Доктор ахборотномаси № 2—2019
40
УДК 612.323:612.822.2
ВЛИЯНИЕ КАЗЕИНА НА ЛИПОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ
ПОДЖЕЛУДОЧНОГО СОКА С УЧАСТИЕМ И БЕЗ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ
О. К. Джалалова, В. А. Алейник, С. М. Бабич, Г. М. Ходжиматов, Ш. Х. Хамракулов
Андижанский государственный медицинский институт, Андижан, Узбекистан
Ключевые слова:
казеин, липолитическая активность, гидролиз белков, протеолитические ферменты, желу-
дочный сок, поджелудочный сок, желчные кислоты.
Таянч сўзлар:
казеин, липолитик фаоллик, оқсилли гидролиз, протеолитик ферментлар, ошқозон суви, пан-
креатик суви, сафро кислоталари.
Keywords:
casein, lipolytic activity, protein hydrolysis, proteolytic enzymes, gastric juice, pancreatic juice, bile acids.
Изучали роль казеина и его гидролизатов в ингибировании липазы и связывающей способности его с
желчными кислотами, за счет изменения активности панкреатической липазы и переваривания жиров. Сдела-
ны выводы, что предварительный гидролиз белков пепсинами в желудке способствует не только дальнейшему
улучшению гидролиза их под влиянием протеолитических ферментов поджелудочного сока (триптической
атакуемости белков), но также снижению связывающей способности их с желчными кислотами и улучшению
гидролиза жиров под влиянием панкреатической липазы. Этот факт, возможно, является более важным для
гидролитической функции желудка, чем триптическая атакуемость белков в желудке и главным эволюцион-
ным фактором предварительного переваривания белков желудочным соком.
КАЗЕИННИ ОШҚОЗОН ОСТИ БЕЗИ ШИРАСИНИ ЛИПОЛИТИК ФАОЛЛИГИГА
ЎТ КИСЛОТАЛАРИ БИЛАН БИРГАЛИКДАГИ ВА УЛАРСИЗ ТАЪСИРИ
О. К. Джалалова, В. А. Алейник, С. М. Бабич, Г. М. Ходжиматов, Ш. Х. Хамракулов
Андижон давлат тиббиет институти, Андижон, Ўзбекистон
Казеин ва унинг гидролизатори липазанинг ингибирланиши ва унинг сафро кислоталари билан боғла-
ниш қобилиятини, панкреатик липазанинг активлигини ўзгариши ва ѐғларни сўрилишини бузилиши билан
боғлиқлигини ўргандик. Хулоса қилиб айтганда, ошқозондаги пепсин томонидан дастлабки оқсил гидролизла-
ниши, нафақат ошқозон ости бези протеолитик ферментларининг таъсирида гидролизни янада яхшилайди
(оқсиллар триптик хужими), ўт кислоталари билан боғланиш хусусиятини пасайтиради ва панкреатик липаза
таъсири остида ѐғлар гидролизини кучайтиради. Бу маълумот ошқозон гидролитик функцияси учун мухим
хисобланади, ошқозондаги триптик оқсиллар хужимидан кўра ва ошқозон шираси таъсирида оқсилларни
бошланғич эволюцион сўрилиш омили сифатида эътироф этилади.
EFFECT OF KAZEIN ON LIPOLYTIC ACTIVITY OF THE PANCREATIC JUICE
WITH AND WITHOUT PARTICIPATION OF BILIC ACIDS
O. K. Dzhalalova, V. A. Aleinik, S. M. Babich, G. M. Khodzhimatov, Sh. H. Khamrakulov
Andijan state medical institute, Andijan, Uzbekistan
We studied the role of casein and its hydrolysates in the inhibition of lipase and its binding ability with bile
acids, by changing the activity of pancreatic lipase and digesting fats. It was concluded that preliminary hydrolysis of
pepsin proteins in the stomach not only further improves their hydrolysis under the influence of proteolytic enzymes
of pancreatic juice (tryptic attack of proteins), but also reduces their binding capacity with bile acids and improves
hydrolysis of fats under the influence of pancreatic lipase. This fact is probably more important for the hydrolytic
function of the stomach than the tryptic attack of proteins in the stomach and the main evolutionary factor in the pre-
liminary digestion of proteins with gastric juice.
Влияние пищевых белков и их гидролизатов на изменение липолитической активно-
сти и перевариваемости жиров вызывает большой интерес, так как показано, что многие
белки ингибируют поджелудочную липазу за счет конкурентной адсорбции белков и де-
сорбции белками липазы с поверхности жировых капель. После гидролиза пепсинами бел-
ков в желудке и образовании из них полипептидов со значительно меньшей молекулярной
массой, снижается возможность к конкурентной адсорбции на границе вода/жир и способ-
ность к ингибированию панкреатической липазы [6]
Кроме того белки могут адсорбировать соли желчных кислот [2, 3, 5]. При этом гидро-
лизаты некоторых белков имеют более высокую способность ингибировать липазу, чем сам
белок [4].
Оригинальная статья
Доктор ахборотномаси № 2—2019
41
Было установлено с применением нескольких низкомолекулярных эмульгаторов [7],
что липолиз триглицеридов зависит от соотношения эмульгатора и желчи. При высокой
концентрации эмульгатора к желчи, в адсорбционном слое на поверхности жировой капли
преобладают молекулы желчи, поскольку молекулы эмульгатора преимущественно включе-
ны в желчные мицеллы. При высокой концентрации эмульгатора к желчи, молекулы эмуль-
гатора преобладают в адсорбционном слое на жировых каплях и липазная активность пол-
ностью подавляется, как в случае без желчных солей [8].
Эти исследования показывают, что многие белки могут препятствовать гидролизу жи-
ров поджелудочной липазой за счет конкурентной адсорбции белков и десорбции белками
липазы с поверхности жировых капель. Также белки способны связываться с желчными
кислотами, обеспечивающими десорбцию белков с поверхности жировых капель и тем са-
мым увеличивать конкурентную адсорбцию белков и десорбцию белками липазы. В тоже
время после гидролиза белков значительно уменьшается их способность, как к конкурент-
ной адсорбции белков, так и к связыванию с желчными кислотами. Что способствует улуч-
шению переваривания жиров. Отсюда вытекает предположение, что роль пепсинов в желуд-
ке заключается не только в улучшении перевариваемости белков трипсином, но также в
улучшении перевариваемости жиров липазой.
Степень гидролиза различных белков может иметь существенное воздействие на липо-
лиз жиров у некоторых больных с пониженной общей концентрацией желчных кислот - с
илеоэктомией, стеатореей, и у пациентов с недостаточностью поджелудочной железы, а так-
же с недостаточной функцией желудка. Это может стать дополнительным обоснованием
для разработки и использования лечебных диет в специфической терапевтической коррек-
ции у таких больных.
Цель исследования:
изучить роль казеина и его гидролизатов в ингибировании липа-
зы и связывающей способности его с желчными кислотами, за счет изменения активности
панкреатической липазы и переваривания жиров.
Материал и методы.
В работе были использованы желудочный и поджелудочный
соки, полученные в хронических экспериментах у собак при тощаковой секреции, а также
желчь, взятая у собак после проведения острых экспериментов. В поджелудочном соке
определялась активность липазы [1], в присутствии различных концентраций казеина, и его
гидролизатов под влиянием желудочного сока. В одних исследованиях в качестве субстрата
для панкреатической липазы использовался 1% трибутирин, эмульгированный казеином в
нарастающей концентрации от 0,1 до 1%. В качестве стабилизатора эмульсий использовали
2,5% раствор аравийской камеди. В других исследованиях в качестве субстрата для панкре-
атической липазы использовался 1% трибутирин, эмульгированный желчью разведенной
1:5 физиологическим раствором и дополнительно казеином в нарастающей концентрации
от 1 до 36%. С целью снижения расщепления казеина, протеолитическая активность подже-
лудочного сока ингибировалась использованием преинкубации его с 0,1% раствором соево-
го ингибитора.
Исследование липолитической активности поджелудочного сока с казеином проводи-
лась в 3 вариантах: 1– без предварительной инкубации с желудочным соком, 2 – с 30 мин
предварительной инкубацией с желудочным соком, 3 – с 60 мин предварительной инкуба-
цией с желудочным соком.
Преинкубация казеиновых субстратов с желудочным соком осуществлялась при рН 2,
после этого проводили нейтрализацию рН до 8 раствором NaOH и добавлением фосфатного
буфера c рН 8,2, затем проводили исследование без добавления и с добавлением разведен-
ной желчи и далее проводили инкубацию субстрата с поджелудочным соком. В исследова-
ниях без преинкубации добавляли дистиллированную воду в объѐме использованного желу-
дочного сока и эквивалентном объѐмном количестве с потраченным раствором NaOH, а так-
же соответствующим добавлением фосфатного буфера. В качестве контроля брались пока-
затели липолитической активности без добавления белков.
О. К. Джалалова, В. А. Алейник,...
Доктор ахборотномаси № 2—2019
42
Статистическая обработка была проведена методом вариационной статистики с вы-
числением средних величин и их средних ошибок, определением коэффициента достовер-
ности разности Стьюдента-Фишера (t). Статистически достоверными считали различия при
p<0,05 и менее.
Результаты.
Результаты исследований показали, что при применении казеина в каче-
стве эмульгатора, липолитическая активность значительно снижается при использовании
его в концентрации 0,1% и это снижение активности продолжается с увеличением концен-
трации казеина до 0,4%, когда полностью отсутствует липолитическая активность и равна
нулю (рис. 1А).
После предварительной 30 минутной инкубации (преинкубации) субстратов казеина
различной концентрации с желудочным соком и дальнейшем использовании их в качестве
эмульгаторов, липолитическая активность значительно, но не достоверно снижается при
концентрации 0,1%, но этот показатель был достоверно выше, чем таковой без преинкуба-
ции с желудочным соком. Это снижение активности липазы продолжается с увеличением
концентрации казеина до 0,5%, когда полностью отсутствует липолитическая активность и
равна нулю. В тоже время все показатели активности липазы были достоверно выше тако-
вых показателей без преинкубации с желудочным соком (рис. 1А).
Подобная тенденция динамики изменения активности липазы с использованием в ка-
честве эмульгатора казеина различной концентрации отмечалась и после 60 минутной пре-
инкубации с желудочным соком. В тоже время снижение активности липазы, до полного еѐ
отсутствия проявляется при концентрации казеина 0,6%. При этом все показатели липоли-
тической активности после 60 минутной преинкубации с желудочным соком были досто-
верно выше таковых показателей без преинкубации и выше таковых показателей после 30
минутной преинкубации с желудочным соком (рис. 1А).
Результаты исследований показали, что при применении казеина в качестве эмульга-
тора совместно с желчью, липолитическая активность с увеличением его концентрации до
12% повышалась и затем значительно снижалась при использовании концентрации до 16%,
когда полностью отсутствует липолитическая активность и равна нулю (рис. 1Б).
После предварительной 30 минутной инкубации (преинкубации) субстратов казеина
различной концентрации с желудочным соком и дальнейшем использовании их в качестве
эмульгаторов совместно с желчью. При увеличении концентрации белка липолитическая
активность не достоверно увеличивалась по отношению к показателям без преинкубации и
повторяла динамику этих показателей, но при концентрации свыше 12% показатели значи-
тельно снижались и при концентрации казеина в 24% липолитическая активность полно-
стью отсутствовала. При этом все показатели липолитической активности после 30 минут-
ной преинкубации субстратов казеина при его концентрации свыше 10% достоверно отли-
чались от таковых без преинкубации (рис. 1Б).
Применение субстратов казеина различной концентрации после предварительной 60
минутной преинкубации с желудочным соком и дальнейшем использовании их в качестве
эмульгаторов совместно с желчью, было установлено. Что липолитическая активность при
увеличении концентрации казеина выражено, но не достоверно увеличивалась по отноше-
нию к показателям без преинкубации и 30 минутной преинкубации и повторяла динамику
этих показателей, но при концентрации свыше 16% показатели значительно снижались, а
при концентрации казеина в 36% липолитическая активность равнялась нулю. При этом все
показатели липолитической активности после 60 минутной преинкубации субстратов казеи-
на при его концентрации свыше 10% достоверно отличались от таковых без преинкубации
(рис. 1Б).
Обсуждение результатов.
Полученные данные показывают, что казеин в отсутствии
желчных кислот обладает ингибирующим действием на липазу в составе панкреатического
сока в более низких концентрациях. В тоже время казеин, используемый в качестве эмуль-
гатора, совместно с желчью, ингибировал липазу при значительно более высоких концен-
Оригинальная статья
Доктор ахборотномаси № 2—2019
43
Рис. 1. Влияние казеина различной концентрации совместно в присутствии (А) и отсутствии (Б)
желчи на активность липазы (х10
3
) поджелудочного сока, до и после гидролиза белков желудочным
соком.
Примечание: 1- без преинкубации с желудочным соком,
2- после 30 мин. преинкубации с желудочным соком,
3-после 60 мин. преинкубации с желудочным соком.
*- достоверно отличающиеся величина по отношению к показателям без преинкубации
с желудочным соком.
трациях. При увеличении концентрации казеин сначала вызывал повышение активности
панкреатической липазы, возможно за счет увеличения эмульгируемости смешанного суб-
страта используемого для определения панкреатической липазы. Затем при достижении
концентрации казеина до определенного уровня, отмечалось значительное снижение актив-
ности липазы, которое доходило до нуля.
После 30 минутной, а еще в большей мере после 60 минутной преинкубации с желу-
дочным соком казеина и дальнейшем использовании его в качестве эмульгатора. Липолити-
ческая активность панкреатического сока, как в присутствии так и отсутствии желчных кис-
лот, по сравнению с таковыми показателями без преинкубации, достоверно повышалась.
Выводы:
Таким образом, можно заключить, что предварительный гидролиз белков
пепсинами в желудке способствует не только дальнейшему улучшению гидролиза их под
влиянием протеолитических ферментов поджелудочного сока (триптической атакуемости
белков), но также снижению связывающей способности их с желчными кислотами и улуч-
шению гидролиза жиров под влиянием панкреатической липазы.
Этот факт, возможно, является более важным для гидролитической функции желудка,
чем триптическая атакуемость белков в желудке и главным эволюционным фактором пред-
варительного переваривания белков желудочным соком.
О. К. Джалалова, В. А. Алейник,...
Доктор ахборотномаси № 2—2019
44
Использованная литература:
1. Курзанов А.Н. Метод определения липолитической активности биологических жидкостей//Лаб.дело.
1975. №12. С.746-747.
2. Boon-Seang Chu, A. Patrick Gunning, Gillian T. Rich et all. Adsorption of Bile Salts and Pancreatic Colipase
and Lipase onto Digalactosyldiacylglycerol and Dipalmitoylphosphatidylcholine Monolayers //Langmuir,
2010, 26 (12), pp 9782–9793.
3. Delorme V. et al. Effects of surfactants on lipase structure, activity, and inhibition //Pharmaceutical research.
2011. Vol. 28. №. 8. pp.1831-1842.
4. Hosomi R, Fukunaga K, Nishiyama T, Yoshida M. Effects of porcine hemoglobin on serum lipid content and
fecal lipid excretion in rats// J. Med. Food. 2014;17(3):302-9.
5. Hur S.J., Decker E.A., McClements D.J. Influence of initial emulsifier type on microstructural changes occur-
ring in emulsified lipids during in vitro digestion //Food Chemistry. 2009. Vol. 114. No. 1. pp.253-262.
6. Speranza A., Corradini M.G., Hartman T.G., Ribnicky D., Oren A., Rogers M.A. Influence of emulsifier struc-
ture on lipid bioaccessibility in oil-water nanoemulsions// J. Agric. Food Chem., 2013, Vol. 61, No. 26,
pp.6505-6515.
7. Vinarov, Z., Tcholakova, S., Damyanova, B., Atanasov, Y., Denkov, N.D., Stoyanov, S.D., & Lips, A. Effects
of emulsifier charge and concentration on pancreatic lipolysis: 2. Interplay of emulsifiers and biles //Langmuir.
2012. Т. 28. №. 33. С. 12140-12150.
8. Vinarov, Z., Petrova, L., Tcholakova, S., Denkov, N.D., Stoyanov, S.D., & Lips, A. In vitro study of triglycer-
ide lipolysis and phase distribution of the reaction products and cholesterol: effects of calcium and bicar-
bonate //Food & function. 2012. Т. 3. №. 11. С. 1206-1220.
Оригинальная статья
