®естниқ#рача, Самарканд
2012, М 3
-Doctor axfjorotnomasi, Samarqaruf
84
АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ ДЕТОКСИКАЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ДЕЙСТВИИ
СЕЛЕКТИВНЫХ ИНГИБИТОРОВ СИНТЕЗА ОКСИДА АЗОТА У
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ
Ташкентская Медицинская Академия
Выяснение
функциональной
взаимосвязи
ферментных
систем,
обеспечивающих
жизне-
деятельность внутриклеточных организаций, при
действии на организм факторов среды, является одной из
актуальных проблем в современной патофизиологии
[3,33]. При патологиях печени особый интерес
представляет
взаимосвязь
нитрергической
с
моноксигеназ- ной системой [20.24]. NO- система
направлена на поддержание гомеостаза NO в тканях,
органах и системах с участием семейства цитохром Р-
450 - подобных ферментов, использующих в качестве
субстрата аминокислоту L- аргинин [8,23]. Все
изоформы NO- синтаз - эндотелиальная (eNOS),
нейрональная (nNOS) и индуцибельная (iNOS)
используют L-арги- нин, кислород и НАДФН в качестве
субстратов для синтеза NO[7], Ко-факторами катали-
тической
активности
изоформ
NOS
являются
тетрагидробиоптерин
(ВНд),
кальмодулин,
флавинадениндинуклеотид
(FAD),
флавипмо-
нонуклеотид (FMH)[10,16]. Отмечено, что снижение
уровня L-аргинина и ВН
4
инициирует iNOS, nNOS и
eNOS к продукции супероксидного анион радикала и
образования активных форм кислорода (АФК) [5,35]. В
этом процессе важное место занимает гиперэкспрессия
NO [6], с которым связывают инактивацию ферментов
повреждения ДНК, ускорение процессов апоптоза
[30,31,34]. Вместе с гем. моноксигеназная система,
главным образом ответственная за гомеостаз клетки в
комплексе с антиоксидантами за детоксикацию АФК и
супероксида, также в своих реакциях использует
кислород и НАДФН, те же кофакторы, что и NOS
[1,36,39]. Несмотря на важность этих систем в
поддержании физико-химического гомеостаза клеток,
остается совершенно не ясным их функциональная
взаимосвязь на уровне .микросомального окисления
печени.
В
последние
годы
для
выяснения
функциональной активности NO-системы. вклада в этот
процесс различных изоформ N0- синтаз используют
неселективные и селективные ингибиторы NOS [7,25]. К
неселективным ингибитором NOS относят L-NAME
(N'co-nitro- L-Arginine Methyl Egter), который блокирует
конститутивные формы NOS - eNOS и nNOS,
селективный ингибитор nNOS -7-nitro-indarole (7-N1) и
селективный ингибитор iNOS - S-. Methylisothiourca (S-
MT) [10,14]. В качестве активатора NO-синтаз
используют его предшественник - аминокислоту >4.-
аргинин [22]. Для оценки функциональной активности
NO-синтаз наряду' с определением уровня NO, L-
аргинина, активности, eNOS, iNOS, изучают содержание
в тканях пероксинитрита (ONO?). Возрастание
концентрации ONO?’ является эффективным критерием
экспрессивности iNOS, развития деструктивных процес-
сов в тканях [19,26].
В связи с вышеизложенным, целью данного
исследования явилось изучение влияния модуляторов
синтеза оксида азота на активность монооксигеназных
ферментов, выяснение их возможной функциональной
взаимосвязи с активностью изоферментов в составе NOS
в
микросомах
печени
и
сыворотке
крови
экспериментальных животных.
Материал и методы.
Опыты проведены на 40 белых
беспородных крысах самцах с массой тела 180-250г.
Животные были разделены на 5гр. по 8 крыс в каждой. 1.
2 и Згр. составили животные, которым вводили
препараты фирмы «Acrosorganies» США: неселективный
ингибитор NOS - N®-nitro-L-Arginine Methyl Egter (L-
NAME) в дозе 10мг/кг, селективные ингибиторы NOS-7-
nitro-indarole (7-NI) и S- Methylisothiourea (S-MT) в дозах
10 и Змг/кг в виде водных растворов внутрибрюшинно,
однократно утром в течении 6 сут подряд по 0,5мл на
100г массы животного. В качестве контроля
использовали группы животных, которым вводили также
внутрибрюшинно в течение 6 сут подряд водный раствор
L-аргинина («Merk») в дозе 150 мг/кг и интактные крысы
(4 и 5гр). Исследования проводили на 7-е сут. Животные
содержались в стандартных условиях вивария и рациона
кормления. Забой животных, находившихся под рауш-
наркозом, проводили посредством мгновенной декапита-
ции. Изьятие органов и выделение субклеточных
фракций проводили в холодильной камере при 0±4"С. В
выделенных
с
помощью
препаративной
ультрацентрифуги VAC601 (Германия) при 105000g
микросомальных фракциях ткани печени определяли на
двухлучевом
спектрофотометре
с компьютерной
обработкой типа UV-2100 (Ltd. Китай) содержание
цитохромов Р-450, Р-448. Р-420 и Ь, классическим
методом T.Omura, R.Sato [28]; активность микросо-
мальных ферментов: НАДФН-цитохром с- редуктазу
(НАДФН-цит.с-ред.) по С.Н. Williams, Н. Kamin [37];
бенз(а)пиренгидроксилазу (Б(а)ПГ) - по С.Н.Yang,
L.P.Kicha [38]; N-деметилазу амидопирина (N-АП) - по
A. Bast, J. Nordhosck [17]: анилингидроксилазу (АГ) - по
А.И. Арчакову и соавт. [4]; глюкоза-6-фосфатазу (Г-6-
Фаза) - по N.S. Gnosh. N.C. Kar [18]; микросомальный
белок (мг/мл) - по О.Н.Lowry и соавт. [29].
Одновременно в выделенных микросомах и в сыворотке
крови определяли содержание NO по основным
стабильным его метаболитам - NOj’ и NOj’ - по методу
П.П. Голикова и соавт. [9]; активность eNOS - по В.В.
Комар ин А. С.,
Сайфуллаева С.А.,
Таткенбаева Э.Н.
Ъестниқврача, Самарканд
2012, №
3
(Dofyor аҳбопПпотая, Samarqaruf
85
Сумбаевой, И.М. Ясинской [13]; активность iNOS и
концентрацию пероксинитрита (ONOO ) - по М.Ю.
Раваевой, Е.Н.Чуян [11]; L- аргинин - по Л.П.Алексеенко
[2].
Методом
иммуноферментного
анализа
с
использованием наборов «Biomedica» определяли в
сыворотке крови ЭТ-1.
Полученные данные обрабатывали статистически с
помощью программы статистического анализа BioStat
2008с использованием параметрических (t-критерий
Стьюдента) и непараметрических (критерий Манна-
Уитни) критериев. Данные представлены в виде ариф-
метической средней М±т ошибки среднего. С целью
изучения статистической взаимосвязи проводили расчет
коэффициента корреляции Спирмена (г). Данные
считали статистически значимыми при Р<0,05.
Результаты и обсуждение.
Установлено, что
неселективный ингибитор NOS (eNOS и nNOS) L-
NAME, а также селективный ингибитор nNOS -7-NI при
6-ти сут. введении животным ведут к существенному
снижению детоксикационной функции печени. При
введении L-NAME функциональная актив-ности систе-
мы детоксикации печени более выражено угнетена, чем
при введении 7-NI. После 6-ти суток введения L-NAME
содержание цитохромов Р-450, Р448 и Ь
5
снизилось - на
34,4; 22,7 и 18,0% (Р<0,01; Р<0,02 и Р<0,05), редуциро-
ванная форма Р-450 - цитохром Р-420 повысились в 3,4
(Р<0,001) раза; активность НАДФН- цит.с-ред.. Б(а)ПГ.
АГ, N-AI1, Г-6-Фаза снизились - на 23,1(Р<0,05);
26,9(Р<0,01);
26,4(Р<0,01); 18,8(Р<0,05) и 22,3(Р<0.01)% со-
ответственно (Табл.1). Вместе с тем, после введения 7-
NT содержание цитохромов Р-450, Р448 и Ь$ - было
снижено - на 15,6; 12,0 и 13,1 (Р<0,05), редуцированная
форма Р-450 - цито
Следовательно,
модуляторы
NOS
обладают
свойством изменять активность микросомальных
ферментов печени. Их фармакологический эффект,
направленный
на
изменение
функциональной
активности микросохром Р-420 повысилась в 1,4
(Р<0,001) раза, активность НАДФН-цит.с-ред. снизилась
- на 13,8 (Р<0,05) %, Б(а)ПГ - на 11,6 (Р<0,05), АГ, N-АП
и Г-6-Фаза соответственно - на 15,3; 10,4 и 10,5%
(Р<0,05).
Полученные данные позволяют заключить, что
важным
вкладом
в
угнетение
активности
микросомальных ферментов печени при введении
неселективного ингибитора NOS является депрессия
скорости ферментативной реакции eNOS. При введении
L.-NAME содержание цитохромов Р-450, Р448, Ь$ в
микросомах печени было в большой степени ниже, чем
при введении селективного nNOS - на 22,2(Р<0,05); 12,1
(Р<0,05); 5,7(Р<0,25) соответственно; редуцированная
форма Р-450 - цитохром Р-420 возросла больше, чем в 2,4
(Р<0,001) раза; активность НАДФН-цит.с-ред., Б(а)ПГ,
АГ, N-АП, Г-6-Фаза были ниже - на 10,8; 17,3; 13,1; 9,3 и
13,1% (Р<0,05) соответственно.
При внутрибрюшинном 6-ти сут введении
селективного ингибитора iNOS- S-MT нами выявлено
значительное
повышение
активности
ферментов
монооксигеназной системы печени. Сходные результаты
получены также при введении субстрата NOS- L-
аргинина. Содержание цитохрома Р-450 повысилась в
обеих исследуемых группах, по сравнению с контролем
на 20.8 и 24,0%(Р<0,05), цитохрома Р-448 -на
25.3
и 41,3 (Р<0,01 и Р<0,001)%, Ь
5
- на 18.0 и
29,5(Р<0,05 и Р<0,01)%, редуцированной формы Р-450 -
цитохром Р-420 снизилось в 2,5 - 1.7 (Р<0.001)раза;
активность НАДФН-цит.с- ред. повысилась - на 32.1 и
33,5 (Р<0,001) %, Б(а)ПГ - на 19,8 и 30,0 (Р<0,05 и
0,001)%, АГ - на 16,7 и 23,6 (Р<0,05 и 0,01)%,N-АП- на
27,3 и 30.9(Р<0.01 и 0.002)%, Г-6-Фаза - на 27.7 и
46.3
(Р<0.01 и Р<0,001)%.
мальных ферментов печени, зависит от способности
блокировать изоформы в активном центре NOS[24],
Конкурентное ингибирование эфирами L-аргинина и
специфичное торможение активности отдельных
изоформ - L-NAME
Показатель
Интактные
(контроль)
L-NAME
1 гр.
7-NI
2 гр.
S-MT
3 гр.
L-аргинин
4 гр.
Р-450, нмоль/мг
0,96x0,031
0,63x0,023*
0.81X0,029
1,16±0,032*
1,19X0,034*
Р-448, нмоль/мг
0,75x0,028
0.58±0.020*
0,66x0,027
0,94x0,025*
1,06x0,028*
Р-420, нмоль/мг
0,05±0,001
0,17±0.005*
0,07X0,001
0,02±0,001*
0,03X0,001*
bs, нмоль/мг
0,61 ±0,017
0,50±0,012*
0,53x0,013
0,72X0,026*
0,79x0,024*
НАДФН-цит.С-ред.,
нмоль/мин/мг
127,91x5,242
98,36±3,196*
110.21X3.052
168,91X5,543*
170,72X4,967*
Бенз(а)ПГ, нмоль/мин/мг
2,68x0,072
1,96±0,049*
2.37X0,095
3,21±0,087*
3,49±0,098*
АГ, нмоль Амино-
фен/мин/мг
0,72x0,025
0,53x0.013*
0,61x0,021
0,84±0,026*
0,89x0,030*
N-АП, нмоль
НСНО/мин/мг
4,69±0,187
3,81±0,119*
4,20X0.128
5,97X0,243*
6,14X0,226*
Г-6-Фаза, нмоль Р
неорг/мин/мг
77,34X1,940
60,11X1,825*
69,21X1,731
98,75x2,592*
113,11X2,802*
Таблица 1
Показатели активности микросомальных ферментов печени в исследуемых группах животных
*- Р<0,05 по сравнению с контролем
(Ветниқврача, Самарканд
2012. № 3
(Dofyor a^6orotnoinasi. Sainarqancf
86
блокирует конститутивную eNOS и nNOS, 7- N1 -- nNOS,
S-MT iNOS, тем самым смешиваясь в процесс
биотрансформации
NO.
уровень
которого
контролируется нс только NOS, но и ферментами
микросомального окисления [14,16]. Вместе с тем,
изменение уровня NO в микросомах под действием
модуляторов NOS, по видимому, является важным
фактором
регуляции
активности
ферментов
монооксигена-
ной
системы
печени
у
экспериментальных животных.
Чтобы подтвердить эту версию, изучена активность
NO-системы в микросомах печени и сыворотке крови
после 6-ти суточоного введения препаратов L-NAME, 7-
NI. S-MT и L- аргинина.
Установлено, что ингибитор L-NAME, вместо
ожидаемого снижения NO, как следствия подавления
активности eNOS и nNOS, привел к существенному его
увеличению, по сравнением с контролем - на
40,2%(Р<0.001). Активность eNOS была снижена - на
30,9%(Р<0.01).
Снижение
активности
eNOS
одновременно характери-зовалось гиперэкс- прсссией
фермента iNOS - в 4,6 раза (Р<0,001) , количества ONO/
- на 62.5%(Р<0,001) и снижением уровня L-аргинина - на
29,4% (Р<0,01). Та же тенденция сохраняется и при
изучении активности NOS в сыворотке крови: - NO
повышается, по сравнению с контролем - на
29,9%(Р<0,01), eNOS и L-аргинина снижаются на 21.6 и
16,0 (Р<0,02 и Р<0.05)%. фермент iNOS и концентрация
ONO2’ повышаются - на 39.9 и 32,0% (Р<0,001 и Р<0,01)
соответственно. В крови после 6-сут введения L- NAME
повышается содержание антагониста NO - эндотелии 1
(ЭТ-1) на 40,7(Р<0,001)% (Табл.2). При анализе действия
селективного ингибитора nNOS - 7-NI установлено, что
его фармакологический эффект по направленности,
практически совпадал с действием L- NAME на
активность NO-системы в микросомах печени и в
сыворотке крови, но несколько в меньшей степени.
Таблица 2
Показатели NO-системы в микросомах и сыворотке крови животных в исследуемых группах
Показатель
Интактные
L-NAME
7-NI
S-MT
L-аргинин
(контроль)
1 гр.
2 гр.
3 гр.
4 гр.
В микросомах:
NO, мкмоль/мг
5,52x0,164
13,74X0,594*
9,37x0,358*
6,23x0,266*
6,65X0,272*
eNOS,MKMonb/MH
н/мг
17,42X0,627
12,03x0,409*
16,90X0,553
20,87x0,710*
21,93X0,687*
iNOS, мкмоль/мин/.мг
0,10±0,002
0,46x0.013*
0,29X0,009*
0,05X0,001*
0.04x0.001*
ONO
2
,
мкмоль/мг
0,08X0,002
0,11X0,005*
0,10x0,002*
0,06x0.001*
0,05x0.001*
L-аргинин. мкмоль/мг
0,17X0,008
0,12X0,003*
0,14x0,003*
0,20=0,005*
0,23x006*
В сыворотке NO,
мкмоль/мг
15.46=0,498
33,09x1,508*
26,74x0,963
17,34x0.485*
18,15x0,511 *
eNOS,MKMonb/MH
н/мг
4,08x0,17]
3,20x0,152*
3.71X0,161
4,91x0,181*
5.07x0,194*
iNOS, мкмоль/мин/мг
14,12x0,523
19,75x0,811*
15,93=0,560*
10,85X0,316*
9,21x0,371*
ONO
2
, мкмоль/мг
0.75x0,032
0.99X0.035*
0,86=0.034*
0,58x0.019*
0.44±0,025*
L-аргинин, мкмоль/мг
9,63x0,269
8,09x0.175*
8,75x0,1 83
10,87x0.199*
11,14x0,209*
ЭТ-1, пг/л
0,27x0,011
0,38x0,014*
0,31x0,012
0,23x0,011*
0,21x0,008*
*- Р<0,05 по сравнению с контролем
При оценке фармакологической активности S-MT и L-
аргинина прослеживается картина увеличения уровня NO,
по сравнением с контролем, -на 12,9 и 20,5%(Р<0,05) в
микросомах печени и в сыворотке крови - на 12,2 и 17,4
(Р<0,05)%, на фоне повышения активности eNOS - 19,8 и
25,9 (Р<0,05 и Р<0,02)% в печени, и на 20,3 и 24,3(Р<0,05 и
Р<0,02)% - в сыворотке крови соответственно. Одновре-
менно отмечается снижение уровня iNOS и ONO
2
'
В
микросомах печени на 50,0 - 60.0 (Р<0,001)% и 25,0 -
37,5(Р<0,02 и Р<0,01)%, а в крови - на 23,2 - 34,8(Р<0,01 и
Р<0,002)% и 22,7 - 41,3(Р<0,05 и Р<0,001)% соответственно
исследуемому препарату в группах. Уровень L-аргинина
повысился в микросомах печени - на 17,6 - 35,3(Р<0,05 и
Р<0,01)%, а в крови - на 12,9 - 26.1(Р<0.05 и Р<0.002)%. В
сыворотке крови после 6-ти сут введения S-MT содержание
ЭТ-1 снизилось, по сравнения с интактной группой, на
14.8%(Р<0,05). а после введения L- аргинина - на
22,2%(Р<0,02).
Следовательно, все исследуемые препараты,
независимо от их модулирующего свойства влиять на
изоформы NOS, обладают свойством увеличивать в
микросомах и в сыво- " ротке крови уровень NO.
Отличительной их способностью является влияние на
активность eNOS, iNOS, содержание ONO
2
‘, L-аргинина в
микросомах печени и в крови. Повышение и/или снижение
в крови ЭТ-1 становится понятным. если учесть, что его
уровень в большой степени регулируется eNOS и iNOS, и в
меньшей - содержанием в тканях NO[30]. Снижение eNOS
ведет
к
активации
ферментов
ангиотензин
II
конвертирующей системы инициирующие синтез ЭТ-1
[27,35]. И наоборот, блокада ферментов этой системы ведет
к ингибиции синтеза ЭТ-1 и увеличению активности eNOS
[21,26]. Активация iNOS сопровождается гиперэкспрессией
в тканях NO, что стимулирует активность ферментов
ангиотензин II, одновременно ингибированием фермента
eNOS, тем самым инициируя синтез ЭТ- 1[27]. Поэтому
можно полагать, что повышение активности eNOS в
микросомах печени и сыворотки крови при действии S-MT
связано с селективной блокадой iNOS, а увеличение NO
есть результат высокой активности eNOS. Одновременно
возрастает потребность в увеличении субстрата окисления
и донора NO - L- аргинина, который в условиях высокой
Лестниқврача, Самарканд
2012, Ni 3
Doctor aKporotnomasi, Samarqand'
87
активности eNOS синтезируется из остаточного азота и
креатинина
вследствие
повышения
функции
L-
орнитинового цикла [21]. Это подтверждается в опытах при
введении животным L-аргинина. При этом возрастание в
микросомах печени и крови эндогенного L-аргинина
характеризуется
повышением
активности
eNOS,
ингибицией iNOS. Снижение активности iNOS и
содержания в периферической крови ЭТ-1 ассоциируются
усилением микроциркуляции в тканях, оптимизацией
обеспечения тканей кислородом, уменьшением явлений
гипоксии. - главного механизма образования свободных
радикалов, активных форм кислорода (АФК) [7,19]. Исходя
из этого, можно полагать, снижается концентрация в
микросомах печени и сыворотке крови ONO
2
‘, уровень ко-
торого определяется избыточным содержанием NO и АФК[
12,16].
При
введении
животным
неселективного
ингибитора L-NAME и селективного ингибитора 7-NI,
гиперэкспрессия NO в микросомах печени и сыворотке кро-
ви обеспечивается возросшей активностью iNOS. По
данным литературы, блокада ферментов eNOS и nNOS
влечет за собой инициацию iNOS [6,12]. Высокий уровень
iNOS приводит к истощению запасов L-аргинина, что по-
видимому, проявляется его снижением в микросомах
печени и сыворотке крови. Адекватно снижению L-
аргинина как следствие eNOS в организме животных
включается механизм поддержания тонуса сосудистого
русла с вовлечением в этот процесс белка ЭТ-1. Его
увеличение способствует развитию гипоксии в тканях и
значительному возрастанию ONO2’, обладающего высоким
цитотоксическим, цитолитическими свойствами [10]. В
связи с этим можно полагать, что среди причин моду-
лирующего эффекта ферментной системы детоксикации
печени при действии неселективных, селективных
ингибиторов NOS и L-аргинина, лежат процессы не только
изменения активности ферментов NOS и уровня L-арги-
нина, но и колебания содержания в них ONO/. Чтобы
обосновать данную версию, проведены исследования по
корреляционной
зависимости
между
показателями
ферментной системы детоксикации и параметрами NOS в
микросомах печени в группах животных, которым вводили
L-NAME и S-MT. Установлено, что введение L-NAME
характеризуется
наличием
достоверной
прямой
корреляционной связи (г=0,89- 0,96, Р<0,001) между
повышением цитохрома Р-420 и активностью iNOS,
содержанием ONO
2
‘,
И
обратной корреляцией (г=0,87-0,93,
Р<0,001) между снижением содержания цитохромов Р-450,
Р-448, Ь
5
, ферментами НАДФН- цит.с-рсд, Б(а)ПГ, АГ, N-
AI1 и Г-6-Фазой. Одновременно, также выявлена четкая
прямая зависимость угнетения показателей eNOS и L-
аргинина со снижением исследуемых показателей
ферментов детоксикации микросом печени. При введении
препарата S-MT ингибиция iNOS, снижение параметра
ONO
2
' сопровождались сильной обратной зависимостью -
увеличением показателя корреляции с возрастанием
цитохромов Р-450, Р-448, Ь
5
, подъемом активности
ферментов микросомального окисления - НАДФН-цит.с-
ред, Б(а)ПГ, АГ, N-АП и Г-6-Фазы. Выявлена сильная
прямая зависимость (г=0,90-0,95, Р<0,001) показателей
eNOS, содержания L-аргинина со всеми параметрами
системы детоксикации печени (кроме с цитохромом Р-420,
с которой они имели сильную обратную корреляцию
г=0,92-0.97, Р<0,001). Вместе с тем, нами не выявлена кор-
реляционная зависимость при введении животным L-
NAME и S-MT между изменением параметра NO в
микросомах печени с показателями активности изучаемых
ферментов микросомального окисления в этом органе.
Следовательно, важной причиной направленного
изменения
каталитической
активности
ферментов
микросомального окисления в печени при действии
модуляторов NOS лежат процессы, связанные с
активностью ферментов eNOS, iNOS, уровнем ONO
2
и L-
аргинина.
Таким
образом,
проведенные
исследования
свидетельствуют,
что
активность
ферментов
монооксигеназной системы на уровне микросом печени
функционально взаимосвязаны с NOS, через механизм
модуляции изоформ семейства цитохром Р-450- подобных
ферментов, использующих в качестве субстрата окисления
аминокислоту L-аргинин. Направленность активности
ферментов МОС печени определяется интенсивностью
eNOS и iNOS, а также экспрессией ONO
2
’ и уровнем L-арги-
нина. Можно полагать, что от состояния функциональной
зависимости монооксигеназной и NO-ергической систем в
микросомах печени зависит активность NOS в сыворотке
крови, участвующей в регуляции метаболических
процессов на системном уровне. Выявленные различия в
изменении активности ферментов МОС печени, в
зависимости от модулирующих эффектов изоферментов
NOS, указывает на возможность их участия в специфике
функ-
®естни\врача, Самарканд
2012,
% 3
(Delator axborotnomasi, Samarqand'
88
ных ферментов коррелирует с индукцией eNOS, повышением
L-аргинина. ингибицией iNOS и содержанием ON О
;
.
Анализ результатов, полученных при введении L- NAME,
7-NI и S-MT. L-аргинина указывает, что изменение активности
NOS в микросомах печени зеркально отражается на изменение
аналогичных показателях NOS в сыворотке крови.
Отсутствие
корреляционной
зависимости
между
показателем NO в микросомах и микросомальными
ферментами в печени дают основание считать, что важными
факторами модуляции активности монооксигеназ являются
изоферменты NOS - eNOS, iNOS. содержание ONO
2
и L-
аргинина.
Литература
I,
. Активированные кислородные метаболиты в монооксигенаных реакциях Ляхович В.В.. Вавилин В.А.. Зенков И.К., Меншикова Е.Б. // Бюл.СО
РАМП. -2005. - №4 (118). - С.7-12. 2. Алексенко Л.П. Метод определения содержания аргинина в моче и сыворотке крови// Совр. методы в биох. Под.
Ред. В.Н.Ореховича, М., «Медицина», 1977. -С.86-91. 3. Гарбузенко Д.В. Механизмы компенсации структуры и функции печени при ее повреждении и
их практическое значение//Рос.журн. гастроэнтерол., гепатол.. колопрактол. -2008, №6. -С.14-21. 3. Гидроксилирование производных анилина и
аминоаптипири- па в эндоплазм.ретикулуме печени! А.И. Арчаков, И.Н. Карузин, B.11. Твеританов, И.С. Кокарева // Биохимия. -1975. - Т.40, вып.1. -
С.29-32. 4. Гильяно Н.Я.. Коневега Л.В., Носкин Л.А. Динамика изменения внутрикл.уровня супероксида и NO в эндотелиоцитах и клетках карциномы
человека после их обработки ингибиторами NO-синтазы// Бюлл. эксп. биол. и мед. - 2010. -Т.149, №, С.85-88. 5. Григлевски Р.Е. Участие свободных
радикалов в преображениях эндотелиального простациклина и окиси азота//Новости фармации и мед.-1997. -№1-2. -С.2-8. 6. Защитные и повреждающие
эффекты периодической гипоксии: роль оксида азота/' Манухина Е.Б., Дауни Х.Ф.. Маллет Р.Т., Малышев И.Ю. // Вестн. РАМН. -2007. -№2. -С.25- 33.
7. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Реутов В.П. NO-синтазы в норме и при патологии различного генеза// Вестн. РАМН. - 2000. -№4. -С.30-34. 8. Оксид
азота и ПОЛ как факторы эндогенной интоксикации при неотл.состояниях/' П.П. Голиков, Н.Ю. Николаева, И.А. Гавриленко и др.// Пат. Физ. и эксп. тер.
-2000. -№2. -С.6-9. 9. Покровский В.И., Виноградов Н.А. Оксид азота, его физиол.и патофизиол.свойства// Тер.арх. -2005. -№1. -С.82-87. 10. Раваева
М.Ю.. Чуян Е.Н. Изменения активности синтеза NO под действием низкоинт/мм-излучепия// Серия «Биология, химия». -2011. -Т.24(63), №4. -С.200- 210.
11. Стародубцева М.Н. Пероксинитрит в физиол.и патол.клеток крови// М.: «Медицина». -2011. -200с. 12. Сумбаев
B.
В., Ясинская И.М. Влияние ДДТ на активность синтазы NO в печени, ... крыс// Совр. пробл. токсикол. -2000. -№3. -С. 3- 7. 13. Торкунов П.А.,
Шабанов П.Д. Применение ингибиторов NO-синтазы, производных L-аргинина, для пре- дотвр.эксперим.токсич.отека// Эк«и. и клин.фармакол. -2009. -
Т.72, №2. -С.44-46. 14. Эндотелиопротекторные эффекты L- аргинина при моделировании дефицита NO / Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров
В.И., Артюшкова Е.Б. // Эксп. и клин.фармакол. -2008. -№2. -С.29-31. 15. Alderion W.K., Cooper С.Е., Knowles R.G. Nitric oxide synthases: structure, function
and inhibition// Biochem .1. -2001. -Vol. 357. -P.593-615. 16. Bast A., Nordhook .1 Product inhibition during the hepatic N- demethylation of aminopyrine in the
rat// Biochem. Pharmacol. -1981 -Vol. 30. № 1. -P. 19-24. 17. Chosh N.C., KarN.C. Chayc- riycc I. Spcsial difference in regard to the distribution of g-6-phd//
Nature. -1983. -№ 4. -P. 596;597. 18. Cooke C.. Davidge S. Peroxynitrite increases iNostrougt NF-Карра В and decreases prostacvcline synthase in endotheline
cells// Am. J. Cell. Physsiol. -2009. Vol'. 282. -P. 395-402.
Dedon P., Tfnnenbaum S. Reaktive nitrogen species ithchemical biology of inflammation//Arch. Biochem. Biophys. -2004. - Vol.423. -P. 12-22. 19. Endothelial
beta3-adrenoceptors mediate vazorelaxation of human coronary microarteries through nitric oxide and endothelium-dependent hyperpolarization/ Dessy C.. Moniotte
S.. Ghisdal P. et al. // Circulation. -2004. -Vol.l 10,N8. -P.948- 954. 20. Guayao W.U., Morris S.M. Arginine metabolism: nitric oxide and beyond// Biochem .1. -
1998. -Vol.336. -P.1-17. 21. Interaction of nitric oxide and the cytochrome P-450 system on blood pressure and renal function in the rat: dependence on sodium
intake/ Kuczeriszka M„ Olszynski K.H., Gasiorowska A. et al. // ActaPhysiologica. -2011. -Vol.201. -P.493-502. 22. Lehnert N.. Scheidt R.W. Cytochrome P-450
Catalyzed Nitric Oxide Synthesis: A Theoretical Study//Inorganic Chem. -2010. -Vol.49. -P. 759- 768. 23. Modulation of prostaglandin biosynthesis by nitric oxide
and nitric oxide donors; Mollace V., Muscoli C.. Masini E. et al. // Pharmacol. Rev. -2005. -Vol.57. -P. 217-252. 24. Nitric oxide and cerebral blood flow responses
to hyperbaric oxygen; Demchenko
J. T., Boso A.E., O’Neil T.J. el al. // J. Appl. Physiol. -2000. -Vol. -P. 1381-1389. 25. Okano A.. Mouda H., Ohkubo C. Decreased plasma levels of nitric oxide
metabolites, angiotensin II and aldosterone in spontaneously hypertensive rats exposed to 5 inT static magnetic field// Bioel ectromagnetics. -2005. -N26. -P.161-
172. 26. Omura T., Sato R. The carbon monoide-binding pigmenr liver microsomes. Evidence for its hemoprotein nature// J. Biol. Chem. -1964. -Vol. 230. № 2. -
P. 2370-2378. 27. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // O.H. Lowry, N.G. Rosenbrough, N J. Farr, R..I. Randall // J. Biol. Chem.-1951 .-Vol.l93,
N1 .-P.265- 275. 28. Receptor-mediated activation of nitric oxide synthesis by arginine in endothelial cells/ Joshi M.S., Ferguson T.B.Jr., Johnson F.K. et al.// Proc,
Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. -Vol.l04,N24. -P.9982-9987. 29. Repression of phenobarbital-dependent CYP2B1 mRNA induction by reactive oxygen species in
primary rat hepatocyte cultures/ K.I. Hirsch-Ernst. K. Schlaefer, D. Bauer et al.// Mol. Pharmacol. -2001.-Vol.59. -P.1402-1409. 30. Scibior D.. Creezot A. Arginine
- metabolism and functions in the human organism// PostepyHig. Med. Dosw. -2004. -Vol.58. -P. 321-332. 31. Stem cell for liver tissue rapair: current knowledge
and perspectives/ Lysy P.A., Camparol D.. Smets F. et al. // World J. Gastroenterol. -2008. -Vol. 14, N6. -P.864-875. 32. Symons A.M.. King L.J. Inflammation,
reactive oxygen species and cytochrome P-450/7 Inflammopharmacology. -2003. -Vol.l I. -P.75-86. 33. Taylor
C.
T., Moncada S. Nitric oxide, cytochrome C oxidase, and the cellular Rcspongc to Hypoxia// Am.J Heart Association. -2010. - Vol.3. -Р.643-647/ 34. Villeneuve
J.P., Pichette V. Cytochrome P-450 and liver diseases// Curr. Drug Metab. -2004. -Vol.5. -P.273- 282. 35. Williams C.H., Karnin H. Microsomal triphosphopyridine
nucleotide - cytochrome c-reductases of liver// J. Biol. Chem. - 1961. -Vol. 237, № 2. -P. 587-595. 36. Yang C.H., Kicha L.P. A direct fluorometric assay of
benzo/a/pyrene - hydroxylase// Analyt. Biochem. -1978. -Vol.84. -P.154-163. 37. Yasui, H„ Hayashi S., Sakurai II. Possible involvement of singlet oxygen species
as multiple oxidants in P450 catalytic reactions// Drug Metab. Pharmacokinet. -2005. -Vol.20. -P.l -13.
ционально-структурных перестроек в паренхиме печени
при действии на организм патогенных факторов среды.
Выводы. Неселективный ингибитор NOSL- NAME
(eNOS и nNOS) и селективный ингибитор 7-NI (nNOS)
угнетают, а селективный ингибитор iNOS - S- МТ. а
также донор NO - L-аргинин повышают активность
ферментов монооксигеназной системы печени.
Угнетение активности микросомальных ферментов
печени при действии L-NAME статистически значимо
коррелирует с показателями высокой активности в
микросомах iNOS, содержанием ONOf, низкой ак-
тивностью eNOS и концентрацией L-аргинина. При
действии селективного ингибитора iNOS - S-MT, сти-
муляция функциональной активности микросомаль
