“ZAMONAVIY BIOLOGIYANING DOLZARB MUAMMOLARI VA
RIVOJLANISH ISTIQBOLLARI”
xalqaro ilmiy-amaliy anjuman materiallari
adu.uz
universaljurnal.uz
790
УДК
: 557.151.05
ЧАСТОТА
МУТАЦИЙ
ПОЛИМОРФИЗМА
IVS2+1G>A
и
1100delC
ГЕНА
CHEK2
в
УЗБЕКСКОЙ
ПОПУЛЯЦИИ
.
¹
,2
Нилуфар
Валиевна Худойбердиева
базовый
докторант
,
Национальный
университет
Узбекистана
,
email:
nilufar.valievna@gmail.com
https://orcid.org/0009-0007-2161-5572
2
ALFRAGANUS UNIVERSITY
Муборак
Махсумовна
Абдуллаева
,
профессор
,
доктор
биологических
наук
,
Национальный
университет
Узбекистана
,
muborakabdullayeva@gmail.com
Гулбахор
Толибжоновна
Абдуллаева
,
доктор
биологических
наук
,
профессор
,
Ташкентский
Государственный
технический
Университет
,
gulbahor79@rambler.ru
Музаффар
Худойбердиевич
Умаров
,
директор
лаборатории
IBL
Республиканского
специализированного
научно
-
практического
медицинского
центра
онкологии
и
радиологии
,
независимый
исследователь
,
dr.muzaffar81@mail.ru
Бакоева
Гулноза
Хабибуллаевна
к
.
б
.
н
., ALFRAGANUS UNIVERSITY
gulnoza_bgh@mail.ru
https://doi.org/10.5281/zenodo.
15637035
Аннотация
. CHEK2
является
одним
из
генов
,
участвующих
в
репарации
ДНК
и
выполняющий
важную
роль
в
клеточном
цикле
,
известен
как
ген
-
супрессор
опухолей
при
раке
молочной
железы
(
РМЖ
).
Наши
исследования
были
направлены
на
изучение
связи
полиморфизмов
гена
CHEK2 (IVS2+1G>A
и
1100delC)
с
РМЖ
.
Образцы
ДНК
для
исследования
были
выделены
из
периферической
крови
у
300
женщин
узбекской
национальности
, 200
из
которых
составляли
основную
группу
с
диагнозом
РМЖ
и
100
женщин
составляющие
контрольную
группу
.
Образцы
крови
были
собраны
и
хранились
в
пробирках
EDTA.
ПЦР
-
амплификация
была
выполнена
с
использованием
анализатора
Corbett
Research GRADIENT PALM CYCLER PCR Analyzers CG1-96 (
Австралия
).
Из
200
пациентов
с
РМЖ
у
4
была
обнаружена
гетерозиготная
форма
генотипа
1100delC (C/G),
у
6
пациентов
—
гетерозиготная
форма
генотипа
IVS2+1G>A (G/A).
Abstract
. CHEK2 is one of the genes involved in DNA repair and plays a crucial role in the
cell cycle, known as a tumor suppressor gene in breast cancer (BC). Our studies aimed to investigate
the association of CHEK2 gene polymorphisms (IVS2+1G>A and 1100delC) with BC. DNA samples
for the study were extracted from peripheral blood of 300 Uzbek women, 200 of whom formed the
main group diagnosed with BC, and 100 women constituted the control group. Blood samples were
collected and stored in EDTA tubes. PCR amplification was performed using the Corbett Research
GRADIENT PALM CYCLER PCR Analyzers CG1-96 (Australia). Among the 200 BC patients, 4
were found to have the heterozygous genotype 1100delC (C/G), and 6 patients had the heterozygous
genotype IVS2+1G>A (G/A).
Annotatsiya. CHEK2
DNK reparatsiyasi, hujayra sikli jarayonlarida muhim rol o‘ynovchi
genlardan biri bo‘lib, ko‘krak bezi saratoni (KBS)da o‘simtani bostiruvchi gen (gen-supressor)
sifatida tanilgan. Bizning tadqiqotimiz
CHEK2
genining polimorfizmlari (IVS2+1G>A va
1100delC)ning KBS bilan bog‘liqligini o‘rganishga qaratilgan. Tadqiqot uchun DNK namunalari
o‘zbek millatiga mansub 300 nafar ayoldan olingan bo‘lib, ulardan 200 nafari KBS tashxisi qo‘yilgan,
asosiy guruhni, 100 nafari nazorat guruhini tashkil etgan sog‘lom ayollar tashkil etdi. Qon
namunalarini yig‘ish va saqlash EDTAli probirkalarda amalga oshirilgan. PZR-amplifikatsiya
Corbett Research GRADIENT PALM CYCLER PZR Analyzers CG1-96 (Avstraliya) yordamida
bajarilgan. KBS tashxisi qo‘yilgan 200 nafar bemordan 4 tasida 1100delC genotipining geterozigot
shakli (C/G), 6 tasida esa IVS2+1G>A genotipining geterozigot shakli (G/A) aniqlangan.
“ZAMONAVIY BIOLOGIYANING DOLZARB MUAMMOLARI VA
RIVOJLANISH ISTIQBOLLARI”
xalqaro ilmiy-amaliy anjuman materiallari
adu.uz
universaljurnal.uz
791
Ключевые
слова
. CHEK2, IVS2+1G>A, 1100delC,
рак
молочной
железы
,
онкология
,
узбекская
популяция
,
апоптоз
.
Keywords
. CHEK2, IVS2+1G>A, 1100delC, breast cancer, oncology, Uzbek population,
apoptosis.
Kalit so’zlar.
CHEK2, IVS2+1G>A, 1100delC, ko’krak bezi saratoni, O’zbek populyatsiasi,
apoptoz.
Введение
.
Рак
молочной
железы
является
наиболее
распространённым
видом
рака
среди
женщин
и
основной
причиной
их
смертности
.
В
Узбекистане
за
период
с
2019
по
2021
годы
было
диагностировано
10 984
случая
рака
молочной
железы
у
женщин
(You
и
др
., 2021,
с
.
100255).
В
настоящее
время
существует
множество
данных
о
факторах
,
влияющих
на
возникновение
рака
.
К
этим
факторам
можно
отнести
и
наследственную
предрасположенность
.
Последние
исследования
подтверждают
,
что
в
возникновении
рака
молочной
железы
участвуют
не
только
гены
с
высокой
(BRCA1, BRCA2, TP53),
но
и
с
средней
(ATM, CDH1
и
CHEK2)
и
низкой
пенетрантностью
(Hu
и
др
., 2021,
с
. 440-451).
Частота
встречаемости
генов
риска
рака
молочной
железы
различается
в
разных
популяциях
.
Нам
известно
,
что
в
Узбекистане
частота
распространения
гена
CHEK2 (
белок
CHK2)
среди
популяции
узбекских
женщин
до
сих
пор
не
изучалась
.
Учитывая
это
нами
была
поставлина
цель
исследования
и
изучения
связи
двух
полиморфизмов
гена
CHEK2 (1100delC,
IVS2+1C>A)
с
раком
молочной
железы
.
Методы
и
материалы
.
ДНК
была
выделена
из
периферической
крови
исследуемых
групп
с
использованием
лизирующего
раствора
,
фенола
,
хлороформа
,
этанола
,
наборов
«AmpliPraym Ribo-prep» (
ООО
«
Некст
Био
»,
Россия
)
и
«Diatom TM DNA Prep 100»
(
Лаборатория
Изоген
,
Россия
).
Количество
и
качество
выделенной
ДНК
проверяли
с
помощью
спектрофотометра
NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific,
США
).
Все
молекулярно
-
генетические
исследования
были
проведены
в
отделе
молекулярной
медицины
и
клеточных
технологий
Республиканского
специализированного
научно
-
практического
медицинского
центра
гематологии
.
Анализ
мутаций
.
Полиморфизмы
1100delC (rs555607708)
и
IVS2+1G>A (rs121908698)
гена
CHEK2
были
исследованы
методом
электрофарезного
ПЦР
в
соответствии
с
инструкциями
к
генетическим
тест
-
наборам
компании
Litex
(01338-100,
ООО
НПФ
«Litex»,
Россия
).
Амплификация
исследуемых
локусов
полиморфизмов
1100delC
и
IVS2+1G>A
гена
CHEK2
осуществлялась
методом
полимеразной
цепной
реакции
(
ПЦР
)
с
использованием
амплификатора
Corbett Research GRADIENT PALM CYCLER PCR Analyzers CG1-96
(
Австралия
).
В
ходе
процесса
использовались
реагенты
из
тест
-
наборов
компании
Litex
(01338-100,
ООО
НПФ
«Litex»,
Россия
).
Детекция
продуктов
амплификации
.
Разделение
продуктов
амплификации
проводилось
методом
горизонтального
электрофореза
в
3%-
м
агарозном
геле
,
приготовленном
на
TAE-
буфере
.
Для
визуализации
результатов
электрофореза
в
гель
добавляли
1%
раствор
бромида
этидия
(
в
количестве
5
мкл
на
50
мл
расплавленного
геля
).
Анализируемые
фрагменты
ДНК
наблюдались
в
виде
ярких
оранжево
-
красных
полос
под
воздействием
УФ
-
излучения
при
длине
волны
310
нм
.
Статистический
анализ
.
Статистический
анализ
полученных
результатов
проводился
с
использованием
статистических
компьютерных
программ
«WinPEPI 2016, Version 11.65»
и
«EpiCalc 2000, Version 1.02».
Выводы
.
Возраст
пациенток
основной
группы
варьировал
от
29
до
85
лет
,
при
этом
наибольшая
доля
приходилась
на
возрастную
группу
55–64
года
(
n
= 63),
а
наименьшая
—
на
возрастную
группу
29–38
года
(
n
= 12).
В
зависимости
от
локализации
опухоли
у
двух
пациенток
новообразования
были
выявлены
в
обеих
молочных
железах
(
правой
и
левой
),
у
100
пациенток
опухоль
была
обнаружена
в
левой
молочной
железе
,
а
у
98
пациенток
—
в
правой
молочной
железе
.
Распределение
по
подтипам
опухоли
показало
,
что
20,3%
пациенток
имели
люминальный
А
тип
, 42,9% —
люминальный
B, 21,5% — HER2/neu-
положительный
“ZAMONAVIY BIOLOGIYANING DOLZARB MUAMMOLARI VA
RIVOJLANISH ISTIQBOLLARI”
xalqaro ilmiy-amaliy anjuman materiallari
adu.uz
universaljurnal.uz
792
тип
,
а
15,2%
случаев
относились
к
тройному
негативному
раку
молочной
железы
.
По
стадиям
заболевания
было
выявлено
,
что
7 (3,5%)
пациенток
находились
на
I
стадии
, 125 (62,5%) —
на
II
стадии
, 60 (30%) —
на
III
стадии
, 8 (4%) —
на
IV
стадии
заболеваемости
.
Гетерозиготный
генотип
1100delC
полиморфизма
гена
CHEK2
был
обнаружен
у
4
пациенток
основной
группы
и
у
1
участницы
контрольной
группы
.
Гетерозиготный
генотип
IVS2+1G>A
полиморфизма
гена
CHEK2
был
выявлен
в
6
образцах
основной
группы
и
в
1
образце
контрольной
группы
.
Полиморфизмы
IVS157+1G>A
и
1100delC
гена
CHEK2
преимущественно
выявлялись
у
женщин
старше
45
лет
(
соответственно
у
6
и
4
пациенток
).
У
пациентов
с
обнаруженными
полиморфизмами
опухоли
в
основном
имели
размер
2–5
см
(T
2
)
и
находились
на
II
стадии
заболеваемости
.
Наши
исследования
подтверждают
что
на
момент
постановки
диагноза
примерно
90%
больных
РМЖ
не
являются
метастаз
(Waks & Winer, 2019,
с
. 288).
Также
больные
имеющие
гетерозиготные
формы
IVS157+1G>A
и
1100delC
не
имели
метастаз
.
Заключения
.
В
результате
наших
исследований
,
посвященных
изучению
связи
гена
CHEK2
с
раком
молочной
железы
в
узбекской
популяции
,
были
получены
следующие
данные
.
Функционально
опасный
аллель
G
полиморфизма
CHEK2 1100delC
статистически
значимо
преобладал
у
пациентов
с
раком
молочной
железы
по
сравнению
со
здоровыми
донорами
(
соответственно
1,0%
и
0,5%); (
χ
²=0,4; p=0,5; OR=2,0; 95% CI: 0,22–18,11; RR=2,0; 95% CI:
0,22–17,77).
В
то
же
время
безопасный
аллель
C
встречался
чаще
в
контрольной
группе
по
сравнению
с
основной
(
соответственно
99,5%
и
99,0%;
χ
²=0,4; p=0,5; OR=0,5; 95% CI: 0,05–
4,48; RR=1,0; 95% CI: 0,98–1,01).
Функционально
опасный
аллель
A
полиморфизма
CHEK2
IVS2+1G>A
также
чаще
встречался
у
пациентов
с
раком
молочной
железы
по
сравнению
со
здоровыми
донорами
(
соответственно
1,5%
и
0,5%); (
χ
²=1,2; p=0,2; OR=3,0; 95% CI: 0,36–
25,34; RR=3,0; 95% CI: 0,36–24,75).
В
то
же
время
безопасный
аллель
G
был
более
распространен
в
контрольной
группе
(99,5%)
по
сравнению
с
основной
(98,5%); (
χ
²=1,2; p=0,2;
OR=0,3; 95% CI: 0,04–2,76; RR=0,9; 95% CI: 0,974–1,005) (
таблица
1).
T
аблица
-1.
Частота
полиморфизмов
1100delC
и
IVS2+1G>A
в
основной
и
контрольной
группах
.
Группа
Частота
аллелей
C
и
G
полиморфизма
1100delC
Частота
аллелей
G
и
A
полиморфизма
IVS
C
G
G
A
n
%
n
%
n
%
n
%
Основная
группа
(n =
200)
396
99,0
4
1,0
394
98,5
6
1,5
Контрольная
группа
(n
= 100)
199
99,5
1
0,5
199
99,5
1
0,5
Функционально
безопасный
(
мажорный
)
аллель
полиморфизма
1100delC
обозначили
буквой
C,
функционально
опасный
(
минорный
)
аллель
—
буквой
G.
Функционально
безопасный
(
мажорный
)
аллель
полиморфизма
IVS2+1G>A
обозначили
буквой
G,
минорный
аллель
—
буквой
A.
Обсуждения
и
Предложения
.
Как
было
отмечено
выше
,
данное
исследование
было
впервые
проведено
в
узбекской
популяции
.
В
лечении
онкологических
заболеваний
крайне
важно
своевременно
поставить
диагноз
,
достичь
положительных
результатов
,
сохранить
жизнь
пациента
,
минимизировать
вред
для
его
здоровья
.
Определение
частоты
минорных
аллелей
играет
значительную
роль
в
выборе
терапевтических
методов
,
включая
выбор
радикальных
хирургических
вмешательств
для
пациентов
,
выявление
мутаций
у
родственников
больных
и
своевременное
проведение
профилактических
мероприятий
.
На
основании
полученных
данных
можно
заключить
,
что
полиморфизмы
IVS2+1G>A
и
1100delC
гена
CHEK2
могут
служить
специфическими
генетическими
маркерами
для
оценки
риска
развития
рака
молочной
железы
в
узбекской
популяции
.
Мы
надеемся
,
что
дальнейшие
исследования
позволят
получить
более
точные
данные
,
включая
изучение
взаимодействия
гена
С
HEK2
с
другими
генами
,
ответственными
за
процессы
апоптоза
.
Литература
.
“ZAMONAVIY BIOLOGIYANING DOLZARB MUAMMOLARI VA
RIVOJLANISH ISTIQBOLLARI”
xalqaro ilmiy-amaliy anjuman materiallari
adu.uz
universaljurnal.uz
793
Hu, C., Hart, S. N., Gnanaolivu, R., Huang, H., Lee, K. Y., Na, J., Gao, C., Lilyquist, J., Yadav, S.,
Boddicker, N. J., Samara, R., Klebba, J., Ambrosone, C. B., Anton-Culver, H., Auer, P.,
Bandera, E. V., Bernstein, L., Bertrand, K. A., Burnside, E. S., Couch, F. J. (2021). A
Population-Based Study of Genes Previously Implicated in Breast Cancer.
New England
Journal of Medicine
,
384
(5), 440–451. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2005936
Waks, A. G., & Winer, E. P. (2019). Breast Cancer Treatment: A Review.
JAMA
,
321
(3), 288.
https://doi.org/10.1001/jama.2018.19323
You, L., Lv, Z., Li, C., Ye, W., Zhou, Y., Jin, J., & Han, Q. (2021). Worldwide cancer statistics of
adolescents and young adults in 2019: A systematic analysis of the Global Burden of Disease
Study 2019.
ESMO Open
,
6
(5), 100255. https://doi.org/10.1016/j.esmoop.2021.100255
