Доктор ахборотномаси № 2—2019
100
УДК 612.017+577.153.365: 576.8.097.4
ИCCЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА
НА ГИАЛУРОНИДАЗУ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ У МЫШЕЙ
С. Ф. Сулейманов, Ч. К. Хайруллаев, И. Б. Шукуров, Н. О. Наврузова
Бухарский государственный медицинский институт, Бухара, Узбекистан
Ключевые слова:
гиалуронидаза, мыши–гибриды, клеточный иммунитет, сульфат декстрана, полиоксидоний,
индукция.
Таянч сўзлар:
гиалуронидаза, дурагай сичқонлар, ҳужайравий жавоб, сульфат-декстран, полиоксидоний,
қўзғалиш.
Keywords:
hyaluronidase, mouse–hybrids, cellular immunity, dextran sulfate, polyoxidonium, induction.
В статье представлены данные по экспериментальному изучению иммуностимулирующих свойств по-
лиионов – СД и ПО – у мышей-гибридов. Было установлено, что антиген Нyal. обладал низкой иммуногенно-
стью. Изучение иммуноадъювантных особенностей СД, ПО к Нyal. при исследовании их влияния на клеточ-
ные реакции ГЗТ показало, что только СД индуцировал данный тип ответа у мышей. По своим иммуностиму-
лирующим свойствам в отношении клеточных реакций ГЗТ на Нyal. СД уступал ПАФ.
ТАЖРИБАДА СИЧҚОНЛАРДА ГИАЛУРОНИДАЗАГА НИСБАТАН
ҲУЖАЙРАВИЙ ИММУН ЖАВОБИНИ ЎРГАНИШ
С. Ф. Сулейманов, Ч. К. Хайруллаев, И. Б. Шукуров, Н. О. Наврузова
Бухоро давлат тиббиѐт институти, Бухоро, Ўзбекистон
Мақолада дурагай сичқонларда СД ва ПО полиионларнинг иммунорағбатлантирувчи ҳоссалар тажриба-
да ўрганилиб, унинг натижалари кўрсатилган. Шу аниқландики, Нyal. жуда паст иммуногенлик ҳоссаларга эга
эди. СД, ПО Нyal. га иммуноадъювантлик хусусиятларини ўрганиш жараѐнида ва ушбу моддаларнинг таъси-
рини СТС лик ҳужайравий реакцияларда текширишлар шуни кўрсатдики, ушбу турдаги иммун жавобини
фақат СД қўзғатган. Нyal. га қарши СТСлик ҳужайравий реакцияларда СД ўзининг иммунорағбатлантирувчи
ҳоссалари бўйича ФТА дан паст эди.
THE STUDY OF CELLULAR IMMUNE RESPONSE ON
THE HYALURONIDASE IN THE EXPERIMENT IN MICE
S. F. Suleymanov, C. K. Khayrullayev, I. B. Shukurov, N. O. Navruzova
Bukhara state medical institute, Bukhara, Uzbekistan
In article are presented the data on experimental studying immunostimulating properties of polyions SD and PO
– at mice–hybrids. It was established, that antigene Нyal. рossessed low immunogenicity. Studying immunoadjuvan-
ticity SD, ON to Нyal. at research of their influence on cellular reactions DTH has shown, that only SD induced the
given type of the response at mice. On the immunostimulating to properties concerning cellular reactions DTH on
Нyal. SD conceded CFA (mycobacterial adjuvants).
Известно, что гиалуроновая кислота являясь по своей природе кислым мукополисаха-
ридом, функционирует и участвует в качестве необходимого компонента, который цементи-
рует межклеточный материал в соединительной ткани. Она в большом количестве содер-
жится в синовиальной жидкости, а также является структурным элементом стенки капилля-
ров [1].
Гиалуронидаза (Нyal.) – это фермент из класса лиаз, который, действуя на р-1->4-
связь, деполимеризует и таким образом расщепляет гиалуроновую кислоту [1, 2].
Нyal. продуцируется многими микроорганизмами бактериальной и паразитарной форм
и индуцирует патологические процессы в организме хозяина. Настоящий энзим является
фактором патогенности и агрессивности микробов. Нyal. способствует интродукции и инва-
зии паразитов в инфицированном организме. Нyal. играет важную роль в патогенезе многих
паразитарных болезней [2, 3].
Следовательно, актуальным является исследование влияния Нyal. на иммунную систе-
му животных.
Цель работы
– исследование клеточного иммунного ответа на Нyal. в эксперименте у
мышей.
Оригинальная статья
Доктор ахборотномаси № 2—2019
101
Материал
и
методы.
В экспериментах использовали мышей-гибридов
(CBAxC57Bl/6) F1 с массой 18-24 г. В качестве антигена использовали Нyal. фирмы «Serva
Finebiochem.». Нyal. Растворяли в 0,9% растворе NaCl. Мышей иммунизировали в следую-
щих вариантах: Нyal., Нyal. в комплексе с полиоксидонием (ПО), Нyal. в комплексе с суль-
фатом декстрана (СД) («Sigma Chem. Co»), эмульсией Нyal. в полном адъюванте Фрейнда
(ПАФ, «Сalbiochem») подкожно в основание хвоста, через 1 месяц реиммунизировали мы-
шей. Вторичную иммунизацию проводили аналогично первичной из расчѐта 10 мкг Нyal./
мышь. Доза СД составляла 300 мкг, ПО - 200 мкг на мышь.
Интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) оценивали
общепринятым способом (4) по величине индуцированного Нyal. отѐка подушечек задних
лапок. Оптимальные условия постановки теста на кожную ГЗТ к антигену Нyal. подобраны
заранее в специальных методических экспериментах. Для учета ГЗТ разрешающую микро-
инъекцию Нyal. производили внутрикожно в дозе 50 мкг Нyal. в 20 мкл 0,9% стерильного
раствора NaCl в подушечку левой задней лапки подопытных и контрольных мышей. В пра-
вые лапки вводили 20 мкл NaCl. Через 24 ч с помощью микрометра измеряли толщину ле-
вой и правой лап. За величину отѐка (ВО) принимали разницу между средними величинами
толщины левой и правой лапок. Индекс отѐка (ИО) вычисляли по формуле:
ИО = (ВОоп – ВОк)/ВОоп,
где ВОоп – величина отѐка в опытной группе, ВОк - величина отѐка в контрольной
группе, получавшей вместо антигена Нyal. инъекцию 0,9% раствора NaCl. Клеточную реак-
цию ГЗТ изучали в динамике спустя 1 неделю после первой иммунизации мышей, а также
через 2 и 4 недели после повторной иммунизации. Идентичные эксперименты повторяли 7
раз.
Результаты и их обсуждение.
Результаты исследований, приведенных в табл. 1 и 2,
продемонстрировали, что Нyal. вызывала у мышей очень слабый специфический клеточный
иммунный ответ на всем протяжении эксперимента. В данной группе максимальный уро-
вень Т-клеточной реакции ГЗТ (Т-эффекторы ГЗТ) на Нyal. приходился на 4 нед. вторично-
го иммунного ответа (ИО = 1,6).
Иммунизация мышей комплексом полианионной природы Нyal.+СД приводила к ин-
дукции клеточной реакции, специфичной к Нyal., в 2–2,5 раза более интенсивную, нежели
при введении одного лишь антигена Нyal. После двукратной иммунизации данным ком-
плексом пик Т-клеточной реакции ГЗТ приходился на 2 нед. вторичного иммунного ответа
с ВОоп 0,09 и ИО=8,0.
Совместное введение мышам Нyal. в составе ковалентного комплекса с поликатионом
полиоксидонием (Нyal.+ПО) в дозах 200 мкг/мышь и 300 мкг/мышь не приводило к замет-
ной индукции специфических Т-клеточных реакций ГЗТ на данный антиген (табл. 1 и 2).
Использование в качестве репера положительной реакции ПАФ к Нyal. индуцировало у мы-
шей интенсивную клеточную реакцию, специфичную в отношении Нyal., в динамике как
после первичного, так и вторичного иммунного ответа. При этом происходило повышенное
образование Т-эффекторов ГЗТ в региональной лимфоидной ткани.
В ответ на разрешающую инъекцию Нyal. в подушечку задней лапки развивалась ре-
акция ГЗТ (ИО = 2,0 – 15,0) в 2-8 раза более интенсивная, чем у мышей, иммунизированных
только Нyal. (ИО = 1,0 – 1,6). Пик максимального клеточного ответа ГЗТ приходился на 2
нед. после повторной иммунизации (табл. 2).
Полученные данные свидетельствуют о том, что полианион СД обладает опре-
деленным иммуноадъювантным действием в отношении антигена Нyal., проявившемся в
его влиянии на клеточную иммунную систему мышей.
И что, особенно, важно, Нyal. – очень слабый иммуноген для мышей-гибридов выше-
приведенной линии. В предыдущих исследованиях мы установили, что СД в значительной
С. Ф. Сулейманов, Ч. К. Хайруллаев,...
Доктор ахборотномаси № 2—2019
102
степени активировал гуморальный (антительный) иммунный ответ на Нyal. [3].
Напротив, поликатион ПО в составе комплекса с Нyal. и в различных дозах не был
способен к стимуляции Т-клеточных реакций ГЗТ в эксперименте и по иммуноадъювант-
ным свойствам уступал как СД, так и ПАФ, однако последнему он уступал в ещѐ большей
мере.
Таким образом, в полианион СД превосходил поликатион ПО по способности индуци-
ровать генерацию специфических Т-эффекторов ГЗТ Нyal. СД оказался более эффективным
иммуноадъювантом по отношению к Нyal., однако следует признать, что он по своему им-
муностимулирующему действию заметно уступал ПАФ.
Таблица 2.
Интенсивность реакции ГЗТ, оцениваемая по ВО и ИО.
В скобках указан доверительный интервал при р=0,05.
Таблица 1.
Интенсивность реакции ГЗТ, оцениваемая по ВО и ИО.
В скобках указан доверительный интервал при р=0,05.
№
Срок
Первичный иммунный ответ
Группы
1 неделя
ВО
ИО
1.
10 мкг Нyal.
0,04
(0,02-0,06)
1,0
2.
10 мкг Нyal.,
300 мкг СД
0,08
(0,03-0,13)
3,0
3.
10 мкг Нyal.,
200 мкг ПО
0,03
(0,02-0,04)
0,5
4.
10 мкг Нyal.,
300 мкг ПО
0,03
(0,01-0,05)
0,5
5.
10 мкг Нyal.
в ПАФ
0,17
(0,07-0,27)
7,5
6.
0,2 мл ФР
0,02
(0,01-0,03)
-
№
Срок
Вторичный иммунный ответ
Группы
2 неделя
4 неделя
ВО
ИО
ВО
ИО
1.
10 мкг Нyal.
0,02
(0,01-0,03)
1,0
0,05
(0,02-0,08)
1,6
2.
10 мкг Нyal.,
300 мкг СД
0,09
(0,05-0,013)
8,0
0,07
(0,04-0,10)
1,3
3.
10 мкг Нyal.,
200 мкг ПО
0,03
(0,02-0,05)
2,0
0,02
(0,01-0,03)
-0,3
4.
10 мкг Нyal.,
300 мкг ПО
0,04
(0,03-0,05)
3,0
0,04
(0,02-0,06)
0,3
5.
10 мкг Нyal.
в ПАФ
0,16
(0,07-0,27)
15,0
0,09
(0,05-0,13)
2,0
6.
0,2 мл ФР
0,01
(0 – 0,02)
-
0,03
(0,02 – 0,04)
-
Оригинальная статья
Доктор ахборотномаси № 2—2019
103
Использованная литература:
1. Генералов И.И. Некоторые аспекты иммунного ответа на гиалуронидазу как фактор агрессии микроор-
ганизмов // В кн.: Актуальные вопросы патогенеза и терапии инфекционных и паразитарных болезней.
Л. 1987. С. 10–16.
2. Росин Я.А. Биохимические регуляторы проницаемости // В кн.: Физиология гисто–гематических барье-
ров. М.: Наука. 1977. С. 60-73.
3. Сулейманов С.Ф., Зульфикаров А.Н., Раджабов А.Б., Сулейманова Г.С. Об активации иммунитета на
гиалуронидазу // Инфекция, иммунитет и фармакология. 2017. Спец. вып. Часть 1. С. 182-185.
4. Magiel-Plotkowski M.S., Ferreira Dias M.F.B., Suassuna I. //Rev. Lat.-Amer. Microbiol. 1987. Vol. 29. P. 277-
282.
С. Ф. Сулейманов, Ч. К. Хайруллаев,...
