Иммунологические и генетические подходы к оптимизации лечения бронхиальной астмы у подростков

ЎЗБЕКИСТОН РЕСПУБЛИКАСИ ФАНЛАР АКАДЕМИЯСИ

ИММУНОЛОГИЯ ИНСТИТУТИ ВА ТОШКЕНТ ТИББИЁТ АКАДЕМИЯСИ

ҲУЗУРИДАГИ ФАН ДОКТОРИ ИЛМИЙ ДАРАЖАСИНИ БЕРУВЧИ

16.07.2013. Tib. 16.01 РАҚАМЛИ ИЛМИЙ КЕНГАШ

_________________________________________________________________

ЎЗБЕКИСТОН РЕСПУБЛИКАСИ ФАНЛАР АКАДЕМИЯСИ

ИММУНОЛОГИЯ ИНСТИТУТИ

ЗИЯДУЛЛАЕВ ШУХРАТ ХУДАЙБЕРДИЕВИЧ

ЎСМИРЛАРДА БРОНХИАЛ АСТМАНИ ДАВОЛАШ

ОПТИМИЗАЦИЯСИГА ИММУНОЛОГИК ВА ГЕНЕТИК ЁНДАШИШ

14.00.36 - Аллергология ва иммунология

(тиббиёт фанлари)

ДОКТОРЛИК ДИССЕРТАЦИЯСИ АВТОРЕФЕРАТИ

Тошкент – 2014

2

УДК:

616.248:612.017.1+575.21-07-053.6

Докторлик диссертацияси автореферерати мундарижаси

Оглавление автореферата докторской диссертации

Content of the abstract of doctoral dissertation

Зиядуллаев Шухрат Худайбердиевич
Ўсмирларда бронхиал астмани даволаш оптимизациясига
иммунологик ва генетик ѐндашиш .............................................................

3

Зиядуллаев Шухрат Худайбердиевич
Иммунологические и генетические подходы к оптимизации лечения
бронхиальной астмы у подростков..............................................................

27

Ziyadullaev Shukhrat Khudayberdievich
Immunological and genetic approaches to optimize treatment Asthma in
adolescents.......................................................................................................

53

Эълон қилинган ишлар рўйхати
Список опубликованных работ
List of published works...................................................................................

75

3

ЎЗБЕКИСТОН РЕСПУБЛИКАСИ ФАНЛАР АКАДЕМИЯСИ

ИММУНОЛОГИЯ ИНСТИТУТИ ВА ТОШКЕНТ ТИББИЁТ АКАДЕМИЯСИ

ҲУЗУРИДАГИ ФАН ДОКТОРИ ИЛМИЙ ДАРАЖАСИНИ БЕРУВЧИ

16.07.2013. Tib. 16.01 РАҚАМЛИ ИЛМИЙ КЕНГАШ

_________________________________________________________________

ЎЗБЕКИСТОН РЕСПУБЛИКАСИ ФАНЛАР АКАДЕМИЯСИ

ИММУНОЛОГИЯ ИНСТИТУТИ

ЗИЯДУЛЛАЕВ ШУХРАТ ХУДАЙБЕРДИЕВИЧ

ЎСМИРЛАРДА БРОНХИАЛ АСТМАНИ ДАВОЛАШ

ОПТИМИЗАЦИЯСИГА ИММУНОЛОГИК ВА ГЕНЕТИК ЁНДАШИШ

14.00.36 - Аллергология ва иммунология

(тиббиёт фанлари)

ДОКТОРЛИК ДИССЕРТАЦИЯСИ АВТОРЕФЕРАТИ

Тошкент – 2014

4

Докторлик диссертацияси мавзуси Ўзбекистон Республикаси Вазирлар Маҳкамаси

ҳузуридаги Олий аттестация комиссиясида 20.02.2014/В2013.2.Tib1

рақам билан рўйхатга

олинган.

Докторлик диссертацияси Ўзбекистон Республикаси Фанлар академияси Иммунология

институти ва Самарқанд давлат тиббиѐт институтида бажарилган.

Докторлик диссертациясининг тўла матни Ўзбекистон Республикаси Фанлар академияси

Иммунология институти ва Тошкент тиббиѐт академияси хузуридаги 16.07.2013.tib.16.01 рақамли
фан доктори илмий даражасини берувчи илмий кенгаш веб-саҳифасида www.immunology.uz
манзилига жойлаштирилган.

Диссертация автореферати уч тилда (ўзбек, рус, инглиз) веб-саҳифада www.immunology.uz

манзилига ва “ZiyoNet” ахборот-таълим порталида www.ziyonet.uz манзилига жойлаштирилган.

Илмий

маслаҳатчи:

Хаитова Назира Мусаевна

тиббиѐт фанлари доктори, профессор

Расмий

оппонентлар:

Назаров Азадбек Ахмедович

тиббиѐт фанлари доктори, профессор

Убайдуллаев Сагдулла Абдуллаевич

тиббиѐт фанлари доктори

Бабаходжаев Сирожиддин Носирович

тиббиѐт фанлари доктори, профессор

Етакчи

ташкилот:

Россия

Федерал

тиббий-биологик

агентлиги

«Иммунология институти» Давлат илмий маркази, Москва

Диссертация ҳимояси Ўзбекистон Республикаси Фанлар академияси Иммунология

институти ва Тошкент тиббиѐт академияси ҳузуридаги 16.07.2013.Tib.16.01. рақамли Илмий
кенгашнинг «____»____________2014 й. соат ____даги мажлисида бўлиб ўтади (Манзил: 100060,
Тошкент, акад. Я. Ғуломов кўч., 74. Тел./факс: (99871) 233-08-55, е-mail: immunologiya@qip.ru).

Докторлик диссертацияси Ўзбекистон Республикаси Фанлар академияси Иммунология

институти Ахборот-ресурс марказида 01 рақами билан рўйхатга олинган, диссертация билан
АРМда танишиш мумкин (Манзил:100060, Тошкент, акад. Я. Ғуломов кўч., 74. Тел.: (99871) 233-
92-83).

Диссертация автореферати 2014 йил «___»___________ да тарқатилди.

(2014 йил _____________ даги № ____ рақамли реестр баѐнномаси).

Т.У. Арипова

Фан доктори илмий даражасини берувчи

илмий кенгаш раиси, т.ф.д., профессор

З.С.Камалов

Фан доктори илмий даражасини берувчи

илмий илмий кенгаш илмий котиби, т.ф.д.

А.А.Батирбеков

Фан доктори илмий даражасини берувчи

илмий кенгаш ҳузуридаги илмий семинар

раиси,

т.ф.д., профессор

5

ДОКТОРЛИК ДИССЕРТАЦИЯСИ АННОТАЦИЯСИ

Диссертация мавзусининг долзарблиги ва зарурияти.

Дунѐ аҳолиси

орасида бронхиал астма (БА) кенг тарқалган оғир касалликлардан бири
бўлиб, у билан болалик ѐшидаги жаҳон аҳолисининг 3 фоизидан
12 фоизигача хасталанган. Бу касаллик билан хасталанган болаларнинг учдан
бир қисми ўсмирларга тўғри келади. БА ўсмирлар орасида кенг
тарқалганлиги, ўсмирларда эндокрин ва иммун тизимининг ѐшга боғлиқ
фаолияти сабабли касалликнинг ўзига хос кечиши каби ҳолатлар ташхис
қўйиш жараѐнида маълум қийинчиликларни келтириб чиқаради, бу эса,
биринчи навбатда, касалликка ташхис қўйиш ва уни даволашда янги
ѐндашувларни излаб топишни тақозо этади.

Маълумки, БАнинг патогенезида иммун механизмлар аҳамияти асосий

омиллардан бири ҳисобланади. Ҳозирги вақтга келиб, аллергик касалликлар,
хусусан БА патогенезида IL-4 ва IL-13 лар билан бир қаторда бир қанча
бошқа (IL-6, IL-8, IL-10, IL-5, INF-α, ва INF-γ) иммунорегулятор
цитокинларининг иштирок этиши тадқиқотчиларнинг эътиборини тобора
кўпроқ жалб этмоқда.

Аллергик касалликларнинг ривожланишида ирсий мойиллик муҳим

аҳамиятга эга. Ҳозирда бронхиал астма ва шу касаллик белгилари билан
боғлиқ 150та ген полиморфизми хақида маълумот олинган. БА касаллигига
мойиллиги жиҳатидан энг асосий ген бу - IgE юқори аффин рецептори β-
занжирини кодловчи ген хисобланади. Аллергик астма патогенезида антиген-
специфик IgEнинг FcεRIβ билан юқори даражадаги ўзаро таъсири марказий
ўринни эгаллайди. БА касаллиги ген-номзодлари қаторида алоҳида қизиқиш
уйғотувчи биотрансформация ферментлари генларидан бири – GSTπ1,
глутатион S-трансфераза π1 ни кодловчи гени хисобланади ва у, хусусан,
ўпка тўқимасида экспрессияланади. Бу ген 11q13 локусда жойлашган бўлиб,
унинг атопия билан боғлиқлиги бир неча бор кўрсатиб берилган. Тўпланган
маълумотлар шуни кўрсатадики, FcεRI, GSTπ1 генлари полиморфизми турли
аллергик патологиялар билан боғлиқдир.

Шу нуқтаи назардан мазкур касалликни ўсмирлик даври шаклланиши

асосларига ѐндашиб ташхислаш, рационал даволаш-профилактика чора-
тадбирларини ишлаб чиқиш учун иммунологик ва генетик тизимни ўрганиш
диссертация мавзусининг долзарблиги белгилайди.

Мустақиллик йилларида мамлакатимизда соғлиқни сақлаш тизимини

ислоҳ қилиш юзасидан дастурий чора-тадбирлар амалга оширилиб, ижобий
натижалар олинди. Амалга оширилган чора-тадбирлар таркибида БАни
ташхислаш, профилактика ва даволаш ишларини самарали ташкил қилиш
юзасидан мақсадли тиббий-ташкилий ва илмий-тадқиқот ишлари амалга
оширилди. Натижада мамлакатимизда мазкур касаллик билан хасталанган
ўсмирларни даволаш юзасидан муайян ижобий кўрсаткичларга эришилди.
Шу билан бир қаторда бугунги кунда ўсмирларда БА касаллигини эрта
ташхислаш ва даволаш-профилактик чоралари режасини ишлаб чиқиш
муҳим вазифалардан бири ҳисобланади. Ушбу тадқиқот иши Ўзбекистон

6

Республикаси Вазирлар Маҳкамасининг 2002 йил 25 январдаги «Аѐллар ва
ўсиб келаѐтган авлод соғлиғини мустаҳкамлашга доир қўшимча чора-
тадбирлар тўғрисида»ги 32-сонли қарорида белгиланган вазифаларни амалга
оширишга хизмат қилади. Шу жиҳатдан БА жараѐнида ўсмирлар иммунитети
ҳужайравий ва гуморал буғинлари ҳолати, иммуногенетик текширувлар ва
уларнинг патогенетик информативлигини аниқлаш юзасидан амалга
ошириладиган

тадқиқотларни

янада

чуқурлаштириш

диссертация

мавзусининг заруратини изоҳловчи муҳим омиллардан бири ҳисобланади.

Тадқиқотнинг Ўзбекистон Республикаси фан ва технологиялар

тараққиётининг устувор йўналишларига мослиги.

Ушбу тадқиқот

Ўзбекистон Республикаси фан ва технологиялар тараққиѐтининг ДИТД-9

«

Инсон касалликлари профилактикаси, ташхиси, даволаш ва реабилита-

цияси янги технологияларини ишлаб чиқиш» устувор йўналишига мувофиқ
амалга оширилди.

Диссертация мавзуси бўйича ҳалқаро илмий тадқиқотлар шарҳи.

Жаҳон соғлиқни сақлаш ташкилотининг "International Study of Asthma and
Allergy in Children" дастури бўйича қатор давлатларда ўтказилган тадқи-
қотлар натижасининг кўрсатишича болалик ѐшидаги аҳолисининг ўндан бир
қисми астма билан хасталанганлигини кўрсатган, шунингдек, саноати юқори
даражада ривожланган давлатлар болалик ѐшидаги аҳолиси орасида
астманинг тарқалиши сўнгги 20 йил ичида уч баробарга ошган. Шу
жиҳатдан Жаҳон соғлиқни сақлаш ташкилоти, хорижий илмий марказлар ва
олий таълим муассасалари томонидан амалга оширилаѐтган илмий-
тадқиқотлар таркибида ўсмирлар бронхиал астма касаллиги профилактикаси
ва даволаш усулларини такомиллаштиришга алоҳида эътибор қаратилмоқда.

Бугунги кунда хорижий илмий марказлар ва олий таълим муассасалари

томонидан амалга оширилаѐтган тадқиқотларга БА иммун жавоб
механизмида иммун тизимга алоқадор босқичларни кетма-кет амалга
оширувда, носпецифик ҳимоя омиллари ва специфик иммунитет ўртасидаги
кооперация, гуморал омиллар билан иммунокомпетент ва бошқа ҳужайралар
орасидаги алоқа, эрта ва кеч яллиғланиш фаза реакциялари ҳамда
антителолар синтезининг қўшилиши, яъни иммуноцитокин концепциясига
устувор аҳамият қаратилмоқда. Мазкур йўналишда иммуноцитокин
концепциясини такомиллаштириш ҳамда болалар ва ўсмирларда бронхиал
астма ривожланишида молекуляр генетика, позицияли ва кандидат
картирлаш ҳамда касаллика мойиллик шаклланишига жавобгар конкрет
генлар полиморфизми ва хромосом локализацияси масалаларига муҳим ўрин
берилган.

Муаммонинг ўрганилганлик даражаси.

Жаҳон, жумладан, мамлака-

тимиз олимлари ва амалиѐтчи-мутахассислари томонидан БА касаллиги
муаммосининг илмий ечимларига қаратилган мақсадли тиббий-ташкилий
тадбирларни амалга оширишга катта эътибор қаратилса-да, бу касаллик
билан касалланган ўсмирларга ташхис қўйиш, самарали даволаш ва
профилактика чоралари етарлича ишлаб чиқилмаган; ўсмирларда БА
касаллиги тарқалиши ва клиник кечишининг хусусиятлари, ҳамда турли

7

тестлар ўтказиш йўли билан ўпканинг вентиляцион функциясига оид ташхис
тадқиқотлари етарлича ўрганилмаган; ўсмирлар БАсида аллергик яллиғ-
ланишида иштирок этувчи иммун тизим фаолияти ва активацион маркѐрлар
ўзгаришларни тиббий тадқиқот натижалари асосида аниқлаштиришни тақозо
этади; БА касаллигида иммун тизим жавобида иштирок этувчи цитокинлар,
хусусан, IL-6, INF-γ даражасини аниқлаш ташхис ва дифференциал
ташхисдаги аҳамияти, иммунокомпетент ҳужайраларга бошқарув таъсири
етарлича ѐритиб берилмаган; минтақа даражасидаги тадқиқотларда БАга
ирсий мойиллик структурасини аниқловчи FcεRIβ, GSTπ1 генлари устида
тадқиқотлар ўтказилмаган.

Бу эса БАнинг ўсмирлик даври шаклланишининг эрта ташхиси, даволаш

ва бронхиал астма профилактикасига оид самарали дастурларини тадқиқот
натижалари асосида такомиллаштиришни талаб этади.

Диссертациянинг илмий-тадқиқот ишлари режалари билан

боғлиқлиги

қуйидаги лойиҳада ўз аксини топган:

Давлат илмий-техника дастурлари асосидаги ITD-1109-11.3-0-13801

«Ўсмирлик даврида бронхиал астманинг ирсий мойиллик шакллари ташхиси,
мукамаллаштирилган давоси, профилактикаси ва иммунореабилитацияси-
нинг янги тиббий технологияларини ишлаб чиқиш» (2009-2011 йй.) номли
амалий тадқиқотлар илмий лойиҳа доирасида ўтказилган.

Тадқиқотнинг мақсади

ўсмирларда бронхиал астма патогенези

имммунологик ва генетик механизмларини ўрганиш ва шу асосда рационал
ташхислаш ва даволаш-профилактика чораларининг режасини ишлаб
чиқишдан иборат.

Мақсадга эришиш учун ишда қуйидаги

тадқиқот вазифалари

қўйилди:

Самарқанд вилоятида яшовчи ўсмирлар орасида ўпка-бронх тизимида

патологик жараѐннинг эрта босқичида БА клиник кечиши хусусиятларини
аниқлаш;

БА жараѐнида ўсмирлар иммунитети ҳужайравий ва гуморал буғинлари

ҳолати хусусиятлари ҳамда фаоллаштирувчи маркерли лимфоцитлар
периферик қондаги иммунофенотипини аниқлаш;

иммунорегулятор цитокинлар интерлейкин-6 ва интерферон-γ маҳсули

даражасини ўрганиш ва ўсмирлар БАсида уларнинг патогенетик информа-
тивлигини аниқлаш;

БА билан касалланган ўзбек миллатига мансуб шахсларда, соғломларига

нисбатан FcεRIβ ва GSTπ1 генлари полиморф вариантлари аллеллари ва
генотиплари тақсимланиш частотасининг ўзига хос хусусиятларини
аниқлаш;

ўсмирлик даврида БА билан касалланганларда полиоксидоний ва

циклоферон дори воситаларидан фойдаланилганда иммуномодулловчи даво
самарасининг клиник-иммунологик жиҳатларини аниқлаш;

ўтказилган тадқиқотлар асосида БА шаклланишининг кўп омилли

моделини ҳамда мазкур патологик ҳолатда ўсмирларда ташхис, даволаш ва
такомиллашган профилактика алгоритмини ишлаб чиқиш.

8

Тадқиқот объекти

сифатида Самарқанд вилоятида яшовчи 4094 нафар

ўсмир ѐшлар олинган.

Тадқиқот предмети

- веноз қон ва қон зардоби ишлатилди, унда иммун

ва цитокин мақомининг асосий кўрсаткичлари текширилди, БАга ирсий
мойилликни аниқлаб берувчи ген-номзодлар полиморф вариантлари
генотипланди ҳамда циклоферон ва полиоксидоний дори воситалари асосида
клиник-иммунологик самарадорлик кўрсаткичлари олинди.

Тадқиқот усуллари.

Тадқиқот жараѐнида скрининг, умумклиник,

функционал, иммунологик, генетик ва статистик усуллардан фойдаланилган.

Диссертация тадқиқотининг илмий янгилиги

қуйидагилардан

иборат:

БА билан касалланган ўсмирларда касаллик клиник кечишининг ўзига

хос хусусиятлари аниқланган;

илк маротаба БА билан касалланган ва соғлом ўсмирларда иммун тизим

миқдорий кўрсаткичларининг ўзгариши тавсифланган ва амалий тиббиѐт
учун меъѐрий ҳамда тавсиявий ҳужжатлар ишлаб чиқилган;

илк маротаба БА билан касалланган ўсмирларда қон зардобининг

цитокин профили комплекс баҳоланган. Иммунорегулятор IL-6 ва INF-γ
цитокинлари маҳсулининг ўзига хослиги ва уларнинг патогенетик ҳамда
бошқарувчилиги тўғрисидаги маълумотлар аниқланган;

илк бор БАнинг турли патогенетик вариантлари билан касалланганлар

ва соғлом индивидларда FcεRIβ, GSTπ1 генларининг полиморф варианти
аллелари ва генотипларининг тақсимланиш частотасига оид таҳлиллар
асосида юқори ҳавф маркерлари аниқланган, шунингдек, ўсмирларда БА
ривожланишига резистентлиги аниқланган;

касаллик патогенезининг энг муҳим жараѐнлари очилиши асосида

БАнинг тасдиқланган модели ҳамда касалликни ўсмирларда босқичли
ташхислаш, даволаш ва профилактика чора-тадбирлари алгоритми ишлаб
чиқилган.

Тадқиқотнинг амалий натижалари

қуйидагилардан иборат:

ўсмирлар БА ташхисида ишлаб чиқилган алгоритм ва ташхислаш

жараѐни уч босқичли ѐндашиш асосида олиб борилган бўлиб, улар замонавий
анкета сўровномалар ва бронхиал обструкциянинг қайтиш синдромини
аниқловчи тестлар, муҳим иммуноцитокинлар маҳсулини баҳоловчи
чуқурлаштирилган иммунологик тадқиқотлар, астма ривожланиш ҳавфини
оширувчи генетик маркерлар аниқлашни ўз ичига қамраб олган;

БА да ҳужайра ва гуморал бўғинларининг етишмовчилиги биргаликда

келганда, даволаш-профилактик дастурини ишлаб чиқишда базис давога
иммуномодулятор препаратларини тавсия этиш мақсадга муофиқлиги
кўрсатилган;

БА билан хасталанган ўсмирлар қон зардобида IL-6 ва INF-γ миқдор

кўрсатгичлари касаллик клиник-патогенетик тавсифини аниқлашда қўшимча
дифференциал-ташхис мезони сифатида фойдаланиш таъкидланган;

БА ривожланиш ҳавфини оширувчи маркерларининг генетик тест

ўтказиш йўли билан аниқланиши предиктив генетик тест ўтказиш

9

кераклигини кўрсатади, бу эса, ўз навбатида, БА наслий мойиллиги бор
ўсмирларда симптомлар юзага чиққунча ташхис қуйишга ва касалликнинг
эрта профилактикасини ўтказишга ѐрдам бериши асосланган;

полиоксидоний ва циклоферон иммуномодуляторларининг юқори

терапевтик ва профилактик самарадорлиги юқорилиги, асорати ва ножўя
таъсири йўқлиги, аллерголог шифокорларга БА билан хасталанган
ўсмирларда комбинациялашган иммунмодулловчи даво сифатида тавсия
қилинган.

Олинган натижаларнинг ишончлилиги

тадқиқотда қўлланилган

объектив иммунологик, замонавий иммуногенетик ва статистика усуллари
асосида тасдиқланган.

Тадқиқот натижаларининг назарий ва амалий аҳамияти.

Ўсмирларда БА касаллиги ташхисининг етарлича эмаслиги Самарқанд
вилоятидаги бу ѐш гуруҳ беморларига ижтимоий-тиббий ѐрдамни янада
самаралироқ ташкил этиш кераклигини кўрсатади. Соғлиқни сақлаш
бирламчи буғини шифокорлари томонидан даврий тиббий профилактик
текширувлар олиб бориш, вақтида сўровномалардан фойдаланиш, ўпканинг
вентиляцион функцияси бузилишини аниқлашга йўналтирилган тест ва,
зарурият туғилганда, бронхиал обструкцияни бронхолитик билан қайтиш
тестини ўтказиш таклиф қилинган.

БА

билан

касалланган

ўсмирларда

аниқланган

бузилишлар

иммунитетнинг ҳам гуморал ҳам ҳужайравий буғини кўрсаткичларининг
пасайиши билан ифодаланади, бу БА билан касалланган ўсмирларда
иммунтанқислик холатларини ҳисобга олиш ва даволаш-реабилитация
тадбирларини такомиллаштириш зарурлигигини кўрсатади.

Тадқиқот натижалари амалий тиббиѐтда муҳим аҳамиятга эга бўлиб,

ўсмирларда БАнинг клиник-патогенетик шакллари ривожланишининг
патогенетик механизмларини ѐритиб беради. Касаллик патогенезига
нисбатан IL-6 ва INF-γ маҳсулининг ўзига хос хусусиятлари аниқланди, бу
кўрсаткичлар клиник амалиѐтга ўсмирлик давридаги БАнинг патогенетик
жараѐнига қўшимча йўналтирилган дифференциал-ташхис мезон кўрсаткич
сифатида жорий қилинди.

Диссертация иши FcεRIβ генининг 109С/Т полиморф варианти, GSTπ1

генининг Ile105Val полиморф варианти тадқиқотлари натижалари БАга
генетик мойиллик асослари умумий маълумотларига сезиларли ҳисса
қўшади. Диссертация маълумотларини БА ривожланиш ҳавфи генетик
омилларини аниқлашдаги кейинги тадқиқотлар ва самарали даволаш-
профилактика тадбирларини ишлаб чиқиш учун асос бўлиб хизмат қила
олади. Тадқиқот натижалари тиббиѐт ва тиббий биология олий ўқув юртлари
ўқув жараѐнларида қўлланилиши мумкин.

Тадқиқот натижаларининг жорий қилиниши

. Амалга оширилган

тадқиқот натижалари асосида ишлаб чиқилган «Ўсмирларда БА эрта ташхис
масалалари» ва «Иммунитет ўзгаришининг ѐшга боғлиқ жиҳатлари» услубий
қўлланмалар ҳамда «Ўсмирларда БА ташхиси учун FcεRIβ гени полиморф
локуси бўйича молекуляр-генетик тестлаш усули» ва «Ўсмирлик даври БАда

10

иккиламчи иммунтанқислик холатини полиоксидоний дори воситасида
иммункоррегирлаш» услубий кўрсатмалар соғлиқни сақлаш амалиѐтига
жорий этилган (Ўзбекистон Республикаси Соғлиқни сақлаш вазирлигининг
18.10.2011 йилдаги 93/106-сонли ва 12.03.2014 йилдаги 1-сонли хулосалари).

Ишнинг апробацияси.

Диссертация иши натижалари 20 та илмий-

амалий анжуманда, жумладан, 8 та халқаро конференцияларда апробациядан
ўтган: IX International Congress on Cell Biology & XX Annual Conference of the
Korean Society for Molecular and Celluar Biology (2008, Seul); XII Acian-Pacifik
Congress of Clinical Biochemistry (2010, Seul), XIII Annual Congress Turkish
Thoracic Society (2010, Istanbul); European Respiratory Society Annual Congress
(2010, Barcelona); «Завaдские чтения» VI илмий-амалий конференцияси
(2011, Ростов-на Дону); «Россия Федерацияси, МДҲ давлатлари ва Европада
соғлиқни сақлаш» (2011, Москва); «Тиббиѐт: назария ва клиник амалиѐтда
янгиликлар»

(2011,

Шаржа);

тиббиѐтда

реабилитация

ва

иммунореабилитация VII халқаро конгресс ҳамда астма ва респиратор
аллергия бўйича V халқаро форум (2012, Нью-Йорк); 6 та республика
конференцияларида, жумладан «Ички органлар касалликлар профилактика,
ташхис, даволаш ва реабилитациясида эришилган ютуқлар» (2009, Тошкент);
«Клиник иммунология, иммуногенетика – соҳалараро муаммолар» (2010,
Тошкент); Ўзбекистон фтизиатр ва пульмонологларининг VII съезди (2010,
Тошкент); «Тиббиѐтдаги долзарб муаммолар» (2010, Самарқанд);
«Тиббиѐтнинг долзарб муаммолари» (2012, Андижон); Ўзбекистон
Республикаси Фанлар академияси Иммунология институти илмий кенгаш
мажлиси ва илмий кенгаш қошидаги илмий семинарда (2013, Тошкент).

Натижаларнинг эълон қилинганлиги.

Диссертация мавзуси бўйича

жами 32 та илмий иш, жумладан, 7 та халқаро журналларда чоп этилган.

Диссертациянинг тузилиши ва ҳажми.

Диссертация кириш, беш боб,

хулоса, фойдаланилган адабиѐтлар рўйхати, 189 саҳифа матн, 6 та расм ва 54
та жадвалдан иборат.

ДИССЕРТАЦИЯНИНГ АСОСИЙ МАЗМУНИ

Кириш қисмида

диссертация ишининг долзарблиги асосланган,

тадқиқот мақсади ва вазифалари ѐритиб берилган, натижаларнинг илмий
янгилиги ва илмий-амалий аҳамияти, диссертация иши апробацияси ва
натижалари чоп этилганлиги келтирилган, диссертация ҳажми ва қисқача
таркиби баѐн этилган.

Диссертациянинг биринчи бобида

адабиѐтлар шарҳи ѐзилган бўлиб, у

5та кичик боблардан иборат. Унда ўсмирлар популяциясида БА
муаммосининг замонавий ҳолати, иммунологик тизим ва цитокинларнинг
касаллик патогенезида иштироки, БА ривожланиши ва унга мойилликни
аниқловчи генларнинг молекуляр – генетик асосини ўрганиш натижалари,
БАда иммунофармаковоситаларининг қўлланиши ҳақидаги замонавий
тасаввурлар тақдим этилган.

11

Диссертациянинг иккинчи бобида

тадқиқотнинг материал ва

услублари баѐн қилинган. Ишнинг мақсад ва вазифаларига мувофиқ ҳолда
4094 нафар ўсмирларда 2007 йилдан 2011 йилга қадар комплекс кўрик
ўтказилган. Илмий тадқиқот дастури Самарқанд шаҳар ўсмирлар диспансери
ва М.Н.Хаитов номидаги Самарқанд шаҳар тиббиѐт бирлашмаси
аллергология-пулмонология

базасида

амалга

оширилди.

Халқаро

симпозиумда тасдиқланган схемага кўра ѐшнинг пубертат ѐшида
даврлаштирилиши ўсмирлик (ўғил болалар – 13 дан 16 ѐшгача; қизлар 12 дан
15 ѐшгача) даври ва ўспиринлик (ўғил болалар – 17 дан 21 ѐшгача, қизлар 16
дан 20 ѐшгача) даврларига ажратилган. Диссертация ишидаги ташхиснинг
клиник верификацияси Жаҳон соғлиқни сақлаш ташкилотининг халқаро
таснифи (Х қайта кўриш, ХКК – 10) ва Global initiative for asthma (GINA,
2006) ташхис талабларига кўра ўтказилди.

Тадқиқот ўз ичига ўсмирлар орасида бронхиал астмани тарқалишини

аниқлаш бўйича сўровнома ўтказишни ва кейинчалик ўсмирлар диспансери
шифокор-мутахассислари

билан

ҳамкорликда

ўсмирларни

клиник-

функционал кўрикдан ўтказиш учун танлаб олишни ўз ичига олган.
Кўрикдан ўтказилган ўғил болаларнинг ўсмирлар сони 1224 нафар, ўспирин
ўғил болалар – 766 нафар, ўсмирлик давридаги қизлар 1318 нафар, ўспирин
қизлар сони 729 нафарини ташкил этди. Самарқанд шаҳрининг тадқиқ
этилаѐтган пубертат ѐшидаги аҳолисининг 2326 нафарини, Ургут тумани
аҳолисининг 1711 нафарини ташкил этди. БАга гумон қилинган ҳолатда
ташҳис қилишнинг умум қабул қилинган лаборатория ва инструментал
услублари ўтказилди. Бу ташхис услублари ўз ичига лейкоцитлар
формулаларини хисобланишини ўз ичига олган умумий қон тахлили, кўкрак
қафаси органларини рентген қилиш, электрокардиография, ҳамда ташқи
нафас фаолияти (ТНФ) ўрганишни ўз ичига олади.

Чуқурлаштирилган иммунологик тадқиқотлар БА билан оғриган ва

соғлом 237 нафар ўсмирлар контингентида иммун кўрсаткичлари (СD3

+

,

СD4

+

, СD8

+

, СD16

+

, СD19

+

, СD23

+

, СD95

+

, IgA, IgM, IgG) ва цитокин (IL-6 ва

INF-γ)ларнинг кўрсаткичлари ҳолати ўрганилди.

Илмий ишда молекуляр-генетик тадқиқотлар учун, изланишлар

давомида танлаб олинган 12 ѐшдан 21 ѐшгача бўлган ўзбек миллатига мансуб
БА билан оғриган 204 беморнинг ДНК намунасидан фойдаланилди. Назорат
гуруҳини практик соғлом аллергик, аутоиммун ва инфекцион – яллиғланиш
касалликларининг клиник кўринишлари мавжуд бўлмаган жинси ва ѐшига
кўра беморлар билан тенг бўлган ва атопик холатлар бўйича ирсий
кассалликлари бўлмаган 56 нафар шахс ташкил этди.

БА билан оғриган 57 нафар ўсмирларда стационар даволаниш даврида

носпецифик иммунотерапия ўтказилди. У ўз ичига асосий даволаш
комплексида полиоксидоний ва циклоферон воситалари билан даволашни
қамраб олган. GINA даги ҳолатларга кўра БА билан оғриган ўсмирлар базис
даволаниш сифатида кромогликат натрийси - 5 мг, антигистамин (зиртек),
ИГКС - флютиказон пропинат 50/100 ѐки беклазон-эко енгил нафас 100/250,
бронходилятор сифатида қисқа таъсирли β

2

-агонист қабул қилишган.

12

Профилактик самарадорлик клиник кўрсаткичларига кўра иммуномодулятор
курси ўтказилгандан кейин узоғи билан бир йилик танаффусдан сўнггина
баҳоланди.

Диссертация ишида БА тарқалганлигини ўрганиш учун анкета

скрининги European respiratory society cўровномасидан фойдаланилди.
Махсус сўровнома тадқиқотчиларга БАнинг эпидемиологик скринингини
ўтказиш учун тасдиқланган ва тавсия этилган.

Ўпканинг вентиляцион функцияси тинч ҳолатда, ўлчамларни автоматик

қайта ишловчи “SPIROSIFT SP-5000” спирометрида ўрганилди (Fukuda
DENSHI, Япония). Бронходиляцион текширишлар умумқабул қилинган
услублар билан ўтказилди. Бронхиал обструкциянинг қайтишини ОФВ

1

нинг

15% ва ундан кўпроқ ошганида ижобий деб баҳоладик.

FcεRIβ ва GSTπ1 генининг полиморф варианти анализи Forward – 5’ –

GTG GGG ACA ATT CCA GAA GA-3’ Reverse – 5’CCG AGC TGT CCA GGA
ATA AA-3’; FORWARD – 5’-GTA GTT TGC CCA AGG TCA AG-3’; Reverse
– 5’-AGC CAC CTG AGG GGT AAG-3’ праймерлари ѐрдамида ПДРФ-тахлил
ва амплификаторда ДНК синтезининг полимераз занжир услуби билан
ўтказилган ва кейинги рестрикцион фрагментларнинг 6%ли полиакриламид
гелида электрофорез ѐрдамида аниқланди. HLA – фенотип стандарт
микролимфоцитоксик тести ѐрдамида аниқланди (Terosaki P.I.), бу тестда
Санкт-Петербург гематология ва қон қуйиш ИТИнинг HLA-антизардоб
панелидан фойдаланилди.

Лимфоцитлар ва уларнинг субпопуляциясини текшириш учун

дифференцион ва активацион (СD3

+

, СD4

+

, СD8

+

, СD16

+

, СD19

+

, СD23

+

,

СD95

+

) антигенларининг моноклонал антитаналаридан фойдаланилди.

Иммуноглобулинларнинг зардобдаги миқдори радиал иммунодиффузия
услуби гелда Манчини бўйича аниқланган (Mancini et al.). INF-γ ва IL-6 нинг
қон зардобидаги даражасини аниқлашда ИФА учун «ИФА- INF-Γ - IL-6» тест
тизимидан фойдаланилган ҳолда иммунофермент анализи услуби
қўлланилган (ЗАО “Вектор Бест” Россия 2009).

Натижалар EXCEL пакетида ишланган ўз ичига статистик функциялар

тупламидан ўртача арифметик қийматни (M), ўрта арифметик қиймат
хатолари (m), Стъюдент мезони (t), хатолар тахмини (р), Пирсон корреляция
коэффициенти (r)ни олган кўрсатгичларга статистик ишлов берилган.
Генетик тадқиқотларда χ

2

, P

Value

, RR–нисбий хавф, EF-этиологик фракция

кўрсаткичи ва PF–превентив фракция кўрсаткичлари хисоблаб чиқарилди.

Диссертациянинг учинчи бобида

Самарқанд вилоятининг икки

худудида: Самарқанд шаҳри (4 та лицей, 2 та коллеж) ва Ургут тумани (3 та
коллеж, 3 та лицей) ўсмирлар популяциясида БА клиник кечишининг ўзига
хос хусусияти ва тарқалганлигини аниқлаш учун лицей ва коллеж
ўқувчилари билан ўтказилган сўровнома натижалари ѐритиб берилган.
Сўровнома маълумотлари тахлилига асосланган ҳолда сўнгги 12 ой давомида
обструкция синдроми мавжуд бўлган шахслар гуруҳи шакллантирилди.
Бизнинг маълумотларга кўра бундай шахслар сони 388 нафар, бу барча
сўралганларнинг 9,6% демакдир. Бунда қизлар 59,1% (229 нафар), ўғил

13

болалар – 40,9% (159 нафар)ни ташкил этди. Кўриниб турибдики тадқиқот
ўтказилган худудда қизлар орасида БА ўсмир ўғил болаларга нисбатан
кўпроқ учраган. Худди шундай балоғат ѐшида бемор ўғил болалар сони
бемор қизлар сонидан кам бўлган. Самарқанднинг бу икки худудида
тадқиқотлар ўтказишга уларнинг бирида (Ургут тумани) аҳоли тамаки
етиштириш билан шуғулланиши асос бўлди. Шу сабабли вилоятнинг турли
худуларида яшовчи ўсмирларда астмасимон симптомлар учраш частотасини
солиштириш маълум қизиқиш ўйғотди.

1-расм. Ўсмирлик ёшида текширилган шахслар тақсимланиши

Ургут тамаки етиштириш туманида ўсмир ѐшдаги коллеж, лицей

ўқувчиларининг 1711 нафари ўртасида сўровнома ўтказилди. Бизнинг
маълумотларга кўра улар орасида БА билан оғриган ўсмир болалар сони 185
нафар, бу барча текширилган умумий болалар сонининг 10,8 % ни ташкил
этди. Самарқанд шаҳрида сўровномага жалб қилинган коллежларда ўқувчи
ўсмирлар сони 2326 нафарни ташкил этди, бунда сўровнома натижасига кўра
астма белгилари 203 нафар ўсмирда аниқланди. Бу эса барча текширилган
болалар умумий сонининг 8,7% ни ташкил этди.

Умуман, биз қўлга киритган натижаларга кўра Самарқанд вилоятида

БАнинг учраши кўрсаткичи ўсмир ѐшдаги шахслар ўртасида 9,6% ни ташкил
қилган, бунда касаллик ўсмирлик ва балоғат ѐшидаги аѐл жинсига мансуб
шахсларда эркак жинсига мансуб шахсларга нисбатан бир қанча юқори
даражада бўлган.

Текширишнинг иккинчи босқичи (клиник функционал изланиш)да

сўнгги 12 ой ичида сўровномаларда камида битта астмасимон симптомини
белгиланган ўсмирлар контингенти хисобга олинди.

БАга гумон қилинган ўсмир ва балоғат ѐшидагиларни текшириш

давомида ФЖЕЛнинг нисбатан нормал кўрсаткичи хамда ОФВ

1

, ПСВ,

МОС

25

, МОС

50

, МОС

75

, МОС

25-75

ларнинг паст кўрсаткичлари аниқланди, бу

14

холат ўпка ветиляцион функциясининг обструктив бузилишларига мос
келади.

Ташқи

нафас

функциясини

изланишида

бронходилятатор

ингаляциясидан фойдалангандан 15 дақиқадан кейин ОФВ

1

ва ўпка

вентиляцион фаолиятининг бошқа кўрсаткичлари бошланғич кўрсаткичидан
15% га ўсиши кузатилади, бу эса ташқи нафас вазифаси кўрсаткичларининг
нормал даражагача яхшиланишига сабаб бўлади.

Бизнинг тадқиқотларимиз натижасида ТНФ ўзгаришнинг аниқланганли-

ги, бронхолитик (салбутамол) тест билан кўрсатилганлиги 243 та ўсмирда БА
ташхисини тасдиқлашга имкон берди, бу барча текширилган ўсмирлар
умумий сониниг 62,6% ни ташкил этади.

Касаллик кечишининг клиник хусусиятлари сўровномалар маълумот-

ларига асосланган холда ўрганиш хамрох холатларнинг учраш частотасини
таснифлашга имкон берди. Бизнинг изланишларда текширилган беморлар-
нинг 73,9% да БА кўпроқ енгил кечиш билан ифодаланувчи аллергик ринит
билан бирга кечиши кузатилади. Бунда АРнинг БА билан бирлашган шакли
текширилган ўсмирларнинг 88 нафарида учради, бу 44% ни ташкил этди. АР
қаторида БА билан касалланган ўсмирларнинг кўпчилигида нореспиратор
аллергик касалликлар кўринишида: атопик дерматит 16,6% ўсмирларда,
аллергик конюктивит 53,7%, Квинке шиши/эшак еми 14%да учрайди.
Текшириш ўтказилган ўсмирланинг 7,6% да озиқ овқатга ва 8,1% да дори
воситаларига аллергияси борлиги таъкидланди.

Global initiative for asthma ташхис мезонига кўра БА ташхис

верификацияси касаллик оғирлик даражасини белгилашга имкон берди.
Текширилган ўсмирларнинг 8,8% да енгил персистирловчи ва 91,2% да
интермитирловчи кечиши кузатилди.

Шу тариқа Самарқанд вилоятида яшовчи ўсмирлар популяциясига оид

шахслар орасида бронхиал астма тарқалишини аниқлашга имкон бўлди,
астмасимон белгиларининг учраш частотаси изланиш ўтказилиб шу нарса
аниқландики аксарият ўсмирларда БА интерметирловчи кечиши ва
касалликнинг кам холатларда персистирловчи кечиши аниқланди. БА билан
оғриган беморлар текширилганда улардаги мавжуд аллергик холатларнинг
структураси ўрганилди, ҳамда БАнинг турли оғирликда билан кечишида
функционал кўрсаткичлар ўзгаришининг хусусиятлари ўрганилди, бу
тадқиқотлар асносида муҳим илмий амалий натижалар қўлга киритилди.

Дисертациянинг тўртинчи бобида

соғлом ва БА билан касалланган

ўсмирларда иммун тизим кўрсаткичларининг ўзгариш хусусиятларини
аниқлаш натижалари баѐн қилинган.

Практик соғлом ўсмирлар популяцияси орасида периферик қон СD3

+

ҳужайраларининг нисбий кўрсаткичи 45,5±0,5%, СD19

+

ҳужайралари –

21,9±0,3%, Т-лимфоцит хелперлар субпопуляциясининг ўртача миқдори
24,4±0,3%, Т-супрессорлар - 21,1±0,3%, табиий қиллерлар 17,2±0,3%, асосий
синф иммуноглобулинлари: IgA-186,7±13,35 мг%, IgM – 111,2±4,47 мг%, IgG
-901,2603±67,18 мг%ни ташкил қилди. Экрак ва аѐл жинсига мансуб соғлом

15

ўсмирлар

иммун

статуси

қиѐсий

ўрганилганда

қайд

этилган

кўрсаткичларнинг ўртача қийматида ўзгаришлар аниқланмади.

Т–ҳужайра иммун буғуни ўрганишида текширилган беморлар

контингентида ўсмир ѐшидаги БА беморларда СD3

+

нисбий кўрсаткичи

ўртача қиймати пасайиши аниқланган (36,8±0,5% назоратда 45,5±0,5% билан
таққослаганда, р<0,01). СD4

+

субпопуляцияси назорат гурухида (р<0,01)

24,4±0,3% билан солиштирганда 19,5±0,3% даражаси билан тавсифланади.
СD8

+

миқдори ҳам шундай, назоратда (р<0,01) 21,0±0,3% билан

солиштирганда 17,2±0,3% гача сезларли пасаяди. Ўсмирлик даврида NK –
ҳужараларига нисбатан олинган натижалар бу кўрсаткичнинг пасайишига
мойиллик тенденциясидан далолат беради (16,0±0,3% билан солиштирганда
17,2±0,3%, назоратда р<0,02).

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

CD3+%

CD4+%

CD8+%

CD16+%

CD19+%

CD23+%

CD95+%

45,5

24,4

21,1

17,2

21,9

21,8

20,2

36,8

19,5

17,1

16

18,3

18,6

17,4

амалий соғломлар

БА билан хасталанган

2-расм.

БА билан касалланган ўсмирларда иммун тизим кўрсатгичлари

БА билан касалланган ўсмирлар зардобида IgА, IgМ ларнинг таркиби

сезиларли ўзгаришларга учрайди, улар иммуноглобулинларнинг сезиларли
пасайиши билан таърифланади. БА беморларида практик соғлом ўсмирлар
гуруҳида деярли фарқ қилмаган ҳолда IgG даражаси бир мунча
кўтарилганлиги аниқланди. Шуни таъкидлаш лозимки текширилган
беморларда В – лимфоцитлар сониинг сезиларли пасайиши кузатилди.

Изланишлар натижаси шуни кўрсатадики, БА билан оғриган ўсмирларда

Т ва В – лимфоцитлари активацион маркерлари хисобланган, СD23

+

-

ҳужайралари билан бир қаторда СD95

+

- ҳужайраларининг нисбий миқдори-

нинг пасайиши ўрин олди.

БАнинг ѐш даврларида иммун холати буғунлари фаолияти ҳақидаги

тасаввурларни кенгайтириш муҳим амалий аҳамиятга эга, бу иммунокор-
рекция ўтказишда терапевтик ва профилактик жараѐнлари тактикасини
муҳокама қилиш имконини беради. БА билан оғриган ўсмирлар ва балоғат
ѐшидагилар Т-лимфоцитларининг умумий миқдорини ифодаловчи СD3

+

-

ҳужайраларининг ўртача даражаси 35,4±1,1% ва 39,6±0,59% ни ташкил
қилди. Кўриниб турибдики кўрсаткичнинг нисбатан паст даражаси ўсмир
ѐшидаги беморларда қайд этилган. Ёш гуруҳларида лимфоцитларнинг
иммунорегулятор суппопуляцияси тахлилида СD4

+

ҳужайралари даражаси-

нинг бир мунча фарқи аниқланган, бироқ балоғат ѐшидаги беморлар

16

гуруҳида СD8

+

ҳужайралари даражаси нисбатан кўтарилганлиги билан

ажралиб турсада (11,2±0,6% билан солиштирганда 17,2±0,32%, р<0,02)
умуман олганда назорат кўрсаткичлари даражасига етмаган (21,1±0,3%
р<0,05). Изланиш олиб борилаѐтган ѐш гуруҳларида СD16

+

даражасини

солиштирганда шу нарса аниқландики БА беморларининг вояга етган
гуруҳида бу кўрсаткич соғлом кишининг даражасида қолса, ўсмир ѐшдаги
беморларда ўрганилаѐтган кўрсаткич назорат гуруҳига нисбатан сезиларли
даражада пасайганлиги билан ажралиб туради (17,2±0,3% билан
солиштирганда 13,6±1,1%, р<0,01), шундай холат БА билан оғриган вояга
етган беморларда ҳам кузатилади (13,6±1,1% билан солиштирганда
16,0±0,39%, р<0,05). БА бемор ўсмирлар гуруҳи СD19

+

ҳужайралари

даражаси назорат гуруҳи билан солиштирганда сезиларли пасайганлиги
кузатилади (18,4±0,30% билан солиштирганда 21,9±0,3%, р<0,02) ѐшга
нисбатан таққослаш гуруҳларида СD19

+

ҳужайралари таркибида яққол

ўзгаришлар кузатилмаган.

Текширилган шахслар иммун тизими профили силжишларини

патогенетик аҳамиятини аниқлаш мақсадида бир томондан БА клиник
патогенетик формалари ва бошқа томондан касаллик кечиш фазаларини
иммунитет параметрлари билан боғлиқлиги тахлили ўтказилди. Текшири-
лаѐтган патология турли вариантлари иммунодефицити ўзига хос ўзгариш-
ларни намоѐн қилди, бу АрБА ва НБАда CD8

+

ва CD95

+

- лимфоцитлар

пасайган миқдори билан ифодаланди. Касалликни авж олиш фазаси билан
яққол ўзаро боғлиқликлар, В-лимфоцитлар активацион маркери кўрсатгичи
ошиши тенденцияси фонида зардоб иммуноглобулинланинг А ва М синфла-
ри ўзгаришлари ўрин олди. Бу ўзгаришларнинг тескари характери (касаллик
авж олиш даврида IgM миқдорининг яққол ошиши ва IgA камайиши, ва
тескари ремиссия фазасида IgM кўрсатгичининг 122,3±6,4мг% дан
92,3±5,1мг% гача камайиши хамда IgA 124,7±2,4мг% дан 141,5±7,7мг% гача
ошиши), фикримизча патогенетик механизмларнинг йўналтирилганлиги
касаллик кечиш характерини ифодалайди. БА патогенезида кузатилаѐтган
дисиммуноглобулинемия хамда IgA продукциясининг сўндирилиши
маълумотлари аллергик касалликлар бўйича ирсий мойиллик иштироки
кузатилмоқда (137,5±7,9мг% қарши 161,5±8,7мг%, р<0,02). Қизиқарли факт
бўлиб бу гурух касалларда аллергологик анамнези оғирлашмаган беморларга
нисбатан CD8

+

, CD16

+

ва CD19

+

лимфоцитлар популяцияси мухим дефицити

хисобланди (р<0,05, р<0,01, р<0,05).

Иммун статус чуқур бузилишлар аниқланган ўсмирлик ѐшидаги БА

беморлар гурухларида, иммунитет миқдорий кўрсаткичларини қайта тиклаш
мақсадида базис даволаш комплексига иммуномодулятор воситаларини
киргизишни кўриб чиқишни талаб этади.

Дисертациянинг бешинчи бобида

ўсмир ѐшдаги беморлар қон

зардобида рақобатдош интерферон-γ ва IL-6 цитокинларининг махсули
даражаси ва патогенетик информативлигини аниқлаш баѐн қилинган.

17

Ўсмир ѐшида БА билан оғриган беморларда периферик қон зардобида

IL–6 цитокинининг миқдори назоратда 8,6±3,6 пг/мл бўлганида беморлар
гурухида 24,0±3,8 пг/мл гача сезиларли даражада ошган эди (р<0,05).

8,6

24

32,1

37,9

16,6

0

5

10

15

20

25

30

35

40

IL-6 пг/мл

амалий соғлом

БА билан хасталанганлар умумий гурухи

АБА

НБА

АpБА

3-расм. БА билан касалланган ўсмирларда IL-6 кўрсатгичлари

Ўрганилаѐтган патологияда IL–6 махсули даражасини касалликнинг

клиник –патогенетик шакллари билан боғлиқлиги ўрганиш учун солиштирма
тахлил ўтказилди. Тахлил натижасида шу нарса аниқландики БАнинг
нисбатан инфекцион механизмлари устун хаста ўсмирларда периферик қонда
IL–6 махсули даражасининг анча юқори кўрсаткичи рўйҳатга олинади ва
ўртача миқдори 37,9±1,3 пг/мл ни ташкил қилган ҳолда бу гуруҳ
беморларида бронхиал дарахт яллиғланиш чуқурлигини акс эттиради.
Касаллик патогенезида нисбатан аллергик механизмлар устуворлиги билан
бўлган беморларда, аксинча IL–6 махсули даражасининг 32,1±1,1 пг/мл гача
тушиб кетиши кузатилади. БАнинг аралаш кўриниши билан оғриган
беморларда IL–6 махсули даражасининг сезиларли пасайишининг
аниқланиши жуда ҳам қизиқдир.

Тадқиқот олиб борилаѐтган БА беморлар гуруҳларида интерферон

ҳолати параметрларини тахлилида ўсмирлар ѐшида иммунокомпетент
ҳужайралари орқали INF-γ паст миқдори аниқланди. Ўсмир ѐшидаги БА
беморларининг периферик қон зардобида цитокин миқдори сезиларли
7,9±0,5 пг/мл гача пасайган бўлиб, назоратда 13,9±1,0 пг/мл ташкил қилди.

Ўрганилаѐтган патология касалликнинг клиник-патогенетик шаклларида

INF-γ хосил бўлишининг ўзаро боғлиқлиги ва продукциясини аниқлаштириш
учун биз солиштирма тахлил ўтказдик.

Статистик тахлил натижасида INF-γ (4,9±0,2 пг/мл, р<0,01) хосил

бўлишининг ўта паст даражаси касалликнинг аллергик клиник – патогетик
шакли билан оғриган ўсмир ѐшидаги БА беморлари гуруҳида рўйҳатга
олинди. Ўсмирлар ѐшида БАнинг аралаш ва инфекцион формаларида
иммунокомпетент хужайралар орқали INF-γ хосил бўлиши деярли бир хил
паст даражада бўлиб соғлом гуруҳ билан солиштирганда аниқ фарқланиш
кузатилди.

18

0

2

4

6

8

10

12

14

INF-γ пг/мл

13,9

7,9

4,9

8,3

9

амалий соғлом БА билан хасталанганлар умумий гурухи

АБА НБА АрБА

4-расм. БА билан касалланган ўсмирларда INF-γ кўрсатгичлари

IL–6 ва INF-γ продукциясида аниқланган ўзига хос тарафлари БАнинг

турли клиник патогенетик формали беморлар ва соғлом шахсларда
яллиғланиш реакциясининг йўналтирилганлигига қўшимча объектив ҳолат
бўлиб хизмат қила олади, бу эса ўз навбатида терапия танланишида
дифференциал ѐшдошиш ва унинг самарадорлигини ошириш имконини
беради.

Рақобатдош IL-6 ва INF-γ цитокинларни БА клиник кечиш хусусиятлари

билан боғлиқликни аниқлаш мақсадида, мазкур кўрсатгичларни касаллик
динамикасида текширилди, бу тахлил БА авж олишида IL-6
продукциясининг яққол ошишини кўрсатди. Мазкур параметр 31,3±1,4пг/мл
гача етиб, ремиссияда 21,8±2,1пг/млни ва практик соғлом шахсларда
8,6±3,6пг/млни ташкил этди (р<0,05, р<0,01,). INF-γ продукцияси касаллик
кечиш фазасига боглиқ анализи мазкур цитокин БА авж олиш даврида
6,1±0,7пг/млгача камайишидан далолат беради (назорат гурухида
13,9±1,0пг/мл, р<0,02), ремиссия даврида эса мазкур кўрсатгич бирмунча
ошган ва шунда хам соғлом шахслар гурухи кўрсатгичларига нисбатан
пастлиги сақланди (р<0,05). Аниқланган ўзаро цитокинлар ўртасида ва
касаллик фазаси билан боғлиқликлар касаллик патогенезида иммун статус
турли буғунлари қатнашишини ифодалайди.

IL–6 ва INF-γ асосий вазифаларидан бири иммунокомпетент ҳужайралар

дифференцировкасини регуляциясидир. Периферик қонда IL-6 ва INF-γ
хосил бўлиши даражасининг иммунологик бузилишлар билан алоқаси ва
характерини аниқлаштириш учун биз солиштирма тахлил ўтказдик. IL-6
даражаси ва СD3

+

-ҳужайралари (r=-0,17; P<0,05), СD4

+

-ҳужайралари (r=-

0,15; P<0,05), СD8

+

-ҳужайралари (r=-0,25; P<0,05), миқдорининг ўзаро

манфий бир бирига боғлиқлиги ва IL–6 қон зардобида айланувчи СD16

+

-

ҳужайралари (r=0,14; P<0,05) ўртасида ўзаро мусбат боғланиш аниқланди.
Худди шу вақтда БА билан оғриган ўсмирларда IL-6 ва СD19

+

-ҳужайралари

ўртасидаги тўғридан тўғри корреляцияси кузатилади (r=0,20; P<0,05). Бунда
IL–6 даражаси IgG билан суст намоѐн бўлган манфий корреляция бўлиб, IgA
ва IgM таркиби билан ижобий коррелляциялашади.

Тадқиқот натижаларининг корреляцион таҳлили шуни аниқладики INF-γ

миқдори кўрсаткичлари ҳужайра иммунитетининг СD3

+

(r=-0,19; P<0,05),

19

СD4

+

(r=-0,15; P<0,05), СD8

+

(r=-0,17; P<0,05), СD16

+

(r=-0,14; P<0,05) барча

кўрсаткичларининг ўртача қиймати билан манфий корреляцияга киришади.
INF-γ таркибининг иммунитетнинг гумморал буғуни кўрсаткичлари билан
корреляция таҳлили натижалари шуниси аниқ бўлдики СD19

+

-ҳужайралари

ва IgA, IgMларнинг яққол манфий корреляцион қарамлилигини аниқлади.
Бунда IgG концентрация кўрсатгичи INF-γ кўрсаткичи билан ижобий (r=34;
P<0,05) корреляцияга киришган.

IL-6 ва INF-γ ҳамда Т ва В-иммунитет буғинлари активацион

маркерлари билан корреляцион боғлиқлик мавжудлигини ўрганиб чиқдик,
бунда IL-6 кўрсаткичлари СD23

+

миқдори билан ижобий (r=0,39; P<0,02)

корреляциялашади ва бир вақтнинг ўзида беморларнинг IL-6 махсули
даражаси СD95

+

миқдори билан яққол манфий (r=-0,32; P<0,02)

корреляциялашмоқда. Шу билан бирга INF-γ кўрсатгичи СD23

+

(r=-0,30;

P<0,05), СD95

+

(r=-0,10; P<0,05) миқдори кўрсатгичи билан манфий

корреляцияда эканлиги аниқланди.

Аниқланган кўпгина ўзаро боғлиқликлар шуни кўрсатадики,

иммунокомпетент хужайралар миқдори ва IL – 6, INF-γ цитокинлари хосил
бўлиши ўзаро боғлиқ, хамда фаоллашув жараѐнлари (СD23

+

) ва элиминация

жараѐнларининг (СD95

+

) мувозанати бузилади. Олинган натижалар

шунингдек тадқиқ қилинган цитокинлар БА фенотипик вариантларига хос
иммун жавоб шаклланишидан далолат беради.

Дисертациянинг олтинчи бобида

БА ривожланишига мойиллиги бор

ўсмирларда FcεRIβ ва GSTπ1 генларида аллеллик вариантлар аҳамиятлилиги
ўрганилди.

Соғлом шахслар орасида FcεRIβ гени 109С/Т полиморфизмини

ўранишда шу нарса аниқландики 109Т-аллел частотаси ўзбек миллати
популяцияси шахсларининг 46,8%, 109С-аллелнинг - 53,2% ни ташкил
қилади. БА беморлари генотипланишида 109Т-аллели - холатларнинг 58,6%
да, 109С аллели - холатларнинг 41,4% да аниқланган (χ

2

=3,59, р=0,058,

OR=1,24).

FcεRIβ

гениниг генотиплари тақсимланиши частотасини

ўрганишда полиморф маркерли 109Т/Т генотиплари соғлом шахсларда
холатларнниг 32,6% да, 109С/Т гетерогизот генотипи 28,3% да, 109 С/С -
39,1% да аниқланган. БА беморларида 109 Т/Т генотипи холатларнинг 45,4%
да, 109С/С генотипи -28% да, 109С/Т генотипи 26,6% (χ

2

=1,84, р=0,17,

OR=0,4) аниқланган. Ўтказилган таҳлил аллелар частотаси ва FcεRIβ гени
109С/Т генотипларининг полиморф вариантининг тақсимланиши БА
беморларининг умумий гуруҳи ва соғлом назорат гуруҳи орасидаги аниқ
бўлмаган фарқни аниқлади.

Жадвалда патологик жараѐн клиник вариантлари қараб, беморлар

ўртасида FcεRIβ генини 109С/Т генотипларининг полиморфизми ва аллеллар
учраши частотаси устида ўтказилган таҳлил натижалари кўрсатиб ўтилган.
Жадвалдан кўриниб турибдики, FcεRIβ генини 109С/Т генотипларининг
полиморфизми аллеллар частотаси таҳлилида шу нарса аниқландики АБА
беморлари гуруҳларида 109Т - аллелли соғлом шахслар гуруҳларидагига
(79,1%ни 46,7% билан таққослаганда, χ

2

=26, р=0,000, OR=3,12). Генотиплар

20

полиморфизмини ўрганиш АБА беморлари гуруҳида геннинг 109 Т/Т
гомозигот варианти соғлом шахслар назорат гуруҳи (64,1% қарши 32,6% га,
χ

2

=11,45, р=0,0007, OR=3,68).

Жадвал.

Соғлом ва БА беморлар гуруҳларида FcεRIβ гени полиморфизми

109С/T аллел ва генотиплари учрашининг тақсимланиши

Fc

εRIβ

ге

ни

1

09

С/

T

п

ол

имо

рф

изм

и

Гуруҳлар N

аллел

Генотиплар

χ

2

Р

Va

lu

e

OR

109С

109T

109

С/T

109

С/С

109
Т/T

Назорат

46

49-

53,3%

43-

46,7%

13–

28,3%

18-

39,1%

15–

32,6%

1

1

,4

5

0

,0

0

0

7

3

,6

8

АБА

1

0

3

43-

20,9%

153-

79,1%

31-

30,1%

6-

5,8%

66-

64,1%

НБА

19

26-

68,4%

12-

31,6%

8-

42,2%

9-

47,3%

2-

10,5%

2

,3

4

0

,1

2

0

,0

5

АрБА

14

19-

67,8%

9-

32,2%

3-

21,4%

8-

57,2%

3-

21,4%

0

,2

1

0

,6

4

0

,1

3

Бунда АБА беморлар гуруҳида 109 С/С частотаси, соғлом шахслар

популяциясига хос равишда сезиларли жаражада паст (39,1% билан
солиштирганда 5,8%). Беморларнинг бу гуруҳи FcεRIβ генини 109С/Т
генотиплари частотаси назорат гуруҳидан деярли фарқ қилмайди. НБА ва
АрБА беморлар гуруҳидаги хусусиятига оид таҳлилининг ўтказилиши
аллеллар частотаси ва FcεRIβ генини 109С/Т полиморф генотипида соғлом
шахсларнинг назорат гуруҳи билан солиштирганда сезиларли фарқ
йўқлигини кўрсатди.

БАнинг ривожланишида жинсни эътиборга олган холдаги боғлиқлигини

баҳолаш мақсадида FcεRIβ генининг аллеллар частотаси ва 109С/Т
генотипларининг полиморфизминнг тақсимланиши тахлили ўтказилди:
FcεRIβ гени 109Т аллеллар частотаси қиз болалардаги БА (67,2%) билан
солиштирганда ўғил болаларда 78,5% ни ташкил этди ва назорат гуруҳи ўғил
болалардагига нисбатан кўрсаткичи сезиларли юқори эди (56,2%) (χ

2

=5,2,

р=0,02, OR=4,71).

Кўплаб оилавий агрегация холатлари кузатилган БА сингари касаллик

клиник кечиш хусусиятлари билан генетик маркерлар профили муаммосига
қизиқиш 30 йилдан буѐн мавжуд, шунга қарамай бу муаммолар ўз ечимидан
узоқда қолмоқда. Аллергик касалликлар бўйича наслий мойиллиги мавжуд
беморлар клиник гурухида аниқланган FcεRIβ гени полиморфизмига
характерли генотип хусусиятлари анализи ўтказилди. Олинган натижаларга
асосан наслий мойиллиги мавжуд шахслар орасида 109Т/T - 72,4%, генотип

21

109С/T - 20,7% холатларда, 109С/С генотипли беморлар эса 6,9% ни ташкил
қилди (χ

2

=9,75, р=0,001, OR=1,27). Бизнинг текширишларда мухим

хусусиятлардан бири, FcεRIβ гени 109С ва 109T аллел частотасининг назорат
гурухи ва наслий мойиллиги мавжуд беморлар гурухи ўртасидаги сезиларли
фарқлари (χ

2

=17,8, р=0,000, OR=4,21).

Шундай қилиб, аллергик касалликларга наслий мойиллиги мавжуд

беморлар гурухига 109Т аллели ва БА юқори ассоциацияси характерли.
Шуни хам таъкидлаш лозимки наслий мойиллиги мавжуд беморлар гурухида
109С/С гомозигот ва 109С/T гетерозигот генотипларга нисбатан 109Т/T
генотипи учраш частотаси юқори.

FcεRIβ гени 109С/Т полиморфизмининг Т-лимфоцитлар ва уларнинг

субпопуляцияси кўрсатгичлари билан боғлиқлигининг тахлили шуни
кўрсатадики, генотип 109Т/Т билан оғриган беморлар гуруҳида СD3

+

миқдорининг нисбий кўрсаткичини С/С ва С/Т генотиплари бемор
гуруҳининг кўрсаткичларига таққослаганда 34,7±0,41%гача пасайганлиги
қайд этилди (иккала холатда ҳам p<0,05). 109Т/Т генотипли беморларида
ноаниқ фарқларни кўрсатган холда СD4

+

ва СD8

+

абсолют кўрсаткичлари

хисобига нисбатан пасайиш сурати кузатилди. СD16

+

кўрсаткичлари БА

билан оғриган ўсмирларда FcεRIβ гени генотиплари тадқиқот гуруҳлари
орасида деярли фарқланмаган. IgG нисбатининг ўратача юқори даражаси
109Т/Т генотипига эга беморлар гуруҳида қайд қилинган. IgАнинг энг паст
кўрсаткичи 109 С/С генотипига эга шахслардан сезиларли фарқли равишда,
109Т/Т генотипли шахсларда рўйхатга олинган. IgМнинг пасайиш сурати
109Т/Т генотипли беморлар гуруҳида ҳам қайд этилган. 109Т/Т генотипли
шахсларда 109С/С, С/Т генотипли (р<0,05; р<0,01) беморлар гуруҳи билан
солиштирганда СD23

+

ҳажминиг нисбатан сезиларли ўсиши қайд этилди,

лекин БА беморларида генотиплар ўртасида СD95

+

-ҳужайраларининг

сезиларли фарқи қайд этилмади. СD23

+

маркери нисбатан 109Т/Т ва 109С/С

(р<0,05) гомозигот генотиплари орасида сезиларли фарқ аниқланди.

Генотипларнинг функционал кучсизлашган комбинацияларини ва

уларнниг иммун кўрсаткичлари билан ўзаро боғлиқлигини ўрганиш ва
аниқлаш бўйича ўтказилган тадқиқотларнинг барчаси шундан далолат
берадики аллергик реакциялар авж олиши учун FcεRIβ генининг нобоп
бирлашмасининг иммунитет ҳужайра ва гуморал буғунлари кўрсаткичлари
билан ўзаро таъсири зарур бўлади.

Соғлом шахслар ўртасидаги GSTπ1 гени Ile105Val полиморфизмининг

тахлили давомида шу нарса аниқландики, 105/lle - аллел частотаси ўзбек
миллатига мансуб шахслар популяциясида 65%, 105/Val да – 35% ни ташкил
этди. БА беморларини генотиплашда 105/Ile-аллели холатларнинг 79,1% да,
105/Val-аллели холатнинг 20,9% да аниқланган. GSTπ1 генининг полиморф
маркер генотиплари частоталари тақсимланишини ўрганишда генотип Ile-
105/105-Ile соғлом шахсларда 30%, гетерозигот холат 70%да аниқланган, Val-
105/Val-105 эса рўйхатга олинмаган. БА беморларда Ile-105/Ile-105-генотип
холатнинг 60,4% да, Val-105/Val-105 генотип -2,4%, Ile-105/Val -генотиплари
37,03% (χ

2

=2,24, р=0,13).

22

GSTπ1 гени полиморфизми ҳақидаги маълумотлар шундан далолат

берадики, бир томондан Ile/Ile-105 генотипининг бошқа тамондан унчалик
юқори кўрсатгичга эга бўлмаган ўзбек популяциясида БА билан оғриган
беморларнинг Ile105 аллели ташиб юрувчанлиги статистик мухим бўлмаган
χ

2

ва Р

Value

кўрсатгичлар ҳақида далолат беради. GSTπ1 гени Ile-105/Val-105

полиморфзмини ўраниш давомида БАнинг аллергик шаклида нобоп
Ile105Ile105 (62%) генотипининг, назоратдаги (30%) шу каби генотип билан
таққослаганда сезиларли тўпланиши содир бўлади (χ

2

=3,49, р=0,06). НБА ва

АрБА гуруҳи беморларида генотип тақсимланишининг хусусиятлари
тахлили шуни кўрсатдики соғлом шахслар назорат гуруҳи билан солиштир-
ганда, GSTπ1 гени полиморфизми аллеллар частотаси ва генотипларида
деярли фарқ йўқлигини кўрсатади.

Шу аснода ўзбек популяциясида касалликнинг аллергик шакли билан

Ile105Ile генотип комбинацияси намоѐн бўлувчи GSTπ1 генининг Ile105/
Val-105 полиморфизмининг ўзига хослиги кўрсатилди.

Жинсни хисобга олган холда ўтказилган GSTπ1 генининг полиморфизми

устида олиб борилган изланишлар шуни кўрсатдики, GSTπ1 генининг Ile105
- аллел частотаси ўғил болалардаги БА (65%) билан солиштирганда
қизлардаги бу кўрсаткич 87% ни ташкил этади ва назорат гуруҳидан ҳам
юқорироқ эканлигини кўрсатди (13%) (χ

2

=3,216, р=0,073). Генотиплар комби-

нацияси шуни кўрсатадики бемор қиз болалар гуруҳида GSTπ1 генининг
Ile105Ile генотипининг гомозигот варианти частотаси назорат гуруҳи соғлом
кишилар кўрсаткичларидан бир мунча юқори (χ

2

=3,936, р=0,047).

Т-лимфоцитлар ва уларнинг субпопуляцияси даражалари фарқи бўйича

изланишларда, уларнинг ўсмирлардаги БАда GSTπ1 гени Ile-105/Val-105
полиморфизми генотипларига қараб фарқи аниқланди, I/I генотипли болалар
гуруҳида бу генотипни сақламаган шахслар гурухига нисбатан CD3

+

, CD8

+

,

CD16

+

кўрсаткичларининг 33,6±0,45%, 15,6±0,88% ва 15,6±0,88% гача

пасайиши аниқланган. Текширилган фарқлар CD3

+

ҳажмига нисбатан Val-

105/Val-105, Ile-105/Val -105 генотипи кўрсаткичлари билан таққослаганда
ҳамда Val-105/Val-105 ва Ile-105/Val-105 генотиплар ўртасида (р<0,01,
р<0,02,

р<0,05),

CD4

+

-ҳужайраларининг

Ile-105/Val-105

(р<0,02)

кўрсаткичига нисбатан, CD8

+

-хужайра Val-105/Val-105 генотипи билан,

ҳамда Val-105/Val-105 ва Ile-105/Val-105 генотиплар ўртасида (р<0,02 иккала
холат учун) ва CD16

+

GSTπ1 гени полиморфизмининг Val-105/Val-105 ва Ile-

105/Val-105 генотиплари билан солиштиргандаги ҳажмига нисбатан
аниқланди. CD3

+

-ҳужайраларининг абсолют кўрсаткичларининг пасайиб

кетиш холати БА Ile-105/Val-105 беморлар гуруҳида, CD4

+

кўрсаткичларнинг

пасайиши Val-105/Val-105 генотипидаги беморлар гуруҳида кузатилди ва
уларда статистик фарқ аникланмади.

CD19

+

-ҳужайралари миқдори фарқларини ўрганишда Ile-105/Val-105 ва

Val-105/Val-105 (р<0,02) генотипли гуруҳлар кўрсаткичлари орасида бир
қанча фарқланишлар аниқланди. БА билан касалланган гомoзигот Ile-105/Ile-
105 ва гетерозигот Ile-105/Val-105 генотипига эга ўсмирларда IgG
даражасини сезиларли ошганлиги рўйхатга олинган. I/I генотипи мавжуд

23

беморларда IgА даражаси Val-105/Val-105 генотипи мавжуд беморларда
караганда кескин камайган (р<0,05). Ўрганилаѐтган генотиплар ўртасида IgМ
концентрациясида мухим фарқ аниқланмади.

Val-105/Val-105 генотипли ўсмирлардаги БАда CD23

+

абсолют ва

нисбий даражаси Ile-105/Ile-105, Ile-105/Val-105 гуруҳларидаги кўрсаткич-
ларига қараганда анча юқори. CD23

+

активацион маркерининг Val-105/Val-

105 генотипи билан нисбий ўртача қиймати беморлардаги Ile-105/Val-105
генотипдан сезиларли фарқ қилади (р<0,05), Val-105/Val-105 генотипи билан
CD23

+

активацион маркери таркибининг абсолют ўртача қиймати

Ile105/Val105 генотипини беморлар гуруҳидан сезиларли ажралиб турган
Val-105/Val-105 индивидлар гурухида CD23

+

миқдори 558,5±32,3га тенг эди,

бу эса GSTπ1 (р<0,05) гени Ile-105/Ile-105 гомозигот гуруҳида 415,15±26,3 га
таққосланганда сезиларли даражада юқори эди. GSTπ1 гени Ile105/Val105
полиморфизмга қараб CD95

+

таркиби камайиши Ile-105/Ile-105 генотипга эга

шахсларда аниқланланган Ile105/Val 105 генотипли шахсли беморларга
нисбатан.

GSTπ1 генининг Ile-105/Val-105 полиморфизмнинг касалликнинг ўзи ва

БА билан касаллангандаги иммун статус ўртасида топилган ассоциациялари
шундан далолат берадики биотрансформация ферменти генлари касаллик
потегенезида БАга ирсий мойилликнинг ривожланишида ва иммун тизим
бузилишларнинг шаклланишида муҳим роль ўйнайди.

Дисертациянинг еттинчи бобида

FcεRIβ генининг 109Т/Т ва GSTπ1

генининг Ile-105/Ile-105 “нобоп генотиплари”ни сақловчи БАли ўсмирларда
полиоксидоний ва циклоферон иммуномодуляторлари қўлланганда олинган
самарадорлик натижалари баѐн этилган.

Полиоксидоний воситасининг БА билан хасталанган ўсмирлар комплекс

даволаш натижаларига кўра берилган терапевтик даволаш схемасида айниқса
CD3

+

нисбий миқдорининг ошиши кўзга ташланди (36,9±0,59% дан

44,2±0,7% гача, р<0,01). Ишлатилган даволаш усулида Т-лимфоцитлар
субпопуляциясига нисбий CD4

+

, CD8

+

ҳужайралари миқдорига нисбатан

сезиларли ошиши билан характерланади. Хусусан CD4

+

19,6±0,239% дан

27,6±0,3% гача, (р<0,01), CD8

+

ҳужайраларининг умумий сони (17,2±0,32%

дан 23,1±0,4% гача р<0,01) сезиларли ошди. В-лифоцитлар сони 18,4±0,20%
дан 21,6±0,9% гача ўсди. CD95

+

таркиби ҳам сезиларди ошди (17,3±0,43%

дан 23,2±0,5% гача р<0,01). Комплекс даволашга полиоксидонийнинг
киритилиши нафас олиш йўлларида микробга қарши ва антитоксик ҳимоя
омилларининг энг асосийларидан бири бўлган (17,2±0,32% дан 23,1±0,4%
гача р<0,01) IgА концентранциясининг сезиларли ошиши ва IgM, IgG
даражаси ошиш тенденцияси кузатилди.

Тадқиқот мақсадига эришиш учун БА беморларининг ўсмирлик даврида

умумий даволашда интерферон синтетик индуктори циклоферондан
фойдаланишнинг клиник иммунологик самарадорлиги баҳоланди.

Циклоферондан фойдаланилгандан сўнг иммун ҳолати кўрсаткичлари-

нинг яхшиланганлиги қайд этилди. БА билан оғриган ўсмирларни комплек
даволашда циклоферондан фойдаланганлиги CD3

+

(36,9±0,59% дан

24

41.7±0.4% гача) ҳужайраларининг бошланғич кўрсаткичларига нисбатан
ошганлиги қайд этилди. Иммунорегулятор лимфоцитлар CD4

+

(19,6±0,3%

дан 24,2±0,3% гача) ва CD8

+

ҳужайралари (17,2±0,32% дан 20,2±0,3% гача)

ҳужайралари ошиб борди. CD95

+

фаоллиги Т-ҳужайра маркерларини олиб

юрувчи, CD23

+

В-лифоцитлар маркерларини олиб юрувчи фаол

лифоцитларининг бироз ошганлиги белгиланди. Иммуноглобулинлар синфи
IgА, IgG ва IgMларнинг фаоллашуви тенденцияси кузатилди.

Шундай қилиб БАга чалинган FcεRIβ гени 109Т/Т генотипли ва GSTπ1

генининг Ile-105/Ile-105 генотипли ўсмирлар иммуномодуллаштирувчи
воситалар - полиоксидоний ва циклоферон билан комплекс даволанишдан
кейин кўпгина клиник функционал кўрсаткичлар ва иммунореактивлик
кўрсатгичларининг яхшиланганлиги ва касаллик ремиссияси бошланиши
кузатилди.

БА

профилактикасини

баҳолаш

иммуномодуляр

воситалар

полиоксидоний ва интерферон индуктори - циклоферон билан 12 ой
давомида даволанган беморларни кузатиш орқали амалга оширилди. Клиник
кўрсаткичлар мониторингидан кейин шундай хулосага келдикки, агар 1
йилда базис геносенсибилизацион терапия ўртача кўрсаткичларнинг сезларли
ўзгаришларига эришилмаган бўлса циклоферон билан даволанган беморлар
бошланғич кўрсчаткичлари билан таққосланганда бир йилда касаллик авж
олиш частотаси камайганлиги кузатилди. Циклоферон билан даволангандан
кейин БА авж олиш частотаси 1 йилда 6,9±0,4 мартадан 4,3±0,5 га тушганли-
ги кузатилади.

Полиоксидоний қабул қилган беморларни текшириш жараѐнида

касалликнинг ривожланиши сезиларли даражада пасайганлиги белгиланди.
Полиоксидоний воситаси билан иммуномодуляр қабул қилган беморларда
йил давомида касаллик хуружи 3-4 маротаба кузатилди, бу кўрсатгич
даволаш курсини ўтказилгунига қадар бир йилда 7 маротаба (р<0,05)
касаллик хуружи кузатилган эди. Касалларда авж олиш ўртача давомийлиги
полиоксидоний олган беморлар иммуномодулятор олишдан олдин
ҳисобланган кўрсатгичга нисбатан яққол фарқ кузатилди.

Касаллик белгилари (харорат, интоксикация белгилари, ринорея, йўтал,

физикал йўл билан аниқланувчи ўпкадаги ўзгаришлар)нинг давомийлиги ва
аѐнлашуви комплек даволашда полиоксидоний ва циклоферон қабул қилган
беморларда дори воситаларининг қабул қилинганига қадар сезиларли
фарқига эга эди. Полиоксидоний қабул қилган БА бемор ўсмирларда бу
кўринишлар ўртача 2,21±1,12, 2,6±1,11, 3,81±1,20, 4,6±1,19, 3,18±1,25 кун
давом этган, циклоферон қабул қилганларидан кейин бу кўринишлар ўртача
3,2±1,14, 3,4±1,16, 4,2±1,131, 7,8±2,22, 4,9±1,13 кун давом этди. Ўсмирлик
ѐшида бронхиал астма билан хасталанганлар базис терапиясига циклоферон
ва полиоксидоний иммуномодуляторларини қўшиш ўпкада патологик
жараѐнини бартараф этишни тезлаштирилишига олиб келди.

Шу тариқа қўлга киритилган натижалар шундан далолат берадики

циклоферон ва полиоксидоний иммуномодуляторлари билан ўтказилган
носпецифик иммунотерапия курслари FcεRIβ, GSTπ1генларининг 109С/Т ва

25

Ile-105/Ile-105 генотиплари бўлган беморларида касаллик авж олиш
частотасини 2-3 баробар пасайтиради. Ўтказилган хисобларга қараганда
позитив

кўрсатгичлар

полиоксидоний

воситасидан

фойдаланилган

беморларда кўпроқ сезиларли натижа берди, бу эса даволаш схемаларига шу
дори воситасини киритишни тақозо қилади.

Ўтказилган чуқур тадқикотлар асносида БА кўп омилли модели ишлаб

чикилди. Шуни таъкидлаш керакки, бу ишланма кўриб чиқилган генлар
патологик фенотипларнинг иммун жавоби дисрегуляцияси, ксенобиотиклар
детоксикацияси

ва

рецептор

механизмлар

аллергик

яллиғланиш

жадаллашишида ва хусусан БА ривожланишида муҳим рол ўйнайдиган
жараѐнларга янгича назр солишга имкон берди.

Бронхиал астма ташхиси верефикациясига йўналтирилган клиник-

функционал, иммунологик ва генетик тадқиқотлар асосида биз томондан
ташхис тадбирларининг алгоритми ишлаб чиқилди, унга кўра аллергик
текширишда 3 босқичли ѐндошув бажарилиши лозим.

1-босқичда сўровнома ўтказиб, берилган индивиддаги БА тахмини

хақида хулоса қилинганидан сўнг танланган шахслар контингенти орасида
бронходилатацион синама ўтказиш орқали бронхиал обструкция қайтиши
тадқиқ этилади. Ижобий натижаларда биз келтирган босқичда БАнинг
мавжудлиги тахмини билан чекланиш мумкин. Ташхис тадбирларининг
иккинчи босқичида иммун бузилишининг хужжатли ўзгаришлари
аниқланганида иммун тизимининг ҳам ҳужайра, ҳам гуморал буғунида ва IL-
6, ИНФ-γ хосил бўлиш даражасини аниқланганида БА ташхиси ўрнатилади
ва касалликнинг патогенетик шакллари аниқланади. Учинчи босқич тестлари
БА ташхиси аниқланганини тасдиқловчи генотипларни аниқлашга ѐрдам
беради.

Ўтказилган скрининг, клиник функционал, иммунологик ва генетик

изланишлар

ўсмирларда

БА

профилатика

тадбирларини

ўтказиш

ѐндошувларини аниқлаш имконини берди.

ХУЛОСА

1. Арид зонада истиқомат қилувчи ўсмир ѐшдаги шахсларда «бронхиал

астма» касаллиги структураси ва учраш частотаси белгиланди. Кайд этилган
патология 9,6% текширилган ўсмирларда руйхатга олинди ва касаллик қиз
болаларда ўғил болаларга нисбатан кўпроқ учради. Касаллик структурасида
интермитирловчи ва енгил персистирловчи шакллари кўпроқ учради

2. Арид зонада яшовчи ўсмирлар орасида БА клиник кечишининг ўзига

хослиги аниқланди, бунда ўпка бронхиал дарахтининг зарарланиши бошқа
орган ва тўқималарнинг аллергик жараѐнлари билан биргаликда учраш
частотаси юқорилиги кўрсатилмоқда, жумладан, 73,9% АР билан, 53,7% АК
билан, 16,6% АтД билан ва 14% Квинке шиши/эшак еми билан биргаликда
учради.

3. Ўсмир ѐшдаги БА касаллар популяцияси текширилганда, уларда

иммун тизимнинг сезиларли даражада намоѐн бўладиган ҳужайра (CD3

+

,

26

CD4

+

, CD8

+

, CD16

+

), гуморал (CD19

+,

IgA, IgG, IgM) иммунитет ва

активацион маркерлар (CD23

+

, CD95

+

) кўрсаткичининг дефицити аниқланди.

Ўсмир ѐшдаги БА касалларда иммун мақомининг ўзига хос томонлари бўлиб,
иммунореактивлик бузилиш чуқурлиги кичик ѐшдаги гуруҳда яққол намоѐн
бўлди.

4. Ўсмир ѐшдаги БА касалларда иммун системада ҳужайралараро ўзаро

таъсирда яққол ўзгаришлар: Тh2-ҳужайралар томонидан секретирланадиган
ва иммуноглобулинлар ишлаб чиқиши ҳамда антителогенез жараѐнини
регуляцияловчи IL-6 маҳсулининг ишончли равишда ортиши ва бунинг акси
– Тh1-ҳужайралар регулятори INF-



цитокини камайиши содир бўлади.

5. Периферик қондаги IL-6 ва INF-γ цитокинлар миқдори касалликнинг

патогенетик варианти билан ўзаро боғлиқлиги аниқланди. Ўсмир ѐшдаги БА
аллергик клиник-патогенетик вариантида қон зардобида INF-γ ишлаб чиқиш
даражаси камлигини кўрсатди. БА инфекцион формаси билан хасталанган
ўсмирлар периферик қонида IL-6 ишлаб чиқиши ортди.

6. Ўзбек этносига тегишли ўсмирларда БА аллергик шаклининг

ривожланиши юқори ҳавф маркерлари аллел FcεRIβ-109Т ва генотип FcεRIβ-
109Т/Т, паст ҳавф маркерлари FcεRIβ-109С ва FcεRIβ-109С/С ҳисобланади.
Ўзбек популяциясида БА наслий мойиллик бўлганда FcεRIβ-109Т/Т генотип
ва FcεRIβ-109Т аллелнинг юқори боғланиш даражаси аниқланди.

7. Ўзбек миллатига мансуб қизларда БА ривожланиш ҳавфи GSTπ1 гени

полиморф локусининг Ile-105 аллел ва Ile-105/Ile-105 генотипи билан
ассоциацияси аниқланди. Ile-105 аллел ва Ile-105/Ile-105 генотип ўзбек
популяциясида БА аллергик формаси ривожланишига олиб келади.

8. БА билан касалланган ўсмирлар комплекс давосига циклоферон ва

полиоксидонийнинг киритилиши иммункоррегирловчи таъсир кўрсатиб,
базис терапия самарадорлигининг ортишига олиб келди. Иммунмодулятор-
ларнинг профилактик самарадорлиги текширилганда, полиоксидоний олган
беморлар гуруҳида ижобий кўрсаткичларга эришилди, бу эса ўсмирлар БА
комплекс даво ва профилактикаси схемасига полиоксидонийни киритиш
аҳамиятлилигини тасдиқлади.

27

НАУЧНЫЙ СОВЕТ 16.07.2013.Tib.16.01

при ИНСТИТУТЕ

ИММУНОЛОГИИ АКАДЕМИИ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН и

ТАШКЕНТСКОЙ МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ по ПРИСУЖДЕНИЮ

УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА НАУК

____________________________________________________

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ

ЗИЯДУЛЛАЕВ ШУХРАТ ХУДАЙБЕРДИЕВИЧ

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К

ОПТИМИЗАЦИИ ЛЕЧЕНИЯ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У

ПОДРОСТКОВ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

(медицинские науки)

АВТОРЕФЕРАТ ДОКТОРСКОЙ ДИССЕРТАЦИИ

Ташкент – 2014

28

Тема докторской диссертации зарегистрирована в Высшей аттестационной комиссии

при Кабинете Министров Республики Узбекистан за № 20.02.2014/В2013.2.Tib1.

Докторская диссертация выполнена в Институте иммунологии Академии наук Республики

Узбекистан и Самаркандском государственном медицинском институте.

Полный текст докторской диссертации размещен на веб-странице научного совета

16.07.2013.Tib.16.01

при Институте иммунологии Академии наук Республики Узбекистан и

Ташкентской медицинской академии по адресу www.immunology.uz

Автореферат диссертации на трех языках (узбекский, русский, английский) размещен на

веб-странице по адресу www.immunology.uz и информационно-образовательном портале
“ZiyoNet” по адресу www.ziyonet.uz

Научный

консультант:

Хаитова Назира Мусаевна

доктор медицинских наук, профессор

Официальные

оппоненты:

Назаров Азадбек Ахмедович

доктор медицинских наук, профессор

Убайдуллаев Сагдулла Абдуллаевич

доктор медицинских наук, профессор

Бабаходжаев Сирожиддин Носирович

доктор медицинских наук, профессор

Ведущая

организация:

Государственный научный центр «Институт иммунологии»
Федерального медико-биологического агентства России,
Москва

Защита состоится «___» __________ 2014 г. в _____часов на заседании научного совета

16.07.2013.Tib.16.01

при Институте иммунологии Академии наук Республики Узбекистан и

Ташкентской медицинской академии по адресу: 100060, г. Ташкент, ул. акад. Я. Гулямова, 74.
Тел./факс: (99871) 233-08-55, е-mail: immunologiya@qip.ru.

Докторская диссертация зарегистрирована в Информационно-ресурсном центре Института

иммунологии Академии наук Республики Узбекистан за №01, с которой можно ознакомиться в
ИРЦ (100060, г. Ташкент, ул. акад. Я. Гулямова, 74. Тел./факс: (99871) 233-08-55)

Автореферат диссертации разослан «___» ________ 2014 года.
(протокол рассылки № от ______________ 2014 года.).

Т.У. Арипова

Председатель научного совета по присуждению

учѐной степени доктора наук, д.м.н., профессор

З.С.Камалов

Ученый секретарь научного совета по присуждению

учѐной степени доктора наук, д.м.н.

А.А.Батирбеков

Председатель научного семинара при научном совете

по присуждению учѐной степени доктора наук,

д.м.н., профессор

29

АННОТАЦИЯ ДОКТОРСКОЙ ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность и востребованность темы диссертации.

Бронхиальная

астма (БА) является одним из наиболее распространенных и тяжелых
заболеваний, которым в мире страдают от 3 до 12% детского населения
земного шара. Доля подростков, страдающих бронхиальной астмой,
составляет одну треть всех детей с этим заболеванием. Высокие цифры
распространенности БА у подростков, особенности течения заболевания,
связанные с возрастными аспектами функционирования эндокринной и
иммунной систем подростков, обусловливающие трудности, которые
возникают в ходе диагностического процесса, выдвигают на первый план
необходимость поиска принципиально новых подходов к диагностике и
лечению данного заболевания.

Известно, что ключевое значение иммунных механизмов в патогенезе

подавляющего большинства случаев БА является реальным и неоспоримым
фактом. В настоящее время существенный интерес исследователей с позиций
участия в патогенезе аллергических заболеваний, в частности БА, наряду с
IL-4 и IL-13 вызывает ряд других (IL-6, IL-8, IL-10, IL-5, INF-α, и INF-γ)
иммунорегуляторных цитокинов.

Наследственная предрасположенность играет важную роль в развитии

аллергических заболеваний. В настоящее время получены данные о связи с
бронхиальной астмой и ассоциированными с данным заболеванием
признаками полиморфизма примерно 150 генов. Значимым претендентом на
роль основного гена предрасположенности к БА является ген, кодирующий
β-цепь высокоаффинного рецептора IgE. Взаимодействие повышенного
уровня антиген-специфичного IgE с FcεRIβ играет центральную роль в
патогенезе аллергической астмы. Особенно привлекательным геном-
кандидатом БА также является один из генов ферментов биотрансформации -
GSTπ1, кодирующий глутатион S-трансферазу π1 и экспрессирующийся
почти исключительно в легочной ткани. Этот ген расположен в локусе 11q13,
для которого неоднократно показано сцепление с атопическими признаками.
Накопленные в литературе данные говорят о связи полиморфизма генов
FcεRI, GSTπ1 с различной аллергической патологией.

С этих позиций изучение иммунологических и генетических

механизмов патогенеза данного заболевания для построения рациональных
лечебно-профилактических мероприятий подчеркивает актуальность данного
диссертационного исследования.

С первых дней независимости в республике успешно реализуются

целевые Государственные программы, направленные на реформирование
системы здравоохранения. В результате целенаправленного осуществления
медико-организационных

и

научно-исследовательских

мероприятий,

направленных на эффективную диагностику, профилактику и лечение БА
среди подростков, достигнуты определенные успехи в лечении этого
заболевания в стране. Тем не менее, в настоящее время проблемы ранней
диагностики

и

разработки

эффективных

программ

лечебно-

30

профилактических мероприятий среди подростков с БА остаются одним из
важных вопросов современного здравоохранения. Данная научно-
исследовательская работа выполнена в рамках выполнения задач,
поставленных Постановлением Кабинета Министров Республики
Узбекистан

«О

дополнительных мерах по укреплению здоровья женщин и

подрастающего поколения» от 25.01.2002 г. за №32. В этом плане
необходимость углубления полученных сведений о состоянии клеточного и
гуморального

звеньев

иммунитета

среди

подростков,

выяснение

патогенетической информативности иммуногенетических исследований при
БА являются одним из важных критериев востребованности темы
диссертации.

Соответствие исследования приоритетным направлениям развития

науки и технологий Республики Узбекистан.

Настоящая работа выполнена

в соответствии с приоритетными направлениями развития науки и
технологии Республики Узбекистан ГНТП-9.«Разработка новых технологий
профилактики, диагностики, лечения и реабилитации заболеваний человека».

Обзор международных научных исследований по теме диссертации.

Научно-исследовательские работы, направленные на сохранение здоровья и
профилактику развития аллергических болезней и, в частности,
бронхиальной астмы среди детей и подростков остаются актуальными для
любой страны, поскольку по данным программы ВОЗ "International Study of
Asthma and Allergy in Children" во многих странах мира десятая часть
детского населения страдает бронхиальной астмой, при этом за последние 20
лет в промышленно развитых странах распространение этого заболевания у
детей и подростков возросло более чем в 3 раза. Следовательно, большое
внимание на совершенствование лечения и профилактики бронхиальной
астмы у подростков уделяется со стороны ВОЗ, зарубежных научных
центров и высших учебный заведений.

Изучению иммунологических особенностей бронхиальной астмы, как в

нашей стране, так и за рубежом посвящено большое количество
исследований, которые не оставляют сомнения, что именно иммунная
система играет ключевую роль как в развитии, так и в поддержании данной
патологии. Разработка концепции иммуноцитокиновой сети - системы
гуморальных посредников между иммунокомпетентными и иными клетками,
вовлеченными

в

иммунные

реакции

при

бронхиальной

астме,

осуществляющими последовательную смену этапов иммунологического
ответа, кооперацию между факторами неспецифической защиты и
иммунитета, реакции ранней и поздней фазы воспаления, а также
переключение классов синтезируемых антител - продолжает подтверждаться
многочисленными

исследованиями.

Роль

наследственной

предрасположенности в развитии бронхиальной астмы у детей и подростков
общеизвестна и, сегодня, благодаря успехам молекулярной генетики и
развитию идеологии позиционного и кандидатного картирования, появилась
возможность решения этой проблемы в терминах хромосомной локализации

31

и описания полиморфизма конкретных генов, ответственных за
формирование предрасположенности к бронхиальной астме.

Степень изученности проблемы.

Несмотря на огромное внимание,

уделяемое проблеме БА, меры эффективной диагностики, лечения и
профилактики данной патологии в подростковом возрасте разработаны
недостаточно.

Не

изучены

в

достаточной

мере

особенности

распространенности и клинического течения БА у подростков, а также
диагностические возможности исследования вентиляционной функции
легких с проведением различных тестов. Весьма противоречивы имеющиеся
данные об изменениях иммунного статуса и активационных маркеров,
вовлеченных в аллергическое воспаление при БА у подростков. Не уточнены
диагностическое и дифференциально-диагностическое значение определения
уровня цитокинов, а именно IL-6, INF-γ, их регуляторного действия на
иммунокомпетентные клетки, участвующие в иммунном ответе при БА. В
отечественных работах не проводилось исследование генов FcεRIβ, GSTπ1,
определяющих структуру наследственной предрасположенности к БА.

Все это является основанием для проведения работы, посвященной

исследованию основ формирования БА в подростковом возрасте, отработке
эффективных программ ранней диагностики, лечения и профилактики
бронхиальной астмы, что и определяет актуальность и приоритетность
поставленной проблемы.

Связь

диссертационного

исследования

с

планом

научно-

исследовательских работ

отражена в следующем проекте:

государственный научно-технический проект ITD - 1109-11.3-0-13801

«Разработка новых технологий диагностики, дифференцирован-ной терапии,
профилактики и иммунореабилитации наследственно - обусловленных форм
бронхиальной астмы в подростковом возрасте» (2009-2011 гг.).

Цель исследования

изучить иммунологические и генетические

механизмы патогенеза БА у подростков и сформировать на этой основе план
рациональных диагностических и лечебно-профилактических мероприятий
при данной патологии.

Для достижения цели работы поставлены следующие

задачи

исследования

:

установить особенности клинического течения БА в популяции

подростков, проживающих на территории Самаркандской области, на ранних
этапах патологического процесса в бронхолегочной системе.

изучить особенности состояния клеточного и гуморального звеньев

иммунитета, а также активационных маркеров при БА в подростковом
возрасте путѐм определения иммунофенотипа лимфоцитов в периферической
крови.

изучить

уровень

продукции

иммунорегуляторных

цитокинов

интерлейкина-6 и интерферона-γ и установить их патогенетическую
информативность при БА среди лиц подросткового возраста.

установить особенности распределения частот аллелей и генотипов

полиморфных вариантов генов FcεRIβ и GSTπ1 в популяции лиц узбекской

32

национальности, страдающих БА, в сравнении со здоровой частью
популяции.

изучить

клинико-иммунологические

аспекты

эффективности

иммуномодулирующей

терапии

с

использованием

препаратов

полиоксидоний и циклоферон у больных БА в подростковом возрасте.

на

основе

проведенных

исследований

разработать

модель

многофакторного формирования бронхиальной астмы и выработать
оптимальный алгоритм диагностики, лечения, профилактики у подростков с
данным патологическим состоянием.

Объектом исследования

явились 4094 подростка, проживающих в

Самаркандском вилояте Республики Узбекистан.

Предмет исследования

-

венозная кровь и сыворотка для

количественного определения основных показателей иммунного и
цитокинового статуса, проведения генотипирования полиморфных вариантов
генов-кандидатов, определяющих наследственную подверженность к БА, а
также клинико-иммунологическая эффективность применения препаратов
циклоферон и полиоксидоний у больных.

Методы

исследования.

Были

использованы

скрининговые,

общеклинические, функциональные, иммунологические, генетические и
статистические методы исследования.

Научная новизна

диссертационного исследования заключается в

следующем:

предложено внедрение в работу врачей подростковых диспансеров

уровневого подхода тестирования, позволяющего существенно повысить
выявляемость БА в подростковом возрасте и оптимизировать лечебно-
профилактические мероприятия в группах риска;

впервые определены своеобразные характеристики количественных

параметров иммунного статуса в контингенте больных БА подросткового
возраста и предложены соответственные нормативные и рекомендательные
документы для здоровой части популяции подростков;

впервые представлена комплексная оценка цитокинового профиля

сыворотки крови при БА у подростков. Установлены особенности продукции
иммунорегуляторных цитокинов IL-6 и INF-γ и их патогенетическая и
регуляторная информативность при БА среди лиц подросткового возраста;

впервые проведен анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного варианта гена FcεRIβ и гена GSTπ1 среди больных с
различными фенотипическими вариантами БА и здоровых индивидов
узбекской национальности, в результате которого выявлены маркеры
повышенного риска или, напротив, резистентности к развитию БА у
подростков узбекской этнической принадлежности;

разработаны

алгоритмы

поэтапной

диагностики,

лечения

и

профилактики БА в подростковом возрасте с точки зрения раскрытых
важнейших моментов патогенеза заболевания, позволяющие выстроить
рациональную последовательность диагностического поиска, направленного

33

на верификацию диагноза и целесообразного построения профилактических
мероприятий.

Практические результаты

исследования заключаются в следующем:

при диагностике бронхиальной астмы у подростков целесообразно

использовать разработанный алгоритм, предполагающий 3-х уровневый
подход к процессу диагностики, включающий в себя использование
современных анкетных опросников и тестов, направленных на выявление
синдрома

обратимой

бронхиальной

обструкции,

углубленное

иммунологическое обследование с оценкой продукции важнейших
иммуноцитокинов и исследование генетических маркеров повышенного
риска развития астмы;

полученные иммунологические данные: сопряженный иммунодефицит

клеточного и гуморального звена у подростков с бронхиальной астмой -
необходимо учитывать при разработке лечебно-профилактических программ
с целью назначения иммуномодулирующих препаратов в комплекс базисной
терапии бронхиальной астмы;

в качестве дополнительных дифференциально – диагностических

критериев клинико-патогенетического характера заболевания у подростков с
бронхиальной астмой возможно использование показателей содержания
цитокинов IL-6, ИФН-γ в сыворотке крови;

полученные результаты генетического тестирования, при котором

выявлены маркеры повышенного риска развития БА (генетический маркер
HLA-В40, генотип FcεRIβ-109T/T и аллель FcεRIβ-109T, генотип GSTπ1-Ile-
105/Ile-105 и аллель GSTπ1-Ile-105) следует рассматривать как свидетельство
клинической целесообразности предиктивного генетического тестирования,
позволяющего проводить досимптоматическую диагностику наследственной
предрасположенности к БА и организовать эффективные меры профилактики
данного заболевания;

высокая

терапевтическая

и

профилактическая

эффективность

иммуномодуляторов полиоксидоний и циклоферон, отсутствие осложнений и
побочных реакций при их применении позволяют рекомендовать в
практическую

деятельность

врачей-аллергологов

назначение

комбинированной иммуномодулирующей терапии больных БА подростков.

Достоверность полученных результатов

обосновывается тем, что

все

цифровые данные иммунологических и генетических исследований
обработаны с использованием современных компьютерных технологий.

Теоретическая

и

практическая

значимость

результатов

исследования.

Полученные данные о недостаточном уровне диагностики

бронхиальной астмы у подростков позволяют более рационально
организовать социально-медицинскую помощь больным этой возрастной
группы в Самаркандском вилояте. Предложено использование анкетирования
подростков врачами первичного звена здравоохранения при проведении
периодических медицинских профилактических осмотров с последующим
функциональным тестированием, направленным на выявление нарушений

34

вентиляционной функции легких, и, при необходимости, исследование
обратимости бронхиальной обструкции в тесте с бронхолитиком.

Выявленные нарушения в иммунном статусе у подростков с БА,

характеризующиеся снижением показателей как клеточного, так и
гуморального звена иммунитета, указывают на необходимость учета их при
диагностике иммунодефицитных состояний и оптимизации лечебно –
реабилитационных мероприятий у подростков с БА.

Результаты работы имеют значение для практической медицины,

поскольку раскрывают существенные патогенетические механизмы развития
клинико-патогенетических форм БА у подростков. Установлены особенности
продукции IL-6 и INF-γ в зависимости от патогенеза заболевания,
выявленные параметры внедрены в клиническую практику как
дополнительные

дифференциально-диагностические

критерии

направленности патогенетического процесса при БА в подростковом
возрасте.

Результаты диссертационной работы по исследованию 109C/Т

полиморфного варианта гена FcεRIβ, Ile105Val полиморфного варианта гена
GSTπ1 вносят существенный вклад в общее представление о генетических
основах предрасположенности к БА. Данные диссертационной работы могут
послужить основой для последующих исследований по определению
генетических факторов риска развития БА и разработки адекватных лечебно-
профилактических мероприятий. Результаты исследования также могут быть
использованы в образовательном процессе медицинских и медико-
биологических ВУЗов.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследования

оформлены в виде методических рекомендаций «Вопросы ранней
диагностики бронхиальной астмы у подростков», «Возрастные аспекты
регуляции иммунитета» и рационализаторских предложений «Метод
молекулярно-генетического тестирования по полиморфному локусу гена
FcεRIβ для диагностики бронхиальной астмы в подростковом возрасте»,
«Способ

медикаментозной

иммунокоррекции

вторичного

иммунодефицитного состояния при БА в подростковом возрасте препаратом
полиоксидоний», которые внедрены в практическое здравоохранение
(Заключение №93/106 от 18.10.2011 года и №1 от 12.03.2014 года
Министерства здравоохранения Республики Узбекистан).

Апробация работы.

Основные положения, изложенные в диссертации,

представлены и доложены 14 научно-практических конференциях, в том
числе 8 международных конгрессах, конференциях, в частности, на IX

International Congress on Cell Biology & XX

Annual Conference of the Korean

Society for Molecular and Celluar Biology (2008, Seoul), XIV Congress of the
Asian Pacific Society of Respirology & 3rd Joint Congress of the APSR/ACCP
(2009, Seoul), XII Asian-Pacific Congress of Clinical Biochemistry (2010, Seoul),
XIII Annual Congress Turkish Thoracic Society (2010, Istanbul), European
Respiratory Society Annual Congress (2010, Barcelona), «Завадские чтения»
(2011, Ростов-на-Дону), «Здравоохранение Российской Федерации, стран

35

СНГ и Европы» (2011, Москва), «Медицина: новое в теории и клинической
практике» (2011, Шаржа), XVII международном конгрессе по реабилитации в
медицине и иммунореабилитации и V всемирном форуме по астме и
респираторной аллергии (2012, Нью-Йорк) и 6 республиканских, в частности,
«Достижения и перспективы профилактики, диагностики, лечения и
реабилитация при заболеваниях внутренних органов», (2009, Ташкент),
«Клиническая иммунология, иммуногенетика – междисциплинарные
проблемы» (2010, Ташкент), VII съезд фтизиатров и пульмонологов
Узбекистана (2010, Ташкент), «Актуальные вопросы медицины» (2010,
Самарканд), «Актуальные проблемы медицины» (2012, Андижан),
заседаниях ученого совета Института иммунологии Академии наук
Республики Узбекистан и научного семинара при научном совете (2013,
Ташкент).

Опубликованность результатов.

По теме диссертации опубликовано

32 научных работ, из них 7 в зарубежных журналах.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения,

пяти глав собственных исследований, выводов, списка цитированной
литературы, текста на 189 страницах, 54 таблиц и 6 рисунков.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Во введении

обоснована актуальность диссертационной работы,

сформулированы цель и задачи исследования, основные положения,
выносимые на защиту, приводится научная новизна и научно-практическая
значимость результатов, приведены сведения об апробации и опубликован-
ности результатов работы, объеме и краткой структуре диссертации.

В первой главе

диссертации представляется обзор литературы,

состоящий из пяти подглав, в которых приводятся сведения о современном
состоянии проблемы БА в популяции подростков; иммунологических
механизмах патогенеза и участии цитокинов в иммунорегуляции при БА у
подростков; изучении молекулярно-генетических основ некоторых генов,
определяющих развитие и предрасположенность к БА; современных
представлениях применения иммунофармакопрепаратов при БА.

Во второй главе

диссертации описаны материалы и методы

исследования. В соответствии с целями и задачами работы проведено
комплексное обследование 4094 подростков в период с 2007 по 2011 гг.
Программа научного поиска была осуществлена на базе Самаркандского
городского подросткового диспансера и отделения аллергологии-
пульмонологии Самаркандского городского медицинского объединения им.
М.Н. Хаитова. Согласно схеме, утвержденной на международном
симпозиуме по возрастной периодизации в пубертатном возрасте, выделяли
подростковый (мальчики - от 13 до 16 лет; девочки - от 12 до 15 лет) и
юношеский период (юноши - от 17 до 21 года; девушки - от 16 до 20 лет).
Клиническая верификация диагноза в диссертационной работе проводилась в

36

соответствии с международной классификацией ВОЗ (Х-пересмотр, МКБ-
10) и по диагностическим критериям Global initiative for asthma (GINA, 2006).

Обследование

включало

анкетирование

по

выявлению

распространенности бронхиальной астмы среди подростков с последующей
выборкой

подростков

для

клинико-функционального

обследования

совместно с врачами-специалистами подросткового диспансера. Среди
обследованного контингента мальчиков в подростковом возрасте было -
1224, в юношеском - 766, девочек в подростковом возрасте было - 1318, в
юношеском - 729. Исследуемая популяция города Самарканда составила -
2326, Ургутского района - 1711 лиц пубертатного возраста. При подозрении
на БА проводились общепринятые лабораторные и инструментальные
методы диагностики, включающие исследование общего анализа крови с
подсчетом

лейкоцитарной

формулы,

общий

анализ

мокроты,

рентгенографию органов грудной клетки, электрокардиографию, а также
исследование функции внешнего дыхания (ФВД).

Углубленные

иммунологические

исследования

проводились

в

контингенте 237 больных БА и здоровых лиц подросткового возраста, у
которых в ходе исследований изучены показатели иммунного (CD3

+

, CD4

+

,

CD8

+

, CD16

+

, CD19

+

, CD23

+

, CD95

+

, IgA, IgM, IgG) и цитокинового статуса

(IL-6 и INF-γ).

Для молекулярно-генетического исследования в работе использованы

образцы ДНК 204 больных БА узбекской национальности в возрасте от 12 до
21 лет, отобранных в ходе исследования. Контрольную группу составили 56
практически здоровых лиц без клинических проявлений аллергических,
аутоиммунных и инфекционно-воспалительных заболеваний, сопоставимых
по полу и возрасту с больными и не имеющих отягощенной
наследственности по атопическим заболеваниям.

Среди страдающих БА пациентов 57 подросткам в период пребывания в

стационаре проводилась неспецифическая иммунотерапия препаратами
полиоксидоний и циклоферон в комплексе базисной терапии. В соответствии
с положением GINA подростки с БА в качестве базисной терапии получали
кромогликат натрия - интал 5 мг, антигистаминные (зиртек), ИГКС -
флютиказона пропионат 50/100 или беклазон-эко легкое дыхание 100/250, в
качестве бронходилятатора получали β

2

-агонист короткого действия

(сальбутамол

или

фенотерол).

Профилактическая

эффективность

оценивалась по клиническим показателям не ранее, чем через год после
проведенного курса иммуномодулирующей терапии.

Для изучения распространенности БА в диссертационной работе

использован анкетный скрининг с использованием вопросника European
respiratory society. Специализированная анкета одобрена и рекомендована
исследователям для проведения эпидемиологического скрининга БА.

Вентиляционная функция легких изучалась в покое на спирометре

«SPIROSIFT SP-5000» (Fukuda DENSHI, Япония) с автоматической
обработкой параметров. Бронходилятационный тест проводили по

37

общепринятой методике. Обратимость бронхиальной обструкции считали
положительной при приросте ОФВ

1

на 15% и более.

Анализ полиморфного варианта гена FcεRIβ и GSTπ1 осуществляли

методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на
амплификаторе и ПДРФ-анализом с помощью праймеров Forward – 5'-GTG
GGG ACA ATT CCA GAA GA-3' Reverse – 5'-CCG AGC TGT CCA GGA ATA
AA-3'; Forward – 5'-GTA GTT TGC CCA AGG TCA AG-3' Reverse – 5'-AGC
CAC CTG AGG GGT AAG-3' и последующей детекцией рестрикционных
фрагментов с помощью электрофореза в 6% полиакриламидном геле. HLA-
фенотип устанавливали в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте
(Terasaki P. I.) c использованием панели HLA-антисывороток Санкт-
Петербургского НИИ гематологии и переливания крови.

Для тестирования лимфоцитов и их субпопуляций применяли

моноклональные антитела дифференцировочных и активационных антигенов
СD3

+

, CD4

+

, CD8

+

, CD16

+

, CD19

+

, CD23

+

, CD95

+

. Концентрацию

сывороточных иммуноглобулинов: IgG, IgM, IgA определяли методом
радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини (Mancini et al.).
Определение уровня INF-Γ и IL-6 в сыворотке крови проводили методом
иммуноферментного анализа с использованием тест-системы для ИФА
«ИФА- INF-Γ - IL-6» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия, 2009).

Статистическая обработка результатов проводилась по программам,

разработанным в пакете EXCEL с использованием библиотеки
статистических функций с вычислением среднего арифметического значения
(М), ошибки среднего арифметического значения (m), критерия Стъюдента
(t), вероятность ошибки (р), коэффициента корреляции Пирсона (r). При
генетических исследованиях вычисляли критерий - χ

2

, Р

Value

, RR-

относительный риск, EF- показатель этиологической фракции и PF -
показатель превентивной фракции.

В третьей главе

диссертации освещены результаты

анкетирования

учащихся лицеев и колледжей для определения распространенности и
особенностей клинического течения БА в популяции подростков, которое
проводилось в двух зонах Самаркандского вилоята: в городе Самарканд (4
лицея, 2 колледжа) и Ургутском районе (3 колледжа, 3 лицея). На основании
анализа анкетных данных была сформирована группа лиц, у которых имелся
синдром обструкции в течение последних 12 месяцев. По нашим данным,
таких лиц было 388, что составило 9,6% от всех опрошенных. Девочки
составили 59,1% (229 человек), мальчики-40,9% (159 человек). Как видно, БА
среди девочек, проживающих в исследованном регионе, встречалась чаще,
чем среди мальчиков - подростков. В юношеском возрасте больных
мальчиков было также меньше, чем девочек - подростков. Основанием для
проведения исследова-ния в двух зонах Самарканда послужило то, что в
одном из них (Ургутский район) население занимается табаководчеством. В
связи с этим, представляло определѐнный интерес сравнить частоту
встречаемости астмоподобных симптомов у подростков, проживающих в
различных зонах вилоята.

38

Было интервьюировано 1711 детей подросткового возраста – учащихся

колледжей, лицеев Ургутского табаководческого района. По нашим данным,
число детей-подростков с наличием БА среди них было 185, что составило
10,8% от всех обследованных. Количество подростков - учащихся колледжей
привлеченных к анкетированию из города Самарканда - составило 2326, при
этом по результатам анкетирования наличие симптомов астмы наблюдалось
у 203 подростков, что составило 8,7% от всех обследованных подростков.

Рис. 1. Распределение обследованных лиц подросткового возраста

В целом, согласно полученным нами результатам среди обследованной

части популяции Самаркандской области показатель встречаемости БА среди
лиц подросткового возраста составил 9,6% и находился на несколько более
высоком уровне в контингенте лиц женского пола, как в подростковом, так и
в юношеском возрасте.

Вторым этапом обследования (клинико-функциональные исследования)

был охвачен контингент подростков, отметивших в вопросниках по меньшей
мере один из астмоподобных симптомов за последние 12 месяцев.

При обследовании юношей и подростков с подозрением на БА

констатировались пониженные показатели ОФВ

1,

ПСВ, МОС

25

, МОС

50

,

МОС

75

, МОС

25-75

при относительно нормальных значениях показателей

ФЖЕЛ, что соответствует обструктивным нарушениям вентиляционной
функции легких.

Исследование

функции

внешнего

дыхания

после

ингаляции

бронходилататора через 15 минут проявлялось приростом ОФВ1 и других
показателей вентиляционной функции легких более чем на 15% от исходных
показателей что соответствовало нормализации всех показателей функции
внешнего дыхания до уровня нормы. По результатам нашего исследования
выявленные изменения ФВД, обратимые в тесте с бронхолитиком
(сальбутамол), позволили подтвердить диагноз БА у 243 подростков, что
составило 62,6% обследованных пациентов.

39

Изучение клинических особенностей течения заболевания по данным

анкет позволило охарактеризовать частоту встречаемости сопутствующих
состояний. В наших исследованиях у 73,9% обследованных больных БА
сочеталась

с

аллергическим

ринитом,

который

характеризовался

преимущественно легким течением. При этом сочетанная форма
респираторной аллергии, АР с БА встречалась у 88 обследованных
подростков, что составило 44%. У большинства больных подростков БА
наряду с АР была ассоциирована с такими внереспираторными
аллергическими заболеваниями как атопический дерматит - 16,6%
подростков, аллергический конъюктивит - 53,7%, крапивница/отек Квинке -
14%. 7,6% обследованных подростков упоминали о наличии пищевой
аллергии и 8,1% – о лекарственной аллергии.

Верификация диагноза БА согласно диагностическим критериям Global

initiative for asthma позволила установить особенности клинического течения
по степеням тяжести. У обследованных подростков легкое персистирующее
течение наблюдалось в 8.8% случаев, интермитирующее течение БА
зарегистрировано среди 91.2% больных.

Таким образом, в популяции подростков, проживающих в

Самаркандском

вилояте,

было

проведено

исследование

частоты

встречаемости астмоподобных симптомов, что позволило выявить истинную
распространѐнность бронхиальной астмы среди лиц данной категории.
Установлено,

что

у

большинства

подростков

констатировалось

интермитирующее течение БА, реже - персистирующее течение заболевания.
У обследованных больных БА была изучена структура сопутствующих
аллергических состояний, а также исследованы особенности изменений
функциональных показателей при разной тяжести течения БА, в ходе
которых получены важные научно-практические результаты.

В четвертой главе

диссертации представляются результаты изучения

особенностей иммунного статуса здоровой популяции и подростков больных
БА.

Относительные показатели CD3

+

клеток периферической крови среди

популяции практически здоровых подростков составили 45,5±0,5%, CD19

+

клеток - 21,9±0,3%, средние значения субпопуляции Т-лимфоцитов хелперов
- 24,4±0,3%, Т-супрессоров - 21,1±0,3%, естественных киллеров - 17,2±0,3%,
и сывороточные иммуноглобулины основных классов: IgA - 186,7±13,35
мг%, IgM - 111,2±4,47 мг%, IgG - 901,2603±67,18 мг%. При сравнительном
изучении параметров иммунного статуса здоровых подростков мужского и
женского пола различий средних значений указанных показателей не
выявлено.

При изучении Т-клеточного иммунного звена в контингенте

обследованных пациентов установлено достоверное снижение среднего
уровня относительного содержания CD3

+

у больных БА подросткового

возраста (36,8±0,5% по сравнению с 45,5±0,5% в контроле, р<0.01).
Субпопуляция CD4

+

характеризовалась уровнем 19,5±0,3% по сравнению с

24,4±0,3% в контроле (р<0.01). Содержание CD8

+

также было достоверно

40

снижено до 17,2±0,3% при 21,0±0,3% в контроле (р<0.01). Результаты,
полученные в отношении NK-клеток при БА в подростковом возрасте,
свидетельствуют о некоторой тенденции к снижению данного показателя
(16,0±0,3% по сравнению с 17,2±0,3% в контроле, р<0.02).

Содержание сывороточных IgА, IgМ в контингенте подростков с БА

претерпевает существенные изменения, характеризующиеся достоверным
снижением данных иммуноглобулинов. Уровень IgG у больных БА оказался
несколько повышенным, существенно не отличаясь от группы здоровых
подростков. Следует отметить, что в контингенте исследованных пациентов
имело место достоверное снижение количества В-лимфоцитов.

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

CD3+%

CD4+%

CD8+%

CD16+%

CD19+%

CD23+%

CD95+%

45,5

24,4

21,1

17,2

21,9

21,8

20,2

36,8

19,5

17,1

16

18,3

18,6

17,4

Практически здоровые

Больные БА

Рис. 2.

Показатели иммунного статуса больных БА в подростковом

возрасте

Результаты исследований показали, что у больных подростков,

страдающих БА, имеет место достоверное снижение количества как CD23

+

-

клеток, так и относительного количества CD95

+

-клеток, являющихся

активационными маркерами Т и В-лимфоцитов.

Расширение представлений о функционировании звеньев иммунного

статуса в возрастные периоды при БА имеет важное практическое значение,
которое позволит обсудить тактику терапевтических и профилактических
аспектов проведения иммунокоррекции. Средний уровень CD3

+

-клеток,

отражающий общий пул Т-лимфоцитов у больных БА подростков и юношей,
составил 35,4



1,1% и 39,6±0,59% соответственно. Видно, что наиболее

низкий уровень данного показателя зарегистрирован у пациентов
подростковой возрастной группы. При анализе иммунорегуляторных
субпопуляций лимфоцитов обнаружены незначительные отличия уровня
CD4

+

-клеток в возрастных группах, однако уровень CD8

+

-клеток отличался

значительным повышением в группе пациентов юношеского возраста
(17,2±0,32% по сравнению с 11,2



0,6%, р<0.02), хотя и в целом не достигал

уровня контрольных параметров (21,1±0,3%, р<0.05). При сопоставлении
уровня CD16

+

в обследуемых возрастных группах выявлено, что если в

группе больных БА юношей данный показатель остается на уровне здоровых

41

лиц, то у пациентов подросткового возраста исследуемый показатель
отличается значительным снижением как по отношению к показателям
группы контроля (13,6



1,1% по сравнению 17,2±0,3%, р<0.01), так и группы

больных БА юношей (13,6



1,1% по сравнению 16,0±0,39%, р<0.05). Уровень

CD19

+

-клеток был достоверно снижен в группе больных БА подростков при

сравнении с группой контроля (18,4±0,30% по сравнению 21,9±0,3%, р<0.02).
Достоверных отличий в содержании CD19

+

-клеток в группах сравнения не

выявлено.

С целью выявления патогенетической значимости выявленных сдвигов в

профиле иммунной системы обследованного контингента лиц проведен
анализ взаимосвязи параметров иммунитета, с одной стороны, с клинико-
патогенетической формой БА, а с другой - с различными фазами ее течения.
Выявлены характерные особенности иммунодефицита различных вариантов
изучаемой

патологии,

отражающиеся

сниженным

количеством

циркулирующего пула CD8

+

и CD95

+

- позитивных лимфоцитов при НБА и

СБА. Наиболее отчетливые взаимосвязи с фазой обострения болезни на фоне
тенденции к увеличению показателя активационного маркера В-лимфоцитов
имели колебания содержания сывороточных иммуноглобулинов классов А и
М. Обратный характер этих изменений (достоверное возрастание уровня IgM
и снижение IgA в период обострения болезни и, напротив существенное
снижение показателя IgM с 122,3±6,4мг% до 92,3±5,1мг% и увеличение IgA с
124,7±2,4мг% до 141,5±7,7мг% в фазу ремиссии), по-видимому, отражает
направленность патогенетических механизмов в зависимости от характера
течения заболевания. На участие наблюдаемой дисиммуноглобулинемии в
патогенезе БА указывают также полученные сведения об угнетении
продукции IgA у больных с наличием наследственной отягощенности по
аллергическим болезням (137,5±7,9мг% против 161,5±8,7мг%, р<0,02).
Интересным также представляется факт существенного дефицита CD8

+

,

CD16

+

и CD19

+

популяций лимфоцитов в этой группе больных по сравнению

с пациентами без отягощенного аллергоанамнеза (р<0,05, р<0,01, р<0,05
соответственно).

Глубокие нарушения иммунного статуса в группах больных БА

подросткового

возраста

требуют

рассмотрения

включения

иммуномодулирующих препаратов в комплекс базисной терапии с целью
восстановления количественных показателей иммунитета.

В пятой главе

диссертации соответственно поставленным задачам

работы освещены результаты посвященные установлению патогенетической
информативности и степени продукции конкурирующих цитокинов
сыворотки крови интерферона-γ и IL-6 у больных БА в подростковом
возрасте.

42

8,6

24

32,1

37,9

16,6

0

5

10

15

20

25

30

35

40

IL-6 пг/мл

ПЗ

общая группа больных БА

АБА

НБА

СБА

Рис. 3. Показатели IL-6 больных БА в подростковом возрасте

Так, содержание цитокина IL-6 в сыворотке периферической крови у

больных БА в подростковом возрасте было достоверно повышено до
24,0±3,8пг/мл при 8,6±3,6пг/мл в контроле (р<0.05). Для уточнения связи и
характера продукции IL-6 с клинико-патогенетическими формами
заболевания был проведен сопоставительный анализ при изучаемой
патологии. Выявлено, что у подростков, страдающих БА с преимущественно
инфекционными механизмами заболевания, регистрируется наиболее
повышенный уровень продукции IL-6, средние значения которого, составляя
37,9±1,3

пг/мл в периферической крови, по-видимому, отражают

выраженность и глубину воспаления бронхиального дерева в этой группе
пациентов. У больных с ведущими аллергическими механизмами в
патогенезе заболевания, наоборот, отмечается некоторое снижение уровня
продукции IL-6 до 32,1±1,1 пг/мл. Представляется интересным
обнаруженный факт выраженного снижения уровня продукции IL-6 у
пациентов со смешанной формой БА.

Анализ параметров интерферонового статуса у исследуемых подгрупп

больных БА в подростковом возрасте обнаружил низкую продукцию INF-γ
иммунокомпетентными клетками. Так, содержание цитокина INF-γ в сыворотке
периферической крови у больных БА в подростковом возрасте было
достоверно снижено до 7,9±0,5 пг/мл при 13,9±1,0 пг/мл в контроле (р<0.01).

Для уточнения связи и характера продукции INF-γ при изучаемой

патологии с клинико-патогенетическими формами заболевания мы провели
сопоставительный анализ.

В результате статистического анализа наиболее низкий уровень

продукции INF-γ (4,9±0,2 пг/мл; p<0,01) зарегистрирован в группе больных
БА в подростковом возрасте с аллергической клинико-патогенетической
формой заболевания. Продукция INF-γ иммунокомпетентными клетками при
смешанной и инфекционно-зависимой формах БА в подростковом возрасте
находилась на практически одинаково низком уровне, достоверно отличаясь
от группы практически здоровых подростков.

43

0

2

4

6

8

10

12

14

INF-γ пг/мл

13,9

7,9

4,9

8,3

9

ПЗ

общая группа больных БА

АБА

НБА

СБА

Рис. 4. Показатели INF-γ больных БА в подростковом возрасте.

Выявленные особенности продукции IL-6 и INF-γ могут служить

дополнительными

и

объективными

критериями

направленности

воспалительной реакции у здоровых и пациентов с различными клинико-
патогенетическими

вариантами

развития

БА,

что

позволит

дифференцированно подойти к выбору терапии и повысить ее
эффективность.

С целью выявления значимости конкурирующих цитокинов IL-6 и INF-γ

с особенностями клинического течения БА исследовали значения этих
показателей в динамике течения заболевания, что позволило установить
выраженное усиление продукции IL-6 при обострении БА. Значения этого
параметра составили 31,3±1,4пг/мл по сравнению с 21,8±2,1пг/мл при
ремиссии заболевания и с 8,6±3,6пг/мл в группе практически здоровых лиц
(р<0,05, р<0,01, соответственно). Анализ продукции INF-γ в связи с фазой
течения заболевания свидетельствует об угнетении продукции данного
цитокина в период обострения БА до 6,1±0,7пг/мл (в контрольной группе
13,9±1,0 пг/мл, р<0,02), тогда как в период ремиссии этот показатель
несколько возрастал, оставаясь все же достоверно сниженным по сравнению
с группой здоровых лиц (р<0,05). Выявленные взаимосвязи уровней
исследованных цитокинов между собой и с фазой болезни отражают участие
различных звеньев иммунного статуса в патогенезе болезни.

Одной из основных функций IL-6 и INF-γ является регуляция

дифференцировки иммунокомпетентных клеток. Для уточнения связи и
характера иммунологических расстройств с уровнем продукции IL-6 и INF-γ
в периферической крови мы провели сопоставительный анализ
исследованного спектра иммунологических параметров при изучаемой
патологии с содержанием цитокинов сывороточной крови. Отмечается
обратная зависимость между уровнем IL-6 и содержанием CD3

+

-клеток (r=-

0,17; Р<0,05), CD4

+

-клеток (r=-0,15; Р<0,05), CD8

+

-клеток (r=-0,25; Р<0,05) и

обнаруживается положительная корреляционная связь между IL-6 сыворотки
крови и уровнем пула циркулирующих CD16

+

-клеток (r=0,14; Р<0,05). В то

же время прослеживается прямая корреляция между содержанием IL-6 в и
уровнем CD19

+

у больных БА подростков (r=0,20; Р<0,05). При этом уровень

44

IL-6, находясь в слабо выраженной отрицательной корреляции с
содержанием IgG, положительно коррелировал с концентрацией IgА и IgМ.

При корреляционном анализе результатов исследования было выяснено,

что показатели содержания INF-γ отрицательно коррелируют со средними
значениями всех показателей клеточного иммунитета

CD3

+

(r=-0,19; Р<0,05),

CD4

+

(r=-0,15; Р<0,05), CD8

+

(r=-0,17; Р<0,05), CD16

+

(r=-0,14; Р<0,05).

Результаты корреляционного анализа концентрации INF-γ с показателями
гуморального звена иммунитета выявили выражено отрицательную
корреляционную зависимость с показателями CD19

+

-клеток и IgA, IgM. При

этом IgG положительно коррелирован с уровнем INF-γ (r=0,34; Р<0,05).

Изучение корреляционной зависимости IL-6, INF-γ с активационными

маркерами Т и В - звена иммунитета у больных БА показало, что параметры
IL-6 положительно коррелируют с уровнем СD23+ (r=0,39; Р<0,02) и в то же
время находятся в выраженной отрицательной корреляции с содержанием
СD95

+

(r=-0,32; Р<0,02). Обнаружено также, что INF-γ отрицательно

коррелирован с содержанием СD23

+

(r=-0,30; Р<0,05), СD95

+

(r=-0,10;

Р<0,05).

Установленные множественные взаимосвязи свидетельствуют о

взаимообусловленности уровня продукции цитокинов IL-6 и INF-γ с
содержанием ИКК и нарушением баланса между процессами активации
(CD23

+

) и элиминации (CD95

+

) при БА у подростков. Полученные данные

также свидетельствуют о возможной регуляторной роли исследованных
цитокинов в формировании иммунного ответа, характерного для
фенотипических вариантов БА.

В шестой главе

диссертации

для уточнения механизмов развития

заболевания изучена значимость аллельных вариантов генов FcεRIβ и GSTπ1
в развитии подверженности к БА.

При изучении 109С/T полиморфизма гена FcεRIβ среди здоровых лиц

установлено, что частота 109T-аллеля в популяции лиц узбекской
национальности

составляет

46,8%,

109С-аллеля

-

53,2%.

При

генотипировании больных БА 109T - аллель выявлен в 58,6% случаев, 109С-
аллель - в 41,4% случаев (χ

2

=3.59, р=0,058, OR=1,24). При изучении

распределения частот генотипов полиморфного маркера гена FcεRIβ генотип
109T/T у здоровых лиц установлен в 32,6% случаев, гетерозиготный генотип
109С/T - в 28,3%, а 109С/С - в 39,1%. У больных БА 109T/T-генотип выявлен
в 45,4% случаев, 109С/С-генотип - в 28%, 109С/T-генотип в 26,6% (χ

2

=1,84,

р=0.17, OR=0,4). Проведенный анализ распределения частот аллелей и
генотипов полиморфного варианта - 109С/T гена FcεRIβ выявил
недостоверные отличия между общей группой больных БА и группой
контроля.

В таблице представлены результаты проведенного анализа частоты

встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма 109С/T гена FcεRIβ среди
пациентов в зависимости от клинических вариантов патологического
процесса. Как видно из таблицы, при анализе частот аллелей 109С/T
полиморфизма гена FcεRIβ обнаружено, что аллель 109T в группе больных

45

АБА встречается достоверно чаще, чем в группе практически здоровых лиц
(79,1% по сравнению с 46,7%, соответственно, χ

2

=26,0, р=0,000, OR=3,12).

Изучение полиморфизма генотипов показывает, что в группе пациентов с
АБА частота гомозиготного варианта 109Т/T гена существенно превышает
показатели контрольной группы здоровых лиц (64,1% против 32,6%,
соответственно, χ

2

=11,45, р=0,0007, OR=3,68).

При этом частота 109С/С в группе больных АБА была заметно ниже

уровня, характерного для здоровой части обследованной популяции лиц
(5,8% по сравнению с 39,1%). Частота 109С/T гена FcεRIβ в этой группе
больных почти не отличалась от контрольной группы. Проведенный анализ
особенностей генотипа в группах больных НБА и СБА показал отсутствие
достоверных различий в частотах аллелей и генотипов полиморфизма 109С/T
гена FcεRIβ

по сравнению с контрольной группой здоровых лиц.

Таблица.

Распределение частот аллелей и генотипов 109С/T полиморфизма гена

FcεRIβ в группах больных БА и здоровых индивидов

10

9С

/T

п

ол

им

ор

фи

зм гена

Fc

εR

Iβ

Группы

N

Аллель

Генотипы

χ

2

Р

Va

lu

e

OR

109С

109T

109

С/T

109

С/С

109
Т/T

Контроль

46

49-

53,3%

43-

46,7%

13–

28,3%

18-

39,1%

15–

32,6%

1

1

,4

5

0

,0

0

0

7

3

,6

8

АБА

1

0

3

43-

20,9%

153-

79,1%

31-

30,1%

6-

5,8%

66-

64,1%

НБА

19

26-

68,4%

12-

31,6%

8-

42,2%

9-

47,3%

2-

10,5%

2

,3

4

0

,1

2

0

,0

5

СБА

14

19-

67,8%

9-

32,2%

3-

21,4%

8-

57,2%

3-

21,4%

0

,2

1

0

,6

4

0

,1

3

С целью оценки ассоциации развития БА с учетом пола проведен анализ

распределения частот аллелей и генотипов 109С/T полиморфизма гена
FcεRIβ: у больных мальчиков частота 109Т-аллеля гена FcεRIβ составила
78,5%, по сравнению с 67,2% у девочек и была достоверно выше, чем у
мальчиков контрольной группы (56,2%) (χ

2

=5,2, р=0.02, OR=4,71).

Интерес к проблеме взаимосвязи профиля генетических маркеров с

особенностями клинического течения такого заболевания как БА, для
которого показаны многочисленные случаи семейной агрегации, существует
уже более 30 лет, но тем не менее они остаются далеки от своего решения.
По полученным данным с учетом выявленного характера полиморфизма гена
FcεRIβ проведен анализ особенностей генотипа в клинических группах
пациентов, различающихся наличием наследственной отягощенности по
аллергическим заболеваниям. Как показали результаты исследований среди

46

лиц с наследственной отягощенностью генотип 109Т/T встречался в 72,4%,
генотип 109С/T - в 20,7% случаев, тогда как количество больных с 109С/С
генотипом составляло 6,9% (χ

2

=9,75, р=0,001, OR=1,27). Важная особенность,

выявленная в наших исследованиях, касается существенных различий частот
аллелей 109С и 109T гена FcεRIβ (χ

2

=17,8, р=0,000, OR=4,21) между

контрольной группой и больными с наследственной отягощенностью.

Таким образом, группе больных с наследственной отягощенностью по

аллергическим заболеваниям характерна повышенная ассоциация аллеля
109Т с БА. Следует также отметить увеличение частоты встречаемости
больных БА с генотипом 109Т/T по сравнению с 109С/С гомозиготным и
109С/T гетерозиготным генотипом в группе с наличием наследственной
отягощенности.

Анализ связи 109С/T полиморфизма гена FcεRIβ с уровнем Т-

лимфоцитов и их субпопуляций при БА у подростков выявил, что в группе
больных с генотипом 109Т/Т регистрируются сниженные показатели
относительного количества CD3

+

до 34,7±0,41% по сравнению с

показателями в группе больных с С/С и С/Т генотипом (в обоих случаях
р<0,05). Тенденция к снижению также наблюдалась у больных с генотипом
109Т/Т в отношении показателей абсолютных значений CD4

+

и CD8

+

,

проявляя недостоверные различия. Показатели CD16

+

существенно не

отличались между исследуемыми группами генотипов гена FcεRIβ при БА у
подростков. Наиболее высокие средние значения IgG регистрировались в
группе больных, имеющих генотип 109T/T. Наиболее низкий показатель IgA
был зарегистрирован у лиц с генотипом 109T/T, который достоверно
отличался от лиц с 109 С/С генотипом. Тенденция к снижению IgM
отмечалась также в группе больных с генотипом 109T/T. У лиц с генотипом
109Т/Т регистрируется достоверное повышение относительного количества
CD23

+

по сравнению с группой больных 109С/С, С/T генотипом (р<0,05;

р<0,01, соответственно), тогда как достоверных отличий CD95

+

- клеток в

комбинации генотипов у больных БА подростков не отмечено. Выявлено
достоверное отличие CD23

+

между гомозиготными генотипами 109Т/Т и

109С/С (р<0,05).

Все проведенные исследования по изучению и выявлению

функционально ослабленных комбинаций генотипов и их взаимосвязи с
параметрами иммунного статуса позволяют сделать заключение о том, что
для

запуска

аллергических

реакций

необходимо

взаимодействие

неблагоприятных комбинаций гена FcεRIβ с показателями клеточного и
гуморального звеньев иммунитета.

При анализе Ile105Val полиморфизма гена GSTπ1 среди здоровых лиц

установлено, что частота 105/Ile - аллеля в популяции лиц узбекской
национальности составляет 65%, 105/Val – 35%. При генотипировании
больных БА 105/Ile – аллель выявлен в 79,1% случаев, 105/Val – аллель в
20,9% случаев. При изучении распределения частот генотипов полиморфного
маркера гена GSTπ1 генотип Ile-105/Ile-105 у здоровых лиц установлен в 30%
случаев, гетерозигота - в 70%, а Val-105/Val-105 - не регистрировался. У

47

больных БА Ile-105/Ile-105 – генотип выявлен в 60,4% случаев, Val-
105/Val-105 генотип – в 2,4%, Ile-105/Val-105 – генотип в 37,03% (χ

2

=2,24,

р=0,13).

Результаты, полученные в отношении полиморфизма гена GSTπ1

свидетельствуют о существовании ассоциации, c одной стороны, генотипа
Ile-105/Ile-105, а с другой, носительства аллеля Ile-105 больных с БА в
узбекской популяции при статистически незначимых показателях χ

2

и Р

Value

.

В ходе исследования Ile-105/Val-105 полиморфизма гена GSTπ1 при
аллергической форме БА выявлено, что происходит относительно
достоверное (χ

2

=3,49, р=0,06) накопление неблагоприятного генотипа

Ile105Ile (62%) по сравнению с аналогичным генотипом в контроле (30%).
Проведенный анализ особенностей распределения генотипа в группах
больных НБА и СБА показал отсутствие статистически значимых различий в
частотах аллелей и генотипов полиморфизма Ile-105/Val-105 гена GSTπ1

по

сравнению с контрольной группой здоровых лиц.

Таким образом, показана специфика полиморфизма Ile-105/Val-105 гена

GSTπ1,

проявляющаяся ассоциацией Ile105Ile комбинации генотипа с

аллергической формой заболевания в узбекской популяции.

Проведенные исследования полиморфизма гена GSTπ1 с учетом пола

обследованных лиц показывают, что у девочек частота Ile105 - аллеля гена
GSTπ1 составила 87%, по сравнению с БА (65%) у мальчиков и была
недостоверно выше, чем у девочек в контрольной группе (13%) (χ

2

=3,216,

р=0.073). Комбинация генотипов показывает, что в группе пациентов
девочек частота гомозиготного варианта генотипа Ile105Ile гена GSTπ1
существенно превышает показатели контрольной группы здоровых лиц
(χ

2

=3,936, р=0.047).

В исследованиях различий уровня Т-лимфоцитов и их субпопуляций при

БА у подростков в зависимости от генотипов Ile-105/Val-105 полиморфизма
гена GSTπ1 выявлено, что в группе больных с генотипом I/I регистрируются
сниженные показатели CD3

+

, CD8

+

и CD16

+

до 33,6±0,45%, 15,6±0,88% и

15,6±0,88%, соответственно, по сравнению с показателями в группе лиц, не
имевших данный генотип. Достоверные различия вычислены в отношении
относительного количества CD3

+

по сравнению с показателями Val-105/Val-

105, Ile-105/Val-105 генотипа, а также между генотипами Val-105/Val-105 и
Ile-105/Val-105 (р<0,01; р<0,02; р<0,05 соответственно), CD4

+

-клеток по

сравнению с показателями Ile-105/Val-105 (р<0,02), CD8

+

-клеток по

сравнению с показателями Val-105/Val-105 а также между генотипами Val-
105/Val-105 и Ile-105/Val-105 (р<0,02 в обоих случаях) и CD16

+

по сравнению

с Val-105/Val-105 генотипа Ile-105/Val-105 полиморфизма гена GSTπ1.
Относительное снижение абсолютного показателя CD3

+

-клеток имело место

в группе пациентов БА с генотипом Ile-105/Ile-105, а CD4

+

- с генотипом Val-

105/Val-105, что выявило статистически недостоверные различия.

При исследовании относительного количества CD19

+

-клеток между

сравниваемыми группами больных была выявлена достоверность различий
показателей групп с генотипами Ile-105/Val-105 и Val-105/Val-105 (р<0,02).

48

Зарегистрировано достоверное увеличение уровня IgG у больных подростков
с БА, имеющих гомозиготный генотип Ile-105/Ile-105 и гетерозиготный
генотип Ile-105/Val-105 по сравнению с гомозиготным генотипом Val-
105/Val-105 (р<0,01 в обоих случаях). Выражено сниженный уровень IgА
был связан с наличием генотипа I/I больных БА по отношению больных БА
подростков, имеющих генотип Val-105/Val-105 (р<0,05). Существенной
разницы в отношении уровня концентрации IgМ между генотипами не
имелось.

Обнаружено, что при БА у подростков с генотипом Val-105/Val-105

относительный и абсолютный уровень CD23

+

выше, чем в группах Ile-

105/Ile-105,

Ile-105/Val-105.

Так, средние значения относительного

содержания маркера активации CD23

+

с генотипом Val-105/Val-105

достоверно отличались от группы больных с генотипом Ile-105/Val-105
(р<0,05), а уровень абсолютного содержания CD23

+

в группе индивидов с

Val-105/Val-105 генотипом был равен 558,5±32,3, что было достоверно выше
по сравнению с 415,15±26,3 в группе с генотипом Ile-105/Ile-105 гена GSTπ1
(р<0,05). Достоверные различия, проявляющиеся снижением содержания
CD95

+

в зависимости от Ile-105/Val-105 полиморфизма гена GSTπ1

исследованных пациентов, зарегистрированы у лиц, имеющих генотип Ile-
105/Ile-105, по сравнению с группой обладающих генотипом Ile-105/Val-105
(р<0,05).

Таким образом, выявленные ассоциации Ile-105/Val-105 полиморфизма

гена GSTπ1 с самим заболеванием и показателями иммунного статуса при БА
свидетельствуют, что гены ферментов биотрансформации играют важную
роль

как

в

непосредственном

развитии

наследственной

предрасположенности к БА, так и в опосредованном формировании
нарушений иммунной системы в патогенезе заболевания.

В седьмой главе

диссертации представляются результаты оценки

эффективности

применения

иммуномодуляторов

полиоксидоний

и

циклоферон при БА у подростков с “неблагоприятными генотипами” 109T/T
гена FcεRIβ и Ile-105/Ile-105 гена GSTπ1.

Полученные данные по результатам комплексного лечения страдающих

БА подростков с включением полиоксидония указывают на выраженное
восстановление со стороны иммунной системы при данной схеме
терапевтического лечения. Особенно заметным было увеличение
относительного (с 36,9±0,59% до 44.2±0,7%, р<0,01) количества CD3

+

. В

отношении субпопуляции Т-лимфоцитов при использованном способе
лечения характерным было достоверное повышение относительного
содержания CD4

+

,

CD8

+

-клеток. В частности, содержание CD4

+

увеличилось

с 19,6±0,23% до 27,6±0,3% (р<0,01), существенно нарастало общее число
CD8

+

-клеток (с 17,2±0,32% до 23,1±0,4%, р<0,01). Количество В-лимфоцитов

возрастало с 18,4±0,20% до 21,6±0,9%. Существенно повышалось
содержание CD95

+

(с 17,3±0,43% до 23,2±0,5%, р<0,01). Включение в

комплексную терапию полиоксидония сопровождалось также достоверным
повышением концентрации IgA, являющегося одним из ведущих факторов

49

противомикробной и антитоксической защиты в просвете дыхательных путей
(с 17,2±0,32% до 23,1±0,4%, р<0,01) и тенденцией к повышению уровня IgМ
и IgG.

Для достижения цели исследования оценена клинико-иммунологическая

эффективность использования синтетического индуктора интерферона -
циклоферон в комплексном лечении больных БА в подростковом возрасте.

После применения циклоферона отмечено улучшение показателей

иммунного статуса. Так, при комплексном лечении подростков, страдающих
БА, дополнительно циклофероном отмечено достоверное повышение
относительного (с 36,9±0,59% до 41.7±0.4%) количества CD3

+

-клеток по

сравнению с исходными данными. Количество иммунорегуляторных
лимфоцитов CD4

+

(с 19,6±0,3% до 24,2±0,3%) и CD8

+

-клеток (с 17,2±0,32%

до 20,12±0,3%) возрастало, почти достигая средних значений контрольной
группы.

Отмечалось

незначительное

повышение

активированных

лимфоцитов, несущих маркеры Т-клеточной активации CD95

+

, маркера

активации В-лимфоцитов CD23

+

. Отмечена тенденция к увеличению

концентрации иммуноглобулинов классов IgA, IgG и IgM.

Таким образом, у больных БА подростков с генотипами 109T/T гена

FcεRIβ и Ile-105/Ile-105 гена GSTπ1, получавших комплексное лечение с
иммуномодулирующими препаратами – полиоксидоний и циклоферон,
отмечалось

восстановление

большинства

клинико-функциональных

показателей и параметров иммунореактивности, наступление клинической
ремиссии заболевания.

Эффективность профилактики БА с помощью иммуномодулирующих

препаратов полиоксидоний и индуктора интерферона циклоферона
оценивалась также по результатам наблюдения за пролеченными пациентами
с “неблагоприятными генотипами” в течение 12 месяцев. Проведенный
мониторинг клинических показателей позволил заключить, что если базисная
гипосенсибилизирующая терапия не отражалась достоверными изменениями
средних показателей продолжительности и числа обострений БА в год, то
клинические данные пациентов, пролеченных циклофероном, по сравнению с
исходными данными, указывают на достоверное уменьшение частоты
обострений заболевания в течение года. После лечения циклофероном
отмечено статистически достоверное уменьшение частоты обострений БА с
6,9±0,4 раз до 4,3±0,5 в год.

При исследовании пациентов, получавших полиоксидоний, также

отмечено достоверное уменьшение количества обострений заболевания.
Снижение обострений БА в течение года у пациентов, получавших курс
иммуномодулирующей терапии с препаратом полиоксидоний, проявлялось в
среднем 3-4 обострениями в год, тогда как до проведения данного курса
лечения обострения заболевания регистрировали, в среднем, до 7 раз в
течения года (р<0,05). Средняя продолжительность обострения у больных,
получавших полиоксидоний, имеет достоверные отличия от показателя,
вычисленного до применения иммуномодуляторов в комплексном лечении
БА у подростков.

50

Выраженность

и

продолжительность

симптомов

заболевания

(температурная реакция, симптомы интоксикации, ринорея, кашель и
изменения в легких, определяемые физикально) в группах получавших
препараты полиоксидоний и циклоферон в комплексе базисной терапии
существенно отличались. Для больных БА подростков, получавших
полиоксидоний эти явления соответственно, длились, в среднем 2,21±1,12,
2,6±1,11, 3,81±1,20, 4,6±1,19, 3,8±1,25 дней, тогда как у больных БА
подростков получавших циклоферон эти явления продолжались в среднем
3,2±1,14, 3,4±1,16, 4,2±1,31, 7,8±2,22, 4,9±1,13 дней. Следовательно,
включение полиоксидония в комплекс базисного лечения способствует более
быстрой ликвидации всех проявлений обострения патологического процесса
в легких.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что

проведение

курсов

неспецифической

иммунотерапии

препаратами

полиоксидоний и циклоферон у больных БА с генотипами 109С/T и Ile-
105/Ile-105 генов FcεRIβ, GSTπ1 в 2-3 раза снижает частоту обострений
заболевания. По проведенным расчетам позитивные показатели преобладают
в группе больных, получавших полиоксидоний и отражают преимущество
включения данного препарата в схемы комплексного лечения БА.

На основании проведенных подробных исследований нами разработана

модель многофакторного развития БА. Следует отметить, что данная
разработка позволила по-новому рассмотреть патологический фенотип с
позиций неслучайных сочетаний исследованных генов, участвующих в
дисрегуляции иммунного ответа, нарушении процессов детоксикации
ксенобиотиков и рецепторных механизмов инициации аллергического
воспаления, которые подчеркивают важность этих процессов в развитии
аллергических заболеваний в частности БА.

На

основании

проведенных

клинико-функциональных,

иммунологических и генетических исследований, направленных на
верификацию диагноза бронхиальной астмы, нами разработан алгоритм
диагностических

мероприятий,

в

соответствии

с

которым

при

аллергологическом обследовании следует придерживаться трехуровневого
подхода их выполнения.

На первом этапе рекомендуется провести опрос по анкете и сделать

заключение о предположительности БА у данного индивида. Затем у
отобранного контингента лиц исследовать вентиляционную функцию легких
с проведением бронходилатационной пробы. При положительных
результатах на данном этапе можно ограничиться вероятностью наличия БА.
На втором уровне диагностических мероприятий при выявлении
иммунологических нарушений, документирующихся изменениями, как в
клеточном, так и гуморальном звеньях иммунной системы и определением
уровня продукции IL-6, INF-γ, устанавливается диагноз БА и определяются
патогенетические формы заболевания. Тесты третьего уровня позволяют
выявить неблагоприятные генотипы, что подтверждает несомненность
диагноза БА.

51

Проведенные

скрининговые,

клинико-функциональные,

иммунологические и генетические исследования позволили определить
подходы к проведению профилактических мероприятий БА у подростков.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Установлены частота встречаемости и структура заболевания

«бронхиальная астма» в аридной зоне среди лиц подросткового возраста.
Указанная патология регистрируется у 9,6% обследованного населения
подростков, при этом данное заболевание чаще встречается среди лиц
женского пола. В структуре заболевания превалирует интермитирующая и
легкая персистирующая формы.

2. Выявленные особенности клинического течения БА среди подростков,

проживающих в аридной зоне, указывают на высокую частоту ассоциации
поражения бронхиального дерева с аллергическими процессами других
органов и тканей: в 73,9% с АР, в 53,7% с АК, в 16,6% с АтД и в 14% с
крапивницей/отеком Квинке.

3. Обнаружено, что в исследуемой популяции больных БА

подросткового возраста происходят выраженные нарушения иммунного
статуса, проявляющиеся дефицитом показателей как клеточного (CD3

+

,

CD4

+

, CD8

+

, CD16

+

), так и гуморального звеньев иммунитета (CD19

+,

IgA,

IgG, IgM) и активационных маркеров (CD23

+

, CD95

+

). Иммунный статус у

больных БА в подросково-юношеском возрасте имеет своеобразные
особенности, при этом глубина выявляемых нарушений иммунореактивности
наиболее выражена в младшей возрастной группе.

4. У больных бронхиальной астмой в подростковом возрасте

выявляются отчетливые изменения в межклеточном взаимодействии
в иммунной системе: достоверное повышение содержания секретируемого
Th2-клетками IL-6 являющегося регулятором процессов созревания антител
и самой продукции иммуноглобулинов, и наоборот снижение уровня

регулятора активности Th1-клеток цитокина INF-



.

5. Обнаружено, что уровень содержания цитокинов IL-6 и INF-γ в

периферической крови имеет связь с патогенетическим вариантом
заболевания. Показано, что наиболее низкие показатели продукции INF-γ в
сыворотке крови характерны для аллергического клинико-патогенетического
варианта БА в подростковом возрасте. У подростков, страдающих
преимущественно инфекционной формой бронхиальной астмы, имеется
тенденция к повышенной продукции IL-6 периферической крови.

6. Выявлено, что маркерами повышенного риска развития аллергической

формы бронхиальной астмы у подростков узбекской этнической
принадлежности являются генотип FcεRIβ-109T/T и аллель FcεRIβ-109T,
маркерами пониженного риска – FcεRIβ-109C/C и аллель FcεRIβ-109C.
Обнаружена высокая степень сцепления генотипа FcεRIβ-109T/T и аллеля
FcεRIβ-109T с наследственной отягощенностью бронхиальной астмы в
узбекской популяции.

52

7. Среди лиц женского пола узбекской национальности выявлена

ассоциация аллеля Ile-105 и генотипа Ile-105/Ile-105 полиморфного локуса
гена GSTπ1 с высоким риском развития БА. Выявлено, что генотип Ile-
105/Ile-105 ассоциирован с развитием аллергической формы бронхиальной
астмы у подростков узбекской популяции.

8. Включение в комплексную терапию подростков больных БА

циклоферона и полиоксидония, оказывая иммунокоррегирующее воздействие
и способствует повышению клинической эффективности терапии. При
исследовании профилактической эффективности иммуномодуляторов
позитивные показатели преобладали в группе больных, получавших
полиоксидоний, что указывает на преимущества включение данного
препарата в схемы комплексного лечения и профилактики бронхиальной
астмы у подростков.

53

SCIENTIFIC COUNCIL 16.07.2013.Tib.16.01 at INSTITUTE of

IMMUNOLOGY of the ACADEMY of SCIENCES of the REPUBLIC of

UZBEKISTAN and TASHKENT MEDICAL ACADEMY on AWARD of

SCIENTIFIC DEGREE of DOCTOR of SCIENCES

____________________________________________________

ACADEMY of SCIENCES of the REPUBLIC of UZBEKISTAN

INSTITUTE of IMMUNOLOGY

ZIYADULLAEV SHUKHRAT KHUDAYBERDIEVICH

IMMUNOLOGICAL AND GENETIC APPROACHES TO OPTIMIZE

TREATMENT ASTHMA IN ADOLESCENTS

14.00.36 - Allergology and immunology

(medical sciences)

ABSTRACT OF DOCTORAL DISSERTATION

Tashkent – 2014

54

The subject of doctoral dissertation is registered the Supreme Attestation Commission at the

Cabinet of Ministers of the Republic of Uzbekistan in number 20.02.2014/В2013.2.Tib1.

Doctoral dissertation is carried out at Institute of Immunology of Academy of Sciences of

Uzbekistan and Samarkand state medical institute

The full text of doctoral dissertation is placed on web page of Scientific council

16.07.2013.Tib.16.01. at the Institute Immunology of the Academy of Sciences of the Republic of
Uzbekistan and Tashkent medical academy to the address www.immunology.uz

Abstract of dissertation in three languages (Uzbek, Russian, English) is placed on web page to

address www.immunology.uz and information-educational portal “ZiyoNet”

to address www.ziyonet.uz

Scientific

consultant:

Khaitova Nazira Musaevna

Doctor of Medical Science, professor

Official

opponents:

Nazarov Azadbek Akhmedovich

Doctor of Medical Science, professor

Ubaydullaev Sagdulla Abdullaevich

Doctor of Medical Science

Babahodzhaev Sirozhiddin Nosirovich

Doctor of Medical Science, professor

Leading

organization:

State Scientific Center "Institute of Immunology" Federal
Medical-Biological Agency of Russia, Moscow

Defense will take place «___» _____________2014 at _____ at the meeting of scientific council

number 16.07.2013.Tib.16.01. at the Institute Immunology of the Academy of Sciences of the Republic
of Uzbekistan and Tashkent medical academy to adress: 100060, Uzbekistan, Tashkent, acad. Ya.
Gulomov street, 74. Phone/fax : (99871) 233-08-55, е-mail: immunologiya@qip.ru.

Doctoral dissertation is registered in Information-resource centre at Institute Immunology of the

Academy of Sciences of the Republic of Uzbekistan №01, it is possible to review it in IRC (100060,
Uzbekistan, Tashkent, acad. Ya. Gulomov street, 74. Phone/fax : (99871) 233-08-55).

Abstract of dissertation sent out on «___» ______________ 2014 year

(mailing report № _______on _________ 2014 year)

T.U. Aripova

Chairman of scientific council on award of scientific

degree of doctor of sciences, MD, professor

Z.S. Kamalov

Scientific secretary of scientific council on award

of scientific degree of doctor of sciences, MD

A.A. Batirbekov

Chairman of scientific seminar under scientific

council on award of scientific degree of doctor

of sciences, MD, professor

55

ANNOTATION OF DISSERTATION

Topicality and demand of the subject of dissertation.

Bronchial asthma

(BA) is one of the most common and serious diseases, which in the world suffer
from 3 to 12% of the child population of the globe. Proportion of adolescents with
asthma, is one third of all children with this disease. High prevalence of asthma in
the numbers of teenagers, characteristics of the disease, age-related aspects of the
functioning of the endocrine and immune systems of teenagers that cause
difficulties which arise in the course of the diagnostic process, highlight the need
to find innovative approaches to diagnosis and treatment of this disease.

It is known that the key immune mechanisms in the pathogenesis of the vast

majority of AD cases is real and indisputable fact. Currently, considerable interest
to researchers involved in the pathogenesis of positions of allergic diseases,
especially asthma, along with IL-4 and IL-13 causes a number of other (IL-6, IL-8,
IL-10, IL-5, INF-α and INF-γ) immunoregulatory cytokines.

Genetic predisposition plays an important role in the development of allergic

diseases. Currently available data on the relationship with asthma and associated
with disease symptoms polymorphism approximately 150 genes. Important role as
the main contender for the predisposition to asthma gene is a gene encoding β-
chain of high affinity receptor IgE. Interaction elevated levels of antigen-specific
IgE with FcεRIβ plays a central role in the pathogenesis of allergic asthma.
Particularly attractive candidate gene asthma is also one of the enzyme genes
biotransformation - GSTπ1, encoding glutathione S-transferase and π1 express
almost exclusively in the pulmonary tissue. This gene is located at the locus 11q13,
for which repeatedly shown clutch with atopic symptoms. Accumulated in the
literature say about the relationship of gene polymorphism FcεRI, GSTπ1 with
different allergic diseases.

From this perspective, the study of immunological and genetic mechanisms of

the pathogenesis of this disease for the construction of rational treatment and
prevention emphasizes the relevance of this thesis research.

From the earliest days of independence, the country has successfully

implemented state programs aimed at reforming the health care system. As a result,
the targeted implementation of organizational health and research activities aimed
at effective diagnosis, prevention and treatment of asthma among adolescents, with
some success in the treatment of this disease in the country. However, now the
problem of early diagnosis and the development of effective programs for
treatment and prevention among adolescents with asthma remain one of the most
important issues of modern health care. This research work was carried out in the
framework of the tasks set by the Resolution of the Cabinet of Ministers of the
Republic of Uzbekistan "On additional measures to improve the health of women
and the younger generation," dated 25.01.2002 for the №32. In this regard, the
need to deepen the information received about the state of cellular and humoral
immunity among adolescents, asking pathogenetic informative immunogenetic
studies in asthma are one of the important criteria demand the dissertation topic.

56

Conformity of research to priority directions of development of science

and technologies of the Republic of Uzbekistan.

This work was performed in

accordance with the priority areas of science and technology of the Republic of
Uzbekistan SSTP-9. "Development of new technologies for prevention, diagnosis,
treatment and rehabilitation of human diseases."

International review of scientific researches on the dissertation theme.

Degree of study of problem.

Research work aimed at preserving health and

preventing the development of allergic diseases and, in particular, asthma among
children and adolescents remain relevant for any country, because according to the
WHO program "International Study of Asthma and Allergy in Children" in many
countries tenth of the population of children suffering from bronchial asthma, with
the last 20 years in industrialized countries, the spread of this disease in children
and adolescents has increased more than 3 times. Therefore, great attention to
improving the treatment and prevention of asthma in adolescents given by WHO,
foreign research centers and higher education institutions.

Study of immunological characteristics of asthma, both in our country and

abroad in a large number of studies that leave no doubt that it is the immune
system plays a key role in the development and in the maintenance of the disease.
Concept development immunocitokin network - system humoral mediators
between immunocompetent and other cells involved in the immune response in
asthma, implementing a succession stages of immunological response, cooperation
between the factors of nonspecific protection and immunity responses of early and
late phase of inflammation, as well as synthesized antidiv class switching -
continues to be supported by numerous studies. The role of genetic susceptibility in
the development of asthma in children and adolescents is well known, and today,
thanks to the success of molecular genetics and the development of ideology and
position of a candidate mapping, it is possible to solve this problem in terms of
chromosomal location and description of specific polymorphisms of genes
responsible for the formation of a predisposition to asthma.

Degree of study of problem.

Despite the enormous attention paid to the

problem of asthma, measures of effective diagnosis, treatment and prevention of
this disease in adolescence developed enough. Have not been studied sufficiently
prevalence and clinical features of asthma in adolescents, as well as diagnostic
capabilities pulmonary ventilation studies with conducting various tests. Rather
contradictory data available on the changes of immune status and activation
markers involved in allergic inflammation in asthma in adolescents. Not specified
diagnostic and differential diagnostic value of the determination of cytokines,
namely IL-6, INF-γ, their regulatory actions on immunocompetent cells involved
in the immune response in asthma. In domestic work is not carried out a study of
genes FcεRIβ, GSTπ1, determining the structure of a genetic predisposition to
asthma.

All this is the basis for the work devoted to the study of the foundations of the

formation of asthma in adolescence and to the development of effective programs
for early diagnosis, treatment and prevention of asthma, which determines the
priority and urgency of the problem.

57

Connection of dissertational research with the thematic plan of scientific-

research works is reflected in following projects:

state scientific and technical project STP - 1109-11.3-0-13801 «Development

of new diagnostic technologies, differentiated therapy, prevention and
immunorehabilitation hereditary - caused forms of asthma in adolescence" (2009-
2011).

Purpose of research

is study the immunological and genetic mechanisms of

the pathogenesis of asthma in adolescents and form the basis of this plan rational
diagnostic and therapeutic measures in this pathology.

In To achieve this goal the following

tasks of research

is solved:

to establish the clinical course of asthma in the population of adolescents

living in the Samarkand region, in the early stages of the pathological process in
the bronchopulmonary system.

explore the features of the state of cellular and humoral immunity, as well as

activation markers in asthma in adolescence by determining the immunophenotype
of lymphocytes in the peripheral blood.

to examine the level of production of immunoregulatory cytokine interleukin-

6 and interferon-γ and install them pathogenetic informative in asthma among
adolescents.

to determine the features of distribution of allele and genotype frequencies of

polymorphic variants of genes and FcεRIβ GSTπ1 population Uzbek people with
asthma, compared with the healthy part of the population.

examine the clinical and immunological aspects effectiveness of therapies

using drugs and polioksidony tsikloferon in patients with asthma in adolescence.

on the basis of studies to develop a multivariate model of formation of

bronchial asthma and develop an optimal algorithm for the diagnosis, treatment,
prevention in adolescents with this pathological condition.

Object of research

are the study were 4094 adolescents living in Samarkand

region of Uzbekistan.

Subject of research -

venous blood and serum for the quantitative

determination of the main indicators of immune and cytokine status, genotyping of
polymorphic variants of candidate genes that determine hereditary susceptibility to
asthma, as well as clinical and immunological efficacy of drugs and tsikloferon
polioksidony patients.

Methods of research.

Were used screening, clinical, functional,

immunological, genetic and statistical methods.

Scientific novelty of dissertational research consists in the following:

proposed introduction to the work of doctors teen clinics layered approach

testing can significantly improve the detection rate of asthma in adolescence and
optimize treatment and preventive measures in high-risk groups;

first defined the peculiar characteristics of the quantitative parameters of the

immune status of patients with asthma in the cohort of adolescence and the
corresponding proposed regulations and guidance documents for the healthy part
of the adolescent population;

58

for the first time presents a comprehensive assessment of the cytokine profile

of blood serum in bronchial asthma in adolescents. Specific features of products
immunoregulatory cytokines IL-6 and INF-γ and their pathogenetic and regulatory
information content in asthma among adolescents;

first analyzed the distribution of alleles and genotypes of polymorphic gene

variants and gene FcεRIβ GSTπ1 among patients with different phenotypic
variants of AD and healthy individuals of Uzbek nationality, which resulted in the
identified markers of increased risk or, conversely, resistance to the development
of asthma in adolescents Uzbek ethnicity;

algorithms for phase diagnosis, treatment and prevention of asthma in

adolescence in terms of disclosure of important moments of the pathogenesis of the
disease, allowing to build a rational sequence of diagnostic search, aimed at
verifying the diagnosis and expedient construction of preventive measures.

Practical results

of research consist in the following:

in the diagnosis of asthma in adolescents is advisable to use the algorithm

developed, involving three-tiered approach to the diagnostic process, including the
use of modern biographical questionnaires and tests aimed at identifying reversible
bronchial obstruction syndrome, in-depth immunological study assessing the most
important products and research immunocytokines genetic markers of increased
risk of developing asthma;

obtained immunological data: dual immunodeficiency cellular and humoral in

adolescents with asthma - to consider when developing prevention and treatment
programs for the appointment of immunomodulatory drugs in the basal complex
therapy of bronchial asthma;

as additional differential - diagnostic criteria for clinical and pathogenic

nature of the disease in adolescents with asthma can use indexes content cytokines
IL-6, IFN-γ in serum;

the results of genetic testing, in which the identified markers of increased risk

of asthma (the genetic marker HLA-B40 genotype FcεRIβ-109T / T allele FcεRIβ-
109T, the genotype and allele GSTπ1-Ile-105/Ile-105 GSTπ1-Ile-105 ) should be
considered as evidence of the clinical feasibility of predictive genetic testing,
allowing for the presimptomatic diagnosis of hereditary predisposition to asthma
and organize effective prevention of this disease;

high therapeutic and prophylactic efficacy of immunomodulators and

polioksidony tsikloferon, absence of complications and adverse reactions in their
application can be recommended in practical activities allergist appointment
combined immunomodulatory therapy in patients with asthma adolescents.

Reliability of obtained results

is the results based on the fact that all data

immunological and genetic studies processed using modern computer technology.

Theoretical and practical value of results of research.

The obtained data on

the lack of diagnosis of asthma in adolescents allow a more rational organization of
social and medical assistance to patients in this age group in the Samarkand region.
Proposed use of questioning adolescents in primary care physicians in the periodic
medical preventive examinations followed by functional testing aimed at detecting

59

violations of pulmonary ventilation and, if necessary, study the reversibility of
bronchial obstruction in the test with a bronchodilator.

Identified abnormalities in immune status in adolescents with asthma,

characterized by a decrease in both cellular and humoral immunity, indicate a need
to consider the diagnosis of immunodeficiency states and optimization of treatment
- rehabilitation measures in adolescents with asthma.

Results of work are important for practical medicine by disclosing significant

pathogenetic mechanisms of clinical and pathogenic forms of asthma in
adolescents. The peculiarities of production of IL-6 and INF-γ in the pathogenesis
of the disease, depending on the identified parameters are introduced into clinical
practice as additional differential diagnostic criteria pathogenetic orientation
process in asthma in adolescence.

Results of the thesis research 109C/T polymorphism of the gene variant

FcεRIβ, Ile105Val polymorphic variant gene GSTπ1 contribute significantly to the
overall view of the genetic basis of susceptibility to asthma. These thesis can serve
as a basis for further research to identify genetic risk factors for asthma and the
development of adequate therapeutic measures. Results of the study can also be
used in the educational process of medical and biomedical universities.

Realization of results.

Results of the study presented in the form of

guidelines, "Questions of early diagnosis of asthma in adolescents", "Age aspects
of the regulation of immunity" and innovations "By molecular genetic testing
polymorphic locus gene FcεRIβ for the diagnosis of asthma in adolescence",
"Method of drug immunocorrection secondary immunodeficiency state in asthma
in adolescence drug polioksidony" that are embedded in practical health
(Conclusion number 93/106 of 18.10.2011 and № 1 dated 12.03.2014, the Ministry
of Health of the Republic of Uzbekistan).

Approbation of work.

The main provisions contained in the thesis presented

and reported 14 scientific conferences, including eight international congresses,
conferences, in particular, on the IX International Congress on Cell Biology &
20th Annual Conference of the Korean Society for Molecular and Celluar Biology
(2008 , Seoul), XIV Congress of the Asian Pacific Society of Respirology & 3rd
Joint Congress of the APSR/ACCP (2009, Seoul), XII Asian-Pacific Congress of
Clinical Biochemistry (2010, Seoul), XIII Annual Congress Turkish Thoracic
Society (2010, Istanbul, Turkish), European Respiratory Society Annual Congress
(2010, Barcelona), «Zavadskie reading» (2011, Rostov-on-Don), "Healthcare in
the Russian Federation, CIS and European countries" (2011, Moscow), "Medicine:
new developments in theory and clinical practice" (2011, Sharja), XVII
International Congress of Rehabilitation Medicine and immunorehabilitation and V
World Forum on asthma and respiratory allergies (2012, New York York) and 6
Republican, in particular, "Achievements and prospects for prevention, diagnosis,
treatment and rehabilitation of internal diseases" (2009, Tashkent), "Clinical
Immunology, Immunogenetics - interdisciplinary problems" (2010, Tashkent), VII
Congress tuberculosis and pulmonology Uzbekistan (2010, Tashkent), "Current
issues of medicine" (2010, Samarkand), "Actual problems of medicine" (2012,
Andijan), meetings of the Academic Council of the Institute of Immunology of the

60

Academy of Sciences of the Republic of Uzbekistan and the research seminar at
the Scientific Council (2013, Tashkent).

Publication of results.

On the topic of the dissertation is published 32

scientific papers, including 7 in foreign journals.

Structure and volume of dissertation.

The dissertation consists of an

introduction, five chapters of their own research findings, a list of references, 189
pages of text, 54 tables and 6 figures.

MAIN CONTENTS OF DISSERTATION

In the introduction the urgency of the thesis, formulated the goal and

objectives of the study, the main points to be defended, given scientific novelty and
scientific and practical significance of the results provides information about
testing and publication of the results of work, scope and structure of the short
dissertation.

The first chapter of the dissertation

presents a literature review, consisting

of five sub-chapters, which provides information about the current state of the
problem of asthma in the adolescent population; immunological mechanisms of
pathogenesis and participation of cytokines in immune regulation in bronchial
asthma in adolescents studying molecular genetic basis of several genes
responsible

for

the

development

and

predisposition

to

asthma;

immunofarmakodrugs use contemporary ideas in asthma.

The second chapter of the dissertation

describes the materials and methods.

In accordance with the objectives and tasks of the work carried out a
comprehensive survey of 4094 adolescents from 2007 to 2011. Program of
scientific research has been carried out on the basis of Samarkand city adolescent
clinic and department of Allergology-Pulmonology Samarkand City Medical
Association named after M.N. Khaitov. According to the scheme approved by the
International Symposium on periodization age puberty, isolated adolescence (boys
- from 13 to 16 years girls - from 12 to 15 years) and adolescence (boys - 17 to 21
years of girls - 16 to 20). Clinical diagnosis verification in the thesis was carried
out in accordance with the international classification of WHO (X revision, ICD-
10) diagnostic criteria and Global initiative for asthma (GINA, 2006).

The survey included a survey to identify the prevalence of asthma among

adolescents, followed by a sample of adolescents to clinical and functional
examination, together with specialist’s adolescent clinic. Among surveyed
contingent boys in adolescence was - in 1224, in the youth - 766 girls in
adolescence was - in 1318, in the youth - 729. The study population was
Samarkand - 2326 Urgut district - 1711 persons puberty. If you suspect a common
asthma conducted laboratory and instrumental methods of diagnosis, including the
study of a general analysis of blood leukocyte count, total sputum examination,
chest radiography, electrocardiography, and the study of respiratory function
(ERF).

Depth immunological studies were conducted in cohort of 237 patients with

AD and healthy individuals adolescence, which in the course of research studied

61

immunological (CD3

+

, CD4 +, CD8

+

, CD16

+

, CD19

+

, CD23

+

, CD95

+

, IgA, IgM,

IgG) and cytokine status (IL-6 and INF-γ).

For molecular genetic testing used in the DNA samples of 204 patients BA

Uzbek nationality aged 12 to 21 years, selected in the study. Control group
consisted of 56 healthy individuals without clinical manifestations of allergic,
autoimmune, and infectious and inflammatory diseases, matched by sex and age
with patients and do not have family history of atopic diseases.

Among 57 patients with asthma in adolescents during their stay in hospital

was conducted nonspecific immunotherapy drugs polioksidony and cikloferon
basic therapy in the complex. In accordance with Regulation GINA adolescents
with asthma as basic therapy received cromolyn sodium - Intalum 5 mg,
antihistamine (Zyrtec), inhaled corticosteroids - fluticasone propionate 50/100 or
Beclazon eco-light breathing 100/250, as a bronchodilator received β2-agonist
short steps (salbutamol or fenoterol). Prophylactic efficacy was assessed by clinical
characteristics not earlier than one year after the course of therapies.

To study the prevalence of asthma in the thesis we used a questionnaire

screening using a questionnaire European respiratory society. Specialized profile
approved and recommended by researchers for the epidemiological screening of
BA.

Ventilation lung function was studied alone for spirometer «SPIROSIFT SP-

5000» (Fukuda DENSHI, Japan) with automatic processing parameters.
Bronhodilyatatsionny test was performed by the standard technique. Reversibility
of bronchial obstruction was considered positive for growth in FEV1 of 15% or
more.

Analysis of polymorphic variants and GSTπ1 FcεRIβ gene carried by

polymerase chain reaction of DNA synthesis (PCR) thermocycler for RFLP
analysis with primers Forward - 5'-GTG GGG ACA ATT CCA GAA GA-3
'Reverse - 5'-CCG AGC TGT CCA GGA ATA AA-3'; Forward - 5'-GTA GTT
TGC CCA AGG TCA AG-3' Reverse - 5'-AGC CAC CTG AGG GGT AAG-3
'and the subsequent detection of the restriction fragments by electrophoresis in a
6% polyacrylamide gel. HLA-phenotype to a standard mikrolimfocitotoxic test
(Terasaki P.I.) c using a panel of HLA-antisera St. Petersburg Research Institute of
Hematology and Blood Transfusion.

To test lymphocyte subpopulations and their monoclonal antibodies used and

differentiation activation antigens CD3

+

, CD4 +, CD8

+

, CD16

+

, CD19

+

, CD23

+

,

CD95

+

. The concentration of serum immunoglobulin’s: IgG, IgM, IgA was

determined by radial immunodiffusion according to Mancini gel (Mancini et al.).

Determining the level of INF-γ and IL-6 in serum were determined by

enzyme immunoassay using a test system for ELISA "IFA-INF-γ - IL-6" ("Vector-
Best", Russia, 2009).

Statistical analysis was performed on the programs developed in the package

EXCEL using a library of statistical functions with the calculation of the arithmetic
mean (M), the error of the arithmetic mean value (m), the Student test (t), the
probability of error (p), the Pearson correlation coefficient (r). When genetic

62

studies calculated criterion - χ2, P

Value

, RR-relative risk, EF-figure etiologic

fraction and PF - figure preventive fraction.

The third chapter

of the dissertation

deals with the results of the survey

students in high schools and colleges to determine the prevalence and clinical
features of asthma in the adolescent population, which was conducted in two areas
of Samarkand region: in Samarkand (4 Lyceum College 2) and Urgut district (3
colleges, 3 Lyceum). Based on analysis of questionnaire data was formed by a
group of persons who had obstruction syndrome in the past 12 months. According
to our data, such persons was 388, which accounted for 9,6% of all respondents.
Girls accounted for 59,1% (229 people), 40 boys, 9% (159 people). As can be seen,
asthma among girls living in the investigated region, met more often than boys -
teenagers. As a young boy patients were also less than the girls - teenagers. The
basis for the study of two areas of Samarkand was the fact that one of them (Urgut
district) population is engaged tabak. In this regard, is of particular interest to
compare the frequency of occurrence of astmа symptoms adolescents living in
different areas of the region.

Was interviewed in 1711 adolescent children - college students, high schools

Urgut tobacco-growing areas. According to our data, the number of adolescent
children with the presence of asthma among them was 185, which accounted for
10,8% of all surveyed. Number of teenagers college students involved in
questioning of Samarkand - was 2326, and the results of a questionnaire on
symptoms of asthma was observed in 203 adolescents, representing 8,7% of all
surveyed teens.

In general, according to our results among the surveyed population of the

Samarkand region rate of occurrence of asthma among adolescents 9,6% and was
at a slightly

higher level in the cohort of females, both in adolescence and in young

adulthood.

Fig. 1. Distribution of those surveyed teens

63

The second stage of examination (clinical and functional studies) was covered

by a contingent of teenagers who indicated in the questionnaire at least one of
asthma symptoms in the last 12 months.

The examination of boys and adolescents with suspected asthma and intercept

of oriented reduced FEV

1,

PEF, MEF

25

, MEF

50

, MEF

75

, MEF

25-75

at a relatively

normal 'values of FVC, which corresponds violations obstructive pulmonary
ventilation.

Study of respiratory function after inhalation of a bronchodilator 15 minutes

manifested increase in FEV1 and other indicators of pulmonary ventilation by
more than 15% from baseline values corresponding to the normalization of all
parameters of respiratory function to the level of standards. According to the
results of our study revealed changes ERF, reversible test bronchodilator
(salbutamol), allowed to confirm the diagnosis of asthma in 243 adolescents,
representing 62,6% of the examined patients.

To study the clinical characteristics of the disease according to profiles to

characterize the frequency of comorbid conditions. In our studies, 73,9% of the
patients, asthma combined with allergic rhinitis, which is characterized by
predominantly mild. In this mixed form of respiratory allergy, AR with asthma met
in 88 teens surveyed, accounting for 44%. Most patients with adolescent asthma
along with AR was associated with allergic diseases such as vnerespiratornymi -
atopic dermatitis, 16,6% of the adolescents, 53,7% of allergic conjunctivitis,
urticaria / angioedema 14%. 7,6% of adolescents surveyed mentioned the presence
of a food allergy, and 8,1% - about drug allergies.

Verification of the diagnosis of asthma according to the diagnostic criteria for

Global initiative for asthma allowed to determine the features of clinical course
severity. We examined adolescents for mild persistent observed in 8,8% of cases,
periodical exposure for - BA reported among 91,2% of patients.

Thus, in a population of adolescents living in the Samarkand region, a study

was conducted asthmas frequency of symptoms, which revealed the true
prevalence of asthma among this category. Found that the majority of adolescent
was stated periodical exposure for asthma, at least - for persistent disease. The
patients were studied the structure of BA related allergic conditions, and also
investigated the changes in functional performance characteristics at different
severity of asthma, during which yielded important scientific and practical results.

The fourth chapter

of the dissertation

presents the results of the study of

immune status features a healthy population and adolescent patients with asthma.
Relative performance CD3

+

cells in peripheral blood of healthy adolescent

population amounted to 45,5±0,5%, CD19

+

cells - 21,9±0,3%, the average values

of the subpopulation of T-helper lymphocytes - 24,4±0,3%, T-suppressors -
21,1±0,3%, natural killer cells - 17,2±0,3%, and serum immunoglobulin’s major
classes: IgA - 186,7±13,35mg%, IgM - 111,2±4,47mg%, IgG - 901,2±67,18mg%.
A comparative study of the parameters of the immune status of healthy adolescent
male and female differences in the mean values of these indicators have been
identified.

64

In the study of the T cell immune contingent link to examinees identified

significant decrease in the average relative content of CD3

+

asthmatic patients

adolescence (36,8±0,5% as compared to 45,5±0,5% in control, p<0,01).
Characterized by a subpopulation of CD4

+

levels 19,5±0,3% as compared to

24,4±0,3% in the controls (p <0,01). CD8

+

content was also significantly reduced

to 17,2±0,3% at 21,0±0,3% in controls (p<0,01). Results obtained in regard to NK-
cells in asthma adolescence indicate a trend toward reduction of the indicator
(16,0±0,3% as compared to 17,2±0,3% in control, p<0,02).

0

10

20

30

40

50

CD3+%

CD4+%

CD8+%

CD16+%

CD19+%

CD23+%

CD95+%

45,5

24,4

21,1

17,2

21,9

21,8

20,2

36,8

19,5

17,1

16

18,3

18,6

17,4

practically healthy

patients with asthma

Fig.

2

.

Immune status of patients with asthma in adolescence in s plants

Serum IgA, IgM in the cohort of adolescents with asthma undergoing

significant changes, characterized by a significant reduction in data
immunoglobulins. IgG levels in patients with asthma was slightly elevated, not
significantly different from the group of healthy adolescents. It should be noted
that the cohort of patients tested was a significant decrease in the number of B-
lymphocytes.

The results showed that patients with adolescents with asthma, there is a

significant reduction of both CD23

+

- cells and the relative amount of CD95

+

- cells,

which are markers of activation of T and B lymphocytes.

Improved knowledge about the functioning of the immune status of the links

in the age periods in asthma is of practical importance, which will discuss the
tactics of therapeutic and preventive aspects of immunomodulation. Intermediate
CD3

+

- cells, reflecting a common pool of T-lymphocytes in patients with asthma

and adolescent boys, was 35,4±1,1% and 39,6±0,59% respectively. It can be seen
that the lowest level of this indicator registered patients adolescent age group.
When analyzing immunoregulatory lymphocyte subpopulations minor differences
detected level CD4

+

- cells in the age groups , but the level of CD8

+

- cells differed

significantly increased in patients adolescence (17,2±0,32% compared to
11,2±0,6%, p<0,02), although in general not reached the level of control
parameters (21,1±0,3%, p<0,05). When comparing the level of CD16

+

in the target

age groups revealed that if a group of patients with asthma boys this figure remains

65

at healthy individuals , then the adolescent patients analyzed different figure as a
significant decrease in relation to the performance of the control group (13,6



1,1%

compared to 17,2±0,3%, p<0,01) , and young patients with asthma group
compared to 16,0±0,39%, (3,6



1,1%, p<0,05). Level of CD19

+

-cells was

significantly reduced in the group of patients with asthma in adolescents compared
with the control group (18,4±0,30% compared to 21,9±0,3%, p<0,02). Significant
differences in the content of CD19

+

- cells in the comparison groups were found.

In order to identify the pathogenetic significance of the identified changes in

the profile of the immune system of the surveyed cohort analyzed the relationship
immune parameters, on the one hand, with the clinical and pathogenetic form of
asthma, and the other - with different phases of its course. The characteristic
features of the various options studied immunodeficiency disease, reflecting a
reduced amount of the circulating pool of CD8

+

and CD95

+

- positive lymphocytes

in the NA and the MA. The most distinct relationship with the phase of acute
illness on the background of increasing trend indicator activation marker of B
lymphocytes had fluctuations of serum immunoglobulin’s A and M. Reverse
nature of these changes (a significant increase in the level of IgM and IgA
reduction in exacerbation of the disease and, on the contrary a significant decline
IgM to 122,3±6,4mg% and 92,3±5,1mg% and an increase in IgA 124,7±2,4 mg%
141,5±7,7 to mg% in the remission phase), apparently reflecting focus
pathogenetic mechanisms depending on the nature of the disease. To participate in
the observed disimmunoglobulinemiya the pathogenesis of asthma also indicate the
information obtained about the oppression of production IgA in patients with the
presence of family history on allergic diseases (137,5±7,9 mg% vs. 161,5±8,7
mg%, p<0,02). An interesting fact is also represented a significant deficiency
CD8

+

, CD16

+

and CD19

+

lymphocyte populations in these patients compared to

patients without burdened allegroanamnesis (p<0,05, p<0,01, p<0,05 respectively).

Profound disturbances of the immune status in groups of patients with asthma

adolescence require consideration inclusion of immunomodulatory drugs in
complex basic therapy to restore quantitative indicators of immunity.

The fifth chapter of the dissertation,

respectively, to the tasks of the thesis

is devoted to the establishment of pathogenic and informative power of competing
products cytokines serum IFN -γ and IL-6 in patients with asthma in adolescence.

Thus, the content of the cytokine IL-6 in peripheral blood serum of patients

with asthma in adolescence was significantly increased up to 24,0±3,8 pg/ml at
8,6±3,6 pg/ml in controls (p<0,05). To clarify the nature of communication and
production of IL-6 with clinical and pathogenic forms of the disease was a
comparative analysis with the study of pathology. Found that adolescents with
asthma with predominantly infectious disease mechanisms, recorded the most
elevated levels of IL-6 production, which averages, accounting for 37,9±1,3 pg/ml
in peripheral blood seems to reflect the severity and depth of inflammation of the
bronchial tree in this group of patients. Patients with major mechanisms in the
pathogenesis of allergic disease, in contrast, a marked decrease in production of
IL-6 up to 32,1±1,1 pg/ml. It is interesting to the finding of significant decrease of
the level of IL-6 production in patients with mixed asthma.

66

8,6

24

32,1

37,9

16,6

0

5

10

15

20

25

30

35

40

IL-6 pg/ml

practical healthy

total group of patients with asthma

АА

NА

MА

Fig.

3. Indicators IL-6 asthma patients in adolescence

Analysis of the parameters of interferon status in the subgroups of patients

with asthma in adolescence found low INF-γ production by immunocompetent
cells. Thus, the content of the cytokine INF-γ in peripheral blood serum in patients
with asthma in adolescence was significantly reduced to 7,9±0,5 pg/ml at 13,9±1,0
pg/ml in controls (p<0,01).

To clarify the nature of communication and INF-γ production in the studied

pathology with clinical and pathogenic forms of the disease, we conducted a
comparative analysis.

As a result of statistical analysis, the lowest level of production INF-γ

(4,9±0,2 pg/ml; p<0,01) was registered in the group of patients with asthma in
adolescence with allergic clinical pathogenetic form of the disease. INF-γ
production by immunocompetent cells in mixed-dependent and infectious forms of
asthma in adolescence was at almost the same low level, significantly different
from the group of healthy adolescents.

0

2

4

6

8

10

12

14

INF-γ pg/ml

13,9

7,9

4,9

8,3

9

practical healthy

total group of patients with asthma

АА

NА

MА

Fig.

4. Indicators of INF-γ in patients with asthma adolescence.

These features production of IL-6 and INF-γ may provide additional objective

criteria and orientation of the inflammatory response in healthy and patients with

67

various clinical and pathogenetic variants of BA, allowing differentiated approach
to the choice of therapy and increase its effectiveness.

In order to assess the significance of competing cytokines IL-6 and INF-γ

with the clinical features of asthma examined the values of these parameters in the
course of the disease, which has allowed to establish expressed increased
production of IL-6 during exacerbation of asthma. The values of this parameter
made 31,3±1,4 pg/ml vs. 21,8±2,1 pg/ml at remission and 8,6±3,6 pg/ml in the
healthy subjects (p<0,05, p<0.01, respectively). Analysis of INF-γ production in
connection with the phase of the disease indicates the inhibition of this cytokine
production in acute asthma to 6,1±0,7 pg/ml (control group 13,9±1,0 pg/ml,
p<0,02), while in remission, this figure increases slightly, remaining still
significantly reduced as compared to healthy subjects (p<0,05). Identified levels
investigated the relationship between cytokines and a phase of the disease reflect
the participation of various parts of the immune status in the pathogenesis of the
disease.

One of the main functions of IL-6 and INF-γ is the regulation of the

differentiation of immune cells. To clarify the nature of communication and
immunological disorders with the level of production of IL-6 and INF-γ in
peripheral blood, we conducted a comparative analysis to examine the spectrum of
immunological parameters in the study of pathology with the content of serum
cytokine levels. There is an inverse relationship between the level of IL-6 and the
content of CD3+-cells (r=-0,17; p<0,05), CD4+-cells (r=-0,15; p<0,05), CD8+-
cells (r=-0,25; p<0,05) and found a positive correlation between IL-6 serum levels,
and the pool of circulating CD16+-cells (r=0,14; p<0,05). At the same time, there
is a direct correlation between IL-6 and levels of CD19+ BA adolescent patients
(r=0,20; p<0,05). The level of IL-6 and is weakly expressed in a negative
correlation with the content of IgG, was positively correlated with the
concentration of IgA and IgM.

Correlation analysis results of the study it was found that the content of

indicators INF-γ thoroughly negatively correlated with the mean values of all
parameters of cellular immunity CD3+ (r=-0,19; p<0,05), CD4+ (r=-0,15; p<0,05),
CD8+ (r=-0,17; p<0,05), CD16+ (r=-0,14; p<0,05). The results of correlation
analysis of the concentration INF-γ with indices of humoral immunity revealed
pronounced negative correlation with indicators of CD19+-cells and IgA, IgM.
Here IgG is correlated positively with the level of INF-γ (r=0,34; p<0,05).
Also studied the correlation dependence of IL-6, INF-γ with activation markers of
T and B-immunity. Indicators of IL-6 correlates positively with CD23+ (r=0,39;
p<0,02), while the level of IL-6 in patients was pronounced negative correlation
with the content of CD95+ (r=-0,32; p<0,02). It was also found that INF-γ
negatively correlated with the content of CD23+ (r=-0,30; p<0,05) and CD95+ (r=-
0,10; p<0,05).

Set multiple interconnection levels indicate interdependence cytokine IL-6

and INF-γ content with impaired balance between the processes of activation
(CD23+) and elimination (CD95+) in asthma in adolescents. The findings also

68

suggest a possible regulatory role of the studied cytokines in the immune response
characteristic phenotypic variants of BA.

The six chapter of the dissertation

to clarify the mechanisms of the disease

studied the significance of alleles genes FcεRIβ, GSTπ1 development and
susceptibility to asthma.

In the study of 109C/T polymorphism FcεRIβ of healthy individuals, the

frequency of 109T-allele in a population of ethnic Uzbeks 46,8% 109C allele –
53,2%. For genotyping of patients with asthma 109T - allele was detected in 58,6%
of cases, 109C allele - in 41,4% of cases (χ2=3,59, p=0,058, OR=1,24). In studying
the frequency distribution of genotypes of polymorphic marker gene FcεRIβ
genotype 109T/T in healthy individuals is set to 32,6% of the heterozygous
genotype 109C/T – 28,3%, and 109C/C – 39,1%. BA patients 109T/T-genotype
detected in 45,4% of cases, 109C/C - genotype - 28%, 109C/T-genotype in 26,6%
(χ2=1,84, p=0,17, OR=0,4). The analysis of distribution of allele and genotype
frequencies of polymorphic variants - 109C/T gene FcεRIβ revealed unreliable
differences between the total group of patients with asthma and control subjects.
Table 1 shows the results of the analysis of the frequency of alleles and genotypes
of polymorphism 109C/T gene FcεRIβ among patients depending on the clinical
variants of the pathological process. As can be seen from the table, the analysis of
allele frequencies at 109C/T polymorphism FcεRIβ found that the 109T allele in
patients ABA occurs significantly more frequently than in the healthy subjects
(79,1% versus 46,7%, respectively, χ2=26,0, p=0,000, OR=3,12). The study of
polymorphism genotypes shows that in patients with homozygous variant
frequency ABA 109T/T gene significantly higher than the control group of healthy
individuals (64,1% vs. 32,6%, respectively, χ2=11,45, p=0,0007, OR=3,68).

Table.

The distribution of alleles and genotypes 109C/T polymorphism of gene

FcεRIβ in groups of patients with asthma and ah healthy individuals

1

0

9

C

/T

p

o

ly

m

o

rp

h

is

m of

g

en

e

Fc

εRI

β

G

ro

u

p

s

N

allele

Genotypes

χ

2

P

V

al

u

e

OR

109C

109T

109

C/T

109

C/C

109

T/T

CG

46

49-

53,3%

43-

46,7%

13-

28,3%

18-

39,1%

15-

32,6%

1

1

,

4

5

0

,0

0

0

7

3

,68

AA

103

43-

20,9%

153-

79,1%

31-

30,1%

6-

5,8%

66-

64,1%

NA

19

26-

68,4%

12-

31,6%

8-

42,2%

9-

47,3%

2-

10,5%

2

,34

0

,12

0

,05

MA

14

19-

67,8%

9-

32,2%

3-

21,4%

8-

57, 2%

3-

21,4%

0

,21

0

,64

0

,13

69

Thus the frequency of 109C/C in patients was significantly lower ABA level

characteristic of the healthy part of the population studied persons (5,8% compared
with 39,1%). Frequency of 109C/T gene FcεRIβ in this group of patients did not
differ almost from the control group. The analysis features of the genotype groups
in patients with MA and NA showed no significant differences in allele
frequencies and genotype polymorphism 109C/T gene FcεRIβ compared with a
control group of healthy individuals.

In order to evaluate the association of asthma by gender analyzes the

frequency distribution of alleles and genotypes 109C/T polymorphism FcεRIβ:
patients boys frequency-109T allele was 78,5% FcεRIβ, compared with asthma
(67,2%) girls and was significantly higher than in males in the control group
(56,2%) (χ2=5,2, p=0.02, OR=4,71).

Interest in the relationship Profile genetic markers with clinical features of

such diseases as asthma, for which shows numerous cases of family aggregation
has existed for over 30 years, but nonetheless, they remain far from being solved.
From the data obtained, taking into account the nature of the identified gene
polymorphism analysis features FcεRIβ genotype in clinical groups of patients
differing in the presence of family history on allergic diseases. As shown by the
results of studies of individuals with hereditary burdened genotype 109T/T met in
72,4%, genotype 109C/T - in 20,7% of cases, while the number of patients with
109C/C genotype composition 6,9% (χ2=9,75, p=0,001, OR=1,27). Important
feature revealed in our research concerns the significant differences of allele
frequencies 109C and 109T gene FcεRIβ (χ2=17,8, p=0,000, OR=4,21) between
the control group and patients with hereditary abnormalities.

Thus, patients with a family history on allergic diseases characterized by

increased 109T allele association with asthma. It is also noted an increase in the
incidence of asthma patients with genotype 109T/T compared to 109C/C
homozygous and 109C/T heterozygous genotype in the group with the presence of
family history.

Analysis of relationship between 109C/T polymorphism FcεRIβ level of T-

lymphocytes and their subpopulations in asthma in adolescents found that in
patients with genotype 109T/T recorded reduced performance relative to the
amount of CD3+ 34,7±0,41% as compared with the in patients with the C/C and
C/T genotype (p<0,05). The downward trend was also observed in patients with
genotype 109T/T with respect to indicators of absolute values of CD4+ and CD8+,
showing false differences. Indicators of CD16+ were not significantly different
between treatment groups genotypes FcεRIβ in asthma in adolescents. The highest
mean values of IgG were detected in the group is patients with genotype 109T/T.
The lowest rate was registered IgA in patients with genotype 109T/T, which is
significantly different from those with 109C/C genotype. The downward trend in
IgM was also observed in patients with genotype 109T/T. Individuals with
genotype 109T/T recorded a significant increase in the relative amount of CD23+
compared with a group of patients with 109C/C, C/T genotype (p<0,05, p<0,01,
respectively), while important differences CD95+ - cells in combination of
genotypes in patients with asthma adolescents were observed. There was a

70

significant difference between CD23+ homozygous genotype 109T/T and 109C/C
(p<0,05).

All the studies in the study and identification of functionally weakened

combinations of genotypes and their relationship with the parameters of the
immune status lead to the conclusion that to launch allergic reactions to adverse
interaction gene combinations FcεRIβ with indicators of cellular and humoral
immunity.

In the analysis of gene polymorphism Ile105Val GSTπ1 among healthy

individuals, the frequency 105/Ile - allele in a population of Uzbek people is 65%,
105/Val - 35%. For genotyping of patients with asthma 105/Ile - allele was
detected in 79,1% of cases, 105/Val - allele in 20,9% of cases. In studying the
frequency distribution of genotypes of polymorphic marker gene GSTπ1 Ile-
105/Ile-105 genotype in healthy individuals is set to 30% of cases, the
heterozygote - 70%, and Val-105/Val-105 - not registered. BA patients Ile-105/Ile-
105 - genotype was detected in 60.4% of cases, Val-105/Val-105 genotype - in
2,4%, Ile-105/Val-105 - genotype in 37,03% (χ2=2,24, p=0,13).

The results obtained with respect to polymorphism gene GSTπ1 indicate the

existence of the Association, c one hand, genotype Ile-105/Ile-105, and on the
other allele carriers Ile-105 in patients with asthma in the Uzbek population in
terms of statistically insignificant χ2 and P

Value

. The study of gene polymorphism

Ile-105/Val-105 GSTπ1 an allergic form of asthma found that is relatively
significant (χ2=3,49, p=0,06) accumulation of unfavorable genotype Ile105Ile
(62%) compared with the same genotype in Control (30%). The analysis features
of genotype distribution in groups of patients NBA and MBA showed no
statistically significant differences in the frequencies of genotypes and alleles of
the gene polymorphism Ile-105/Val-105 GSTπ1 compared with the control group
of healthy individuals.

Thus, the specificity of gene polymorphism Ile-105/Val-105 GSTπ1,

manifested Association Ile105Ile genotype combination with allergic form of the
disease in the Uzbek population.

Studies of gene polymorphism GSTπ1 by gender persons surveyed indicate

that girls frequency Ile105 - GSTπ1 allele was 87%, compared with asthma (65%)
boys and was not significantly higher than that of girls in the control group (13%)
(χ2=3,216, p=0,073). The combination of genotypes shows that patients
homozygous variant frequency girls genotype Ile105Ile gene GSTπ1 significantly
higher than the control group of healthy individuals (χ2=3,936, p=0,047).
In studies of variation in levels of T-lymphocytes and their subpopulations in
asthma in adolescents depending on the gene polymorphism genotypes Ile-
105/Val-105 GSTπ1 revealed that in patients with genotype I/I recorded reduced
performance CD3

+

, CD8

+

and CD16

+

to 33,6±0,45%, 15,6±0,88% and

15,6±0,88%, respectively, compared to a group of persons who did not have this
genotype. Significant differences were calculated with respect to the relative
amount of CD3+ as compared with the Val-105/Val-105, Ile-105/Val-105
genotype and between genotypes and Val-105/Val-105 Ile-105/Val-105 (p< 0,01,
p<0,02, p<0,05, respectively), CD4+-cells compared with Ile-105/Val-105

71

(p<0,02), CD8

+

-cells as compared with the Val-105/Val-105 and also between

genotypes and Val-105/Val-105 Ile-105/Val-105 (p<0,02 in both cases) and CD16

+

in comparison with the genotype Val-105/Val-105 Ile-105/Val-105 gene
polymorphism GSTπ1. Reduction in the absolute measure CD3

+

-cells in the

patients had asthma genotype Ile-105/Ile-105, and CD4

+

- genotype Val-105/Val-

105, which revealed statistically insignificant differences.

In the study of differences in the relative number CD19

+

-cells between the

compared groups of patients was found between the accuracy of the performance
groups and genotypes Ile-105/Val-105 Val-105/Val-105 (p<0,02). Registered a
significant increase in the level of IgG in patients with asthma, adolescents with
homozygous genotype and heterozygous genotype Ile-105/Ile-105 Ile-105/Val-105
compared with homozygous genotype Val-105/Val-105 (p<0,01 in both cases).
Expressed a reduced level of IgA was associated with the presence of genotype I/I
BA patients against patients with asthma adolescents with genotype Val-105/Val-
105 (p<0,05). Significant difference in the level of IgM concentration between
genotypes were not available.

Found that adolescents with asthma genotype Val-105/Val-105 relative and

absolute levels of CD23

+

than in groups Ile-105/Ile-105, Ile-105/Val-105. Thus,

the average value of the relative content of the activation marker CD23

+

genotype

Val-105/Val-105 significantly different from the group of patients with genotype
Ile-105/Val-105 (p<0,05), and the level of the absolute content of CD23

+

in the

group of individuals with Val -105/Val-105 genotype was equal to 558,5±32,3,
which was significantly higher compared to 415,15 ± 26,3 group genotype Ile-
105/Ile-105 gene GSTπ1 (p<0,05). Significant differences were manifested
decrease CD95

+

content depending on Ile-105/Val-105 gene polymorphism GSTπ1

studied patients reported in individuals with genotype Ile-105/Ile-105, compared
with the group having genotype Ile-105/Val-105 (p<0,05).

Thus, the identified association Ile-105/Val-105 GSTπ1 gene polymorphism

with the disease itself and the immune status in asthma suggest that genes
metabolizing enzymes play an important role in the development of direct
hereditary predisposition to asthma, and the indirect formation of immune system
disorders in the pathogenesis of the disease.

The seven chapter of the dissertation

presents the results of evaluating the

effectiveness of the use of immunomodulators polioksidony and cikloferon in
asthma in adolescents with "unfavorable genotypes" 109T/T gene and FcεRIβ Ile-
105/Ile-105 gene GSTπ1.

The data on the results of complex treatment of adolescents with asthma to

include polyoxidonium indicate marked recovery from the immune system in this
scheme of therapeutic treatment. Especially notable was the increase in the relative
(with 36,9±0,59% to 44.2±0,7%, p<0,01) the amount of CD3

+

. In respect of T-

lymphocyte subpopulations for the used method of treatment characteristic was a
significant increase in the relative content of CD4

+

, CD8

+

-cells. In particular, the

CD4

+

count increased to 19,6±0,23% to 27,6±0,3% (p<0,01) increase substantially

the total number of CD8

+

-cells (c 17,2±0,32% to 23,1±0,4%, p<0,01). Number of

B-lymphocytes increased from 18,4±0,20% to 21,6±0,9%. Significantly increases

72

the content of CD95

+

(from 17,3±0,43% to 23,2±0,5%, p<0,01). Complex therapy

polyoxidonium also accompanied by a significant increase in the concentration of
IgA, which is one of the leading factors of antimicrobial and antitoxic protection in
the lumen of the airway (from 17,2±0,32% to 23,1±0,4%, p<0,01 ) and a trend to
higher levels of IgM and IgG.

To achieve the objectives of the study evaluated the clinical and

immunological efficacy of the use of synthetic interferon inductor - cikloferon in
complex treatment of patients with asthma in adolescence.

After applying cikloferon marked improvement in immune status. Thus, in the

complex treatment of adolescents with asthma, further cycloferon noted a
significant increase in the relative (with 36,9±0,59% to 41,7±0,4%) number of
CD3

+

-cells compared with the original data. Immunoregulatory lymphocyte CD4

+

(a 19,6±0,3% to 24,2±0,3%) and CD8

+

-cells (with 17,2±0,32% to 20,12±0,3%)

increased, almost reaching the average values of the control group. Showed a slight
increase of activated lymphocytes bearing markers of T-cell activation CD95

+

, a

marker of B lymphocytes activate CD23

+

. There was a trend to increased

concentrations of immunoglobulins IgA, IgG and IgM.

Thus, in patients with asthma adolescents with genotypes 109T/T gene and

FcεRIβ Ile-105/Ile-105 gene GSTπ1, receiving complex treatment with
immunomodulatory drugs - polioksidony and cikloferon, noted the reopening of
most clinical and functional parameters and immunoreactivity, the onset of clinical
remission disease.

Effectiveness of prevention of asthma using immunomodulatory drugs and

interferon inducer polioksidony cikloferon also evaluated the results of observation
of patients treated with "unfavorable genotypes" within 12 months. The monitoring
of clinical indicators led to the conclusion that if basic hyposensitization therapy
changes do not present fairly the average duration and number of exacerbations per
year, the clinical data of patients disinfected cycloferon-tion, compared with the
initial data indicate a significant decrease in the frequency of exacerbations in
during the year. After treatment cycloferon statistically significant decrease in the
frequency of exacerbations with 6,9±0,4 times to 4,3±0,5 per year.

In the study of patients treated polioksidony also showed a significant

decrease in the number of exacerbations. Reduction of asthma exacerbations
during the year in patients receiving treatment course with the drug polioksidony,
manifested in the average 3-4 exacerbations per year, whereas prior to the current
treatment of acute illness were recorded, on average, up to 7 times during the year
(p<0,05). The average duration of an exacerbation in patients treated polioksidony
has significant differences from the index, calculated prior to the application of
immunomodulators in treatment of asthma in adolescents.

Severity and duration of symptoms (temperature reaction, symptoms of

intoxication, rhinorrhea, cough, and changes in the lung determined physical signs)
in the groups treated with drugs polioksidony and cikloferon in a complex of basic
therapy differed significantly. For adolescent patients with asthma who received
polioksidony these phenomena, respectively, lasted an average of 2,21±1,12,
2,6±1,11, 3,81±1,20, 4,6±1,19, 3,8±1,25 days, whereas in patients with asthma

73

treated with teenagers cikloferon these phenomen lasted an average of 3,2±1,14,
3,4±1,16, 4,2±1,31, 7,8±2,22, 4,9±1,13 days. Consequently, the inclusion complex
Polyoxidonium basic treatment contributes to more rapid elimination of all forms
of acute pulmonary involvement.

Thus, the results indicate that the courses of nonspecific immunotherapy

drugs polioksidony and cikloferon BA patients with genotypes 109T/T and Ile-
105/Ile-105 genes FcεRIβ, GSTπ1 2-3 times reduces the frequency of
exacerbations. According to the calculations positive indicators prevalent in
patients treated polioksidony advantage and reflect the inclusion of the drug in the
treatment of BA integrated circuits.

On the basis of detailed studies, we developed a model of multi-factor of BA.

It should be noted that this development has enabled a new way to consider the
pathological phenotype positions nonrandom combinations studied genes involved
in dysregulation of the immune response, impaired detoxification processes of
xenobiotics and receptor mechanisms of initiation of allergic inflammation, which
emphasize the importance of these processes in the development of allergic disease
in particular asthma.

On the basis of clinical and functional, immunological and genetic studies to

verify the diagnosis of asthma, we developed an algorithm for diagnostic
procedures, according to which at allergic examination should follow a three-tier
approach of their performance.

At the first stage it is recommended primarily by questionnaire and interview

to conclude expectation of asthma in a given individual. Then selected from cohort
to investigate ventilation lung function with holding bronchodilation test. With
positive results at this stage we can restrict the probability of having asthma. At the
second level of diagnostic measures , the detection of immunological disorders
documented changes in both cellular and humoral parts of the immune system and
the definition of the level of IL-6, INF-γ and a diagnosis of asthma defined
pathogenic form of the disease. Third level tests can detect adverse genotypes,
which confirms the certainty of the diagnosis of asthma.

Conducted screening, clinical and functional, immunological and genetic

studies have allowed to define approaches to preventive measures of asthma in
adolescents.

CONCLUSION

1. Set the frequency of occurrence of the disease and the structure of "asthma"

in the arid zone among teens. Said pathology is recorded in 9,6% of the population
surveyed adolescents, while the disease is more common among females. In the
structure of the disease prevails periodical exposure and mild persistent form.

2. Identified by clinical features of asthma among adolescents living in the

arid zone, indicate a high frequency of lesions of the bronchial tree association
with allergic processes in other organs and tissues: in 73,9% of the AR, 53,7% with
AK 16,6% with BA and 14% with urticaria/angioedema.

3. Found that in the study population of patients with asthma adolescence

occur expressed disturbances of the immune status, manifested deficit indicators as

74

cell (CD3

+

, CD4

+

, CD8

+

, CD16

+

), and humoral immunity (CD19

+

, IgA, IgG, IgM)

and activation markers (CD23

+

, CD95

+

). The immune status of patients with

asthma in young people, adolescence has distinctive features, the depth of detected
violations immunoreactivity was most pronounced in the younger age group.

4. In patients with bronchial asthma in adolescence revealed distinct changes

in cell-cell interactions in the immune system: a significant increase in the content
of Th2-cells secreted IL-6 is a regulator of maturation of antibodies and
immunoglobulin production itself, and vice versa reducing regulator activity of
Th1-cell cytokine INF-γ.

5. It was found that the contents of cytokines IL-6, INF-γ and in the peripheral

blood is in communication with one pathogenic disease. It is shown that the lowest
level of INF-γ production in the serum is characteristic of allergic clinical
pathogenic variant asthma in adolescence. Adolescents suffering from
predominantly infectious form of asthma, there is a sharp trend towards increased
production of IL-6 in peripheral blood.

6. Revealed that markers of increased risk of allergic forms of asthma in

adolescents Uzbek ethnicity are genotype FcεRIβ-109T/T allele FcεRIβ-109T,
low-risk markers - FcεRIβ-109C/C and allele FcεRIβ-109C. A high degree of
cohesion genotype FcεRIβ-109T/T allele and FcεRIβ-109T with hereditary burden
of asthma in the Uzbek population.

7. Among females ethnic Uzbek Association revealed Ile-105 allele and

genotype Ile-105/Ile-105 polymorphic gene locus GSTπ1 at high risk for asthma.
Revealed that the genotype associated with the development Ile-105/Ile-105
allergic form of asthma in adolescents Uzbek population.

8. Complex therapy with adolescents’ patients with asthma cikloferon and

polyoxidonium, providing immunocorrective effect, enhances the clinical efficacy
of basic therapy. In the study of prophylactic efficacy of immunomodulators
positive indicators prevailed in the group of patients receiving polioksidony,
necessitating its inclusion in the priority scheme of integrated treatment and
prevention of asthma in adolescents.

75

ЭЪЛОН ҚИЛИНГАН ИШЛАР РЎЙҲАТИ

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

LIST OF PUBLISHED WORKS

I бўлим (I часть; I part)

1. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х., Кадырова Р.Т. Особенности

иммунного статуса при бронхиальной астме в подростковом возрасте //
Вестник врача - Самарканд, 2010. - № 1. -С. 32-35.

2. Зиядуллаев Ш.Х. Генетическое тестирование при

бронхиальной астме

//

Вестник врача - Самарканд, 2010. - № 1.-С. 29-32.

3. Аралов Н.Р., Зиядуллаев Ш.Х. Возрастные периоды развития

иммунной системы // Вестник ассоциации пульмонологов Центральной Азии
- Ташкент, 2010. -№ 13. -С. 102-108.

4. Зиядуллаев Ш.Х. Патогенетическое значение IL-6 при БА у лиц

подросткового возраста // Вестник ассоциации пульмонологов Центральной
Азии – Ташкент, 2010. - № 13. -С. 26-29.

5. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М. Изучение уровня продукции γ-ИФН у

больных бронхиальной астмой в подростковом возрасте // Проблемы
биологии и медицины - Самарканд, 2010. - № 3. -С. 119-120.

6. Khaitova N. M., Ziyadullaev Sh. Kh., Aralov N.R. The prevalence of

asthma symptoms among adolescents in Samarkand region of Uzbekistan //
Medical and Health Science Journal, International Open Access Journal - Prague,
2011. - № 7. – pp. 99-101.

7. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М., Мухамедов Р.С., Жмырко Е.В.

Ile105Val полиморфизм гена GSTπ1 при бронхиальной астме в узбекской
популяции // Уральский медицинский журнал - Екатеринбург, 2011. - № 6. -
С.13-15.

8. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х., Аралов Н.Р. Иммунокорригирующая

терапия в комплексном лечении подростков с бронхиальной астмой //
Вестник последипломного медицинского образования – Москва, 2011. -№ 4. -
С. 39-42.

9. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М., Арипова Т.У., Умарова А.А.

Цитокиновый профиль при бронхиальной астме у подростков и юношей //
Бюллетень СО РАМН - Новосибирск. 2011. -№ 6. - С. 17-21.

10. Хаитова Н.М., Арипова Т.У., Зиядуллаев Ш.Х. Основные положения

по применению иммуномодулятов в клинической практике // Вестник врача -
Самарканд, 2011. - № 1. - С. 173-176.

11. Khaitova N. M., Ziyadullaev Sh. Kh., Mukhamedov R. S. Investigation of

association between bronchial asthma and gene FсεRIβ 109 C/T polymorphism in
Uzbek population // Medical and Health Science Journal, International Open
Access Journal - Prague, 2011. - № 8. - pp. 55-58.

12. Зиядуллаев Ш.Х. Продукция иммунорегуляторных цитокинов при

бронхиальной астме в подростковом возрасте // Вестник врача - Самарканд,
2011. - № 1. - С. 77-79.

76

13. Зиядуллаев Ш.Х. Роль гена высокоаффинного рецептора IgE в

формировании предрасположенности к БА в узбекской популяции //
Проблемы биологии и медицины - Самарканд, 2011. - № 3. - С. 56-59.

14. Зиядуллаев Ш.Х. Взаимосвязь между полиморфизмом гена GSTπ1 и

БА в узбекской популяции // Журнал теоретической и клинической
медицины – Ташкент, 2011. -№ 6. -С. 19-21.

15. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М., Аралов Н.Р. Применение

полиоксидония при бронхиальной астме у подростков // Сибирский
медицинский журнал – Иркутск, 2011. -№ 7. - С. 58-60.

16. Зиядуллаев Ш.Х. Функциональные тесты в диагностике

бронхиальной астмы у подростков // Вестник врача - Самарканд, 2011. -№ 4. -
С. 62-63.

17. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М. Генетические механизмы

иммунного дисбаланса при бронхиальной астме у подростков // Педиатрия -
Ташкент, 2013. - № 1-2. - С. 28-32.

18. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М. Профилактическая эффективность

иммуномодулирующих препаратов при бронхиальной астме у подростков //
Журнал теоретической и клинической медицины - Ташкент, 2013. -№ 3. - С.
70-72.

II бўлим (II часть; II part)

19. Ziyadullaev Sh. Kh. HLA-B40 in diagnostics of predisposition to

bronchial asthma // 9

th

International Congress on Cell Biology & 20

th

Annual

Conference of the Korean Society for Molecular and Celluar Biology.-Seoul
(Korea), 2008.- рр.359

20. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х., Аралов Н.Р., Турдибеков Х.И.

Распространенность симптомов астмы и аллергического ринита среди
подростков и юношей Самаркандской области // Достижения и перспективы
профилактики, диагностики, лечения и реабилитация при заболеваниях
внутренних органах» посвященная 90-летию организации НИИ курортологии
и физиотерапии им.Н.А.Семашко: Материалы Республиканской научно-
практической конференции.-Ташкент, 2009.-С.31.

21. Ziyadullaev Sh. Kh. Prevalence of symptoms of an asthma and allergic

rhinitis among teenagers of the Samarkand area // 14th Congress of the Asian
Pacific Society of Respirology.-Seoul (Korea), 2009. - pр.261.

22. Ziyadullaev Sh. Kh. Polymorphism gene FcεRIβ patients with bronchial

asthma in Uzbek population // Turkish Thoracic Society 13th Annual Congress.-
Istanbul (Turkish), 2010.-pр.251.

23. Dushanova G.A., Ziyadullaev Sh.Kh. Role of IL-6 in the pathogenesis of

BA in adolescent // 12

th

Asian-Pacific Congress of Clinical Biochemistry.-Seoul

(Korea), 2010.-pр.170.

24. Ziyadullaev Sh. Kh. Investigation of polymorphism gene glutathione S-

transferase P1 in patients with bronchial asthma in Uzbek population // European
Respiratory Society Annual Congress.-Barcelona (Spain), 2010.-pр.32.

77

25. Зиядуллаев Ш.Х. Уровень продукции γ-ИФН у больных БА в

подростковом возрасте // Клиническая иммунология, иммуногенетика -
междисциплинарные проблемы» с международным участием, посвященная
25-летию института иммунологии АН РУз: Сборник научных трудов научно-
практической конференции 11-12 октября 2010.-Ташкент, 2010.-С.46-47.

26. Зиядуллаев Ш.Х. Состояние иммунного статуса при бронхиальной

астме в подростковом возрасте // Материалы VII съезда фтизиатров и
пульмонологов Узбекистана.-Ташкент, 2010.-С.190-191.

27. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х. Продукция иммунорегуляторных

ИФН-γ и IL-6 цитокинов при БА в подростковом возрасте // Актуальные
вопросы медицины» посвященная 80-летию СамГосМИ: Материалы научно-
практической конференции с международным участием.-Самарканд, 2010.-
С.134-135.

28. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х. Исследование корреляционной

взаимосвязи некоторых цитокинов при бронхиальной астме в подростковом
возрасте // Завадские чтения: VI научно-практическая конференция молодых
ученых с международным участием 26 марта 2011.-Ростов-на-Дону (Россия),
2011.-С.66-68.

29. Зиядуллаев Ш.Х., Давидьян А.А. Спирометрия в диагностике

бронхиальной астмы у подростков // Медицина: новое в теории и
клинической практике: Материалы научно-практической конференции с
международным участием 22-24 апреля 2011.-Шаржа (ОАЭ).-С.24.

30. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х., Аралов Н.Р. Эффективность

иммуномодулирующей терапии в комплексном лечении подростков с
бронхиальной астмой // Здравоохранение Российской Федерации, стран СНГ
и Европы: сборник научных материалов международного медицинского
конгресса 6-8 июня 2011.-Москва (Россия), 2011.-С.139-140.

31. Хаитова Н.М., Зиядуллаев Ш.Х., Бобоназаров Б.Ш., Кадиров М.А.

Функциональные тесты в диагностике бронхиальной астмы у подростков //
Актуальные проблемы медицины: материалы республиканской научно-
практической конференции.-Андижан, 2012.-С.462.

32. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М., Исследование молекулярно-

генетических маркеров мультифакториальных заболеваний // XVII
международный конгресс по реабилитации в медицине и иммуно-
реабилитации и V всемирный форум по астме и респираторной аллергии.-
Нью-Йорк (США), 2012.-С.140.