STOMATOLOGIYA
клеток варьирует в довольно широких пределах от 10 до 80
мВ, мембранный потенциал ацинарных клеток слюнных
желез равен-10-35 мВ, в протоках равен 80 мВ. При этом
мембранный потенциал серозных ацинусов составляет, в
среднем, 16 мВ, а слизистых - 25 мВ. Гиперполяризацию
возбужденных железистых клеток называют возбуждающим
гиперполяризационным потенциалом ВГП.
При возбуждении железистой клетки мембрана ги-
перполяризуется, для объяснения этого явления были
предложены две гипотезы: хлорная (анионная) и калиевая
(катионная).
Современное
объяснение
механизма
возбуждающей гиперполяризации объединило воедино обе
гипотезы. Согласно этому ВГП осуществляется за счёт
поступления ионов хлора внутрь клетки и выхода ионов
натрия и калия из клетки.
Гиперполяризация базальной мембраны происходит
вследствие активного транспорта ионов хлора, а натрий
поступает в клетку пассивно, сопровождая хлор.
Гиперполяризация апикальной мембраны происходит в
результате выхода из клетки ионов калия и натрия. При
возбуждении вначале возникает гиперполяризация ба-
зальной, затем апикальной мембраны. Однако гипер-
поляризация последней никогда не достигает величин
гиперполяризации базальной мембраны. Таким образом,
возникает
неодинаковая
степень
гиперполяризации
мембран апикального и базального полюсов железистой
клетки: базальная мембрана имеет больший заряд, который
возникает раньше, при возбуждении ацинарной клетки.
Разность потенциалов между апикальной и базальной
мембраной 2-3 мВ.
При возбуждении эта разность потенциалов между
полюсами возрастает до 10-20 мВ. Разность потенциалов
между полюсами 2-3 мВ, но, учитывая размеры клетки, она
создает в ней электрическое поле 20-40 В/см, при возбуж-
дении электрическое поле доходит до 100 В/см. Возрас-
тающее электрическое поле способствует перемещению
гранул секрета от базального к апикальному полю. Элек-
трическое поле также необходимо для образования канала,
через который происходит выброс макромолекул при
экструзии. При возрастании напряжение электрического
поля приводит к электрическому пробою мембраны, ко-
торый вызывает поступательные движение и выброс ма-
кромолекул секрета из клетки в проток. Таким образом,
гетерополярность железистых клеток является одним из
механизмов секреторной функции.
Список литературы
1.
Дегтярёва В.П., Будылина СМ. Нормальная физиология с курсом физиологии челюстно-
лицевой области. Москва-2015, с. 714-723
2.
КоротькоГ.Ф. Физиология системы пищеварения-Краснадар-2009.
3.
Камкин АД..Киселева И.С Физиология и молекулярная биология мембран клеток:
Учебное пособие для студентов высших медучебныхзаведений. -М.: Академия, 2008.-
592, с. 384-391
4.
Найтон АДДолл Дж.З. Медицинская физиология: Учебник: пер.с англ. /Подред.
В.И.Кобрина.-МхПогосфера, 2008, с. 459-466
5.
Fundamentals of Human Physiology 4 £ Lauralee Sherwood USA, 2012, c. 437-447.
ГАНОДЕРМА ЛУЦИДУМ - НОВЫЕ
ВОЗМОЖНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ
РАЗЛИЧНЫХ ПАТОЛОГИЙ В
МЕДИЦИНЕ
С.С. Муртазаев,
П.М.Абилов
Ташкентский
государственный
стоматологический институт, Узбекистан
Summary
In this article, new opportunities for treating diseases of
the gastrointestinal tract, cardiovascular system, oncology
based on biological active supplement based on Ganoder-
ma Lutsidum are disclosed. Mushroom ganoderma Lucid-
urn or Reishi, or Lingzhi, or Trutovik shining grows only in
Malaysia, because that's where the optimum temperature
and humid climate. Even before our era. was known mush-
room Ganoderma Lucidum. And it was the Chinese doctors
who attributed this fungus to the higher fungi, which is sev-
eral degrees higher than Ginseng.This mushroom was avail-
able at that time only to the emperors, since it rarely grows
in the wild, and the man who found this mushroom was
rewarded generously. Since that time, Chinese doctors have
learned to produce ganoderma lucidum on plantations. But
artificially grown Ganoderma, when properly executed
plantation technigue, does not differ from the natural one.
Ganoderma Lucidum contains triterpenoids, unsaturated
fatty acids, the whole complex of essential amino acids, vita-
mins (group B, vitamin C), organic germanium, iron, molyb-
denum, zinc, р-polyglucans (polysaccharides).
Keywords: ganoderma lucidum, polyglucans, unsaturat-
ed fatty acids, irreplaceable vinic acids, oncology, cardiovas-
cular system, digestive system
В течении многих лет проблеме профилактики и ле-
чения хронических заболеваний в организме человека
14
ОРГАНИЗАЦИЯ, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИСТОРИЯ
уделяется значительное внимание. Еще со времен Абу Али
ибн Сино многие болезни лечились и излечивались с
помощью травяных настоек (фитотерапия), грибов
различного происхождения и состава и др. До нас дошли
лишь немногие рецепты великих врачевателей и конечно,
сейчас на заре высоких технологий почему-то природная
сила растений отошла на второй план. А ведь именно
благодаря растениям, травам и получается создать те
компоненты лекарств, которые используются сейчас в
медицине. Конечно, есть очень много лекарств, созданных
на основе нанотехнологий или биопрогрес- сивной
медицины, но на сегодняшний день такого гриба как
Ганодерма Луцидум нет.
Ганодерма Луцидум или Рейши, или Лингжи, или Тру-
товик блестящий был известен еще со времен династии Чин
(221-207 до н.э.) [1,2,3,4,5,б,7] во времена правления первого
императора Китая Цинь Шихуан Ти. С того времени
изображение этого гриба присутствует в литературе и
искусстве Китая. Во времена правления династии Хан (206 г
до н.э.-220 г. н.э.) при строительстве императорского дворца
Кан-Чуанг внутри дворца был обнаружен Лингчжи в виде
девяти парных листьев. Это происшествие было оценено как
знак необычного везения и удачи, потому что гриб Лингчжи
высоко ценился не только как лекарственное средство, но
также был символом счастья, предзнаменования удачи,
хорошего здоровья и долголетия.
Так в чем же секрет Рейши? На это вопрос мы поста-
раемся ответить.
Гриб Ганодерма Луцидум или Рейши, или Лингчжи,
имеет так много названий потому что в Китае его называют
Рейши, в Японии - Лингчжи, в Корее - Ёнгжи, в России -
Трутовик блестящий. Так же так много названий можно
объяснить тем, что плодовые тела, имеющие различные
цвета или форму называли разными именами. Считалось, что
в зависимости от цвета и вкуса плодового тела гриб
действует на разные органы. Так различают б типов: 1-
красные горькие - Акашиба - действовали на работу
внутренних
органов,
улучшали
память,
усиливали
внутреннюю энергию. 2-голубые и кислые - Аошиба -
действовали на печень, улучшали зрение, успокаивали
нервы, 3- желтые и сладкие - Кишиба - отвечали за работу
селезенки, успокаивали душу, 4 - белые и едкие - Ши-
рошиба - укрепляли легкие, придавали храбрость и силу
воли, б- черные и соленые - Курошиба действовали на
почки, б-фиолетовые и сладкие - Мурасакашиба - дей-
ствовали на работу суставов и мышц, укрепляли слух и
улучшали цвет лица [11,12,13,14]
В Китае и Японии очень почитали G. Lucidum, что означал
гриб громового раската, громовой гриб. Он обозначал небо,
человека и землю. В этом смысле он был постоянным
спутником даосских богов долголетия. Один из таких богов
сердобородый старик Шоу-сиюнчжен изображался летящим
на журавле с Лингчжи в руках. Как символ возможности
победы над временем Линг Чжи
был ритуальной пищей правителей во время религиозных
церемоний.
В 1781 г. Британский ботаник Уильям Куртис описал и
зарисовал трутовик лакированный, собранный с орешника. В
1821 г. Фриз описал этот гриб как Polyporus lucidus. Позднее,
в 1881г. финский миколог Питер Адольф Кар- стен ввел род
Ganoderma и включил в него только один вид - Polyporus
lucidus переименовав его в Ganogerma lucidum [8,9,10].
В 1933 г. Донк впервые внутри одного семейства
Polyporaceae подсемейство Ganodermatoidae позднее подняв
его до ранга семейства Ganodermataceae и эта
классификация была принята большинством исследователей.
В1981 г. ввел порядковое название Ganodermatales, которое
принял Пеглер в восьмом издании Dictionary of Fungi (2000).
Основными синонимами Ganoderma Lucidum являются
Polyporus lucidus, Fomus Lucidus, Plasodes Lucidus.
Плодовые тела G. lucidum однолетние, изредка 2-3
летние, с боковой эксцентрической, реже центральной
довольно длинной ножкой имеют полукруглую, вееро-
образную или почковидную форму. Иногда базидиомы
консолевидные, прирастающие к субстрату боком - нож-
ковидным основанием шляпки. Размер шляпок плодовых тел
3-8x10-25x2-3 см. Ножка цилиндрическая прямая или
выгнутая, 1 -2 см в диаметре, 5-15 см в длину. Поверхность
шляпки покрыта сначала рыжеватой, потом рыжевато-
пурпурной, кроваво-красной или каштаново-бурой, с
возрастом почти черной блестящей, как бы лакированной,
коркой. Такой же коркой покрыта и ножка. Край шляпки
беловатый, желтоватый до рыжеватого, обычно острый
иногда волнистый и слегка загнутый вниз, бесплодный на 2-
5 мм к центру. Ткань плодового тела губчато-пробковидная с
возрастом твердеющая до деревянистой, белая или
беловатая, неясно зональная, над трубочками древесинного
или светло-рыжеватого цвета. Трубочки 0,5-2 см длиной,
обычно однослойные, реже 2-3-слойные, охряные. Поры
мелкие округлые, по 4-5 на 1 мм. Поверхность гименофора
сначала беловатая, затем кремовая, после высыхания у
свежих образцов табачная,
15
STOMATOLOGIYA
при прикосновении темнеющая. Корка на поверхности
шляпки из буроватых цилиндрических или булавовидных
клеток, создающих палисадный слой.
Гифальная система тримитическая. Генеративные гифы
тонкостенные, гиалиновые с пряжками, 3-4 мкм в диаметре,
чаще всего наблюдаемые в растущем крае базидиомы.
Скелетные гифы бледно-окрашенные, толстостенные до
сплошных, 6-8 мкм в диаметре, длинные, волнистые, почти
неветвящиеся, плотно сплетены со слабоветвящимися более
тонкими (2-3 мкм в диаметре), сильно извилистыми часто
неравномерно
утолщенными
толстостенными
связывающими гифами. Оба типа гиф преобладают во всех
частях базидиом. Размер базидий -10-14x9-12 мкм. Споры
желтоватые яйцевидные, усеченные у вершины, 7-1 Зх 5,5-8
мкм, с гладким гиалиновым эписпорием и бородавчатым
буроватым эндоспорием. Споровый порошок бледно-
желтого цвета (Бондарцева, 1998).
Изучая микроморфологию вегетативного мицелия с
помощью
сканирующего
электронного
микроскопа,
Адаскавег и Гилбертсон (Adaskaveg and Gilbertson, 1986)
показали, что все штаммы G.lucidum, изолированные из
природы, образуют в культуре сильноразветвленный
коралловидный мицелий и обильные терминальные и
интеркалярные хламидоспоры, с гладкой или слегка ше-
роховатой стенкой. Размеры хламидоспор составляют 12-
20x10-12 мкм (Stamets, 1993).
Трутовик лакированный относится к ксилотрофам и
встречается почти во всех странах света у основания ос-
лабленных и погибающих деревьев, а также на мертвой
древесине пород, относящихся к родам Quercus, Acer, Alnus,
Betula, Carpinus, Castanea, Fagus, Fraxinus, Suglans, Mal us, Til
ia, Populus, Pyrus,, а также очень редко на древесине Picea,
Larix, Pinus. Изредка трутовик лакированный встречается на
живых деревьях, однако чаще плодовые тела обнаруживают
на пнях, недалеко от поверхности почвы. Иногда базидиомы,
выросшие на погруженных в землю корнях деревьев, можно
найти непосредственно на почве. G. lucidum вызывает белую
гниль. Трутовик лакированный широко распространен в
мире и встречается в Европе везде, кроме северных
регионов, в Азии, в Северной Африке, в Северной Америке.
В России трутовик лакированный распространен по
преимуществу в южных районах, в Ставропольском и
Краснодарском краях, на Северном Кавказе. В умеренных
широтах G. lucidum встречается реже, чем в субтропиках.
Плодовые тела образуются с мая по ноябрь (Бондарцева,
1998; Stamets, 1993).
Культивирование G.lucidum проводят исключительно для
медицинских целей. Сырьем для получения биологически
активных метаболитов G.lucidum традиционно служат
плодовые тела, значительно реже вегетативный мицелий
этого гриба. Наибольшее количество медико-биологических
работ по изучению лечебных свойств гриба выполнено с
использованием плодовых
тел G.lucidum, полученных при экстенсивном и интенсивном
культивировании или собранных в природе. Несмотря на
обилие работ по исследованию биологической активности
G. lucidum, существует только один лекарственный препарат
(SunRecome, Green Valley Holding Company, Ltd., Шанхай,
Китай) из G. lucidum, разработанный на основе плодовых тел,
выращенных по экстенсивной технологии. Это
может быть связано с трудностью воспроизведения
эффектов, которые были получены на нестандартизован-
ном материале.
Значительно меньше работ по исследованию биоло-
гической активности вегетативного мицелия. Очевидно, что
использование мицелия для получения биологически
активного материала может облегчить стандартизацию
материала
и
обеспечить
воспроизводимость
биологического эффекта от партии к партии препарата.
Выращивание вегетативного мицелия в погруженной
культуре, в отличие от получения плодовых тел, осу-
ществляется в строго контролируемых условиях, что дает
возможность получать стабильный химический состав
получаемого
материала.
Технологичность
процесса
погруженного культивирования и стоимость продукта
зависят от научно-технического уровня биотехнологической
разработки.
Одна из первых попыток культивирования G.lucidum
была предпринята в 1937 году
6.
Хенми. Однако, впервые массовая продукция пло-
довых тел G.lucidum была достигнута в 1971 году Наои,
который для выращивания мицелия использовал банки,
наполненные опилками (Mizuno et al, 1995).
Основными странами производителями плодовых тел
G.lucidum являются Китай, Япония, Корея, Тайвань и Таиланд.
Это обусловлено и климатическими условиями, и тем, что,
несмотря
на
трудоинтенсивную
технологию
культивирования, в этих странах доступна дешевая рабочая
сила, что делает производство плодовых тел высоко-
рентабельным. Мировой объем производства плодовых тел
G.lucidum на 2002 год составляла 4900-5000 тонн, из них 3800
тонн было получено в Китае (Lai et al., 2004).
Культивирование, с целью получения стабильного
урожая плодовых тел, необходимо проводить на органи-
ческих субстратах в помещениях с возможностью регуляции
условий микроклимата,. Субстратами могут быть природная
древесина или другой лигниноцеллюлозный субстрат
(Stamets, 1993). Для получения высококачественных
плодовых тел G.lucidum в странах Юго-восточной Азии
используют древесину дубов (Quercus monogolica Fisch, et
Ledeb., Q. accutissima Carruth., Q. caliprinos Webb., Q. robur L),
японского каштана (Castanea crenata Sieb. et Zucc), японского
абрикоса (Prunus mume Sieb. et Zucc.) и другие твердые
породы древесины (Wasser and Weis, 1997).
Погруженному культивированию мицелиальных грибов
с целью получения биомассы и биологически актив
16
ОРГАНИЗАЦИЯ, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИСТОРИЯ
ных метаболитов уделяется в последнее время большое
внимание. Погруженное культивирование G.lucidum, прежде
всего, направлено на получение полисахаридов и
тритерпенов. Эти метаболиты обладают важными фар-
макологическими свойствами, такими как иммуномоду-
лирующими и противоопухолевыми, поэтому очень важно
разработать технологии производства, направленные на
получения максимального количества этих активных
веществ.
Основное преимущество получения продукта в по-
груженной культуре перед получением плодовых тел
заключается в значительном сокращении сроков культи-
вирования, в 8-10 раз, а также гарантии получения стан-
дартизированного по химическому составу продукта.
Погруженное культивирование обычно проводят в два
этапа: получение посевного материала и собственно этап
ферментации.
В настоящее время основным источником получения
биологически активного материала G.lucidum являются его
плодовые тела, которые выращивают по экстенсивной и
интенсивной технологиям. Обе технологии хорошо
отработаны, масштабированы и многократно опробованы в
культуре. В медицинских целях также используют
вегетативный мицелий G.lucidum, который получают ме-
тодом погруженного культивирования. Обязательным
этапом предшествующим погруженному культивированию и
получению плодовых тел является выращивание культур на
плотных агаризованных средах.
Плодовые тела и мицелий G. lucidum содержат углеводы
(редуцирующие сахара и полисахариды), аминокислоты,
пептиды, белки, тритерпены, включая стероиды, липиды,
алкалоиды, гликозиды, летучие эфирные масла, витамины,
неорганические ионы, такие как магний, марганец,
молибден, кальций, цинк, калий, натрий, железо, медь, сера,
германий (Hobbs, 1995; Wasser&Weis, 1997).
Германий, содержащийся в высоких концентрациях в
плодовых телах G. lucidum, находится в составе орга-
нического соединения (Ge-CH2CH2COOH)203 карбок-
сиэтил-германий-сесквиоксид,
называемого
GE-132.
Германий проявляет противоопухолевую активность,
способствует улучшению циркуляции крови и оказывает
болеутолящее действие (Sato and Iwaguchi, 1979).
Наиболее важными биологически активными соеди-
нениями, выделенными из этого гриба, являются полиса-
хариды и тритерпены. Практически все профилактические и
терапевтические
эффекты,
известные
у
трутовика
лакированного, обнаружены именно у этих двух групп
соединений.
Из G.lucidum выделены более 150 тритерпенов, таких как
ганодеровые кислоты А, В, Ci, С2, Di, D2, Е„ Е2, F, G, Н, I, J, Кь
К2, L, Ma, Mb, Me, Md, Me, Mf, Mg, Mi, Mj, Mk, Mn, N, 0, P, Q, S,
T, U, V, W, X, Y, Z; тридеацетилганодеровая кислота T;
ганодереновые кислоты А, В, С, D, Е, Г, G, Н, I; ганолю-
цидовые кислоты А, В, С, D, Е; люциденовые кислоты А, В, С,
Di, D2, Ei, Е2, F, G, H, I, J, К, L, M; ганодермовые кислоты;
люцидоны А, В, С; ганодералы А и В; эпоксиганодериолы А, В,
С; фураноганодеровая кислота, люсидимолы А и В,
ганодерманондиол, ганодериол F и ганодерманонтри- ол.
(Toth et al., 1983; Hirotani et al., 1985, 1986; Komoda et al., 1985;
Morigawa et al., 1986; Nishitoba et al., 1985, 1987; Lin&Shiao,
1988; Kim &Kim, 1999; Sliva, 2003). Тритерпены, выделенные
из G.lucidum имеют лапостановую основу. Их классификация
основана на числе атомов углерода и степени окисления.
Качественный и количественный состав этих соединений
сильно различается от штамма к штамму и от стадии
онтогенеза (Wasser & Weis, 1999). Тритерпены, выделенные
из
G.lucidum
обладают
многочисленными
фармакологическими
эффектами,
такими
как
противоопухолевое,
противовоспалительное,
про-
тивоаллергенное,
гепатопротекторное,
гиполипидеми-
ческое, противовирусное действия (Hobbs, 1995; Wasser
SWeis, 1997).
Полисахариды, выделенные из плодовых тел, мицелия,
спор или культуральной жидкости G.lucidum, в последнее
время привлекают пристальное внимание ученых, как
перспективные
для
практического
использования
иммуномодуляторы. Различия в биологической активности
полисахаридов связаны с растворимостью в воде, размером
и структурой молекул, степенью разветвленности, системой
связей в основной и боковых цепях. Исследования
показывают, что большинство наиболее активных
полисахаридов из плодовых тел и мицелия G.lucidum имеют
молекулярную массу от 4 х 105 до 1 х 10 Da, существуют
преимущественно в форме водорастворимых D-глюканов со
связями /3-(1 -3) в основной цепи и /3-(1 -6) в боковых и
обладают трехнитевой закрученной вправо спиральной
структурой (Wasser&Weis, 1999; Wasser, 2002; Sliva, 2003).
Помимо /З-Б-глюканов из плодовых тел и мицелия G.lucidum
выделено значительное количество гетерополисахаридов,
обладающих
выраженными
иммуномодулирующими
свойствами. Среди них описаны арабиноксило-/3-0-глюкан,
ксило-/3-0-глюкан, манно-/3-Б-глюкан, ксиломанно-/3-Б-
глюкан, глюкуро- но-/3-0-глюкан (Miyazaki & Nishijima,
1981,1982; Mizuno et al 1995a,b,c; Willard, 1990; Zhang et al,
2000; Bao et al., 2002; Chang & Lu, 2004), маннан, содержащий
L-фукозу и D-кси- лозу, разветвленный D-галактоглюкан и
другие полисахариды. Известно также большое число
биологически
активных
гликопротеинов
G.lucidum,
содержащих D-глю- козу, D-маннозу, D-галактозу, L-фукозу,
ксилозу, уроновые кислоты (Wasser and Weis, 1997; Kavagishi
et al., 1997).
Из G. lucidum выделен белок LZ-8, состоящий из 110
аминокислот с молекулярной массой 12420 Da (Kino et al.,
1989, Tanaka et al., 1989). Показано сходство его строения с
различными участками тяжелой цепи иммуноглобулинов.
Это
соединение
обладает
иммуномодулирующим
действием.
Среди стероидов, обнаруженных в плодовых телах G.
lucidum, описаны эргостерол, ганодестерол и 24-метил-
холеста-7,22-диен-3-/3-ол. Концентрация эргостерола
17
STOMATOLOGIYA
(провитамина D2) в G. lucidum составляет 0,3-0,4%. Эр-
гостерол и 24-метилхолеста-7,22-диен-3-/3-ол являются
основными компонентами стероидной фракции, при этом
количество 24-метилхолеста-7,22-диен-3-/3-ол превосходит
количество эргостерола (Mizuno et al., 1995с).
Активными компонентами, полученными из трутовика
лакированного, являются нуклеозиды и нуклеотиды.
Выделенные из G. lucidum аденозин, гуанозин, гуано-
зинмонофосфат ингибируют агрегацию тромбоцитов и
оказывают болеутоляющее действие (Shimisu et al., 1985;
Kasahara and Hikino, 1987).
В традиционной медицине Востока плодовые тела G.
lucidum используют для лечения многих заболеваний уже
несколько
тысяч
лет.
Первоначально,
G.lucidum
использовали как природное лекарственное средство только
в Китае. Позже его начали применять как поддерживающую
здоровье добавку довольно широко в мире. Наибольшей
популярностью препараты из трутовика лакированного
пользуются в странах тихоокеанского региона, таких как
Япония, Китай, Корея, Тайвань, Таиланд, Малайзия, Вьетнам,
Индонезия. В США биологически активные добавки из
G.lucidum также имеют большой спрос. Из плодовых тел и
мицелия G.lucidum выделено большое количество
биологически активных соединений различной химической
природы, в том числе полисахариды, тритерпены, белки,
аминокислоты, нуклеозиды, алкалоиды, и жирные кислоты.
(Hobbs, 1995; Wasser&Weis, 1997; Тадаши и др., 1998). К
сожалению, не во всех работах авторы указывают из
плодовых тел, базидиоспор или мицелия выделены
соединения и их препараты, обладающие биологической
активностью.
Наиболее важными лечебными эффектами G.lucidum
являются противоопухолевое и иммуностимулирующее
действия, изучению которых посвящено большое коли-
чество работ о профилактическом и терапевтическом
действии метаболитов трутовика лакированного. По ме-
ханизму действия эти соединения можно разделить на две
группы.
Первая группа объединяет вещества, воздействующие
непосредственно на клетки опухоли. Как химиоте-
рапевтические агенты, способные ингибировать развитие
раковых клеток HeLa in vitro описаны терпеноиды,
выделенные из плодовых тел G.lucidum (Wasser & Weis, 1999;
Zhu et al., 2000; Wu et al, 2003). Ганодеровые кислоты R,T, U,
V, W, X, Y и Z, выделенные из мицелия G.lucidum, показали
цитотоксическое действие в отношении клеток гепатомы in
vitro (Hobbs, 1995; Mizuno et al., 1995c). Ганодеровые кислоты
А и С, выделенные из плодовых тел, ингибировали
фарнезилтрансферазу,
фермент,
который
является
ключевым для активации онкогенного белка Ras,
ответственного за клеточную трансформацию. Тритерпены
люсидимолы А и В, ганодерманондиол, гано- дериол F и
ганодерманонтриол, изолированные из спор G.lucidum,
оказывали цитотоксическое действие в отношении клеток
мышиной саркомы Meth-A и легочной кар
циномы Льюиса (Min et al., 2000). Тритерпеновая фракция
G.lucidum значительно ингибировала рост клеток че-
ловеческой гепатомы Huh7. Та же самая тритерпеновая
фракция очень мало влияла на нормальные клетки печени
человека (Kimura et al., 2002; Boh et al., 2004).
Вторая группа включает соединения, противоопухолевое
действие которых основано на иммуностимулирующей
активности.
Противоопухолевой активностью обладают много-
численные как водорастворимые, так и водонерастворимые
полисахариды плодовых тел, базидиоспор и мицелия
G.lucidum, а также их комплексы с белками. Они оказывают
иммуностимулирующее действие, предотвращая развитие
опухоли и метастаз, посредством активации иммунного
ответа организма, стимулируя естественные клетки-киллеры,
Т-лимфоциты, В-лимфоциты и макрофаги (Furusawa et al.,
1992; Zhang&Lin, 1999; Hu&Lin, 1999; Bao et al., 2002;
Zhou&Gao, 2002; Cao&Lin, 2004; Lin&Zhang, 2004). Кроме
того,
большинство
биологически
активных
водорастворимых и водонерастворимых полисахаридов G.
lucidum, адсорбируя канцерогены и ускоряя выведение их из
организма, могут быть классифицированы как пищевые
волокна и, таким образом, быть применимы для
предупреждения рака прямой и толстой кишки (Wasser &
Weis, 1999).
Полисахариды и их комплексы с белками рассматривают
как новый тип противоопухолевых соединений, учитывая,
что их действие основано на повышении иммунитета. В
отличие от противоопухолевых соединений, которые
используют в химиотерапии, эти вещества не токсичны
(Wasser & Weis, 1997). В большинстве работ по изучению in
vivo
противоопухолевого
действия
экстрактов
и
полисахаридных фракций из G. lucidum препараты вводили
животным внутрибрюшинно, что обеспечивало быстрый
доступ действующих веществ в кровоток и тем самым
облегчало обнаружение противоопухолевых эффектов (Ito et
al., 1977; Miyazaki & Nishijima, 1981; Sone et al., 1985;
Maruyama et al., 1989). Критерием противоопухолевой
активности экстрактов плодовых тел и мицелия G. lucidum и
выделенных из них очищенных фракций в большинстве
работ служило отторжение привитой опухоли или
уменьшение ее веса. Практически нет работ, в которых
оценку противоопухолевого действия экстрактов и
полисахаридных фракций из G. lucidum проводили бы с
использованием перорального введения препаратов.
Очевидно, что именно такое введение является более
функциональным и легким для дальнейшего применения
при профилактике и лечении заболеваний. Однако
пероральное
введение
полисахаридных
препаратов
зачастую приводит к ослаблению противоопухолевого
действия или к его полному отсутствию.
Водные экстракты из плодовых тел и мицелия G. lucidum
и выделенные из них полисахариды, включая /J-D-глюканы,
гетерополисахариды, а также их комплексы с белками,
оказывали ингибирующее действие
18
ОРГАНИЗАЦИЯ, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИСТОРИЯ
на рост саркомы 180 у мышей при внутрибрюшинном
введении препарата (Ito et al., 1977; Miyazaki &Nishijima, 1981;
Sone et al., 1985). При внутрибрюшинном введении
полисахарида G1-1, выделенного из плодовых тел G. lucidum,
мышам линии ICR с солидной саркомой 180 в концентрации
5,10 и 20 мг/кг/сут было отмечено торможение роста
опухоли на 42%, 81% и 98,5%, соответственно (Miyazaki
&Nishijima, 1981). Полисахариды, изолированные из мицелия
G. lucidum, в дозировке 50-100 мг/кг ингибировали рост
саркомы 180 на мышах BaIb/с с уровнем торможения роста
опухоли 37,8% - 78,1% (Hu&Lin, 1999). Внутрибрюшинное
введение экзополисахарида G. lucidum, полученного из
культурального фильтрата в дозировке 10 мг/кг показало
торможение роста опухоли на 96,8% (Sone et al., 1985).
Связанные с белком полисахариды, выделенные из
плодовых тел G. lucidum, показали торможение роста
саркомы 180 на мышах Balb/c при введении препарата
внутрижелудочно. Торможение роста опухоли при введении
50,100 и 200 мг/кг/сут препарата было соответственно 35,2%,
45,2% и 61,9% (Сао & Lin, 2004).
Полисахариды, тритерпеноиды, стеролы, лектины и
протеины - наиболее важные биологически активные
вещества, получаемые из грибов. Плодовые тела Гано-
дермы Луцидум пользуются наибольшей популярностью из
всего семейства Ganodermaticae, так как считается, что лишь
они обладают терапевтическим эффектом [15,16,17,18].
В состав Ганодермы Луцидум входят тритерпеноиды, Р-
полиглюканы, аденозин, неорганические компоненты
(германий, марганец, цинк, магний и др.), ненасыщенные
жирные кислоты и незаменимые аминокислоты, огромное
число витаминов (витамины группы В, витамин С и др.) Это
удивительный компонент, который растет только в
Малайзии, потому что именно там достаточная температура
для выращивания и оптимальная влажность, которая
необходима Ганодерме. Содержание в этом грибе германия
и обуславливает его терапевтический эффект.
А какими свойствами обладает германий? Целый ряд
кардиологических эффектов Рейши связывают с высоким
содержанием органического германия. В крови органи-
ческий германий ведет себя аналогично гемоглобину и
участвует в процессе переноса кислорода в тканях орга-
низма. Когда молекула германия попадает в кровь, то она
«проталкивает» шесть молекул кислорода. Тем самым
предупреждается развитие гипоксии на тканевом уровне. И
самое пожалуй главное - уменьшение сердечной
недостаточности - наличие в составе плодовых тел Рейши
нуклеотида аденозина снижает во-первых, агрегацию
тромбоцитов, что приводит к увеличению скорости кро-
вотока и улучшению кровоснабжения тканей и снижению
развития инфаркта и инсульта [20,21,22,23,24,25]
Помимо кардиологических эффектов Рейши обладает
мощным противоопухолевым средством. Так противо-
опухолевый эффект связан с действием [З-полиглюканов,
под действием которых запускается альтернативный путь
активации комплемента и запускается целый каскад реакций,
который начинается с активации макрофагов, то есть первых
защитников в иммунологическом надзоре, который как
известно, представлен макрофагами, цитотоксическими
лимфоцитами и Т-хелперами. После активации макрофагов
происходит усиление формирования цитотоксических Т-
лимфоцитов за счет стимуляции дифференцировки клеток-
предшественников в Т-киллеры. В последнюю очередь
происходит активация Т-хелперов, однако механизм этого до
сих пор неизвестен. Некоторые ученые считают, что это
происходит за счет усиления роли NK-клеточной активности.
Другие считают, что это происходит за счет снижения Т-
супрес- соров [26,27,28,29,30].
Среди терапевтических эффектов противоопухолевая
активность обнаружена у многих видов базодиоми- цетов и
в настоящее время большое количество работ по изучению
Ганодермы посвящено поиску метаболитов, обладающих
противоопухолевой и иммуностимулирующей активностью.
Экстракты ганодермы высоко эффективны при лечении
гепатита В, значительно снижают уровень сахара в крови,
нормализуют как артериальную гипертонию, так и
гипотонию, подавляют агрегацию тромбоцитов, проявляют
высокую активность в отношении высокого круга
грамположительных и грамотрицательных микроорга-
низмов, дрожжей, нитчатых грибов [30,31,32,33,34,35]
Тритерпены обладают адаптогенными и антиаллерги-
ческими свойствами. Метанольные экстракты плодовых тел
действуют на вирусы гепатита С и ВИЧ [36,40,45,50].
Экстракты плодовых тел используются также при
лечении воспаления почек, неврастении, артритов,
бессонницы, язвы желудка и 12-перстной кишки, голо-
вокружений, прогрессирующей мышечной дистрофии
[38,42,46,48].
В настоящее время работ по изучению свойств Гано-
дермы не так много, в стоматологии нами встретились очень
мало количество работ, посвященных Ганодерме.
Так, в частности Qi G с соавтр (2009) [64] проанали-
зировал результаты лечения синдрома Шегрена при
хронических сиалоденитах и пришел к выводу, что
19
STOMATOLOGIYA
Ganoderma Lutcidum оказал существенное влияние на
течение и выздоровление (сокращение сроков лечения,
увеличение количества Т-лимфоцитов, уменьшение площади
лимфоцитарных очагов) больных. Также Hijikata Y с соавтр
(2007) [41] изучил влияние ganoderma Lutcidum на течение
вируса простого герпеса и сделал вывод, что биодобавки на
основе Ganoderma Lutcidum обеспечивают быстрое и
эффективное облегчение от симптомов Gerpes labialis.TeM не
менее, многие вопросы вляиния Ганодермы Луцидум на
течение вирусных заболеваний и в том числе острого
герпетического стоматита остаются нерешенными. Поэтому
считаем
актуальным
провести
сравнительную
характеристику Ганодермы Луцидум в лечении острых
инфекционных заболеваний слизистой оболочки полости рта
у детей, оценить полученные результаты и сделать соответ-
ствующие выводы.
Список литературы
1.
Бондарцева М.А. Определитель грибов России. Пор. Афиллофоровые. вып. 2.
Оанкт-Петербург: Норко, 1998. - 390 с.
2.
Бухало
АС
Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. Киев:
Наукова думка, 1988,- 176 с.
3.
Денисово Н.П. Лечебные свойство грибов. Этномикологический очерк.
Санкт-Петербург: ОПЕМУ, 1998. - 60 с.
4.
Дудко И.А., Бисько Н.А., Бухало A.G., Вассер С.П., Кулиш М.Д., Соломко Э.Ф.,
Шевченко С.В. Высшие съедобные бозидиомицеты в поверхностной и
глубинной культуре. Киев: Ноуково думко, 1983. -311 с.
5.
Зохаров И.А., Касперавичюс М.М. Грибы: в мифах и обрядах. Кроткий очерк
этномикологии // Микологии и фитопатология. 1981. - Т. 15, №1,-С. 66-72.
6.
Захарова И.Л., Косенко Л.В. Методы изучения микробных полисахаридов. —
Киев: Ноуково думко, 1982.-192 с.
7.
Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии.-М.:Из-во МГУ,
1980.280с.
8.
Максимов В.Н., Федоров В.Д. Применение методов математического
планирования эксперимента. М.:МГУ, 1969. - 128 с.
9.
Методы экспериментальной микологии: Справочник 7 Под ред. В.И. Билой.
Киев: Ноуково думко, 1982. - 550 с.
10.
Решетников С.В. Эволюция бесполого размножения высших базидио-
мицетов. Киев: Ноуково думко, 1991. - 187 с.
11.
Еадаши Г, Мелик-Огонджонян Р.Г, Мноцоконян В.А. Изучение и использование
свойств гриба Ganoderma lucidum (Hr.) Korst, в современной медицинской
практике. 77 Альтернативная медицина. 1998, январь-март. - С.29-36.
12.
Шиврина А.Н. Биологически активные вещество высших гри- бов.-Л.:Науко,
1965.-199с.
13.
Шиврина А.Н., Низковскоя О.П., Фалина Н.Н., Моттисон Н.Л., Ефименко О.М.
Биосинтетическая деятельность высших грибов. Л.: Ноуко, 1969.-243 с.
14.
Adaskavec] J.E., Gilbertson Pl. Cultural studies and genetics of sexuality of
Gonodermo lucidum and G. tsugoe in relation to the taxonomy of the G. lucidum
complex 7/Mycologio. -1986. Vol. 78, № 5. - P.694-705.
15.
Adaskaveg J. £, Gilbertson P. L. Basidiospores, pilocystidia, and other basidiocarp
characters in several species of the Gonodermo lucidum complex 7/Mycologio.
1998. V. 80 (4), p. 493-507
16.
Adaskaveg J.E., Gilbertson P.L Vegetative incompatibility between intraspecific
dikaryoticparings of Gonodermo lucidum and G. tsugoe. 77 Mycologio. 1987. - Vol.
79, №4. - P.603-613.
17.
Bao X.E, Fang J.H., Li X.Y Structural characterization and immunomodulating
activity of a complex glucan from spores of Ganoderma lucidum 7/Biosdence
Biotechnology and Biochemistry. 2001. v. 65. p. 2384-2391
18.
Bao X.E, /hen Y, Puan L, Pang J.H. Purification, characterization, and modification
of f lymphocyte-stimulating polysaccharide from spores of Ganoderma lucidum 77
Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 2002. - Vol. 50, № 5. - P.623 629.
19.
Bao X.E, Wang X.S., Dong Q., Fang J.N., Li X.Y. Structural features of
immunologically active polysaccharides from Ganoderma lucidum//
Phytochemistry. 2002. - Vol 59. - P. 175-181.
20.
Berovk M., Habijanic J., lore I., Wraber B., Hodzar D, Boh B. Submerged cultivation
of Ganoderma lucidum biomass and immunostimulatory effects of fungal
polysaccharides 7/ Journal of Biotechnology. 2003. - Vol. 103. - P. 77-86.
21.
Gao LI., Lin I. Regulation on maturation and function of dendric cells Ganoderma
lucidum polysaccharides 7/Immunology Letters. 2002. - Vol. 83, №3.-P 163-169.
22.
Gao LI Lin LB. Regulatory effect of Ganoderma lucidum polysaccharides on cytotoxic
F-lyrnphocytes induced by dendritic cells in vitro 77 Acta Pharmacological Sinica.
2003. - Vol. 24,H
e
4.-P. 312-326.
23.
Gao Q.7., Lin 7.B. Antitumor and antiangiogenic activity of Ganoderma lucidum
polysaccharides peptide 7/Acta Pharmacological Sinica. 2004,- Vol. 25, № 6. -
P.833-838.
24.
Ghang H. M . and But PPH. Pharmacology and Applications of Chinese Materia
Medico. Vol. 1. Singapore: World Scientific Inc, 1986.-521 p.
25.
Ghang YJW., Lu EJ. Molecular characterization of polysaccharides in hot- water
extracts ofGanoderma lucidum fruiting bodies 7/Journal of Food and Drug Analysis.
2004. - Vol. 12, НЧ-Р. 59-67.
26.
Ghen Alice W. Ganoderma lucidum (Reishi): cultivation in North America 77 Science
and cultivation of mushrooms. Hanging, China, 1998. - p. 175-197.
27.
Ghen AJW. Cultivation of medicinal mushroom Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.)
P.Karst
л
(reishi)// International Journal of Medicinal Mushrooms. 1999. - Vol. 1. -
P263-282.
28.
DSouza EM., Merrit G.S., Peddy G.A. Lignin-modifying enzymes of the white rot
basidiornycete Ganoderma lucidum //Applied and Environmental Microbiology.
1999. V. 65. p. 5307-5313
29.
Eo S.K., Kim Y.S., Lee G.K., Han S.S. Antiviral activities of various water and methanol
soluble substances isolated from Ganoderma lucidum //Journal of
Ethnopharmacology. 1999. V.68.p. 139-136
30.
Gao J.J., Min B.S., Ahn E.M., Hakamura H, Lee H.K., Hattori M. Hew triterpene
aldehydes, lucialdehydes A-G, from Ganoderma lucidum and their cytotoxicity
against murine and human tumor cells // Chemical & Pharmaceutical Bulletin.
2002. V. 50. p. 837-840.
31.
Habijanic J., Berovk M., Raber B., Hodzar D., Boh B. Immunostimulatory effects of
fungal polysaccharides from Ganoderma lucidum submerged biomass
cultivaticm/XFood Fechnology and Biotechnology. 2001. V. 39. p. 327-331
20
ОРГАНИЗАЦИЯ, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИСТОРИЯ
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
El-Mekkawy S., MeselhyM.r., Nakamura Н., Tezuka Y, Hattori M., Kakiuchi N.,
Shomotonho K., Kawahata I, Otake T. Anti-HIVandanti-HIV-l-protease substances
from Ganodenna lucidumll Phytochemistry. 1998. - Vol. 49, № 6.-P. 1651-1657.
Eo S.K., Kirn Y.S., Lee C.K., Han S.S. Possible mode of antiviral activity of acidic
protein bound polysaccharide isolated from Ganodenna lucidum on herpes simplex
viruses//Journal of Ethnopharmacology. 2000. - Vol.72, № 3,-P.475-481.
Fang Q.H and, Thong J.J fwo-Stage culture process for improved production of
ganoderic acid by liguid fermentation of higher fungus Ganodenna lucidumll
Biotechnology Progress. -2002a. Vol. 18,№1.-P.51 -54.
Fang Q.-H. and Thong J.-J. Effect of initial pH on production of ganoderic acid
andpolysaccharide by submerged fermentation of Ganodenna lucidum II Process
Biochemistry. -2002b. Vol. 37, № 7. -P 769-774
Fang Q.-H. and Thong J.-J. Submerged fermentation of higher fungus Ganodenna
lucidum for production of valuable bioactive metabolites— ganoderic acid and
polysaccharide // Biochemical Engineering Journal. 2002c. -Vol. 10, № 1. - P61-65.
Fang Q.-H., fang Y.-J. and Thong J.-J. Significance of inoculation density control in
production of polysaccharide and ganoderic acid by submerged culture of
Ganodenna lucidum II Process Biochemistry. 2002. - Vol. 37, № 12.-P. 1375-1379.
Furusawa E., Chou S.G. Furusawa S., Hirazum A., Dang Y. Antitumor activity of
Ganodenna lucidum, an edible mushroom, on intraperitoneally implanted Lewis
lung carcinoma in synergeneic mice // Phytotherapy Research. 1992. - Vol.6. - P.
300-304.
Gao Y, Thou S., Huang Min and Xu Anlong. Antibacterial and antiviral value of the
genus Ganodenna PKarst. species (Aphyllophonnycetideae): a review //
International Journal of Medicinal Mushrooms. 2003. - Vol. 5, №3. - P235-246.
Habijanic J., BerovicM., WraberB., Hodzar D. and Boh B. Immunostimulatory Effects
of Fungal Polysaccharides from Ganodenna lucidum Submerged Biomass
Cultivation // Food Technology and Biotechnology. 2001. - Vol.39, №4. -P. 327-
331.
Hijikata Y, Yamada S, Yasuhara A. Herbal mixtures containing the mushroom
Ganodenna lucidum improve recovery time in patients with herpes genitalis and
labialis./T J Altern Complement Med. 2007 Nov;13(9) :985-987.
Hikino H. and Mizuno F. Hypoglycemic actions of some heteroglycans of
Ganodenna lucidum fruit bodies// Planta Medico. 1989. - Vol. 55.-P.385.
Hikino H, Konno C., Mirin Y, Hayashi F. Oriental medicines. Part 91.Antidiabetes
drugs. Isolation and hypoglycemic activity ofganoderans A and B: glycan of
Ganodenna lucidum fruit bodies//Planta Medico. 1985. - Vol.51.-P339-340.
Hikino H, Ishiyama M., Suizuki Y, Konno C. Mechanisms of hypoglycemic activity
ofganoderan B: glycan of Ganodenna lucidum fruit bodies//Planta Medico.-1989.
Vol.55. -P. 423-428.
Hirotani M., Furuya E, Shiro M. A ganoderic acid derivative, a highly oxygenated
lanostane-type triterpenoid from Ganodenna lucidum// Phytochemistry. 1985. -
Vol. 24, W9.-P. 2055-2061.
Hirotani M., Ino 0., Furuya E, Shiro M. Ganoderic
J S
and R, new triterpenoids from
the cultured mycelium of Ganodenna lucidum // Chemical and Pharmaceutical
Bulletin. 1986.-Vol.34. -P.2282-2285.
Hobbs 6. Medicinal Mushrooms: an Exploration of Tradition, Healing and Gultures.
-Interweave Press, 1995.251 p.
48.
Hsu M.J., Lee
5.5.,
Lin WW Signaling mechanism of enhanced neutrophil
phagocytosis and chemotaxis by the polysaccharide purified from Ganodenna
lucidum II British Journal of Pharmacology. 2003. - Vol. 139.-P. 289-298.
49.
Hu Y.H., Lin ТВ. Effects of polysaccharides isolated from mycelia of Ganodenna
lucidumon HL-60 cell apoptosis // Acta Phannacologica Sinica. 1999.-Vol. 34.-P.
268-271.
50.
Ito H, Naruse S., Shimura K. Studies on antitumor activity of basidiornycete
polysaccharides: VII. Antitumor effect of the polysaccharide preparation from
Ganodenna lucidum on mouse Sarcoma 180 //Mie Medical Journal. 1977. -Vol. 26.-
P.147-152.
51.
Jong S.G., Birmingham J.M. Medicinal Benefits of the Mushrooms Ganodenna II
Advances in Applied Microbiology-1992. - Vol. 37.-P.101-134.
52.
Kavagishi H, Mitsunaga S., Yamawaki M., Ido M., Shimada A., Kinoshita F., Murata
F., Usui E, Kimura A., Chiba S. A lectin from mycelia of the fungus
Ganodennalucidum//Phytochemistry 1997. - Vol. 44.-P.7-10.
53.
Kim
Ш
Hwang H.J., ParkJ.P, Cho Y.J., Song G.H., Yun J.W. Mycelial growth and exo-
biopolymer production by submerged culture of various edible mushrooms under
different media //Letters in applied microbiology. -2002. Vol.34, № 1. - P.56-61.
54.
Kim H.W. and Kim B.K. Biornedkinal tliterpenoids of Ganodenna lucidum (Gurt.: Fr.)
P Karst (Aphyllophoromycetidae) // International Journal of Medicinal Mushrooms.
1999.-Vol. I.-P. 121-138.
55.
Kim B.K., Kim R.S., and Kim H.W. Effects of Ganodenna lucidum on human
leukocytes// Proceedings of the 1st International Symposium on Ganodenna
lucidum in Japan. — Fokyo, 199/.-P8/-89.
56.
Kim D.H., Shim S.B., Kim N.J., Jang I.S. Beta-glucuronidase-inhibitory activity and
hepatoprotective effect of Ganodenna lucidum //Biological and Pharmaceutical
bulletin. — 1999. Vol.22,№2.-P. 162-164.
57.
Kimura Y, Okuda H, Arichi S. Effect of the extracts of Ganodenna lucidum on
bloodglucose level in rats// PI ant a Medico. -1988. Vol. 54. - P.290-294.
58.
Hu H, Aim N.S., Yang X., Lee Y.S., Kang K.S. Ganodenna lucidum extract induces cell
cycle arrest and apoptosis in MOE-/ human breast cancer cell // Intern. J. Gancet.
2002. V. 102. P. 250-253
59.
Jiang, J. Ganodenna lucidum inhibits proliferation of human breast cancer cells by
down-regulation of estrogen receptor and NF-kappaB signaling/J. Jiang, V. Slivova,
D. Sliva Hint J Oncol. 2006. - Vol. 29, N3.-P 695-703.
60.
Kimura Y, Faniguchi M., Baba K. Antitumor and antimetastatic effects on liver of
triterpenoid fractions of Ganodenna lucidum: mechanism of action and isolation of
an active substance // Anticancer Res. 2002. V. 22. P. 3309- 3318.
61.
Sliva D. Ganodenna lucidum (reishi) in cancer treatment // Integr. Gancer (her.
2003. V. 2. P. 358-364.
62.
Sliva D, Labanere G, Slivova V, SedlakM., LloydF.PJr., Ho N.W. Ganodenna lucidum
suppresses motility of highly invasive breast and prostate cancer cells//Biochem.
and Biophys. Res. Commun. 2002. V. 298. P. 603-612.
63.
Lin T B., /hang H. N. Anti-tumor and immunoreguiatory activites of Ganodenna
lucidum and its possible mechanism.// Acta. Pharmacol. Sin. 2004.-25(11).-P. 1387-
1395.
64.
Qi G(1), Hua H, Gao Y, Lin Q, Yu GY. Effects of Ganodenna lucidum spores on
sialoadenitis ofnonobese diabetic mice.//Ghin Med J (Engl). 2009 Mar 5;122(5):556-
560.
21
