РЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И
мицинрезистентных энтерококков // КМАХ. Том
20, №1. 2018. С.55-61.
12. Хай-Хром Экспресс-диагностика. Дифференциа
ция микроорганизмов в первичном посеве. Ката
лог компании HiMedia. С. 3 7.
13.
Халдарбекова
Г.З.,
Мухамедов
И.М.
Био-
логичсекие
свойства
лактобацилл
выде
ленных
из
разных
биотопов
тела
человека
//Журнал
Стоматология.
Ташкент.
2018,
№3. С. 75-78.
14. Царев В.Н. Микробиология, вирусология и имму
нология полости рта. // ГЭОТАР-Медиа, 2016.
с. 572.
615.453.47-281:617.7 -[611.77-612.084
ДОКЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КОЖНО-РАЗДРАЖАЮЩЕГО
И КОЖНО- РЕЗОРБТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ГЛАЗНОЙ
ЛЕКАРСТВЕННОЙ ПЛЕНКИ «NOVACEL ZIYO»
1
Л.Н.Хегай ,
2
З.А.Ниязова ,
3
А.А. Сыдиков
1
Ташкентская Медицинская Академия,
Ташкентский педиатрический медицинский институт,
’Ташкентский государственный стоматологический институт.
РЕЗЮМЕ
В статье представлены результаты исследо
вания
кожно-раздражающего
и
кожно-резорб
тивного
действия
многофункциональной
пленки
для терапии травм органа зрения «Novacel ziyo».
Опыты проведены на 24 половозрелых крысах-сам
цах массой тела 150-170 гр. Для изучения воздей
ствия растворов пленки на кожные покровы 18
белых крыс применены 3 взаимодополняющие ме
тодики:
двухкапельная
и
аппликационная
пробы
и опускание 2/3 хвоста в пробирку с раствором
пленки. Контрольную группу составили 6 особей.
Установлено, что отечественная пленка для лече
ния травм глаз «Novacel ziyo» не обладает токси
ческим действием на кожные покровы.
Ключевые
слова:
доклинические
исследования,
многофункциональная лекарственная пленка, кож
но-раздражающее и кожно-резорбтивное свойство.
ABSTRACT
The article presents the results of a study of the skin
irritating and skin-resorptive action of the multifunctional
film "Novacel ziyo’’ for the treatment of eye injuries.
The experiments were carried out on 24 sexually mature
male rats weighing 150-170 g. To study the effect of film
solutions on the skin of 18 white rats 3 complementary
methods were used: two-drop and application tests and
lowering 2/3 of the tail into a test tube with a film solution.
The control group consisted of 6 individuals. It has been
established that the domestic film "Novacel ziyo'’ for the
treatment of eye injuries does not possess a toxic effect
on the skin.
Key words:
preclinical studies, multifunctional drug
film, skin irritant and skin resorptive properties.
Актуальность.
Создание новых нетоксичных,
биодеградирумых покрытий для терапии травм
органа
зрения
является
приоритетной
задачей
ученых. Для оценки медико- биологической без
опасности новых изделий медицинского назна
чения
необходим
доклинический
токсикологи
ческий скрининг на экспериментальной модели
патологии [1]. Тщательное изучение токсично
сти новых материалов на животных необходимо
для профилактики нежелательных реакций при
клинических испытаниях [2,3]. В дополнение к
традиционным
офтальмологическим
препаратам
в виде гелей, мазей, водных суспензий разрабо
таны
офтальмологические
пленки,
коллоидные
системы, состоящие из нано- и микрочастиц, на
ноэмульсий, наносуспензии [4,5,6,7]. По сравне
нию с традиционной субконъюктивальной инъ
екцией,
пленочные
покрытия
характеризуются
более длительным воздействием, высокой био
доступностью для оболочек глаза [7].
Биоматериалы остаются одной из самых сложных
и актуальных задач современной офтальмологии.
Трудности заключаются в низкой биодоступности в
виду особенностей анатомии и физиологии глаза, от
носительной низкой проницаемости эпителиальной
мембраны роговицы, динамики слезной жидкости,
назолакримального дренажа и др. [8]. В данном слу
чае идеальным изделием могло служить пленочное
покрытие, которое бы прикладывалось на повре
жденную склеру для барьерной функции и дальней
шей адекватной терапии. Имплантат должен обла
дать адекватной площадью покрытия, адгезивными
свойствами, быть биосовместимым, с низкой часто
той осложнений, не должен вызывать системные и
побочные действия, быть простым в применении,
экономически доступным [7,9].
Цель.
Изучение кожно-раздражающего и кож
но-резорбтивного
действия
отечественной
поли-
функциональной лекарственной пленки «Novacel
140
MEDICINE AND INNOVATIONS |
№1, 2021
МЕДИЦИНА И КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ
ziyo» для терапии проникающих ранений глаз в экс
перименте.
Материал и методы исследования.
Биоактив
ное покрытие для лечения травм глаз синтезировано
группой ученых Узбекистана на основе Na-КМЦ,
красителя метиленового синего, обладающего фото
сенсибилизирующей и противомикробной активно
стью и пластификатора глицерина [10].
Данное исследование выполнено в соответствии
с планом научно-исследовательских работ Таш
кентской медицинской академии в рамках Государ
ственной научно- технической программы по гран
ту ПЗ-2017092910 «Разработка полупроницаемых и
биодеградируемых раневых покрытий для лечения
повреждений кожных покровов и мягких тканей
различного генеза».
Лекарственная форма представляет собой поли-
композиционную
биодеградируемую
полимерную
пленку, активными компонентами являются водора
створимый натрий карбоксиметилцеллюлоза, sodium
carboxymethyl cellulose (пищевая добавка Е466), гли
церин и метиленовый синий. Параметры токсично
сти Na- КМЦ - ЛД50 в/ж крысы 27000 мг/кг. ПДК в
воздухе рабочей зоны 10 мг/м
3
, класс опасности 3.
Кожно-резорбтивным действием не обладает. Мети
леновый синий по паспорту безопасности в соответ
ствии с Регламентом (ЕС) № 1907/2006 (REACH), с
поправками, внесенными 453/2010/ЕС [ОЭСР Test
№ 404 «Acute Dermal Irritation/Corrosion»] является
нетоксичным соединением. Глицерин (Glycerol) со
гласно Регламенту (ЕС) № 1272/2008 является без
опасным веществом. Согласно статье 2 регламента
REACH (ЕС) № 1907/2006 вещество освобождено от
регистрации.
С целью подтверждения результатов изучения
кожно-раздражающего и кожно- резорбтивного дей
ствия отечественной пленки для лечения ранений
глаз проведены гистологические исследования кож
ных покровов спинки и хвостов белых крыс. Микро
препараты окрашивали гематоксилин-эозином.
Статистические исследования проведены на ос
новании стандартных клинических рекомендаций.
Количественные данные представлены как среднее
арифметическое (М) ± стандартное отклонение (SD)
в случае нормального распределения и как медиана
(Md) и квартили (Q) или (SD) при других распределе
ниях. За статистически значимые изменения прини
мался уровень достоверности Р< 0,05. Обработка ре
зультатов клинического обследования производилась
на персональном компьютере Pentium-IV с использо
ванием прикладных офисных программ Statplus 9.0
с расчетом среднеарифметической изучаемого пока
зателя (М), ее стандартной ошибки (т), показателей
достоверности (Р) и критерия Стьюдента. При этом
учитывались методики, существующие указания по
статистической обработке данных в клинических и
лабораторных исследованиях [11].
Результаты и обсуждение.
Оценка медико-био
логической безопасности лекарственной пленки для
терапии проникающих ранений глаз в эксперименте
включала скрининг кожно-раздражающих и кож
но-резорбтивных свойств вещества.
Токсикологические
исследования
проведены
на 24 половозрелых крысах-самцах массой тела
150-170 гр. Животные содержались в стандартных
условиях
вивария
Межвузовской
научно-иссле
довательской лаборатории (МНИЛ) ТМА с есте
ственным режимом освещения, при температуре
22-24 С; относительной влажности воздуха 40-
50%, с использованием стандартной диеты (сба
лансированной по содержанию белков, жиров и
углеводов рацион). Перед началом экспериментов
лабораторные животные осмотрены, учтена масса
тела, возраст, пол, двигательная активность и со
стояние шерстного покрова.
Эксперименты проводились с учетом требований
Европейской конвенции по защите позвоночных жи
вотных, используемых для экспериментальных иссле
дований или в иных научных целях [12,13,14,15,16],
требований Национального руководства по содер
жанию и использованию лабораторных животных
(получено разрешение Комитета по вопросам этики
Минздрава РУз. (протокол № 5 от 05 июля 2018 года).
Согласно ГОСТ ISO 10993-5-2011 по продолжи
тельности контакта биопленка относится к катего
рии В - изделие длительного однократного примене
ния, контакт которого превышает 24 час, но не более
30 сут. С учетом этого продолжительность наших ис
следований составила 30 суток [1].
За сутки до экспериментов с использованием
двухкапельного и аппликационного методов шерсть
тщательно выстригалась на симметричных участках
боков размером 2x2 см, левая боковая сторона была
контрольной и обрабатывалась дистиллированной
водой, правая была опытной.
Аппликация растворов пленки в дозах 10, 100
и 200 мг/кг проводилась на выбритой коже спин
ки ежедневно открытым способом. При нанесении
аппликации в течение 4- часовой экспозиции жи
вотные находились в фиксированном состоянии.
Кусочек марли размером 1 см, смоченный раство
ром пленки, накладывали на кожу и фиксировали
лейкопластырем. На месте аппликации в течение
24-48 часов реакцию кожи учитывали ежедневно
по шкале оценки кожных проб. Реакцию наблюда
ли на наружной поверхности кожи и оценивали в
баллах по шкале: видимая реакция; бледно-розовая
эритема по всему участку или по его периферии;
ярко-розовая эритема по всему участку или его
периферии; красная эритема по всему участку; ин
фильтрация и отек кожи.
При изучении кожно-раздражающего действия ре
акцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки
кожных проб. Реакцию наблюдали на наружной по-
141
РЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И
Рис 1. Кожа спинки белых
крыс опытной группы.
Эпидермис, дерма, при
датки не нарушены. Окра
ска ГЭ. Об. 5x5.
Рис
2.
Кожа
спинки
крыс
опытной
группы.
Очагов
отёка,
некро
за,
инфильтрации
нет.
Окраска ГЭ. Об. 5x20
Рис. 5. Кожа спинки белых
крыс
опытной
группы.
Эпидермис,
дерма,
при
датки
не
нарушены.
Окраска ГЭ. Об. 5x5.
Рис.
6.
Кожа
спинки
белых
крыс
опытной
группы.
Очагов
отёка,
некроза,
инфильтрации
нет Окраска ГЭ.Об. 5x20.
Рис.З.
Кожа
спинки
белых
крыс
опытной
группы.
Эпидермис,
дерма, придатки не на
рушены.
Окраска
ГЭ.
Об. 5x5.
Рис.4.Кожа
спинки
белых
крыс
кон
трольной
группы.
Очагов отёка, некро
за, инфильтрации нет
Окраска ГЭ. Об. 5x20.
Рис.
7.
Кожа
спинки
белых
крыс
опытной
группы.
Эпидермис,
дерма, придатки не на
рушены.
Окраска
ГЭ.
Об. 5x5.
Рис. 8. Кожа спинки бе
лых
крыс
контрольной
группы.
Очагов
отёка,
некроза,
инфильтрации
нет Окраска ГЭ. Об. 5x20.'
верхности кожи через 24 часа и оценивали в баллах
по следующей шкале:
• видимой реакции - нет;
• бледно-розовая эритема по всему участку или по
его периферии - отсутствует;
• ярко-розовая эритема по всему участку или его пе
риферии - отсутствует;
• красная эритема по всему участку - отсутствует;
• инфильтрация и отек кожи (утолщение кожных
складок) при наличии или отсутствии эритемы.
Эритема - выраженная инфильтрацией очагов
изъязвления (некроз), возможны геморрагии, об
разование корочек. В течение периода наблюде
ния при воздействии растворов вещества в дозах
10, 100 и 200 мг/кг каких-либо признаков раздра
жения (гиперемия и др.) и отечности со стороны
кожных покровов не наблюдалось, что свиде
тельствует об отсутствие проявления раздража
ющего действия.
Таким образом, при накожной аппликации иссле
дуемой субстанции не наблюдалось раздражающего
действия на окружающую кожную ткань в зонах на
несения вещества.
Изучение кожно-резорбтивного действия прове
дено в подостром опыте в условиях погружения в
пробирки с изучаемыми растворами пленки 2/3 дли
ны хвостов крыс, что составляет 5% от поверхности
тела. Ежедневная экспозиция изучаемых растворов в
концентрациях 10, 100 и 200 мг/кг составила 4 часа
при длительности опыта 30 дней. Ежедневно после
4-часовой экспозиции хвосты животных мыли те
плой водой с мылом и высушивали. Растворы пленки
в изученных дозах не оказывали местно-раздражаю
щего действия на кожные покровы эксперименталь
ных животных.
После декапитации животных скальпелем иссече
ны кожные лоскуты спинки и хвосты размером 2 см
и толщиной не более 5-10 мм. Вырезанные кусочки
фиксировали в 10% водном растворе формалина. В
качестве растворителя использована водопроводная
вода, т.к. дистиллированная вызывает набухание тка
ней. Срок фиксации тканей в формалине не превышал
48 час. После проводки кусочки заливали в парафин.
Толщина парафиновых срезов колебалась от 2 до 3
мкм. Применена методика окраски гематоксилин-эо-
зином [17,18,19]. Гистологические исследования ми-
142
MEDICINE AND INNOVATIONS |
№1, 2021
Рис. 9. Хвост белых
крыс опытной группы.
Дерма, эпидермис, при
датки сохранены. Окра
ска ГЭ. Об. 5x5.
Рис.
10.
Хвост
белых
крыс
опытной
группы.
Очагов
дистрофии,
не
кроза,
инфильтрации,
отёка
нет. Окраска
ГЭ.
Об. 5x10
Рис. 13. Хвост белых крыс
опытной
группы.
Эпидер
мис,
дерма,
придатки
не
нарушены.
Окраска
ГЭ.
Об. 5x5.
Рис.
14.
Хвост
белых
крыс
опытной
группы.
Очагов
отёка,
некроза
нет.
Эпидермис,
дерма,
придатки
сохранены.
Окраска ГЭ. Об. 5x1 С.
кропрепаратов проведены на световом микроскопе
DN-200M (Китай) со встроенным фотоаппаратом.
При гистоморфологическом исследовании, прове
денном через 30 дней после воздействия растворов
пленки в концентрации 10, 100 и 200 мг/кг, у живот
ных контрольной и опытных групп анатомическое
расположение и структура внутренних органов соот
ветствовали норме. Внешний вид, размеры и макро
скопическая структура органов визуально не отлича
лись от нормы. Структура кожных покровов спинок и
хвостов белых крыс независимо от дозы воздействия
без патологических изменений.
Кожа.
Гистологическая картина кожи спины белых
крыс после 30-дневного воздействия растворов плен
ки в дозе 10, 100 и 200 мг/кг представлена на рис. 1-8.
Установлено, что эпидермис, дерма и придатки не
нарушены, отёк, некроз, и инфильтрация не выявле
на. Таким образом, результаты гистоморфологиче-
ских исследований кожи спины белых крыс после
30-дневного воздействия растворов пленки в дозах
10, 100 и 200 мг/кг позволили установить, что эпи
дермис, дерма, придатки не нарушены , не выявлены
очаги отёка, некроза и инфильтрации.
Гистологическая картина кожных покровов хво
стов белых крыс после 30-дневного воздействия рас
Рис
.11.
Хвост
белых
крыс
опытной
груп
пы.
Эпидермис,
дерма,
придатки
не
нарушены.
Окраска ГЭ. Об. 5x5.
Рис.
15.
Хвост
белых
крыс
опытной
груп
пы.
Эпидермис,
дерма,
придатки
не
нарушены.
Окраска ГЭ. Об. 5x5.
Рис .12. Хвост белых крыс
контрольной
группы.
Очагов отёка, некроза нет.
Эпидермис, дерма, при
датки сохранены. Окраска
ГЭ. Об. 5x20.
Рис. 16. Хвост белых крыс
контрольной группы. Оча
гов отёка, некроза нет. Эпи
дермис,
дерма,
придатки
сохранены.
Окраска
ГЭ.
06.5x10.
творов пленки в дозах 10, 100 и 200 мг/кг также не
выявила патологических изменений (рис.9-16).
Результаты гистоморфологических исследований
кожных покровов хвостов белых крыс после 30-днев-
ного воздействия растворов пленки в дозах 10, 100 и
200 мг/кг позволили установить, что эпидермис, дер
ма, придатки не нарушены, не выявлены очаги отёка,
некроза и инфильтрации.
Таким образом, результаты гистоморфологиче
ских исследований кожных покровов хвостов белых
крыс в опытных и контрольных группах не выявили
каких-либо изменений в структуре клеток.
Заключение.
Результаты сравнительного гисто-
морфологического исследования покровных тканей
кожи контрольных и опытных животных позволяют
констатировать, что 30-дневное накожное воздей
ствие растворов пленки в дозах 10, 100 и 200 мг/кг не
оказывает токсического влияния на кожные покровы
экспериментальных животных. Доклиническая ги-
стоморфологическая оценка медико-биологической
безопасности глазной лекарственной пленки под
тверждает отсутствие у отечественного покрытия
«Novacel ziyo» для лечения проникающих ранений
глаз кожно-раздражающего и кожно- резорбтивного
действия.
143
РЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1.
ГОСТ ISO 10993-1-2011. Межгосударственный
стандарт изделия медицинские. Оценка биологи
ческого действия медицинских изделий. Часть 1.
Оценка и исследования [ISO 10993-1-2011. Medical
devices. Biological evaluation of medical devices. Part
1. Evaluation and testing (In Russ.)],
www. russiangost. com
2.
ХабриевP. У. Руководство no экспериментальному
(доклиническому) изучению новых фармакологиче
ских веществ. Москва. 2005г. - 832 с. [Khabriev
R. U. Guidelines for experimental (preclinical) study>
of new pharmacological substances. Moscow. 2005. -
832p. (In Russ.)],
.
3.
Руководство no проведению доклинических ис
следований лекарственных средств. Под общей
редакцией Миронова А.Н. Часть Т-М.-Грнф UK-
М. 2012. 944 с. [Guidelines for conductingpreclinical
studies of drugs. Under the general editorship ofA.N.
Mironov. Part 1-M.-Grif and K.-M. 2012. 944p. (In
Russ.)]. www. twirpx. com.
4.
ГОСТ ISO/TS 80004-1-2017. Нанотехнологии.
Часть 1. Основные термины и определения [(SO/
TS 80004- 1:2015. Nanotechnologies. Vocabulary>.
Part 1: Core terms, IDT) (In Russ.)], hll/к: Docs.
5.
TVelpandian (editor) Pharmacology> of Ocular
Therapeutics /New Delhi, India.- 2016,- 534p. https://
DOI 10.1007 / 978-3-319-25498-2. ISBN978-3-319-
25498-2.
6.
Baino E, Perero S, Ferraris S. et al. Biomaterials for
orbital implants and ocular prostheses: overview and
future prospects. Acta Biomater. 2014Mar:10(3):1064-
87. https: doi: 10.1016factbio.2013.12.014.
7.
Baino, E, Perero, S, Ferraris, S, Miola, M, Balagna,
C, Vem, E„ Ferraris, M. (2014). Biomaterials for
orbital implants and ocular prostheses: Overview
and future prospects. Acta Biomaterialia. https: doi.
org/10.1016/J. actbio. 2013.12.01. 0.
8.
АнуроваM. H, Бахрушина E. О., ЛапикИ. В., Ши
това A. С., КраснюкИ. И. Изучение осмотической
активности офтальмологических гелей. Разработ
ка и регистрация лекарственных средств. 2018;
3 (24):30-34 [Anurova MN, Bakhrushina ЕО, Eapik
TV, Shitova AS, Krasnyuk II Study> of osmotic activity>
of ophthalmic gels. Development and registration
of medicines. 2018: 3 (24): 30-34. ISSN 2305-2066
(Print). ISSN2658-5049 (Online) (In Russ.)].
9.
Sun, S, Li, J., Li, X, Lan, B., Zhou, S, Meng, Y., &
Cheng, L. (2016). Episcleral drug film for better-
targeted ocular drug delivery> and controlled release
using multilayered polycaprolactone (PCL). Acta
Biomaterialia, 37, 143-154.
].
actbio. 2016.04.01.
10. Патент № FAP 01540 от 12.06.2019
г
Глазная
лекарственная пленка для лечения инфицирован
ных ран в эксперименте. Авторы Ниязова З.А.,
СарымсаковА.А., ХегайЛИ, и др. [PatentNo. FAP
01540 from 12.06.2019, Ophthalmic medicinal film
for the treatment of infected wounds in the experiment.
Authors Niyazova Z.A., Sarymsakov A.A., Khegai
LN, etal. (In Russ.)].
11. Зайцев B.M., Лифляндский В.Г, Маринкин В.И.
Прикладная
медицинская
статистика
/Учеб
ное пособие,- СПб,- ООО «Издательство Фоли
ант»,- 2003,- 432 с. [Zaitsev V.M., Liflyandsky V.G.,
Marinkin VI. Applied Medical Statistics / Textbook-
SPb - ООО “Foliant Publishing House"-2003 - 432
p. (In Russ.)]. Http://w
. kingmed.infc»
knigi book.
12. Европейская конвенция no защите позвоночных
.животных, используемых для экспериментальных
исследований или в иных научных целях (ETS№ 123,
Страсбург, 1986.-20 с. European Convention for the
protection of vertebrate animals used for experimental
research or other scientific purposes [(ETS № 123,
Strasbourg, 1986.-20pfln Russ.)], hup: conventions,
coe.int.
13. ГОСТ32373-2013Методы испытаний no воздей
ствию химической продукции на организм челове
ка. Основные требования к проведению испыта
ний по оценке острой токсичности при накожном
поступлении [Testing of chemicals of health hazard.
Basic requirements for tests for acute dermal toxicity>.
(In Russ.)],
14.
Руководящий документ ОЭСР Тест № 402:
Острая кожная токсичность [Test № 402 «Acute
Dermal Toxicity»> (In Russ.)],
15. Руководящий документ ОЭСР. Test № 404 «Acute
Dermal Irritation ('orrosion OECD (2004) (In
.
16. Руководящий документ ОЭСР .Skin Absorption:
In Vitro Method, Test Guideline №. 428, OECD
Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD, Paris.
.
17.
Меркулов ГА. Курс патолого-гистологической
техники: Медицина.-М-1969 С.156-164 [Merkulov
G.A.
Course
of
pathological
and
histological
techniques: Medicine.-M.- 1969 S. 156-164 (In
Russ.)]. www. labx. narod. ru
18.
Luna, Lee G., HT(ASCP) (editor)). Manual of
Histologic Staining Methods of the Armed Forces
Institute of Pathology> (Third Edition). American
Registry> of Pathology: (McGraw Hill Publishers, New
York 1960 (Progressive Stain).
19. Hematoxylin and Eosin (H&E) Staining Protocol
Prepared by ROY ELLIS IMVS Division of Pathology:
The
Queen
Elizabeth
HospitalWoodville
Road,
Woodville, South Australia 5011.
com.
144
MEDICINE AND INNOVATIONS |
№1, 2021
