<Вестниқ,врача
2013,
2
(Doctor cv(tjorotno;nasi
УДК.616.2-036.11
ЗАВИСИМОСТЬ ЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ
ЛИСТЕРИОЗА ОТ ВОЗРАСТА КУЛЬТУРЫ И СРЕДЫ
ВЫРАЩИВАНИЯ
Бухарский медицинский институт
Проведены исследования для определения листерий методом люминесцентной микроскопии. При культивировании
листерий на различных питательных средах получены различные степени свечения. Выявлено, что свечение листерий
зависит от среды выращивания - в мазках, приготовленных из культур, выращенных на специальных питательных средах
наблюдается более интенсивное свечение. В молодых культурах наблюдается более интенсивное свечение, чем в старых
культурах.
Conducted research designed to identiy Listeria monocytogenes by fluorescent microscopy. During the
cultivation of Listeria monocytogenes in differens culture media for different levels of illumination.
Revealed that the luminescence depends Listeria growth medium in spuars prepared from cultures grown
in special culture media is observed a more intensive illumination .In young cultures, there is more intense
fluorescence than the old cultures.
Листериоз - зоонозная малоизвестная инфекция,
которая представляет опасность и для здоровья человека.
От больных листериозом животных люди заражаются
при употреблении инфицированного мяса, молока,
молочных продуктов. В целях недопущения заболевания
людей листериозом медицинские работники совместно с
ветеринарными
специалистами
обязаны
взаимно
информировать о случаях заболевания листериозом
животных и человека, связанных с обслуживанием скота,
организовывать совместные мероприятия по ликвидации
очагов инфекции.
Для прижизненной диагностики листериоза в
лабораторию направляют кровь или сыворотку крови от
больных для серологического исследования; выделения
из половых органов. Лабораторный диагноз на листериоз
можно
поставить
по
результатам
гисто-
люминесцентного исследования взятого материала.
Сущность метода заключается в соединении меченых
флюоресцирующими
красителями
(флюоресцеинтиоционатом) специфических антител с
бактериальными клетками (антигенами), находящимися
в органах и тканях больных листериозом и выявлении
образовавшихся комплексов под люминесцентным
микроскопом.
Целью
наших
исследований
явилось
определение зависимости люминесценции от возраста и
среды выращивания.
Материал и методы. Культуры листерий выращивали
на следующих питательных средах: мясо-пептонный
печеночный агар с 1% глюкозы и 2% глицерина;мясо-
пептонный печеночный бульон с 1% глюкозы,
теллуристо- флоримицино-хлоридная среда.
Предварительно проводили опыты по изучению
активности и специфичности люминес- цирующих
сывороток. Для этого из суточных культур листерий
готовили 1-миллиардную взвесь на физиологическом
растворе по оптическому стандарту мутности. Из этой
суспензии переносили 1 мл в пробирку содержащую 9 мл
физиологического
раствора,
затем
делали
последовательные двукратные разведения до 1:10. Таким
образом, в последующих разведениях мы имели 100000,
10000, 1000, 100, 10 микробных клеток в 1 мл раствора.
Растворы этих разведений центрифугировали и из осадка
готовили мазки. Густые мазки для исследования
непригодны, так как микробы в них могут светиться
менее интенсивно. Мазки готовили средней густоты -
несколько десятков микробов в поле зрения микроскопа.
Мазки маркировали и фиксирован! в течение 15 минут в
стеклянном сосуде со спиртом и ацетоном в
вертикальном положении. После фиксации и испарения
спирта мазки споласкивали физиологическим раствором
хлорида натрия с фосфатным буфером pH 7,4.
Фосфатный буфер pH 7,4 готовили следующим образом:
9,078 г химически чистого однозамещенного фосфата
калия заливали дистиллированной водой до 1 л. Затем
11,876 г двузамещенного фосфата натрия в другой
мерной колбе доводили дистиллированной водой до 1 л.
Полученный буфер добавляли к физиологическому-
раствору в соотношении 1: 50. На слегка подсушенный
мазок
наносили
1
каплю
листериозной
люминесцирующей
сыворотки
с
следующих
разведениях: 1:10; 1:16; 1:8. Мазкие сывороткой
помещачи во влажную камеру - в чашки Петри с влажной
фильтровальной бумагой на дне и выдерживали в
термостате при температуре 37 град, в течение 30 минут.
Затем сыворотку отмывали, погружая мазки в кювету,
содержащую физиологический раствор с фосфатным
буфером pH 7,4 на 20 мин. ютвор в кювете периодически
помешивал! ■ 'сняли
Мансурова M.X., Сагдуллаева Г. У.,
Atnoeea М.А., Ходиева С. С.,
Давлетова С.Б., Муминова А.Ю.,
Суюнова М.Х.
(Вестницврача
2013, № 2
•Doctor a%6orotnomasi
через 10 минут.
Отмытые мазки споласкивали дистиллированной
водой и высушивали на воздухе.
На поверхность мазка наносили небольшую кашпо
глицерина с буфером pH 8.0 , накрывали покровным
стеклом.
На
поверхность
мазка
наносили
нефлуо-
ресцирующее иммерсионное масло и производили
люминесцентную
микроскопию.
Наиболее
яркое
свечение листерий, оцениваемое в 4 креста наблюдается
в мазках окрашенных люминесцентной листериозной
сывороткой в разведении 1:10, при экспозиции про-
крашивания 30 минут.
Специфичность люминесцирующих листериозных
сывороток.
Для определения специфичности использовали
культуры листерий и гетерогенные культуры, которые
выращивались на МППА, ЖСА, МППБ, МПБ в течение
18, 24, 36 и 48 Из гетерогенных культур использовали:
Staphilococcus aureus E.coli
Учет люминесцентной микроскопии показал, что в
мазках культур листерий выявляется специфичность
свечения, оцениваемое в 4 креста, а при просмотре
мазков гетерогенных культур просматриваются темные
контуры палочек со слабым свечением, оцениваемым в 1
крест.
Listeriae monocytogenes 10 мазков +++ Staphiloccus
aureus
10 мазков +
E.coli
10 мазков +
Из штаммов листерий получали 18-, 24-, 36-, 48-, 96
часовые и 15-дневные культуры на МППА с 1% глюкозы
и 2% глицерина, МППБ с 1% глюкозы; теллуристо-
флоримицино- хлоридная среда; желточно-солевой агар;
мясо-пептонный агар. Мазки окрашивали прямым
методом окраски.
часов.
Таблица
№
Среда
Люминэсценция листерий при росте на средах
_________________ через(часов)
П
15
6
12
18
24
36
48 96
дней
1
МППА с 1% глюкозы и 2% глицерина
2
Теллуристофлоримицинохлоридная
3
МППБ с 1% глюкозы
д Контроль: мазки культуры, окрашенные по Г
раму
40
+++ +++
+++
++++
+++
-н-
+
40
+++ +++
+++
+++
+++
++
+
30
Характерные для листерий грамположительные палочки
Яркое зеленое свечение, оцениваемое в 4 креста наблюдается в мазках, приготовленных из 24 часовой культуры,
выросших на МППА с 1% глюкозы и 2% глицерина; в мазках из 6-12 часового роста культур. В мазках, приготовленных
из 36 и выше часовых культур степень свечения уменьшается.
Выводы. Люминесценция листерий зависит от среды выращивания - наиболее интенсивное свечение наблюдается
в мазках, приготовленных из культур, выращенных на теллуристо- флоримициновой среде. Возраст культуры тоже имеет
значение - в молодых культурах свечение более интенсивное, чем в старых.
Литература
1.
Деконенко Е. П., Куприянова Л. В., Головатенко-Абрамов К. В. и др. Листериозный менингит и его осложнения//
Неврологический журнала, 2001; 2: 23-26.
2.
Красовский В. В., Васильев Н. В., Деркач Н. А., 11охил С. И. Итоги пятилетнего изучения листериоза на Украине/,'Журн.
микробиол., 2000: 3:80-85.
3.
В., Маненкова Г. М.. Цвиль Л. А. Эпидемическая ситуация по листериозу в Москве// Эпидемиол. и ин- фекц. б-ни, 2С00;
6:15-1 S.
4.
Родина Л. 3.. Маненкова Г. М., Тимошков В. В. Факторы и пути заражения листериозом населения Москвы / Эпидемиол. и
илфехц. б-ни, 2002; 4: 48-50.
5.
Тартакозский И. С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика'/ Клин, мпкроблол. и
ангямикр. химистер., 2000; 2: 20-30.
6.
Тартековский И. С , Малеев С. В., Ермолаева С. А. Листерии: роль в инфекционной патодогии человека и лабораторная
диагностика. М Медицина для всех; 2СС2. 200 с.
7.
Честнова ' ’ В. Два случая листериоза с необычными клиническими проявлениями. Материалы международной н.учно-
пэактичесхой конференции. Пскров: ВЧИИВ БиМ, 2001; 120 -123.
8.
Чес-чова Т. В. Диагностика листериоза у новорожденных// Эп (лемпол. и инфекц. б-ни. 2001; 3: 45-4’7.
Результаты исследований
