99
ПРОБЛЕМЫ
БИОЛОГИИ
И
МЕДИЦИНЫ
1 (68) 2012
В
последнее
время
установлено
,
что
гепатоциты
экспресируют
различные
семейства
рецепторов
(TNF-R1, DR4, DR5)
который
характеризуется
наличием
гомологичного
внутриклеточного
участка
,
называемого
доменом
смерти
(DED).
Последний
активируется
после
связывания
рецептора
с
специфи
-
ческим
лигандом
.
Специфическими
лигандами
для
выше
указанных
рецепторов
являются
TNF
α
Fash
и
TRAIL.
Повреждение
гепатоцитов
печени
вызванные
активацией
TNF-R1
рецептора
наблюдается
в
результате
эндотоксемии
и
ишемических
,
реперфузионных
поражениях
.
Активирующим
агентом
при
этом
является
фактор
некроза
опухоли
альфа
(TNF
α
).
При
этом
активизируется
митохондриальной
пути
гибели
клетки
путём
активации
лизосомныхпротеназ
(
Давыдов
и
соавт
., 2006: Kimminga A.N. et
al., 2000, Moazzam et al., 2002).
В
последнее
время
многочисленными
исследованиями
доказано
,
что
любой
патологический
про
-
цесс
в
печени
может
сопровождаться
холестазом
,
который
в
общем
виде
представляет
собой
наруше
-
ние
синтеза
,
секреции
и
оттока
желчи
(Miyashiuetal, 2001).
Анализ
литературы
по
данному
вопросу
свидетельствуют
,
что
эндотоксемия
усиливает
процессы
апоптоза
гепатоцитов
и
способствует
к
гибе
-
ли
клеток
.
Последние
имеет
прямую
связь
между
силой
и
длительностью
повреждающего
воздейст
-
вия
.
В
связи
с
этим
особенно
актуально
изучение
влияния
эндотоксемии
на
холестатический
синдром
.
Многообразие
клинической
картины
развития
обструктивного
холестаза
затрудняет
оценку
степе
-
ни
тяжести
состояния
больных
и
выбора
индивидуальной
тактики
лечения
общепринятые
лаборатор
-
ные
диагностические
тесты
часто
недостаточный
для
объективной
оценки
состояния
больных
.
Целью
данного
исследования
явилась
оценка
информативности
низко
молекулярных
белков
син
-
тезирующих
в
печени
при
внутрипеченочной
холестаза
.
Материалы
и
методы
исследования
.
Обследовано
70
пациентов
(
преимущественно
женщин
фер
-
тильного
возраста
)
с
хроническим
заболеванием
печени
.
Группу
контроля
составили
14
практически
здоровые
лица
.
Сопоставили
по
полу
и
возрасту
не
имеющих
в
анамнезе
вирусных
гепатитов
.
Крите
-
риями
включения
в
основную
группу
были
фаза
реактивации
заболевания
,
выявления
HbsAg,
анти
-
HbsAg,
выявление
ДНК
вируса
гепатита
В
с
помощью
ПЦР
,
синдром
цитолиза
-
повышенной
активно
-
сти
,
АЛТ
,
АСТ
,
ГГТП
(
гаммолютаминтрансфераза
),
щелочная
фосфатаза
а
также
фракции
билирубина
критериями
исключения
явилось
сердечнососудистые
заболевания
,
сахарный
диабет
,
бронхиальная
астма
,
почечная
и
онкопатология
,
беременность
.
У
обследуемых
нами
больных
было
отмечено
досто
-
верные
повышения
(
Р
<0,05)
среднемолекулярных
пептидов
Ergo,
что
указывало
на
эндогенную
инток
-
сикацию
.
Последнее
при
внутрипеченочной
холестазе
вызывает
кислородный
взрыв
клетки
,
который
ассоциируется
также
с
нарастанием
куче
молекул
средней
массой
на
фоне
дисфункции
системы
ПОЛ
и
АОС
.
Сопровождающийся
истощением
потенциалом
антиоксидантной
системы
(
значимое
нараста
-
ние
малонового
диальдегида
на
фоне
снижения
антиоксидантной
активности
сыворотки
крови
).
Активность
аконитат
–
гидратазы
в
сыворотки
крови
определяли
спектрофотометрическим
путем
,
с
помощи
спектрофотометра
при
235
нмв
сфере
,
содержащей
0.05
мм
трис
-
НС
l-
буфер
(
рН
7, 8) 4
мм
цитрат
.
За
ферментативную
единицу
(
Е
)
принимали
количество
фермента
,
необходимого
для
превра
-
щения
1
мкмоль
субстрата
в
1
мин
при
250
оС
.
В
качестве
маркерных
ферментов
для
митохондрии
оп
-
ределяли
маладегидрагеназу
и
глутаматдегидрагеназы
на
автоматическом
анализаторе
фирмы
НО
SPITAX.
Используя
наборы
компании
«
Биохиммак
» (
Россия
).
Активность
лизосомального
фермен
-
та
–
катепсин
Д
оценивали
по
методу
А
.
А
.
Покровского
.
Концентрацию
цистатина
в
сыворотке
крови
больных
определяли
методом
ИФА
с
использованием
коммерческих
наборов
фирмы
«Biovendor».
Оптическую
плотность
образцов
оценивали
при
длине
вольны
450
нм
.
Результаты
представляли
в
виде
общей
концентрации
цистатина
С
в
расчете
на
1
мл
сыворотки
1
в
нг
\
мл
)
фиброноген
в
плазме
сывороткой
крови
определяли
по
методу
Рутберг
.
Уровень
протеина
в
сыворотке
крови
определяли
используя
реактивы
фирмы
«Sigma»
и
«Beringer Mannhaim».
Статистически
обработку
полученных
результатов
исследования
осуществляли
методом
вариаци
-
онной
статистики
с
применением
t-
критерия
Стьюдента
.
Результаты
обработаны
при
помощи
пакета
программ
«Statistica».
Результаты
и
их
обсуждения
.
Известно
что
в
гибели
клетки
,
в
том
числе
гепатоцитов
важные
зна
-
чение
имеет
окислительный
стресс
и
повышение
образования
активных
форм
кислорода
(Borgognone-
m et al., 2005).
В
данной
ситуации
основным
генератором
активных
форм
кислорода
являются
мито
-
хондрии
,
в
которых
активные
формы
кислорода
образуются
до
1-2%
от
общего
количества
молекуляр
-
Нурбоев
Ф
.
Э
.,
Джумаев
Б
.
З
.,
Солиев
О
.
О
.,
Эргашев
Ф
.
Ф
.
ОЦЕНКА
КЛИНИЧЕСКОЙ
ИНФОРМАТИВНОСТИ
ЦИСТАТИНА
С
И
ПРОТЕИНА
С
У
БОЛЬНЫХ
ВНУТРИПЕЧЕНОЧНЫМ
ХОЛЕСТАЗОМ
Бухарский
государственный
медицинский
институт
100
ПРОБЛЕМЫ
БИОЛОГИИ
И
МЕДИЦИНЫ
1 (68) 2012
ного
кислорода
.
Активные
формы
кислорода
являются
одной
из
причин
образования
и
утечки
электро
-
нов
,
и
приводит
к
усилению
проницаемости
мембран
митохондрии
.
Нарушение
структурных
компо
-
нентов
мембран
митохондрии
на
фоне
эндотоксемии
и
активных
форм
кислорода
приводит
к
выходу
митохондриальных
ферментов
в
сыворотку
крови
,
указывая
тем
самым
на
нарушения
митохондриаль
-
ного
уровня
.
Как
показано
в
таблице
1,
у
больных
внутрипеченочным
холестазом
отмечено
повышение
активно
-
сти
малатдегидрогеназы
в
2,6
раза
глутанатдегидрагеназы
в
2,3
раза
(
Р
<0,05)
при
сравнение
со
здоро
-
выми
лицами
.
Нарушение
баланса
между
чрезмерной
продукции
активных
форм
кислорода
и
недоста
-
точностью
функционирования
антиоксидантной
системы
приводит
интенсификации
свободного
ради
-
кального
окисления
.
Свободные
радикалы
образуются
также
при
стимуляции
клеток
купфера
и
секве
-
страции
полиморфоноядерных
нейтрофиллов
.
Белковая
молекула
аконитат
-
гидратазы
легко
разруша
-
ется
активной
формой
кислорода
вследствие
деструкции
железосерного
кростера
в
составе
данного
фермента
,
что
приводит
к
его
инактивации
.
Это
позволяет
рассматривать
аконитатгидратазу
как
крити
-
ческую
м
лишено
действия
свободных
радикалов
.
Анализ
полученных
результатов
указывает
на
значительные
снижения
активности
аканитатгидра
-
тазы
в
сыворотки
крови
обследуемых
лиц
в
среднем
в
2,4
раза
по
сравнению
с
уровнем
относительно
здоровых
лиц
.
Как
было
указано
выше
при
стимуляции
клеток
Купфера
образуются
свободные
радикалы
кроме
того
стимуляция
макрофагов
печени
приводит
к
секреции
низкомолекулярного
белка
-
цистатина
вне
-
клеточном
образе
.
Последний
является
эндогенным
ингибитором
цистенновых
протеаз
и
регулирует
активность
катепсинов
внеклеточным
путем
,
то
при
внеклеточной
секреции
катепсина
В
макрофагами
при
их
стимуляции
.
Видимо
,
отмеченные
нами
повышение
концентрации
цистатина
С
в
сыворотки
крови
больных
внутрипеченочной
холестазом
,
направлено
на
ингибирование
активности
катепсина
В
или
её
связывания
.
Обнаруженные
нами
повышенные
концентрации
цистатина
С
сыворотки
крови
у
больных
внутрипеченочной
холестазом
указывает
на
возможность
использования
данного
показателя
в
качестве
одного
из
маркеров
стимуляции
макрофагов
при
хронической
поражениях
печени
.
Проведенные
исследования
у
больных
внутрипеченочный
холестазом
показали
на
снижение
актив
-
ности
системы
протеина
С
в
плазме
по
сравнению
со
здоровыми
лицами
,
что
видимо
обусловлено
с
нарушением
белоксинтезирующей
функции
печени
.
Кроме
того
,
отмечено
положительная
корреляция
между
содержанием
в
плазме
крови
протеина
С
и
фибриногена
,
что
непосредственно
может
оказать
влияние
на
прокоагулянтные
звено
системы
гемостаза
.
Выводы
.
1.
У
больных
внутрипеченочной
холестазом
на
фоне
образования
активных
форм
кисло
-
рода
и
эндогенной
интоксикации
отмечено
гиперферментемия
за
счет
нарушения
мембранных
струк
-
тур
митохондрии
гепатоцитов
. 2.
Эндогенная
интоксикация
и
активные
формы
кислорода
стимулирует
макрофаги
печени
,
что
выражается
в
увеличении
концентрации
цистатина
с
и
катепсина
В
в
крови
. 3.
Обструктивный
холестаз
сопровождается
нарушением
белоксинтезирующей
функции
печени
,
что
вы
-
ражается
в
снижении
концентрации
протеина
С
в
плазме
крови
.
Использованная
литература
:
1.
Давыдов
В
.
Г
.,
Бойчук
С
.
В
.
Молекулярные
механизмы
апоптоза
и
некроза
гепатоцитов
.
Росс
.
журнал
гастроэн
-
терологии
,
гепатологии
и
колопроктологии
. 2006.
№
5,
с
. 11-17.
2. Kimmings A.N. Deventer B.J. Obortor H et all. endotoxin, cytokines and endotoxin bilding protein in obstructive saun-
dise and after preoperative biliary drainage. Gut. 2000-v 46 - p. 725-731.
3. Moazzam F.N. Gamelli R.Z. Ding J.W. Endotoxin potentiates hepatocyte apoptosis in cholestasis. J.am.call. surg-2002-
v196-
№
6, p. 731-739.
4. Borgognone M. Roma. M.A. Signaling modulation of lile salt-indused in isolated rat hepatocytes. Toxicall Sci.-2005-
v83-
№
1, p. 114-125.
Таблица
1.
Биохимические
показатели
крови
у
больных
внутриклеточной
холестазом
Показатели
Здоровые
лица
n=14
Больные
с
внутрипеченоч
-
ным
холестазом
n=70
Малатдегидрогеназа
МЕ
\
Л
90,12+8,13
234,0+7,02*
Глутаматдегидрогеназа
ммоль
/
час
/
л
15,4+ 0,91
35,1+3,21*
Аконитатгидратаза
ЕД
/
МЛ
0,43+0,05
0,18+0,01*
Цистатин
С
нг
/
мл
1037,1+14,2
1754,6+12,1*
Протеин
С
мг
/
л
1,14+0,18
0,85+0,07*
Фибриноген
г
/
л
3,14+0,41
3,01+0,43
Катепсин
В
мк
моль
/
мин
/
г
белка
28,7+2,04
43,8+3,19*
Примечание
:
достоверность
различных
Р
<0,05
при
сравнении
с
контролем