International Journal of Education, Social Science & Humanities.
Finland Academic Research Science Publishers
ISSN: 2945-4492 (online) | (SJIF) = 7.502 Impact factor
Volume-11| Issue-4| 2023
Published:
|22-04-2023|
2146
Publishing centre of Finland
УДК: 619:616.981.42.
РАЗРАБОТКА ИННОВАЦИОННЫХ МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ
АЛЛЕРГЕНОВ И ИСПЫТАНИЯ ИХ АКТИВНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ
В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ.
https://doi.org/10.5281/zenodo.7893250
А.Д.Улугмурадов
д
.
ф
.
в
.
н
.,
М.А.Рузимуродов
к.в.н.
Научно
-
исследовательский институт ветеринарии Республика Узбекистан.
E-mail: nivi@vetgov.uz
Аннотация.
В статье представлена разработка инновационных методов получения
бруцеллезных аллергенов и испытания их активности и специфичности в
лабораторных условиях НИИВетеринарии.
Ключевые слова
.
Аллерген, бруцеллёз, активность, специфичность, метод, диагностика,
контаминация, препараты.
Введение.
Аллергия – это измененная реактивность организма
вследствие предшествующей чувствительности. Впервые термин аллергия (от
греческого «
аллос
» — другой, «
эргогон
» — движение) был предложен Пирке в
1906 г. на основании изучения патологической реакции человека на
повторное введение чужеродной сыворотки (сывороточная болезнь) [1; 2; 3.].
Аллергодиагностика занимает основное и важное место в комплексе
санитарно-гигиенических мероприятий, проводимых при бруцеллезе,
поэтому она рекомендована Международным Эпизоотическим Бюром (МЭБ)
как надежный тест для оценки здоровья стада.
Цель и задачи.
Разработка инновационных методов получения
аллергенов и испытания их активности и специфичности в бруцеллѐзной
лаборатории НИИВ.
Методика.
Согласно методикам
Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты
[5].
International Journal of Education, Social Science & Humanities.
Finland Academic Research Science Publishers
ISSN: 2945-4492 (online) | (SJIF) = 7.502 Impact factor
Volume-11| Issue-4| 2023
Published:
|22-04-2023|
2147
Publishing centre of Finland
Результаты.
Аллергены готовили путем инкубации культур №1 (условно
обозначенный), №2 и №3, и №9 в МППГГБ при +37°С в течение 10-15 дней.
Каждые 48 часов рост культур в МППГГБ исследовали под микроскопом по
методу Козловского и постоянно контролировали контаминацию. рН и
плотность микробных клеток проверяли по оптическому стандарту мутности
Л.А.Тарасевича. При снижении рН в ходе испытания подщелачивали 4%
стерильным раствором едкого натрия до достижения рН 7,2-7,4.
По окончании периода культивирования проверяли чистоту бульонной
среды и разделяли среды, в которых выращивался каждая культура, на две
части. Первую часть нагревали при температуре +95°С +100°С в течение 30
минут. После охлаждения пищевой среды ее центрифугировали на
суперцентрифуге при 10-15 тыс. об/мин в течение 10 минут. После этого
полученный концентрат аллергена пропускали через стерильные ватно-
марлевые фильтры (способ 1).
Вторую часть культуральной жидкости замораживали в полистироловом
контейнере при температуре -20°С, помещали на горячую водяную баню
(+90°С и выше) и сразу после снятия с водяной бани оттаивали. Эта ситуация
повторилась
трижды.
После
последнего
растворения
имеющуюся
бактериальную массу центрифугировали на суперцентрифуге при 10-15 тыс.
об/мин в течение 10 минут и пропускали через стерильные ватно-марлевые
фильтры (метод 2).
Агглютиногенность, токсичность, реактогенность, специфичность и
свойства активности экспериментальных рядов аллергенов, полученных из
каждой культуры, исследовали на 15 белых мышах и морских свинках и 15
овцах в лабораторных условиях.
Масса суспензий белым мышам (18-20 гр.) вводили дозу 0,25 мл под кожу
плечевой области с соблюдением правил асептики и антисептики. Морским
свинкам (с весом 370-450 гр.) вводили дозу 1 мл под кожу в области
внутренней части стороны бедра. В качестве контроля использовали 3 мышей
и морских свинок, которым не вводили бруцелл.
Экспериментальные серии аллергенов, приготовленные из каждой
культуры, были испытаны на 3 овцах. Инъекции разделены на группы по 0,5
мл под кожу левого нижнего века. Аллергены вводили методом
пальпебральной пробы, с соблюдением правил асептики и антисептики.
Всего аллергены вводили 12 овцам 4 типов культур. В качестве контроля
использовали 3 головы неинъекцинированных аллергеном овец.
International Journal of Education, Social Science & Humanities.
Finland Academic Research Science Publishers
ISSN: 2945-4492 (online) | (SJIF) = 7.502 Impact factor
Volume-11| Issue-4| 2023
Published:
|22-04-2023|
2148
Publishing centre of Finland
Перед введением аллергена у морских свинок и 15 овец у них брали
кровь и тестировали на РБП и РА. За животными в опыте наблюдали в
течение 3-7 дней, ежедневно проводили термометрию. Через 15-20 дней у
этих овец брали кровь и тестировали их сыворотку на РБП и РА, и были
получены отрицательные результаты.
В последующих исследованиях этих овец также повторно использовали
для проверки активности аллергодиагностикумов после вакцинации
различными бруцеллезными вакцинами.
Таким
образом,
проведенные
исследования
показали,
что
экспериментальные аллергены, приготовленные из местных культур №1, №2,
№3, №9 не оказывали токсического действия, были безвредны, не обладали
антигенной (агглютиногенной) активностью и эти показатели, по которым
они соответствовали требованиям, предъявляемым к аллергенам бруцеллеза.
При испытании экспериментальных серий аллергенов, приготовленных
из каждой культуры, на овцах, вакцинированных различными вакцинами
против бруцеллеза, были получены следующие результаты (см. табл.).
За овцами в опыте наблюдали в течение 3-5 дней после введения
диагностического средства, их кормили и давали воду в обычном порядке,
при этом каких-либо существенных физиологических изменений у них не
наблюдали.
Таблица.
Результаты аллергической активности экспериментальных образцов
аллергодиагностических средств, приготовленных из разных культур на
вакцинированных овцах.
№
групп
№
Вид
животного
особи
Дата
вакцинации
Аллергодиагностикумы
из
культур
abortus
и
melitensis
№1
№2
№3
№9
I.
1
м.р.с.
овца
15.10.2019 г
+
2
м.р.с.
баран
+
3
м.р.с.
баран
+
II.
1
м.р.с.
овца
15.10.2019 г
+
2
м.р.с.
овца
+
3
м.р.с.
овца
+
III.
1
м.р.с.
овца
15.10.2019 г
+
2
м.р.с.
баран
+
3
м.р.с.
овца
+
International Journal of Education, Social Science & Humanities.
Finland Academic Research Science Publishers
ISSN: 2945-4492 (online) | (SJIF) = 7.502 Impact factor
Volume-11| Issue-4| 2023
Published:
|22-04-2023|
2149
Publishing centre of Finland
IV.
1
м.р.с.
баран
15.10.2019 г
+
2
м.р.с.
овца
+
3
м.р.с.
баран
+
К.
1
м.р.с.
баран
невакциниро
ванные
–
–
–
–
2
м.р.с.
баран
–
–
–
–
3
м.р.с.
баран
–
–
–
–
Результаты по аллергенам учитывали каждые 48-72 часа. Полные
результаты наблюдались через 48 часов, и у всех вакцинированных овец
развились опухоли различных размеров в местах введения тестовых серий
аллергенов. Это определялось, как положительная реакция местных
аллергодиагностических проб и свидетельствовало о высокой активности
исследуемых препаратов.
Выводы.
1. Разработаны инновационные методы получения аллергенов и
проведены испытания их активности и специфичности в лабораторных
условиях.
2. На основании результатов, полученных в лабораторных условиях, то
есть
с
учетом
чувствительности,
антигенности
и
активности
экспериментальных аллергодиагностических средств, принято решение о
продолжении испытаний в производственных условиях с разрешения
Госкомветеринарии и развития животноводства Республики Узбекистан.
ЛИТЕРАТУРА:
1.
Коляков Я.К., Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология // Москва:
Агропромиздат, 1986.- (272 с). С.202-214.
2.
Воронин Е.С. и др. Иммунология: учебник / под ред.
Е.С.Воронина // М.: Колос-Пресс, 2002. – 408 с.
3.
Радчук Н.А. Ветеринарная микробиология и иммунология:
учебник / ред. Н.А. Радчук // М.: Агропромиздат, 1991. – 383 с.
4.
ГОСТ
34579-2019.
Животные.
Лабораторная
диагностика
бруцеллеза. Аллергический метод / ГОСТ от 22 октября 2019 г. № 34579-2019.
5.
Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты // Справочник. Москва.
Колос. – 1981 – С.185-188.
6.
Саидова Б.М., Ахмедов Д.Р., Саидов M.C. Аллергодиагностика
бруцеллеза // Ж. Клиническая Лабораторная Диагностика, № 3, 2013. С.16-17.
