Биология ва тиббиёт муаммолари, 2017, №3 (96) 19
УДК: 615.355.03+617.7:575-08-07
G915С ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА TGFβ1 У МУЖЧИН С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 2 ТИПА
УЗБЕКСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ
Г.Г. АКРАМОВА, З.С. АКБАРОВ, Ф.А. ТАХИРОВА, С.И. ИСМАИЛОВ
Республиканский Специализированный Научно-Практический Медицинский Центр Эндокринологии,
Республика Узбекистан, г. Ташкент
Ташкентский педиатрический медицинский институт, Республика Узбекистан, г. Ташкент
ЎЗБЕК ПОПУЛЯЦИЯСИДА ҚАНДЛИ ДИАБЕТ 2 ТУРИ ЭРКАКЛАРДА ГЕНИНИНГ G915C
ПОЛИМОРФИЗМИ
Г.Г. АКРАМОВА, З.С. АКБАРОВ, Ф.А. ТАХИРОВА, С.И. ИСМАИЛОВ
Республика Ихтисослаштирилган Эндокринология Илмий -Амалий Тиббиёт Маркази,
Ўзбекистон Республикаси, Тошкент
Тошкент педиатрия тиббиёт институти, Ўзбекистон Республикаси, Тошкент
G915C POLYMORPHISM OF TGF B1 GENE IN TYPE 2 DM MEN OF UZBEK POPULATION
G.G. AKRAMOVA, Z.S. AKBAROV, F.A. TAKHIROVA, S.I. ISMAILOV
Center for the Scientific and Clinical Study of Endocrinology, Republic of Uzbekistan, Tashkent
Tashkent Pediatric Medical Institute, Republic of Uzbekistan, Tashkent
Материаллар ва усуллар: ўзбек популяциясида КД 2 тури билан 158 та эркаклар кўриб чиқилди.
Натижалар. ўтказилган тадқиқот натижаларига кўра, TGFΒ1 генининг C аллели КД 2турида (8,2%)
ва соғлом шахсларда (3,2%), G аллелга нисбатан анча кам учраши кузатилди. СС генотипи учраш
тезлиги КД 2турда (84,8%; р=0,31) ва соғломларда (93,5%) ҳам бир хилда юқори. КД 2турда (13,9%;
р=0,40) ва соғломларда (6,5%) CG генотипининг учраши бир юқорилиги билан муҳим фарқланмади.
Соғлом эркакларда гомозиготали GG генотип учрамади. Хулоса. Ўзбек популяциясидаги соғлом
эркаклар ва КД 2тур беморлари текширирлган гуруҳлари ўртасида, соғломлар гуруҳида GG
генотипининг йўқлигидан ташқари, TGFβ1 генининг G915C полиморфизмининг на аллеллари, на
генотипларида тайинли фарқ йўқ.
Калит сўзлар:
қандли диабет 2 тур, ўзбек популяциясидаги экрганлар, трансформирланган ўсиш
фактории бета, генотиплар.
Materials and methods: 158 male patients with DM type 2 men Uzbek population have been surveyed.
Results: Analysis of the research showed that the allele C gene TGFβ1 occurs much less frequently than allele
G in both healthy individuals (3,2%), and in patients with type 2 DM of (8,2%). CC genotype frequency of
equally high and (93,5%) in healthy patients and DM (84,8; p=0,31%). No significant differences in genotype
frequency of CG in healthy subjects and 6,5% of patients with type 2 DM (13,9%). Homozygous GG genotype
in healthy men was not present. Conclusion: Except for lack GG genotype among researched healthy men and
patients with type 2 DM of Uzbek population no significant difference was defected neither in allele, nor in rep-
resentation of genotypes G915C polymorphism gene TGFβ1.
Keywords:
diabetes mellitus type 2, men of Uzbek nationality, transforming growth factor beta, geno-
types
В настоящее время в мире сахарный диабет
(СД) является одним из наиболее распространен-
ных заболеваний [8]. По прогнозам экспертов IDF
в 2015 г. количество больных СД составило 415
миллиона человек, к 2040 году прогнозируется
увеличение до 645 миллионов человек, т.е. каж-
дый десятый взрослый будет болеть диабетом [1,
5]. Согласно расчетным данным IDF, в Узбеки-
стане число лиц с СД в возрасте 20-79 лет, со-
ставляет 963 900 человек (5,05% взрослого насе-
ления), однако официально зарегистрировано не-
многим больше 169 000 (0,8%) [1].
Исследования последних лет, что немало-
важную роль в развитии осложнений СД играют
наследственные факторы. Роль генетической со-
ставляющей в генезе СД 2 типа (СД2) доказывают
выявленные локусы предрасположенности - как в
европейских, так и в азиатских популяциях [3, 4].
Было определено более 100 генов, ассоции-
рованных с риском развития СД2, большинство
из которых влияют на секрецию инсулина, однако
точный молекулярный механизм их влияния
окончательно не установлен. Раскрытие этих ме-
ханизмов поможет понять основы патофизиоло-
гии СД2 и определить группы людей с высоким
риском развития СД2, для проведения профилак-
тических мероприятий. Однако данные по боль-
шинству этих вариантов далеко не всегда под-
тверждаются в различных исследованиях, а зача-
стую и противоречат друг другу [2]. Одним из
важных модуляторов клеточного роста, воспале-
ния, пролиферации и дифференцировки, внекле-
точного матричного депонирования и апоптоза
G915с полиморфизм гена TGFΒ1 у мужчин с сахарным диабетом 2 типа узбекской …
20 Проблемы биологии и медицины, 2017, №3 (96)
является трансформирующий фактор роста бета
(TGF- β1) [6]. В исследовании Beránek M. et al. [7]
показано, что TGF- β1 является одной из важных
молекул контролирующих формирование новых
сосудов и экспрессируется в тканях глаза, вклю-
чающих роговицу, ресничный эпителий, эпителий
хрусталика, сетчатку и кровеносные сосуды.
Предполагают, что TGF- β1 и цитокины, особенно
интерлейкины и факторы некроза опухолей
(TNFs) функционируют в качестве локальных ам-
плификаторов сигналов при патологических про-
цессах, ассоциированных с хроническим воспале-
нием глаза. Экспрессия TGF- β1 повышается у
пациентов с ишемией сетчатки, а также у лиц с
пролиферативной диабетической ретинопатией
(ПДР) и играет важную роль в стимулировании
ангиогенеза и ингибировании эндотелиальной
функции в глазе. Локальная активация экспрессии
TGF - β1 может играть существенную роль в раз-
витии пролиферативной фазы диабетической ре-
тинопатии.
Данные о клиническом значении TGF- β1 у
больных с СД 2 типа немногочисленны и ранее в
узбекской популяции они не проводились. В свя-
зи с этим целью наших исследований явилось
изучение ассоциаций вариантов гена TGF-b1 у
мужчин с СД 2 узбекской национальности.
Материалы и методы.
Обследовано 158
мужчин больных СД2 мужчин узбекской нацио-
нальности. Группа больных СД2 формировалась
из числа больных клиники РСНПМЦЭ и Таш-
кентского городского эндокринологического дис-
пансера. Принадлежность к узбекской нацио-
нальности считали установленной, если родители
и бабушка с дедушкой имели соответствующую
национальность. Критерии включения: больные
СД 2 типа, мужской пол, возраст старше 45 лет,
узбекская национальность. Критерии исключения:
больные СД 1 типа, женский пол, возраст младше
45 лет, неузбекская национальность.
Всем больным проводилось стандартное
комплексное клинико-лабораторное обследова-
ние, включающее в себя сбор анамнеза, фи-
зикальный
осмотр
больного,
лабораторно-
инструментальные исследования. Молекулярно-
генетические исследования гена TGFβ1 проводи-
лись в лаборатории геномики при Институте Био-
органической химии (ИБОХ) Академии Наук
Республики Узбекистан (АН РУз). Выделение
ДНК из цельной крови осуществлялось набором
реагентов Diatom™ DNA Prep 200 (производство
ООО “Лаборатория ИзоГен”, Москва, Россия).
Данный набор реагентов основан на использова-
нии лизирующего реагента с гуанидинтиоциана-
том, который предназначен для лизиса клеток,
солюбилизации клеточного дербиса, а также для
денатурации клеточных нуклеаз. В присутствии
лизирующего реагента ДНК активно сорбируется
на NucleoS™ - сорбенте. ДНК, элюированная из
сорбента ЭкстаГеном E™ или чистой водой
напрямую использовалась для дальнейшего про-
ведения анализа. Выделение ДНК проводилось по
стандартному протоколу выделения ДНК с ис-
пользованием набора реагентов Diatom™ DNA
Prep 200.
Типирование образцов ДНК по гену TGFβ1
проводилось с использованием специфических
олигонуклеотидных праймеров с участками гена
TGFΒI. ПЦР анализ проводили с использованием
набора реагентов для ПЦР амплификации ДНК
GenePak™ PCR Core (производство ООО “Лабо-
ратория ИзоГен”). Использовались готовые для
амплификации пробирки Master Mix, которые со-
держат в лиофилизированном сухом состоянии
ингибированную “для горячего старта” Taq ДНК
полимеразу, дезоксинуклеозодтрифосфаты и хло-
рид магния с конечными концентрациями, соот-
ветственно, 1 u, 200 мкМ и 2,5 mM, а также опри-
мизированную буферную систему для проведения
стандартной ПЦР амплификации. В пробирки
Master Mix добавлялось по 5 мкл смеси прайме-
ров, с конечной концентрацией 0.5 мкМ, 10 мкл
ПЦР растворителя и по 5 мкл исследуемой ДНК.
ПЦР амплификация проводилась по стандартному
протоколу. Для проведения ПЦР амплификации
использовали GeneAmp® ПЦР система 9700 с зо-
лотым
96-ячеечнным
блоком
(Applied
Biosystems). Программа амплификации включала
5 мин предварительной денатурации при 94 °С, 38
циклов: 94 °С – 60 с, 61 °С – 50 с, 72 °С – 60 с ;
программу завершала элонгация при 72 °С в тече-
ние 5 мин.
Последовательность специфических олиго-
нуклеотидных праймеров для проведения стан-
дартной ПЦР-амплификации к гену TGFβ1
TGFΒI
gene
Pr_G915C_F
CAC CAG CTC CAT GTC GAT AG
Pr_ G915C _R
CTA CCT TTT GCC GGG AGA CC
Статистическую обработку полученных ре-
зультатов проводили с помощью программ
STATISTICA 6.
Описательная статистика качественных
признаков (определение частоты встречаемости
полиморфизмов генов) представлена абсолютны-
ми и относительными частотами. Сравнение не-
связанных групп по качественным признакам
(попарное
сравнение
частот
молекулярно-
генетических показателей в группах больных и
здоровых лиц) осуществляли с использованием
двустороннего критерия χ2 (критерий Пирсона)
для таблиц сопряженности 2×2. Силу ассоциаций
оценивали в значениях показателя отношения
шансов (ОШ) и 95% доверительный интервал
(95% ДИ), который рассчитывали с применением
логистической регрессии. Различия считали ста-
тистически значимыми при p ≤0,05.
Г.Г. Акрамова, З.С. Акбаров, Ф.А. Тахирова, С.И. Исмаилов
Биология ва тиббиёт муаммолари, 2017, №3 (96) 21
Таблица 1.
Распространенность аллелей и генотипов G915С полиморфизма гена TGFβ1
у больных СД 2 и у здоровых
Генетический маркер
Здоровые, n=31
СД 2 типа, n=158
ОШ
95%ДИ
р
абс
%
абс
%
1
Аллель С
60
96,8
290
91,8
0,37
0,09-1,61
0,27
2
Аллель G
2
3,2
26
8,2
χ2; р
104,8; <0,00001
437,8; <0,00001
3
Генотип СС
29
93,5
134
84,8
0,39
0,09-1,72
0,31
4
Генотип СG
2
6,5
22
13,9
2,35
0,52-10,5
0,40
5
Генотип GG
-
-
2
1,3
χ2; р
43,6; <0,00001
158,0; <0,00001
Результаты и обсуждение.
Проведен гене-
тический анализ распределения аллелей и геноти-
пов G915С гена TGFβ1 у 158 мужчин больных СД
2 и у 31 практически здоровых мужчин. По
нашим данным С аллель наблюдался одинаково
чаще как у практически здоровых лиц (96,8%) так
и у больных СД2 (91,8%) (табл. 1).
При сравнении частоты аллельных вариан-
тов гена TGFβ1 выявлено, что аллель С встреча-
ется существенно реже аллеля G и в группе здо-
ровых добровольцев (3,2%) и больных СД2
(8,2%).
Частота встречаемости генотипа СС среди
здоровых и больных СД2 не имела значимых от-
личий и составила соответственно у здоровых
(93,5%) и у больных СД2 (84,8%; р=0,31). Нами
также не установлены существенные различия по
частоте генотипа CG в изученных группах (здо-
ровых лиц – 6,5% и больных СД2 – 13,9%;
р=0,40). Следует отметить, как у здоровых лиц,
так и у больных СД2 генотип CG отмечался до-
стоверно реже, чем генотип СС. Гомозиготный
генотип GG у здоровых мужчин отсутствовал.
Сравнение частоты встречаемости аллелей
C и G, генотипов СС, CG и GG G915С полимор-
физма гена TGFβ1 у здоровых и больных СД 2 не
обнаружило достоверной разницы, за исключени-
ем отсутствия GG генотипа в группе здоровых.
Таким образом, за исключением отсутствия
GG генотипа в группе здоровых между исследо-
ванными группами здоровых мужчин и больных
СД 2 узбекской популяции ни по аллелям, ни по
представленности генотипов G915С полиморфиз-
ма гена TGFβ1 существенной разницы нет.
Литература:
1.
Атлас IDF, 7-й выпуск 2015 г.
2.
Бондарь И.А., Шабельникова О.Ю. Генетиче-
ские основы сахарного диабета 2 типа//Сахарный
диабет. - 2013. - №4. – С.11-16.
3.
Лукьянчиков В.С., Зверева И.В. Патогенез и
профилактика сосудистых осложнений при мета-
болическом синдроме и сахарном диабете 2 ти-
па//РМЖ. – 2009. – № 10. – С. 717–720.
4.
Майоров А.Ю. Инсулинорезистентность в па-
тогенезе сахарного диабета 2 типа //Сахарный
диабет. – 2011. – №1. – С. 35–43.
5.
Alish C., Garvey W., Maki K.C. et al. A diabetes–
specific enteral formula improves glycemic variabil-
ity in patients with type 2 diabetes//Diabetes Technol
Ther. – 2010. – Vol.12(6). – P.419–425.
6.
Annes J., Munger J., Rifkin D. Making sense of
latent TGF-beta activation//J. Cell. Sci. – 2003. –
Vol.116. – P. 217–224.
7.
Fernández–Real J., Pickup J. Innate immunity,
insulin resistance and type 2 diabetes// Trends Endo-
crinol Metab. – 2008. – Vol.19(1). – P.10–16.
8.
Tanti J., Ceppo F., Jager J., Berthou F. Implication
of inflammatory signaling pathways in obesity–
induced insulin resistance//Front Endocrinol (Lau-
sanne). – 2013. – Vol.3. – P.181.
G915С ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА TGFβ1 У
МУЖЧИН С СД 2 ТИПА УЗБЕКСКОЙ
НАЦИОНАЛЬНОСТИ
Г.Г. АКРАМОВА, З.С. АКБАРОВ,
Ф.А. ТАХИРОВА, С.И. ИСМАИЛОВ
Материалы и методы. Обследовано 158
мужчин больных СД2 мужчин узбекской нацио-
нальности. Результаты. Анализ проведенных ис-
следований показал, что аллель С гена TGFβ1
встречается существенно реже аллеля G как у
здоровых лиц (3,2%), так и у больных СД2 (8,2%).
Частота встречаемости генотипа СС одинаково
высока и у здоровых (93,5%) и у больных СД2
(84,8%; р=0,31). Не выявлено значимых различий
по частоте генотипа CG у здоровых лиц (6,5%) и
больных СД2 (13,9%; р=0,40). Гомозиготный ге-
нотип GG у здоровых мужчин отсутствовал. Вы-
вод. За исключением отсутствия GG генотипа в
группе здоровых между исследованными группа-
ми здоровых мужчин и больных СД 2 узбекской
популяции ни по аллелям, ни по представленно-
сти генотипов G915С полиморфизма гена TGFβ1
существенной разницы нет.
Ключевые слова:
сахарный диабет 2 типа,
мужчины узбекской национальности, трансфор-
мирующий фактор роста бета, генотипы.
