КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
28. Thomas J.В., Antiga L., Che S.L. et al. Variation in
the carotid bifurcation geometry of young versus
older adults: implications for geometric risk of
atherosclerosis. //Stroke 2005: 36: 2450-2456.
29. Yagil Y, Yagil C. Hypothesis: ACE2 modulates blood
pressure in the mammalian organism.//Hypertension.
2003: 41: 871-873.
УДК: 616.31-576-079.5 (575.1)
АКТУАЛЬНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ХРОМОГЕННЫХ СРЕД - ХАЙ
ХРОМ ПРИ ЭКСПРЕСС ДИАГНОСТИКЕ ДИСБИОЗОВ ПОЛОСТИ РТА
В РЕСПУБЛИКЕ УЗБЕКИСТАН
Г.З. Халдарбекова - базовый докторант
И.М. Мухамедов-д.м.н., профессор, руководитель
Кафедра Микробиологии и фармакологии Ташкентского государственного стоматологического института
РЕЗЮМЕ
Идентификация любых бактерий с использовани
ем метода посева на питательные
среды невозможна
без выделения чистой культуры. Проблеме! получения
чистой кулытры и объективной идентификации ми
кроорганизмов всегда актуальна для микробиологии,
микологии и вирусологии. Предпочтение отдается
методам идентификации, которые выполняются за
относительно короткий срок (часы) и отличают
ся высокой степенью объективности и точности.
Как начало пищеварительного тракта полость рта
представляет собой широкий спектр микроорганиз
мов число которых достигает более 700 видов [13].
Данная работа представляет результаты микроб
ного пейзажа полости рта у женщин фертильного
возраста с использованием хромогенных сред “Хай
Хром” компании HIMEDIA для экспресс диагности
ки и идентификации микроорганизлюв на первичном
посеве.
Ключевые слова:
полость рта, нормальная микро
флора, дисбиоз, кариес, экспресс диагностика, иден
тификация, хромогенные среды.
Актуальность.
Важная роль в под держании функ
ций некоторых органов принадлежит нормальной
микрофлоре, которая благодаря выраженным фер
ментативным свойствам, способны синтезировать
витамины, является одним из факторов естественной
защиты микроорганизма [11]. Нормальная микрофло
ра играет важную роль в защите организма от патоген
ных микробов, например, стимулируя иммунную си
стему, принимая участие в реакциях метаболизма. В
то же время эта флора способна привести к развитию
инфекционных заболеваний [6]. Дисбиозы являются
актуальной проблемой медицины, привлекающей
пристальное внимание ученых и профильных вра
чей-клиницистов, ежедневно сталкивающихся с ми-
кроэкологическими нарушениями при клинической
патологии различного происхождения [7]. Очевидно,
будущее каждой нации зависит от здоровых поколе
ний, а это естественно обеспечивается женщинами
фертильного возраста. Полость рта - единственный
участок, где твердые ткани организма (зубы) в норме
сообщается с внешней средой. Количество микроор
ганизмов в полости рта изменяется в течение суток,
при этом ведущую роль играет продукция слюны,
которая резко снижена в ночное время. Факторами,
вызывающими временное или постоянное измене
ние содержания отдельных представителей флоры,
являются антибиотики, изменение дейты, физиоло
гические воздействия, ликвидация всех кариозных
поражений зубов и удаление разрушенных зубов,
различные соматические заболевания [9].
Бактериальные сообщества прочно прикрепля
ются к поверхности зубов, формируя сложную био
пленку, называемую зубным налетом, или бляшкой.
В составе биопленки определяются практически все
представители микрофлоры полости рта [10]. Иссле
дования последних лет показали, к младенцу в по
лость рта самыми первыми попадают лактобактерии
и практически не имеют токсичных свойств [1]. Та
ким образом, любые изменения нормофлоры полости
рта у женщин фертильного возраста может привести
к возникновению заболеваний и врожденных поро
ков развития плода [3]. Разработка дополнительных
критериев предотвращений и ранней диагностики
дисбиоза, в часности количественного и качествен
ного состава микрофлоры полости рта у женщин
фертильного возраста помогли бы решить вопрос,
касающийся здоровой поколении и нации.
Как известно, на сегодняшний день кариес явля
ясь результатом дисбиотического процесса полости
рта, считается одним из самых распространенных
заболеваний в мире (свыше 95% людей) [2]. Изучая
причины кариеса, выявляя факторы риска его раз
вития, ученые группируют их по этиологическому
принципу, разделяя на управляемые (действие кото
рых можно устранить или ослабить) и неуправляе
мые, специфические и неспецифические, экзогенные
и эндогенные. Эти факторы могут быть отнесены к
135
медико- биологическим, биохимическим, клиниче
ским, социо-экономическим и эпидемиологическим.
В основе такого деления лежит патогенический под
ход, который по мнению специалистов является до
минирующим [5].
В настоящее время считается что бактериальный
фактор является определяющим в развитии кариеса
зубов. Было проведено много исследований в кото
рых была установлена корреляция индексов кариеса
с наличием бактерий полости рта [4]. Определение
микробиологической этиологии кариеса более до
ступным и быстрым способом остается одной из ак
туальных проблем в современной стоматологии.
Цель идентификации микроорганизмов - опре
деление принадлежности отдельных их популяций
к тем или иным видам, родам, семействам и т.д. ме
тоды идентификации различных микроорганизмов
разрабатывались и совершенствовались микробио
логами и бактериологами на протяжении многих лет,
и сегодня эти методы активно используются в науке,
медицине, фармацевтике, промышленном производ
стве. Несмотря на широкое внедрение в бактерио
логическую практику методов генодиагностики и
геноиндикации,
классический
бактериологический
метод остается «золотым стандартом» при диагно
стике большинства современных инфекций. Этот
метод предполагает посев материала на плотные
питательные среды с последующим выделением и
идентификацией чистой культуры микроорганизма.
Основной недостаток классического метода - дли
тельность исследования. Так, по быстрорастущим
микробам результат может быть получен не ранее,
чем через 2-3 суток после посева на плотную среду.
Для ускоренной идентификации выделяемых культур
в состав сред для первичного посева или накопления
чистой культуры обычно вводят дифференцирующие
субстраты и соответствующие индикаторы. В 1905
году бактериолог А.Мак-Конки разработал первую
хромогенную среду. В ее состав входят селективные
компоненты (нейтральный красный и соли желчных
кислот) которые ингибируют рост грамм-положи-
тельных микробов, и специфический субстрат - лак
тоза [12].
Слово хромоген является комбинацией двух грече
ских слов: chroma (chromatos) - цвет, и genes - порож
дающий. Принцип действия заключается в образова
нии окрашенных веществ (индикаторов) в результате
взаимодействия высокоспецифичных ферментов бак
терий с компонентами среды [8]. Быстрое обнару
жение и идентификация искомых микроорганизмов
стало возможным при использовании хромогенных
питательных сред
- ХайХром.
Идентификация ми
кроорганизмов возможна уже на этапе первичного
посева, в результате происходит сокращение времени
исследования и получаем ускоренный результат.
Цель и задача исследования.
Изучение и анализ
микрофлоры полости рта у здоровых и больных с
кариесом женщин фертильного возраста, с использо
ванием хромогенных питательных сред -
ХайХром
впервые в Республике Узбекистан.
Материал и методы.
Было осуществлено когорт
ное поперечное исследование, которое включало
комплексное стоматологическое обследование, изу
чение микробиологических особенностей полости
рта, количественный и видовой состав лактобактерий
у здоровых и больных с кариесом женщин в возрасте
Рис.2.
Хромогенные
среды
ХайХром
со
специальными
добавками в комплекте.
Рис.1. Стандарты мутности
Макфарланда.
136
MEDICINE AND INNOVATIONS |
№1, 2021
КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
20-40 лет. К исследованиям было привлечены 90 жен
щин. Для возможности проведении сравнительного
анализа результатов испытуемые были разделены на
две группы: здоровая - с кариесом. Материал соби
рали 1-2 часа после еды. В лаборатории проводили
раститровку по стандарту мутности Макфарланда
(Рис.1)
исследуемого материала в изотоническом
растворе хлорида натрия и посев на хромогенные пи
тательные среды -
ХайХром -
HICrome E.coli Agar;
HICrome Candida Differential Agar/Base, Modified;
HICrome MeReSa Agar Base; HICrome Aureus Agar
Base; HICrome Lactobacillus Selective Agar
(Puc.2).
Результаты исследования.
В ходе исследования
выяснилось, что у женщин со здоровой полостью рта
соотношение анаэробных и аэробных микроорганиз
мов составляет 10:1. В то же время у женщин боль
ных кариесом это соотношение составляет 8:3.
Собственно доминирующими микроорганизмами
у практически здоровых лиц являются аэробные и
анаэробные стрептококки, стафилококки, лактобак
терии и энтеробактерии. Так количество анаэробов
пептострептококков и лактобактерий составляет 1g
4,30±0,2 КОЕ/мл, тогда как факультативная группа
равнялась 1g 2,60±0,2 КОЕ/мл.
Но у испытуемых с развитием кариеса зубов, флора
изменяется как в количественном, так и в качествен
ном отношении, то есть отмечается дисбиоз. При
этом как правило наблюдается снижение количества
анаэробов, но достоверное увеличение факультатив
ной группы микробов. У исследуемых с кариесом,
почти во всех случаях в количестве обнаруживался
- Staph, aureus и кишечная палочка. Участился встре
чаемость - Pseudomonas aurogenosa. Повыселась ко
личество пептострептококков и лактобацилл до - 10
8
Использованием специальных хромогенных сред
стало возможным определения микроорганизмов
до вида на первом посеве уже через 24 часа. Не во
оруженным глазом можно определить вид данного
микроорганизма, то есть представители одного рода
но разного вида образуют колонии разного цвета. На
пример, в нашем случае мы выделили дрожжеподоб
ных грибов рода Candida:
Candida albicans (колонии зеленого цвета), Candida
glabrata (колонии розового цвета). Результаты иссле
дования хромогенных сред приведены в Рисунках
1,23,4,5.
Заключение.
В результате исследования установ
лено, что у женщин со здоровой полостью рта струк
турный состав микробного пейзажа можно считать
достаточно стабильным и в количественном и в каче
ственном отношении. У них определялся непатоген
ный состав микроорганизмов. Напротив у женщин
больных с кариесом наблюдались наиболее выра
женные дисбиотические изменения в микрофлоре
полости рта. Эта микробиологическая картина харак
теризуется увеличением количества лактобактерий
дифференциации) М1297А
Рис.1. Хай Хром селективный агар для грибов Candida (для
Ингридиенты
ГраммУлитр
Пептон специальный
15,00
Дрожжевой экстракт
4,00
Калия гидрофосфат
1,00
Агар-агар
15,00
Хлорамфеникол
0,50
Хромогенная смесь
7,22
Рис. 1.1. Результат посева чистой культуры. Рис.1.2. Результат посева патологическо
го материала (Слюна).
137
КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Рис.2. ХайХром агар для селекции метициллин рези
стентных S.aureus (MeReSa) (М1674)
Ингридиенты
Грамм\литр
Ферментативный
13,00 гидролизат казеина
Дрожжевой экстракт
2,50
Мясной экстракт
2,50
Агар-агар
15,00
Натрия пируват
5,00
Натрия хлорид
40,00
Хромогенная смесь
5,30
Рис. 2.1. Результат посева чистой
культуры.
Рис. 2.2. Результат посева патоло
гического материала (Слюна)
Рис. 3.1. Результат посева чистой
культуры
Рис.З. ХайХром селективный агар для выделения
Лактобактерий ( М 2065)
Ингридиенты
Грамм\литр
Пептон
10,00
Мясной экстракт
1,00
Протеиновой порошок
5,00
Феноловый красный
0,025
Агар-агар
15,00
D-Маннит
10,00
Натрия хлорид
10,00
Хромогенная смесь
3,20
Рис. 3.2. Результат посева патологи
ческого материала (Слюна)
138
MEDICINE AND INNOVATIONS |
№1, 2021
КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Рис.4.1. Результат посева чистой
культуры.
ис.4.ХайХром агар для обнаружения и подсчета E.coli (М
1295)
Ингридиенты
Грамм\литр
Ферментативный гидролизат казеина
14,00
Пептон специальный
5,00
Смесь солей желчных кислот
1,50
Агар-агар
12,00
Натрия гидрофосфат
1,00
Натрия хлорид
2,40
Калия ди гидрофосфат
0,60
Х-Глюкуронид
0,075
Рис.4.2. Результат посева патологиче
ского материала (Слюна)
и представителей УПМ (условно-патогенной ми
крофлоры) в более высоких титрах. Можно считать
что, данное явление приводит к развитию кариесных
поражений на зубах и воспалительных процессов
слизистых полости рта. Это ещё раз доказывает, что
ведущая роль в возникновении кариеса принадлежит
микроорганизмам.
При использовании хромогенных сред срок диа
гностирования намного сокращается, тем самым пре
доставляют некоторые удобства врачам микробио
логам и особенно клиницистам для быстрого начало
лечения.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1.
Бондарева ТА. Современное состояние и пер
спективы решения проблемы повышения эффек
тивности экстренной профилактики и лечения
системных бактериальных инфекций ТА.Бонда-
рева, В.БКалининский, КВ.Борисевич и др. //Мо
лекулярная медицина. 2009. №5. С. 21-25.
2.
Гузева НА. Методы диагностики кариеса Бюлл.
Медицинских интернет-конференций. 2017. Том
10. С. 1533-1535.
3. Дармов И.В. Кишечная микрофлора: взгляд изну
три сборник науч, статей. Выпуск №1.2012.
С. 3-6.
4. Зайцев А.В., Ваценко А.В. Кариес -биологичес кий
феномен // Вестник Украинской медицинской
стоматологической академии. Том 9. Выпуск №3.
2008. С. 185-188.
5. Корчагина В.В. Факторы риска развит ия кариеса
/Кур. 1е()ицинская сестра. 2017, №7. С. 10-13.
6. Мамедов Ф.Ю., Ердоган И. Патогенетическая ак
тивность микрофлоры полости рта больных с со
матической патологией. /Вестник ВДНЗУ. 2015.
Том 16, Выпуск№4. С.23-27.
7. Мухаммедов ИМ., Неъматов А., Рахмонов X. Ми
кроэкология важнейших биотопов тела человека.
//Ташкент. 2007. С.8-29.
8. Мухаммедов ИМ. и др. Клиническая микробиоло
гия в стоматологии. //Ташкент. 2015. с.212
9.
Сахарук НА. Микробная флора полости рта
в норме и патологии. Морфология грибов рода
Candida // Вестник ВГМУ 2008. Том 7. №2.
С. 1-10.
10. Степанов КМ. идентификация и основные био
логические свойства молочнокислых бактерий. //
Вестник КрасГАУ. 2009. Выпуск №9. С. 158-161.
11. Федорова А.В., Клясова Г. А. Использование селек
тивной хромогенной среды для детекции ванко-
139
РЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И
мицинрезистентных энтерококков // КМАХ. Том
20, №1. 2018. С.55-61.
12. Хай-Хром Экспресс-диагностика. Дифференциа
ция микроорганизмов в первичном посеве. Ката
лог компании HiMedia. С. 3 7.
13.
Халдарбекова Г.З., Мухамедов И.М. Био-
логичсекие
свойства
лактобацилл
выде
ленных из разных биотопов тела человека
//Журнал
Стоматология.
Ташкент.
2018,
№3. С. 75-78.
14. Царев В.Н. Микробиология, вирусология и имму
нология полости рта. // ГЭОТАР-Медиа, 2016.
с. 572.
615.453.47-281:617.7 -[611.77-612.084
ДОКЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КОЖНО-РАЗДРАЖАЮЩЕГО
И КОЖНО- РЕЗОРБТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ГЛАЗНОЙ
ЛЕКАРСТВЕННОЙ ПЛЕНКИ «NOVACEL ZIYO»
1
Л.Н.Хегай ,
2
З.А.Ниязова ,
3
А.А. Сыдиков
1
Ташкентская Медицинская Академия,
Ташкентский педиатрический медицинский институт,
’Ташкентский государственный стоматологический институт.
РЕЗЮМЕ
В статье представлены результаты исследо
вания
кожно-раздражающего
и
кожно-резорб
тивного
действия
многофункциональной
пленки
для терапии травм органа зрения «Novacel ziyo».
Опыты проведены на 24 половозрелых крысах-сам
цах массой тела 150-170 гр. Для изучения воздей
ствия растворов пленки на кожные покровы 18
белых крыс применены 3 взаимодополняющие ме
тодики: двухкапельная и аппликационная пробы
и опускание 2/3 хвоста в пробирку с раствором
пленки. Контрольную группу составили 6 особей.
Установлено, что отечественная пленка для лече
ния травм глаз «Novacel ziyo» не обладает токси
ческим действием на кожные покровы.
Ключевые слова:
доклинические исследования,
многофункциональная лекарственная пленка, кож
но-раздражающее и кожно-резорбтивное свойство.
ABSTRACT
The article presents the results of a study of the skin
irritating and skin-resorptive action of the multifunctional
film "Novacel ziyo’’ for the treatment of eye injuries.
The experiments were carried out on 24 sexually mature
male rats weighing 150-170 g. To study the effect of film
solutions on the skin of 18 white rats 3 complementary
methods were used: two-drop and application tests and
lowering 2/3 of the tail into a test tube with a film solution.
The control group consisted of 6 individuals. It has been
established that the domestic film "Novacel ziyo'’ for the
treatment of eye injuries does not possess a toxic effect
on the skin.
Key words:
preclinical studies, multifunctional drug
film, skin irritant and skin resorptive properties.
Актуальность.
Создание новых нетоксичных,
биодеградирумых покрытий для терапии травм
органа
зрения
является
приоритетной
задачей
ученых. Для оценки медико- биологической без
опасности новых изделий медицинского назна
чения
необходим
доклинический
токсикологи
ческий скрининг на экспериментальной модели
патологии [1]. Тщательное изучение токсично
сти новых материалов на животных необходимо
для профилактики нежелательных реакций при
клинических испытаниях [2,3]. В дополнение к
традиционным
офтальмологическим
препаратам
в виде гелей, мазей, водных суспензий разрабо
таны
офтальмологические
пленки,
коллоидные
системы, состоящие из нано- и микрочастиц, на
ноэмульсий, наносуспензии [4,5,6,7]. По сравне
нию с традиционной субконъюктивальной инъ
екцией,
пленочные
покрытия
характеризуются
более длительным воздействием, высокой био
доступностью для оболочек глаза [7].
Биоматериалы остаются одной из самых сложных
и актуальных задач современной офтальмологии.
Трудности заключаются в низкой биодоступности в
виду особенностей анатомии и физиологии глаза, от
носительной низкой проницаемости эпителиальной
мембраны роговицы, динамики слезной жидкости,
назолакримального дренажа и др. [8]. В данном слу
чае идеальным изделием могло служить пленочное
покрытие, которое бы прикладывалось на повре
жденную склеру для барьерной функции и дальней
шей адекватной терапии. Имплантат должен обла
дать адекватной площадью покрытия, адгезивными
свойствами, быть биосовместимым, с низкой часто
той осложнений, не должен вызывать системные и
побочные действия, быть простым в применении,
экономически доступным [7,9].
Цель.
Изучение кожно-раздражающего и кож
но-резорбтивного
действия
отечественной
поли-
функциональной лекарственной пленки «Novacel
140
MEDICINE AND INNOVATIONS |
№1, 2021