Биология ва тиббиёт муаммолари, 2016, №3 (89) 89
УДК: 616.993.162
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КОЖНОГО
ЛЕЙШМАНИОЗА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
У.Т. СУВОНКУЛОВ
1
, Д.А. КОВАЛЕНКО
1
, З.Э. КУДРАТОВА
2
, Н.Т. РАББИМОВА
1
, Ф.Т. АБДИЕВ
1
1 - Научно-исследовательский институт медицинской паразитологии им. Л.М.Исаева МЗ РУз, г. Са-
марканд;
2 - Самаркандский Государственный медицинский институт, Республика Узбекистан, г. Самарканд
ТЕРИ ЛЕЙШМАНИОЗИНИ ҚЎЗҒАТУВЧИСИНИ ПОЛИМЕРАЗ ЗАНЖИР РЕАКЦИЯ
УСУЛИ БИЛАН АНИҚЛАШ
У.Т. СУВОНКУЛОВ
1
, Д.А. КОВАЛЕНКО
1
, З.Э. КУДРАТОВА
2
, Н.Т. РАББИМОВА
1
, Ф.Т. АБДИЕВ
1
1 – ЎзР ССВ Л.М. Исаев номидаги тиббий паразитология илмий-текшириш институти, Самарқанд;
2 – Самарқанд Давлат медицина институти, Ўзбекистон Республикаси, Самарқанд
THE IDENTIFICATION OF CAUSATIVE AGENT OF CUTANEOUS LEISHMANIASIS WITH
POLYMER CHAIN REACTION
U.T. SUVONKULOV
1
, D.A. KOVALENKO
1
, Z.E. KUDRATOVA
2
, N.T. RABBIMOVA
1
, F.T. ABDIEV
1
1 - Research Institute of Medical Parasitology them. L.M. Isaev Ministry of Health of Uzbekistan,
Samarkand;
2 – Samarkand State Medical Institute, Republic of Uzbekistan, Samarkand
Тери лейшманиозини қўзғатувчисини аниқлаш учун молекуляр-биологик текширув (ПЗР)
қўлланилган. Муборак шаҳрида касалларда антропоноз тери лейшманиози (
Leishmania tropica
)ни
топилиши, илгалари зоонозли тери лейшманиозини ўчоқларида, эпидемиологик жараённи фаолигини
ошганлигиндан дарак беради, ва бу ҳудуда антропоноз тери лейшманиозини тарқалигини кўрсатади.
Илгари бошқа худудларда тери лейшмаиозига яхши бўлган антропоноз тери лейшманиоз
қўзғатувчиси
Leishmania tropica
ни топилиши, бу касаликни фаоллашганлигидан дарак беради.
Калит сўзлар.
Антропонозли тери лейшманиоз, зоонозли тери лейшманиоз, полимеразли
занжир реакция, Leishmania major, Leishmania tropica.
The molecular-biological method (polymerase chain reaction) for identification of causative agent of
cutaneous leishmaniasis was used. Revealing of deoxyribonucleic acid of causative agent of antroponotic
form of cutaneous leishmaniasis (
Leishmania tropica)
in the samples taken from patients living in Mubarek –
traditionally known as zoonotic focus of cutaneous leishmaniasis -
allow us to make the conclusion that
intensity of epidemiological process is increasing and that the antroponotic form of cutaneous leishmaniasis
is spreading in this region. In other regions earlier safe from cutaneous leishmaniasis
Leishmania tropica
–
causative agent of antroponotic form of cutaneous leishmaniasis was revealed that testifies the active
spreading of the disease.
Keywords.
Antroponotic form of cutaneous leishmaniasis, zoonotic form of cutaneous leishmaniasis,
polymerase chain reaction, , Leishmania major, Leishmania tropica.
Актуальность.
Антропонозный кожный
лейшманиоз (АКЛ) встречается во многих стра-
нах мира – регионах Ближнего Востока, Азии,
Западной и Северной Африки, западной части
Индии. На территории СНГ регистрировался в
городах и поселках среднеазиатских республик и
Закавказья. Практическая ликвидация заболева-
ния на данных территориях была осуществлена в
1965 г.
Возбудитель заболевания -
Leishmania
tropica.
Источник заражения - больной человек,
переносчик – москит рода
Phlebotomus.
Заболе-
вание характеризуется поражением (иногда
множественным) кожных покровов открытых
участков тела, доступных для укусов москитов.
Данной форме лейшманиоза подвержены люди
любого возраста. Последнее особенно актуально
в связи с заболеваемостью детского контингента.
[3, 4].
Проблема АКЛ имеет, помимо медицин-
ского, также и социальный аспект. Как правило,
после самопроизвольного заживления (1-3 года)
на месте язв остаются косметические дефекты
(рубцы), иногда значительные, обезображиваю-
щие. Это может иметь весьма негативные по-
следствия, особенно для женщин в плане созда-
ния семьи и социальной адаптации в обществе.
В последние годы эпидемиологическая си-
туация по АКЛ имеет тенденцию к осложнению,
т.к. случаи заболевания стали регистрироваться
в областях, где уже многие годы наблюдалось
эпидемическое благополучие по АКЛ.
Обязательным условием для решения про-
блемы борьбы с АКЛ в Узбекистане является
четкое разграничение двух нозологических
форм: АКЛ и зоонозного кожного лейшманиоза
(ЗКЛ), каждой из которых присущи эпидемиоло-
гические, эпизоотологические, клинические осо-
Идентификация видовой принадлежности возбудителей кожного лейшманиоза методом…
90 Проблемы биологии и медицины, 2016, №3 (89)
бенности. Методы микроскопии не позволяют
определить видовую принадлежность возбуди-
теля. Для идентификации генотипа возбудителей
лейшманиозов необходимо проведение молеку-
лярно-биологических исследований [1,2].
Цель исследования
. Установление видо-
вой принадлежности возбудителей кожного
лейшманиоза методом полимеразной цепной
реакции.
Материал и методы исследований
. Для
идентификации возбудителей кожного лейшма-
ниоза была проведена ПЦР в два этапа. На пер-
вом этапе проводилось выделение ДНК лейшма-
ний. Экстракция проводилась по соответствую-
щему протоколу с использованием набора
QIAamp DNA Mini Kit (пр-во Германия).
Выде-
ленные образцы были амплифицированы в тер-
моциклере «Терцик» (пр-во Россия) по протоко-
лу ITS-1 ПЦР. Визуализация результатов произ-
ведена путем разгона выделенных образцов ДНК
в электрическом поле в 1,2% агарозном геле и
документирования полученных результатов фо-
тографированием свечения ДНК в ультрафиоле-
товом свете.
На втором этапе проводилось определение
видовой принадлежности выделенных ДНК с
использованием RFLP-ПЦР, основанной на раз-
делении цепи ДНК на специфические фрагмен-
ты, разгоне их в электрическом поле в 3% ага-
розном геле и последующем сравнении с ДНК
референтных штаммов лейшманий
Leishmania
tropica
и
Leishmania major
.
Материалом для ПЦР служили соскобы из
язв 20 больных кожным лейшманиозом из реги-
онов республики.
Результаты и обсуждение
. По получен-
ным данным видовая принадлежность возбуди-
телей представлена следующим образом: г.
Мубарек (6 образцов) –
Leishmania tropica
; г.
Самарканд (4 образца) -
Leishmania tropica
;
г.Термез (2 образца) -
Leishmania major
;
г.Джизак (4 образца) -
Leishmania tropica.
Полу-
ченные результаты свидетельствуют о преиму-
щественном поражении людей
Leishmania
tropica –
возбудителем антропонозного кожного
лейшманиоза (АКЛ) по сравнению с
Leishmania
major –
возбудителем зоонозной формы кожного
лейшманиоза.
Выводы.
1. В считавшихся на протяжении
многих десятилетий благополучными по кожно-
му лейшманиозу регионах республики (Самар-
кандская, Джизакская области) у больных был
выявлен
L.tropica
– возбудитель АКЛ
.
Это сви-
детельствует об активизации распространения
АКЛ и требует принятия мер по предотвраще-
нию дальнейшего распространения заболевания.
2. Для разработки дифференцированного науч-
но-обоснованного плана противоэпидемических
мероприятий необходимо определение видовой
принадлежности
возбудителей
кожного
лейшманиоза путем проведения ПЦР.
Литература:
1.
Чухловин А. Б. Метод ПЦР в клинической
лабораторной диагностике // Справочник заве-
дующего КДЛ/Метод ПЦР в клинической лабо-
раторной диагностике, Москва, 2008.
2.
«Основы полимеразной цепной реакции
(ПЦР)» Методическое пособие, Москва, 2012 г.
3.
«Паразитарные болезни человека (протозоозы
и гельминтозы)». Руководство для врачей. Под
ред. академика РАМН В. П. Сергиева, академика
РАМН Ю. В. Лобзина, профессора С. С. Козло-
ва. // Санкт-Петербург: Изд-во «Фолиант». –
2008 г.
4.
Сергиев В.П., Филатов Н.Н. «Человек и его
паразиты. Соперничество геномов и молекуляр-
ное взаимодействие». //М.: «Наука», 2010.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИДОВОЙ
ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ
КОЖНОГО ЛЕЙШМАНИОЗА МЕТОДОМ
ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
У.Т. СУВОНКУЛОВ, Д.А.КОВАЛЕНКО,
З.Э. КУДРАТОВА,
,
Н.Т. РАББИМОВА,
Ф.Т. АБДИЕВ
Для идентификации возбудителей кожного
лейшманиоза был применен молекулярно-
биологический метод исследования (ПЦР) Об-
наружение ДНК возбудителя антропонозной
формы кожного лейшманиоза (
Leishmania
tropica)
у больных в г.Мубареке, традиционно
считавшегося очагом зоонозной формы позволя-
ет сделать вывод о возрастании интенсивности
эпидемического процесса и распространении
антропонозной формы кожного лейшманиоза в
данном регионе. В других, ранее благополучных
по кожному лейшманиозу регионах республики
у больных был выявлен
Leishmania tropica
– воз-
будитель АКЛ
,
что свидетельствует об активи-
зации распространения данного заболевания.
Ключевые слова.
Антропонозный кож-
ный лейшманиоз, зоонозный кожный лейшма-
ниоз, полимеразная цепная реакция, Leishmania
major, Leishmania tropica.
