Влияние фармакотерапии на функцию почек и эндотелия сосудов при экпериментальном ишемическом инсульте

«nevrologiya»—4(72), 2017

6

ВОПРОСы КЛИНИКИ, ДИАГНОСТИКИ И ЛЕчЕНИЯ НЕРВНыХ БОЛЕЗНЕй

В

исследованиях последних десятилетий продемон-

стрирована тесная взаимосвязь между церебраль-

ной и кардиальной патологией, возникающей вследствие

различных сердечно-сосудистых заболеваниях (ССЗ). Общ-

ность этиопатогенеза ССЗ привела к формированию обще-

принятых представлений об «ишемической болезни голов-

ного мозга и сердца» [1,4,6]. К сожалению, до настоящего

времени в литературе недостаточно данных о распростра-

ненности сочетанной патологии сердца, головного мозга и

почек. Головной мозг, сердце и почки в организме челове-

ка функционируют автономно друг от друга, но общим для

них является высокое потребление кислорода и аденозин-

трифосфата (АТФ), что определяет их высокую чувствитель-

ность к гипоксии. Сосудистая система выполняет коммуни-

кативную функцию, и любые изменения сосудистой стенки

(эндотелия), изменяя показатели центральной и перифе-

рической гемодинамики, будут способствовать изменению

транскапиллярного обмена, развитию гипоксии и гипотро-

фии тканей [7,8]. В свою очередь, при локальных некротиче-

УДК: 616.1+616.8+616-092

ВЛИЯНИЕ ФАРМАКОТЕРАПИИ НА ФУНКЦИЮ ПОчЕК

И ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ ПРИ ЭКПЕРИМЕНТАЛьНОМ

ИШЕМИчЕСКОМ ИНСУЛьТЕ

Расулова Х.А., Даминов Б.Т., Маджидова Ë.Н.

Ташкентский педиатрический медицинский институт

Ключевые слова: экспериментальный ишемический инсульт, почки, крысы, сыворотка крови, неоангиогенез, сукцинасол,

тивортин, холина альфосцерат.

ЭКПЕРИМЕНТАЛ ИШЕМИК ИНСУЛьТДА ФАРМАКОТЕРАПИЯНИНГ БУйРАКЛАР ВА ТОМИРЛАР ЭНДОТЕЛИйСИ

ФУНКЦИЯЛАРИГА ТАЪСИРИ

Расулова Х.А., Даминов Б.Т., Маджидова Ë.Н.

Калит сўзлар:эксперименталишемик инсульт, буйраклар, каламушлар,қон зардоби, неоангиогенез, сукцинасол, тивор-

тин, холин альфосцерати.

Ишнинг мақсади - каламушларда яратилган экспериментал ишемик инсульт (ЭИИ)да эндотелиал ва ренал дисфунк-

ция даражасини фармакотерапия фонида ўрганиш. Материал ва услублар. Экспериментлар 105 наслсиз оқ каламушлар-

да ўтказилди. 20 та интакт каламуш назорат гуруҳини ташкил қилди. ЭИИ модели чап умумий уйқу артериясига лигатура

қўйиш орқали чақирилди. Натижалар. Олинган натижалар экспериментал ҳайвонларда ЭИИда неоангиогенез фаоллаши-

ши билан эндотелий дисфункциясидан далолат берди. Сукцинасол билан ўтказилган фармакотерапия даволанмаган гуруҳ

кўрсаткичлари билан таққослаганда 7 кун давомида эндотелин-1 (ЭТ-1) миқдорининг бир оз камайишига олиб келди, лекин

назорат гуруҳининг кўрсаткичларидан 2,5 бароварига юқори бўлди. Шу билан бирга, ТўЭО (томирлар ўсиши эндотелиал оми-

ли) даволанмаган каламушлар кўрсаткичларидан 1,65 бароварига камайди (р<0,01), лекин контрол кўрсаткичлардан 1,74 ба-

роварига юқори бўлди (р<0,01). Каламушларда ривожланган ЭИИда пайдо бўлган протеинурия, микроальбуминурия ва кре-

атининурия, чамаси, буйраклардаги гемодинамик ўзгаришлар ва коптокчалар базал мембранаси ўтказувчанлиги бузилиши

ҳамда токсинлар ва оқсиллар маҳсулотлари парчаланиши билан боғлиқ бўлиши мумкин. Хулоса. ЭИИда неоангиогенез фа-

оллашиши билан кечувчи эндотелиал дисфункция ҳамда патологик жараёнга буйраклар жалб этилиши кузатилади. Фарма-

котерапия муайян даражада аниқланган ўзгаришларни коррекция қилади. Тивортин ва холин альфосцерати дори воситала-

рининг кўпроқ самараси, афтидан, гемодинамик бузилишларни камайтириш ва нейротрофик таъсирлари билан боғлиқдир.

INfLuENCE Of PHARMACOTHERAPy ON fuNCTION Of KIdNEyS ANd VASCuLAR ENdOTHELIuM IN ExPERIMENTAL

ISCHEMIC STROKE

Rasulova Kh.A., daminov B.T., Madjidova y.N.

Key words: experimental ischemic stroke, kidneys, rats, blood serum, neoangiogenesis, suktsinasol, tivortin, choline

alfoscerate.

Aim of the study.To assess the degree of endothelial dysfunction and renal function in experimental ischemic stroke (EIS) in

rats on the dynamics of pharmacotherapy.Materials and Methods.The subject of experimental studies were 105 adult mongrel white

male rats. The object of the study were the serum and urine of rats. The model of cerebral circulation reproduced by temporary

clipping of the left common carotid artery. The controls were 20 intact animals. Results. The results indicate to the development of

endothelial dysfunction with EIS with the activation of neoangiogenesis in experimental animals. Pharmacotherapy with suksinasol

for 7 days caused reduction of the level of ET-1 with respect to the values of untreated animal group and was still significantly higher

than control group of rats in 2.5 times. At the same time, the level of VEGf A (vascular endothelial growth factor A) significantly

decreased respectively to untreated group of rats in 1.65 times (p<0.01), but was still higher than control values in 1.74 times

(p<0.01). development of proteinuria, microalbuminuria and creatininuria in rats with EIS apparently was due to the development of

hemodynamic changes in the kidney and glomerular basal membrane permeability, and due to the enhanced excretion of toxins and

protein degradation products.Conclusion. The endothelial and renal dysfunctions with activation of neoangiogenesis develop on the

model of EIS. Pharmacotherapy corrects the identified changes to some extent. Tivortin and choline alfosceratewere more effective,

possibly, because of decrease of hemodynamic disturbances and neurotrophic effects.

ских процессах при ишемии мозга или сердца продукты рас-

пада, поступая в кровь, циркулируют, способствуя развитию

ответной реакции эндотелия, и экскретируются почками, что

может привести к изменениям почечной паренхимы, то есть

взаимно усугублять течение как первичного, так и вторично-

го повреждения органов и тканей. Данные литературы сви-

детельствуют о единых патогенетических механизмах разви-

тия и прогрессирования патологии почек и сердца [1,2].

Невыясненной остается роль факторов эндотелиаль-

ной дисфункции [фибронектин, фактор Вилленбранда,

эндотелин-1 (ЭТ-1), тромбомодулин, простагландины, эн-

дотелиальный фактор роста сосудов (ЭФРС) и др.] при раз-

личных патогенетических подтипах ишемического инсульта.

Для практического невролога острым остается вопрос диф-

ференциальной диагностики и тактики лечения различных

подтипов ишемического инсульта (ИИ), а также ранней ней-

ропротекции, подразумевающей комплекс мероприятий, на-

правленных на предотвращение или ослабление развития

основных звеньев патобиохимического каскада, приводящих

«nevrologiya»—4(72), 2017

7

ВОПРОСы КЛИНИКИ, ДИАГНОСТИКИ И ЛЕчЕНИЯ НЕРВНыХ БОЛЕЗНЕй

к обратимым метаболическим изменениям нейронов или к

их гибели при ИИ. Нейропротекция является одним из наи-

более приоритетных направлений терапии ИИ. Основное ее

направление — применение препаратов с нейромодулятор-

ными и нейротрофическими действиями [3].

Сочетание ренальной дисфункции у больных с ИИ соз-

дает серьезные проблемы при определении тактики лечения

таких больных, у которых она должна быть комбинированной

нейро- и нефропротективной с учетом этих двух коморбид-

ных состояний. Учитывая изложенное, представляет боль-

шой интерес изучение ангио-церебро-ренальной дисфункции

путем определения состояния почек, факторов ангиогенеза

и эндотелиальной дисфункции (содержание в сыворотке кро-

ви продуктов оксида азота, аргинина, ацетилхолина, ЭФРС,

ЭТ-1) при ИИ в эксперименте.

Цель исследования

- оценить эндотелиальную и почеч-

ную дисфункции при экспериментальном ишемическом ин-

сульте (ЭИИ) у крыс на фоне лечения цито- и нейропротекто-

рами различной фармакологической направленности.

Материал и методы исследования

Экспериментальные исследования проводили на 105

половозрелых беспородных белых крысах-самцах с массой

160-220 г (221,2 ± 30,9 г), находившихся на стандартном ра-

ционе вивария со свободным доступом к воде и пище. Объ-

ектом исследования служили сыворотка крови и моча крыс.

Выбор объекта эксперимента был обусловлен сходством

ангиоархитектоники головного мозга крыс и человека, а так-

же близостью основных гемодинамических параметров. Все

процедуры эксперимента соответствовали требованиям

Международных правил гуманного отношения к животным,

отраженным в Санитарных правилах по оборудованию и со-

держанию экспериментально-биологических клиник (вивари-

ев).

Операции проводили под этаминаловым наркозом. Мо-

делирование ЭИИ осуществляли путем наложения лигатуры

на левую общую сонную артерию с дальнейшей реперфузи-

ей. Контрольную группу составили 20 интактных животных.

О тяжести ишемического повреждения судили по степени

неврологического дефицита, оцениваемого по шкале Stroke-

index MсGraw в модификации НИИ неврологии РАМН через

2 ч после оперативного вмешательства и по динамике невро-

логического дефицита на 1-е, 3-и и 7-е сутки (табл. 1).

Таблица 1

Оценка тяжести неврологической симптоматики при

ишемии головного мозга у крыс (McGraw, 1977).

В зависимости от получаемой фармакотерапии экспери-

ментальные животные были разделены на пять групп: 1-ю

составили 21 крыса без ЭИИ (контрольная группа), получав-

шая воду для инъекций; 2-ю - 21 животное с ЭИИ, получав-

шее плацебо-терапию (стерильная вода для инъекций в дозе

10,0 мл/кг) в течение 1-7 дней (общая летальность к концу

эксперимента составила 9,52%); 3-ю - 21 оперированное жи-

вотное с ЭИИ, которому в течение 1-7 дней интраперитоне-

ально вводили сукцинасол (фирма «REKA-MEd fARM», Узбе-

кистан) в терапевтических дозах из расчета 25,0 мл/кг в сутки

однократным введением (общая летальность к концу экспе-

римента - 4,76%); 4-ю - 21 оперированное животное с ЭИИ,

которому интраперитонеально вводили в течение 1-7 дней

L-аргинин (тивортин фирмы «Юрия-Фарм», Украина) в тера-

певтических дозах из расчета по 8 мг/кг в сутки однократным

введением (общая летальность к концу эксперимента - 0%);

5-ю - 21 оперированное животное с ЭИИ, которому в течение

1-7 дней интраперитонеально вводили холина альфосцерат

(глиатилин фирмы «ИталФармако», Италия) в терапевтиче-

ских дозах из расчета по 100 мг/кг в сутки однократным вве-

дением (общая летальность к концу эксперимента - 0%).

Все исследуемые препараты вводили через 2-3 ч после

воспроизведения модели ЭИИ внутрибрюшинно 1 раз в сутки

в течение 1-7 дней. Эффективность лечебного воздействия

оценивали на 1-е, 3-и и 7-е сутки после ишемии-реперфузии

как клинически, используя шкалу оценки внешних изменений

в поведении крыс, так биохимически и морфологически.

Мочевыделительную функцию почек и особенности дей-

ствия фармакотерапии изучали следующим образом. Спустя

24 ч после последнего введения препаратов каждой крысе

внутрижелудочно вводили дистиллированную воду из расче-

та 3,0 мл на 100 г массы тела и помещали в метаболическую

клетку, собирали суточную мочу в индивидуальных боксах

для сбора мочи, которую подвергали биохимическим иссле-

дованиям состава.

Ренальную дисфункцию изучали путем определения

в сыворотке крови животных уровней мочевины и креати-

нина с помощью коммерческих наборов urealiquicolor и

Creatinineliquicolor (HuMAN, Германия) на биохимическом

анализаторе Mindray BA-88A (Китай). Скорость клубочковой

фильтрации (СКФ) рассчитывали по формуле Шварца (мл/

мин/1,73 м2 поверхности тела), которая чаще используется

для пациентов детского и подросткового возраста [9]:

клиренс креатинина (мл/мин) = 0,0484 х рост (см) или 40

х рост____

Cr крови (мкмоль/л) Cr крови (мкмоль/л)

Для определения факторов ангиогенеза и эндотелиаль-

ной дисфункции спустя 24 ч после последнего введения пре-

паратов животных всех групп под легким эфирным наркозом

декапитировали и собирали кровь с последующим выделе-

нием сыворотки для определения концентрации ЭТ-1 (1-21)

и ЭФРС (VEGf A) методом твердофазного иммунофер-

ментного анализа с использованием коммерческих наборов

Affymetrixe Bioscience (Австрия) и Biomedica (Австрия).

Полученные при исследовании данные подвергали ста-

тистической обработке с помощью программного пакета

Microsoft Office Excel-2012, включая использование встроен-

ных функций статистической обработки. Использовали ме-

тоды вариационной параметрической и непараметрической

статистики с расчетом средней арифметической изучаемого

показателя (M), стандартной ошибки среднего (m), относи-

тельных величин (частота, %) и их стандартных ошибок. Ста-

тистическую значимость полученных измерений при сравне-

нии средних величин определяли по t-критерию Стьюдента

при проверке нормальности распределения (по критерию

эксцесса) и равенства генеральных дисперсий (f – критерий

Фишера). За статистически значимые изменения принимали

уровень достоверности р<0,05. Статистическую значимость

«nevrologiya»—4(72), 2017

8

ВОПРОСы КЛИНИКИ, ДИАГНОСТИКИ И ЛЕчЕНИЯ НЕРВНыХ БОЛЕЗНЕй

различий для качественных величин вычисляли с помощью

χ2 критерия (хи-квадрат) Пирсона.

Результаты и обсуждение

В день проведения операции у крыс объективно наблю-

дались слабость и гипотония лапок на контралатеральной

очагу стороне, сужение глазной щели (полуптоз) на стороне

очага. Животные не могли упираться на лапки, не реагирова-

ли на уколы на стороне пареза, теряли аппетит, становились

неаккуратными, неряшливыми и агрессивными. В 1-е сутки

после операции при оценке неврологических отклонений

у крыс с ЭИИ отмечено, что почти у всех (90-100%) живот-

ных наблюдались умеренные неврологические нарушения в

виде вялости и замедленности движений. Выраженные не-

врологические нарушения, проявлявшиеся в виде манежных

движений по кругу и параличей конечностей, были отмечены

в 30-40% случаев. Неврологические нарушения без лечения

(плацебо-терапия) были более выраженными к 7-м суткам

эксперимента (табл. 2).

Таблица 2

Показатели неврологического статуса эксперименталь-

ных животных по шкале McGraw (баллы)

Примечание. Звездочкой отмечены статистически значи-

мые (р<0,05) различия между показателями леченой и неле-

ченой групп.

На фоне лечения динамика неврологических симптомов

была положительной практически у всех животных с ЭИИ в

виде нивелирования слабости и гипотонии лапок (у 70-80%),

полуптоза (у 80%), манежных движений по кругу и параличей

конечностей (у 30%). Улучшение неврологического статуса

было более выраженным на фоне лечения холина альфос-

цератом и тивортином. Суммарный клинический балл невро-

логических нарушений по шкале McGraw в этих группах был

ниже аналогичного показателя у нелеченых животных на 7-е

сутки в 1,63 и 1,6 раза, составляя соответственно 6,5±0,07 и

6,6±1,07 балла (р<0,05).

Результаты исследования (табл. 3) показали развитие

дисфункции эндотелия, проявляющейся активизацией вазо-

активных факторов. Так, на 7-й день моделирования ЭИИ у

крыс в сыворотке крови резко возрастает уровень ЭТ-1, пре-

вышая показатели контрольных животных в 3 раза (р<0,001).

Содержание ЭФРС также достоверно возрастает, превышая

значения контрольных крыс в 2,87 раза (р<0,001). Получен-

ные результаты свидетельствуют о развитии дисфункции эн-

дотелия при ИИ с активацией неоангиогенеза у эксперимен-

тальных животных.

Фармакотерапия сукцинасолом в течение 7 дней приво-

дит к некоторому снижению уровня ЭТ-1 относительно зна-

чений нелеченой группы животных, однако его значения все

еще достоверно превышают показатели контрольной группы

крыс в 2,51 раза (р<0,01). В то же время содержание ЭФРС

более выраженно снижается относительно показателей не-

леченой группы крыс в 1,65 раза (р<0,01), хотя все еще пре-

вышает контрольные значения в 1,74 раза (р<0,01).

При фармакотерапии ЭИИ тивортином отмечается бо-

лее выраженное снижение уровня ЭТ-1 в сыворотке крови

крыс. Значения данной группы ниже показателей нелеченой

в 2 раза (р<0,05). Однако эти показатели сохранялись выше

значений контрольной группы в 2 раза (р<0,01). Такая же ди-

намика была отмечена и в содержании ЭФРС. Его значения

при лечении тивортином снизились в 2,26 раза (р<0,001) от-

носительно показателей нелеченой группы, но все еще до-

стоверно превышали значения контрольных животных в 1,27

раза (р<0,05). Изучаемые показатели были ниже значений

группы крыс с ЭИИ, получавших сукцинасол.

Таблица 3

Содержание эндотелина-1 и фактора роста сосудов в

сыворотке крови экспериментальных животных

Примечание. Звездочками отмечена статистически зна-

чимая (р<0,05) достоверность различия: одной - между по-

казателями контрольной и опытной групп, двумя - между по-

казателями леченой и нелеченой групп.

Фармакотерапия ЭИИ холина альфосцератом приводи-

ла лишь к некоторому снижению уровня ЭТ-1, однако эти

значения носили статистически незначимый характер. Изу-

чаемый показатель все еще статистически значимо превы-

шал контрольные значения в 2,47 раза (р<0,001). В то же

время содержание ЭФРС более выраженно статистически

значимо снижается относительно показателей нелеченой

группы крыс - в 1,93 раза (р<0,01), но все еще превышает

контрольные значения - в 1,48 раза (р<0,01).

Таким образом, при ЭИИ отмечается повышение со-

держания ЭТ-1 и ЭФРС. Фармакотерапия сукцинасолом и

холина альфосцератом уменьшают изученные показатели,

особенно более выраженно высокие значения ЭФРС. В вос-

становлении дисфункции эндотелия наиболее эффектив-

ным оказался тивортин (L-аргинин). Однако, несмотря на

это, изучаемые показатели сохранялись выше значений ин-

тактных крыс.

При исследовании ренальной дисфункции у экспери-

ментальных животных, выявили, что степени отклонения

уровня мочевины, креатинина в сыворотке крови и значений

скорости клубочковой фильтрации (СКФ) по формуле Швар-

ца в целом были незначительные. Первоначально лишь про-

слеживалась тенденция к повышению уровня мочевины при

ЭИИ в 1,54 раза (р<0,05) относительно контрольных данных

и незначительному снижению СКФ в 1,11 раза. Эти измене-

ния были более выраженными на 7-е сутки эксперимента,

что свидетельствует об ухудшении функции почек, связан-

ном с гемодинамическими нарушениями и шоковым состо-

янием после острой ишемии головного мозга, что является

угрожающим симптомом. На фоне фармакотерапии наблю-

далась тенденция к улучшению этих показателей, особенно

при применении тивортина.

Результаты анализа мочи лабораторных животных ука-

зывали на развитие протеинурии (повышение в 3,3 раза,

р<0,001), микроальбуминурии (увеличение в 1,86 раза,

р<0,05), креатининурии (повышение в 2,03 раза, р<0,01). Так-

же наблюдались снижение суточного диуреза, лейкоцитурия

и гематурия у крыс с ЭИИ. Видимо, они были обусловлены

развитием гемодинамических изменений в почках и прони-

цаемости базальной мембраны клубочков, а также усилен-

ным выведением токсинов и продуктов распада белков.

Фармакотерапия уменьшала выраженность этих изме-

нений, особенно при применении тивортина и холина аль-

фосцерата. Так, если при фармакотерапии сукцинасолом

наблюдалась тенденция к уменьшению протеинурии и ми-

кроальбуминурии, то креатининурия достоверно снижалась

«nevrologiya»—4(72), 2017

9

ВОПРОСы КЛИНИКИ, ДИАГНОСТИКИ И ЛЕчЕНИЯ НЕРВНыХ БОЛЕЗНЕй

в 1,73 раза р<0,05) относительно значений нелеченой груп-

пы животных. Эти показатели сохранялись выше значений

интактных крыс в 4,23 (р<0,001), 1,68 (р<0,05) и 1,17 раза со-

ответственно значениям общего белка, альбуминов и креа-

тинина.

Фармакотерапия ЭИИ тивортином достоверно снижала

протеинурию в 1,83 (р<0,01) раза, микроальбуминурию – в

1,43 (р<0,05) раза, креатининурию – в 2,03 (р<0,001) раза от-

носительно значений нелеченой группы животных. Если зна-

чения протеинурии и микроальбуминурии достоверно пре-

вышали показатели интактных крыс соответственно в 2,9

(р<0,001) и 1,3 (р<0,05) раза, то содержание креатинина при-

близилось к значениям интактных крыс.

При лечении ЭИИ холина альфосцератом также досто-

верно снижалась выраженность протеинурии в 2,54 (р<0,001)

раза, микроальбуминурии – в 1,39 (р<0,05) раза, креатинину-

рии – в 2,03 (р<0,001) раза относительно значений нелеченой

группы животных. Если значения протеинурии и микроальбу-

минурии соответственно достоверно превышали показате-

ли интактных крыс в 2,1 (р<0,01) и 1,34 (р<0,05) раза, то со-

держание креатинина приблизилось к значениям интактных

крыс.

Выводы

Таким образом, на основании результатов исследова-

ния можно заключить, что при ЭИИ развивается дисфункция

эндотелия и вовлекаются в патологический процесс почки.

Фармакотерапия сукцинасолом в определенной степени кор-

ригировала выявленные изменения при ИИ. Более эффек-

тивными оказались тивортин и холина альфосцерат, что,

видимо, обусловлено уменьшением гемодинамических нару-

шений и нейротрофическим действием.

Литература

1. Арьев А.Л., Овсянникова Н.А., Арьева Г.Т. Нефроло-

гия, 2011, №1, с. 76-83.

2. Даминов Б.Т., Эгамбердиева Д.А., Абдуллаев Ш.С.

Мед. журн. Узбекистана, 2010, №4, с. 56-60.

3. Маджидова Ё.Н., Расулова Х.А. Ишемический ин-

сульт (инфаркт мозга): клиника, диагностика, лечение. / Ру-

ководство для врачей. - Ташкент, 2011. - 232 с.

4. Расулова Х.А., Даминов Б.Т. Тер. вестн. Узбекиста-

на, 2015, №1, с. 42-47.

5. Bugnicourt JM, Chillon JM, Godefroy J, Massy ZA.

Relationship between silent brain infarction and chronic kidney

disease. NephroldialTransplant. 2009; 24 (6): 2005-2007.

6. damman K, Navis G, Voors AA, Asselbergs fW, Smilde

Td, Cleland JG, van Veldhuisen dJ, Hillege HL. Worsening renal

function and prognosis in heart failure: systematic review and

meta-analysis. J Cardfail. 2007; 13 (8): 599-608.

7. Kruzliak P, Novák J, Novák M. Vascular endothelial growth

factor inhibitor-induced hypertension: from pathophysiology

to prevention and treatment based on long-acting nitric oxide

donors. Am J Hypertens. 2014; 27(1): 3-13.

8. Pikula A, Beiser AS, Chen TC, Preis SR, Vorgias d,

deCarli C, Au R, Kelly-Hayes M, Kase CS, Wolf PA, Vasan

RS, Seshadri S. Serum brain-derived neurotrophic factor and

vascular endothelial growth factor levels are associated with risk

of stroke and vascular brain injury: framingham Study. Stroke.

2013; 44(10): 2768-2775.

9. Schwartz GJ, Work df. Measurement and estimation

of GfR in children and adolescents. Clin. J. Am. Soc. Nephrol.

2009; 4: 1832-1843.