pastki qismining bir tomoniga bosilgan. Mustahkam 2-
bosqich lichinkalari quduqlarga bittadan lichinka bilan emlangan. Plitalar 30 ± 1 °
C, 60 ± 5% RH va qorong'ilikda inkubatorga joylashtirildi. Bundan tashqari,
ddH2O (2 ml) 10 g dietaga nazorat sifatida qo'shildi. Har bir davolashda 4 ta
takroriy va 12 ta lichinka mavjud edi. O'lik va tirik lichinkalar soni har kuni vizual
tekshirish orqali tekshirildi. Bt bilan kasallangan o'lik lichinkalar qora rangga ega.
Ta'limning zamonaviy transformatsiyasi
19-to’plam 3-son May 2025
233
120 soatlik o'lim ma'lumotlari Abbott formulasi 64 orqali nazoratdagi tabiiy
o'limdan foydalangan holda tuzatildi. 120 soat uchun LC50 qiymati avval
tavsiflangan protsedura65 yordamida hisoblab chiqilgan. BiotGm dan BiotGm
genomik DNKsi uchun genomik DNKni tayyorlash, ketma-ketlik va hisoblash
tahlili xabar qilingan protsedura yordamida tayyorlangan66. BiotGm genomi
Pacific Biosciences RS II (Pacific Biosciences, Menlo Park, CA, AQSH)
sekvensiyalash platformasi yordamida ketma-ketlashtirildi. Sekvensiya chuqurligi
~ 200 barobar qamrovni tashkil etdi. PacBio o'qishlarini yangi yig'ish SMRT
portaliga kiritilgan RS_HGAP_Assembly.3 protokoli yordamida amalga oshirildi.
Genom annotatsiyasi NCBI prokaryotik genom avtomatik izohlash quvur liniyasi
tomonidan amalga oshirildi. Tarkibi vektor daraxti (CVTree) filogenetik tahlili
bepul, veb-asoslangan vosita - Bacillus Typing Bioinformatics Database
(https://btbidb.com) yordamida amalga oshirildi. BiotGm Gistopatologiya
tahlillariga duchor bo'lgan GWM lichinkalarining o'rta ichaklarida gistopatologik
tahlil va apoptoz oldingi tavsifga muvofiq amalga oshirildi68. 4-bosqich GWM
lichinkalari navbati bilan davolash guruhi va nazorat guruhi sifatida 10 mkL
BiotGm (100 mkg/ml) yoki PBS bilan AOK qilingan. BiotGm yoki PBS
yuborilganidan keyin 0, 2, 4, 6, 8 va 10 soatdan keyin lichinkalarning o'rta ichaklari
sterillangan pichoq yordamida yorqin maydon optikasi ostida ajratilgan. O'rta ichak
to'qimalari muzli 4% PFA (Sigma‒Aldrich, AQSH) 4 °C da tun davomida
to'xtatildi. Fiksatsiyadan so'ng, o'rta ichak to'qimalarining namunalari etanol
seriyasi orqali suvsizlandi, kerosin mumiga solingan va 6 mikron bo'laklarga
bo'lingan,va bo'laklar gematoksilin va eozin bilan bo'yalgan . Tasvirlar ProgRes
3012 raqamli kamerasi bilan Leica Diaplan mikroskopida olingan. O'rta ichak
to'qimalarining namunalari yuqorida aytib o'tilganidek tayyorlangan. Apoptoz
avvalgi usulga muvofiq o'zgartirilgan usul yordamida o'tkazildi69. O'rta ichak
to'qimalarining namunalari 4% PFA 1 soat davomida namlangan, PBSda 30%
saxarozaga o'tkazilgan va kechasi 4 ° C da saqlangan. Suvsizlanishdan so'ng, o'rta
ichak to'qimalarining namunalari joylashtirish agenti yordamida ko'milgan va
Leica mikrotomi yordamida -20 ° C da 6 mikron muzlatilgan qismlarga kesilgan.
Ta'limning zamonaviy transformatsiyasi
19-to’plam 3-son May 2025
234
TUNEL tahlillari In Situ Cell Death Detection Kit yordamida amalga oshirildi.
TUNEL reaktsiya aralashmasi yangi tayyorlangan va bo'limlarga qo'llangan va
keyin namlangan kamerada qorong'ida 37 ° C da 2 soat davomida inkubatsiya
qilingan. Nihoyat, DAPI hujayralar tarqalishini kuzatish uchun 6 daqiqa davomida
qarama-qarshi bo'yash uchun ishlatilgan. Tayyorlangan barcha slaydlar lazerli
konfokal mikroskop (Leica SP8, Leica, Germaniya) ostida tekshirildi va
immunofluoresans bo'yashdan keyin skanerdan o'tkazildi. O'rta ichak hujayralari
qisman 20 × kattalashtirishda tasvirlangan
Xulosa
:Umuman olganda, bu natijalar asalarilar uyasida GWM ning Bt
asosidagi biologik nazoratini qo'llash uchun istiqbolli yo'nalish bergan. Barqaror
zararkunandalarga qarshi kurash sohasidagi so'nggi yutuqlarda Bt ni maqsadli
zararkunandalar uchun mo'ljallangan maxsus jalb qiluvchi moddalar bilan
birgalikda qo'llash yangi strategiya sifatida paydo bo'ldi. Ushbu ikki tomonlama
yondashuv nafaqat zararkunandalarning Bt bilan uchrashish ehtimolini oshiribgina
qolmay, uning zararkunandalarni o'ldirish samaradorligini oshiradi, balki Bt
formulalarini ham takomillashtiradi va ularning ta'sirida aniqroq bo'lishini
ta'minlaydi. Bundan tashqari, ushbu metodologiya foydali organizmlarga ko'zda
tutilmagan ta'sirni sezilarli darajada kamaytiradi va uning ekologik jihatdan ongli
zararkunandalarga qarshi kurashish majburiyatini asoslaydi.
Foydalanilgan adabiyotlar
1.
Sanahuja G. et al. Bacillus thuringiensis: a century of research, development and
commercial applications //Plant biotechnology journal. – 2011. – T. 9. – No. 3. –
pp. 283-300.
2
.Han, Bo, et al. "Greater wax moth control in apiaries can be improved by
combining Bacillus thuringiensis and entrapments." Nature Communications 14.1
(2023): 7073.
