Доктор ахборотномаси № 2—2019
24
УДК 618.177-089.888.11-078.33:616.69-008.8
ВЛИЯНИЕ ТРИПСИНА НА ИММУННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ И
ПРОТЕОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ СПЕРМЫ
У МУЖЧИН С НАРУШЕНИЕМ ФЕРТИЛЬНОСТИ
С. М. Бабич, В. А. Алейник, Г. М. Ходжиматов, Х. Н. Негматшаева, С. Р. Ибрагимова
Андижанский государственный медицинский институт, Андижан, Узбекистан
Ключевые слова:
иммунные свойства спермы, нарушение фертильности, интерлейкиновый статус, трипсин,
протеолитическая активность спермы, антипротеолитическая активность спермы.
Таянч сўзлар:
сперма иммунитетлари, туғилишнинг салбийлиги, интерлейкин ҳолати, трипсин, сперма про-
теолитик фаоллиги, сперма антипротеолитик фаоллик.
Keywords:
sperm immune properties, impaired fertility, interleukin status, trypsin, sperm proteolytic activity, sperm
antiproteolytic activity.
У мужчин, имеющих нарушение фертильности, изучали в эякуляте протеолитическую и анти-
протеолитическую активность, а также показатели про- и противовоспалительных интерлейкинов после лече-
ния их препаратом трипсин. У мужчин с нарушением фертильности отмечается снижение общей протеолити-
ческой активности и нарастание антипротеолитической активности спермы. Нарастание антипротеолитиче-
ской активности в большей мере связано с местной и системной реакцией на воспалительный процесс, но в
меньшей степени с ингибированием протеаз спермы. После лечения трипсином у мужчин с нарушением фер-
тильности отмечалось снижение антипротеолитической и увеличение протеолитической активности спермы.
Применение препарата трипсина в качестве иммунокоррегирующего фактора спермы мужчин способствует
улучшению еѐ иммунных характеристик.
ФЕРТИЛЛИКДА БУЗИЛИШИ БЎЛГАН ЭРКАКЛАРДА ТРИПСИННИ СПЕРМАНИНГ
ПРОТЕОЛИТИК АКТИВЛИГИГА ВА ИММУН ХАРАКТЕРИСТИКАСИГА ТАЪСИРИ
С. М. Бабич, В. А. Алейник, Г. М. Ходжиматов, Х. Н. Негматшаева, С. Р. Ибрагимова
Андижон давлат тиббиѐт институти, Андижон, Ўзбекистон
Фертиллик бузилиши бўлган эркаклар эякулянтида протеолитик ва антипротеолитик активлиги ўрга-
нилди, шунингдек трипсин препарати билан даволангандан кейин яллиғланишдан олдинги ва яллиғланишга
қарши интерлейкинларнинг кўрсаткичлари ўрганилди. Фертиллик бузилиши бўлган эркакларда умумий
пртеолитик активлик камайиши ва спермада антипротеолитик активлик ортиши кузатилади. Антипротеолитик
активликнинг ортиши кўп тарафдан яллиғланиш жараѐнига маҳаллий ва умумий реакция билан боғлиқ, кам
даражада спермани протеаза билан ингибирланишига боғлиқ. Трипсин билан даволангандан кейин Фертиллик
бузилиши бўлган эркакларда антипротеолитик активлик камайиши ва протеолитик активликни ортиши куза-
тилади. Трипсин препаратларининг спермага иммунокоррекцияловчи омил сифатида қўлланилиши эркаклар-
да унинг иммун характеристикасининг яхшиланишига таъсир этади.
EFFECT OF TRIPSIN ON IMMUNE CHARACTERISTICS AND PROTEOLYTIC ACTIVITY OF SPERM
IN MEN WITH FERTILITY DISORDER
S. M. Babich, V. A. Aleynik, G. M. Khodzhimatov, Kh. N. Negmatshaeva, S. R. Ibragimova
Andijan state medical institute, Andijan, Uzbekistan
In men with impaired fertility, proteolytic and anti-proteolytic activity was studied in the ejaculate, as well as
the rates of pro- and anti-inflammatory interleukins after their treatment with trypsin. In men with impaired fertility,
there is a decrease in total proteolytic activity and an increase in the antiproteolytic activity of sperm. The increase in
antiproteolytic activity is more associated with the local and systemic reaction to the inflammatory process, but to a
lesser extent with the inhibition of sperm proteases. After treatment with trypsin in men with impaired fertility, there
was a decrease in antiproteolytic and an increase in the proteolytic activity of sperm. The use of trypsin as an immuno-
corrective factor of male sperm helps to improve its immune characteristics.
Известно, что нормальная имплантация и последующее развитие эмбриона и плода
обеспечиваются уникальными иммунологическими механизмами, в частности включающи-
ми влияние компонентов семенной плазмы (СП), на репродуктивную функцию женщины.
Долгое время СП рассматривалась, прежде всего, как транспортная среда, обеспечивающая
возможность прохождения сперматозоидов через слизистый барьер цервикального канала,
направленный трафик сперматозоидов и выживаемость их во «враждебной» среде женского
Оригинальная статья
Доктор ахборотномаси № 2—2019
25
репродуктивного тракта. Тем не менее, накопленные за последние годы факты значительно
расширили существовавшие ранее представления [1].
Семенная плазма содержит активные иммунорегуляторные факторы, придающие ей
уникальные свойства и позволяющие проявлять иммуносупрессорные и противовоспали-
тельные свойства – простагландины, цитокины, – росттрансформирующие факторы, интер-
лейкины (ИЛ) и их растворимые рецепторы. Плазменная фракция спермы является богатым
источником цитокинов, концентрация отдельных цитокинов в семенной жидкости значи-
тельно превышает аналогичные сывороточные концентрации, что указывает на потенциаль-
ную роль цитокинов в репродуктивной физиологии человека [3,5].
В настоящее время показано, что в сперме баланс между протеазами и их ингибитора-
ми имеет важное значение. Изменение этого баланса, связанного с нарушением контроля
протеолитической активности в семенной жидкости, приводит к нарушению разжижения
спермы, изменению подвижности сперматозоидов и к бесплодию у человека [2].
Развитие инфекционных и воспалительных процессов сопровождается высвобождени-
ем и активацией большого семейства протеаз, которые играют основную роль в деградации
компонентов экстрацеллюлярного матрикса, определяя характер и прогноз течения заболе-
ваний. Регуляция уровня активности протеаз осуществляется многочисленными системны-
ми и местными ингибиторами, которые предупреждают чрезмерный протеолиз, поддержи-
вая целостность органа-мишени [2].
Эти исследования указывают на возможность влияния через интерлейкиновый статус
в тканях на состояние местного иммунитета. Предполагается, что этот механизм принимает
участие в эффектах протеиназ при лечении нарушений фертильности у мужчин, имеющих в
сперме отклонения, связанные с воспалительными и аутоиммунными состояниями.
Цель исследования:
у мужчин, имеющих нарушение фертильности, изучить в эякуля-
те протеолитическую и анти-протеолитическую активность, а также показатели про- и про-
тивовоспалительных интерлейкинов после лечения их препаратом трипсин.
Материал и методы.
В рамках изучения причин нарушения фертильности у семей-
ных пар, были обследованы 49 мужчин, у которых были исследованы 49 эякулятов. Все об-
следованные мужчины были разделены на 3 группы. В 1 группу вошли 19 мужчин с под-
твержденной фертильностью, они имели нормальные показатели спермограммы и содержа-
ния лейкоцитов. Во 2 группу вошли 16 мужчин, у жен которых было 2 и более выкидыша, а
у мужчин имелись нормальные показатели спермограммы и содержания лейкоцитов. 3
группу составили 14 мужчин, у жен которых в анамнезе не было беременностей, у мужчин
отмечена субфертильность, сперма имела повышенную вязкость и повышенное содержание
лейкоцитов.
В сперме до и после лечения препаратом трипсин определяли показатели интерлейки-
нов: провоспалительных - интерлейкин-1бета (ИЛ-1), фактор некроза опухолей-
α (
ФНО-
α),
и противовоспалительных - интерлейкин -10 (ИЛ-10) методом ИФА с использованием тест-
систем ЗАО ―Вектор-Бест‖.
В сперме определяли также протеолитическую активность (ОПА) казеинолитическим
методом по учету продуктов гидролиза казеина в единицах активности (Ед) по тирозину,
ингибиторную - анти-протеолитическую - активность (АПА) также казеинолитическим ме-
тодом, Ингибиторную активность выражали в ингибиторных единицах (ИЕд) по трипсину и
по папаину [4, 6].
Препарат трипсин назначали мужчинам 2 и 3 групп в дозе 5 мг в/м 1 раз в день, кур-
сом 15 дней.
Полученные данные подвергались статистической обработке с использованием стан-
дартных программ Microsoft Excel 2007 c вычислением средних величин (М), их средних
ошибок (m), а также коэффициента достоверности разности средних величин Стьюдента-
Фишера (t).
Результаты и их обсуждение.
Полученные данные показали (табл. 1), что средний
С. М. Бабич, В. А. Алейник,...
Доктор ахборотномаси № 2—2019
26
Таблица 1.
Изменение показателей TGF-
β1
и интерлейкинового статуса в сперме мужчин исследуе-
мых групп до и после лечения трипсином
показатель провоспалительного интерлейкина ФНО-
α
в сперме мужчин второй группы был
достоверно выше, чем у мужчин первой группы, а у мужчин третьей группы еще более вы-
сокий по сравнению с первой группой и достоверно выше, чем во второй группе (Р<0,001).
После лечения трипсином отмечалось достоверное снижение показателей ФНО-
α
у
мужчин второй и третьей групп относительно показателей до лечения (Р<0,001).
Аналогичные тенденции динамики отмечены и по средним показателям ИЛ-1бета в
сперме мужчин второй и третьей групп (табл. 1) (Р<0,01).
После лечения трипсином также отмечено снижение показателей ИЛ-1 бета у мужчин
второй и третьей групп относительно соответствующих показателей до лечения (Р<0,05).
Показатели у мужчин третьей группы превышали показатели мужчин второй группы.
Показатели противовоспалительного ИЛ-10 в сперме мужчин второй группы были
ниже как до лечения, так и после относительно показателей контрольной и третьей группы
(табл. 1). Тогда как показатели третьей группы были выше и первой, и второй групп как до,
так и после лечения. Необходимо отметить, что показатель ИЛ-10 был значительно выше,
особенно относительно второй группы (Р<0,05).
Показатели TGF-
β1
в составе спермы мужчин второй группы (таб. 1) были достоверно
ниже по сравнению с таковыми показателями первой группы (Р<0,05), однако у мужчин
третьей группы, наблюдались недостоверно меньшие показатели TGF-
β1
по сравнению с
первой группой.
После лечения трипсином у мужчин второй группы в составе спермы показатели TGF-
β1
недостоверно повышались по сравнению с подобными значениями до лечения. Похожие
изменения недостоверного повышения TGF-
β1
по сравнению с таковыми значениями до
лечения отмечались и в 3 группе.
Также результаты исследования показали, что средние показатели ОПА спермы муж-
чин второй группы до лечения трипсином были достоверно ниже по сравнению с первой
(контрольной) группой мужчин (Р<0,001) (табл. 2). После лечения трипсином у мужчин
второй группы показатели ОПА спермы достоверно повышались относительно значений до
лечения, но оставались ниже, чем в контрольной группе.
У мужчин третьей группы до лечения трипсином также наблюдались достоверно бо-
лее низкие значения ОПА спермы по сравнению с показателями мужчин контрольной груп-
пы (Р<0,01) (табл. 2). После лечения трипсином у мужчин третьей группы показатели ОПА
спермы по сравнению с данными до лечения достоверно повышались (Р<0,05), но остава-
лись несущественно ниже контроля.
В этих же исследованиях показатели антипротеолитической активности по трипсину
спермы мужчин второй группы до лечения были достоверно выше по сравнению с первой
группой мужчин (Р<0,05) (табл. 2). После лечения трипсином у мужчин этой группы пока-
затели антипротеолитической активности по трипсину спермы, по сравнению с таковыми
Примечание:
* - достоверно отличающиеся величины относительно показателей 1 группы;
** - достоверно отличающиеся величины относительно показателей до лечения.
1 контрольная
группа
2 группа
3 группа
до лечения
после
лечения
до лечения
после
лечения
ФНО пг/мл
14,2 ± 1,3
21,8 ± 1,9*
14,9±1,2**
29,7±3,1*
17,1±1.6**
ИЛ-1 пг/мл
27,3±2,5
39,5±3,6*
28,3±2,5**
46,3±5,2*
31,2±2.7**
ИЛ-10 пг/мл
47,2±4,5
32,8±3,1*
43,7± 4.2**
62,5±5,9*
85,3± 7.4**
TGF-
β1
нг / мл
28,3±3,1
16,8±1,9*
22,4± 2.5
21,7±1,8
25,1± 2.9
Оригинальная статья
Доктор ахборотномаси № 2—2019
27
значениями до лечения, достоверно снижались, приближаясь по величине к показателям
контроля.
У мужчин третьей группы показатели антипротеолитической активности по трипсину
до лечения были недостоверно выше относительно показателей первой группы мужчин
(Р>0,05). После лечения трипсином у мужчин третьей группы показатели антипротеолити-
ческой активности спермы по трипсину по сравнению со значениями до лечения незначи-
тельно, но достоверно снижались (Р<0,05).
Показатели антипротеолитической активности по папаину спермы мужчин второй
группы до лечения трипсином были достоверно выше по сравнению с показателями первой
группы мужчин (Р<0,01) (табл. 2), После лечения трипсином у мужчин второй группы пока-
затели антипротеолитической активности по папаину относительно значений до лечения
достоверно снижались (Р<0,05).
У мужчин третьей группы показатели антипротеолитической активности по папаину
до лечения трипсином были незначительно выше по сравнению с таковыми значениями
первой группы мужчин (Р<0,001) (табл. 2). После лечения трипсином у мужчин третьей
группы показатели антипротеолитической активности по папаину спермы по сравнению со
значениями до лечения достоверно снижались (Р<0,01).
Таким образом, применение препарата трипсин способствует снижению показателей
провоспалительных интерлейкинов в сперме и повышению содержания противовоспали-
тельных интерлейкинов, а также не значительному увеличению TGF-
β1.
Из полученных данных также видно, что показатели ОПА спермы снижены в большей
мере у мужчин с нарушением фертильности. После лечения трипсином у этих мужчин от-
мечалось значительное восстановление ОПА. Снижение ОПА спермы, но в меньшей степе-
ни, сохраняется и у мужчин с нарушением фертильности, но с отсутствием выраженных
воспалительных явлений по результатам спермограммы. После лечения трипсином у этих
мужчин так же отмечалось значительное восстановление ОПА.
Значительное увеличение антипротеолитической активности спермы по трипсину от-
мечалось у мужчин с нарушением фертильности и выраженным воспалительным процес-
сом, проявляющемся в повышенном количестве лейкоцитов по результатам спермограммы,
после лечения трипсином показатели антипротеолитической активности по трипсину суще-
ственно снижались. У мужчин с нарушением фертильности, но без выраженных проявлений
воспаления антипротеолитическая активность спермы по трипсину была незначительно вы-
ше, а после лечения трипсином снижалась.
Таблица 2.
Изменение показателей общей протеолитической активности (ОПА) и
антипротеолитической активности (АПА) спермы мужчин с нарушением
фертильности до и после лечения трипсином
1 контроль-
ная группа
2 группа
3 группа
до лечения
после
лечения
до лечения
после
лечения
ОПА
Ед /мл
121,6 ± 11,7
58,4 ± 6,1*
104,9±9,8**
73,5 ± 6,9*
112,3±10,8**
АПА ИЕд/мл
по трипсину
51,2 ± 4,8
84,6 ± 8,2*
56,1±5,8**
67,3 ± 7,1*
48,6±4,3**
АПА ИЕд/мл
по папаину
33,5 ± 2,8
52,7 ± 4,9*
35,9± 3,1**
67,3 ± 7,1*
41,3±3,8**
* - достоверно отличающиеся величины относительно показателей первой
(контрольной) группы;
** - достоверно отличающиеся величины относительно показателей до лечения.
Примечание:
С. М. Бабич, В. А. Алейник,...
Доктор ахборотномаси № 2—2019
28
Исходя из этого полученные нами данные антипротеолитической активности спермы
по папаину и трипсину можно интерпретировать таким образом, что при лечении трипси-
ном принимают участие в большей степени системные механизмы защиты у мужчин с
нарушением фертильности, но без выраженных проявлений воспаления, а местные механиз-
мы - в большей степени у мужчин с нарушением фертильности и выраженным воспалитель-
ным процессом, проявляющемся в повышенном количестве лейкоцитов по результатам
спермограммы,
Вывод.
Применение препарата трипсина в качестве иммунокоррегирующего фактора
спермы мужчин способствует улучшению еѐ иммунных характеристик.
У мужчин с нарушением фертильности отмечается снижение общей протеолитиче-
ской активности и нарастание антипротеолитической активности спермы. Нарастание анти-
протеолитической активности в большей мере связано с местной и системной реакцией на
воспалительный процесс, но в меньшей степени с ингибированием протеаз спермы. После
лечения трипсином у мужчин с нарушением фертильности отмечалось снижение антипро-
теолитической и увеличение протеолитической активности спермы.
Использованная литература:
1. Бабаян А.А., Смольникова В.Ю. и др. Влияние иммунорегуляторных свойств семенной плазмы на ре-
продуктивную функцию женщин// Гинекология, 2012, №4, С. 80-84.
2. Choi K.Y, Swierczewska M, Lee S. Chen X. Protease-activated drug development//Theranostics, 2012; 2: 156–
178.
3. Eggert-Kruse W., Boit R., Rohr G., Aufenanger J., Hund M., Strowitzki T. Relationship of seminal plasma
interleukin (IL) -8 and IL-6 with semen quality// Hum. Reprod.,2001; 16(3):517-528.
4. Krol J., Kowalski R., Demska-Zakęś K., Hliwa P., Glogowski J. Proteolytic and anti-proteolytic activity in the
seminal plasma of Eurasian perch (Perca fluviatilis L.) during the spawning period. Czech J. Anim. Sci., 2011,
vol. 56, №9, 390–397.
5. Robertson SA. Seminal plasma and male factor signalling in the female reproductive tract// Cell Tissue Res
2005; 322: 43–52.
6. Shadmanov A., Aleynik V., Babich S. at all. Therapeutic effects on performance wobenzym proteolytic and
antiproteolitic activity in men with sperm impaired fertility. European applied sciences, Stuttgart, Germany,
2014, no 3, 47-48.
Оригинальная статья
