Изучение биомаркеров протеолиза – антипротеолиза в развитии кандидозного стоматита полости рта

Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №3 (102) 113

УДК: 616.31-002.72:5.76.8-612.015.1

ИЗУЧЕНИЕ БИОМАРКЕРОВ ПРОТЕОЛИЗА – АНТИПРОТЕОЛИЗА В РАЗВИТИИ

КАНДИДОЗНОГО СТОМАТИТА ПОЛОСТИ РТА

С.Х. ЮСУПАЛИХОДЖАЕВА, О.Е. БЕКЖАНОВА

Ташкентский государственный стоматологический институт, Республика Узбекистан, г.Ташкент

ОҒИЗ БЎШЛИҒИ ШИЛЛИҚ ҚАВАТИ КАНДИДОЗЛИ СТОМАТИТИНИ РИВОЖЛАНИШИДА

ПРОТЕОЛИЗ – АНТИПРОТЕОЛИЗ БИОМАРКЕРЛАРИНИ ЎРГАНИШ

С.Х. ЮСУПАЛИХОДЖАЕВА, О.Е. БЕКЖАНОВА

Тошкент давлат стоматология институти, Ўзбекистон Республикаси, Тошкент

STUDY OF BIOMARKERS OF PROTEOLYSIS - ANTIPROTELEISIS IN THE DEVELOPMENT OF

CANDIDIASIS STOMATITIS

S.Kh. YUSUPALIKHOJAEVA, O.E. BEKJANOVA

Tashkent State Dental Institute, Republic of Uzbekistan, Tashkent

Протеиназа ва унинг ингибиторлари оғиз бўшлиғи шиллиқ қавати кандидозли

шикастланишларида муҳим роль ўйнайди. Оғиз суюқлигидаги калликреин, прекалликреин, умумий

протеолитик фаолликнинг, катепсин ва эластазанинг ортиши ялиғланиш жараёнинг тизимли

жараёнини бошлайди. а1 - протеиназ ингибитори, а2 – макроглобулин фаоллигини ортиши жараённинг

ўткир кечишида протеиназани фаоллаштиришда компенсатор реакция бўлиб ҳисобланади.

Антипротеиназа ингибиторларининг паст фаоллигида оғиз бўшлиғи шиллиқ қаватида жараённинг

сурункалашув хавфи ортади.

Калит сўзлар

: кандидоз, оғиз бўшлиғи шиллиқ қавати, кандидозли стоматит,биомаркерлар

Proteinases and their inhibitors play an important role in the pathogenesis of Candidiasis oral mucosa.

The increase in kallikrein, prekallikrein, total proteolylytic activity, cathepsin and elastase in the oral fluid ini-

tiates the systemic level of the inflammatory process. Increased activity of a1 - proteinase inhibitor, a2 - mac-

roglobulin is a compensatory reaction to the activation of proteinases in the acute course of the process. With a

low activity of antiproteinase inhibitors, the risk of chronicity of the oral mucosa process increases.

Key words

: candidiasis, oral mucosa, candidal stomatitis, biomarkers

.

Кандидоз полости рта, представляет серьез-

ную проблему в связи с широкой распространён-

ностью и рецидивирующим характером течения

[2,3,6]. По данным литературы оральный канди-

доз составляет около 20% от числа других пора-

жений слизистой рта [3,6,7]. Благодаря наличию

гиф-элементов, которые разрушают эпителий,

дрожжеподобные клетки проникают в глубь тка-

ней, что имеет важное значение в развитии пато-

генеза заболевания [1,2,5]. Протеолилитические

ферменты концентрируется на терминальных

концах гифов и обеспечивает непосредственную

инвазию грибов в ткани человека. Одним из фак-

торов, определяющих патогенность наиболее рас-

пространенных и опасных грибковых культур,

является активность их протеолитических фер-

ментов. Рядом исследователей установлено до-

стоверное увеличение аспартат-протеиназы, фос-

фолипазы и других протеолитических ферментов

у клинических штаммов

C.albicans

. Это может

способствовать гидролитическому расцеплению

жирных кислот в фосфолипидах и разрушению

иммуноглобулинов, тем самым повышая устой-

чивость

C.albicans

к кислородозависимому бакте-

рицидному механизму действия фагоцитов [5,6,8].

Интерес к выяснению патогенеза воспали-

тельного процесса при кандидозном поражении

СОПР обусловлен также и тем, что уровень гриб-

ковой контаминации и состояние микрофлоры

полости рта во многом определяют характер и

тяжесть течения заболевания. Отсутствуют сведе-

ния о роли протеаз-антипротеаз и воспаления в

патофизиологии кандидозного стоматита, о взаи-

мосвязи между протеазной активностью и тяже-

стью процесса на СОПР, о взаимосвязи протеоли-

за-антипротеолиза в системном воспалении, ре-

шение которых, поможет как в понимании пато-

генеза заболевания, так и в дальнейшей тактике

ведения этих больных.

Цель исследования

выявить значение из-

менений состояния показателей протеиназ – ин-

гибиторной системы в развитии кандидозного

поражения слизистой оболочки полости рта.

Материалы и методы исследования.

В

исследованиях приняли участие 76 пациентов

(основная группа) с кандидозным стоматитом из

них: 15 с острым всевдомембранозным кандидоз-

ным стоматитом (В 37.00);20–с острым эритема-

тозным кандидозным стоматитом (В 37.01);17-с

хроническим эритематозным кандидозным стома-

Изучение биомаркеров протеолиза – антипротеолиза в развитии кандидозного стоматита …

114 2018, №3 (102) Проблемы биологии и медицины

титом (В 37.02) и 21 – с хроническим эритематоз-

ным кандидозным стоматитом (В 37.03) и 20 че-

ловек без патологии полости рта составили груп-

пу контроля. Длительность заболевания 5 лет±2,5

года.

Диагноз кандидозного стоматита устанав-

ливали по классификации, принятой Всемирной

организацией здравоохранения, МКБ-10 (1997 г.).

Материалом для исследования являлась ро-

товая жидкость больных кандидозом СОПР. Взя-

тие материала проводили при первом визите, до

начала лечения. Ротовую жидкость получали ме-

тодом сплевывания в стерильные пробирки.

Активность калликреина и содержание пре-

калликреина пределяли методом Пасхиной Т.С. и

Кринской А.В. Общую протеолитическую актив-

ность ротовой жидкости определяли по гидролизу

протаминсульфата. Метод основан на определе-

нии аргинина, отщепившегося от протаминсуль-

фата под действием протеиназ плазмы.

Полную

активность

лейкоцитарной

эластазы, находящейся в комплексе с α1 –

протеиназным ингибитором определяли по

Доценко В.Л., Нешкова Е.А., Яровой Г.А.,

aктивность катепсинов - по Покровскому А.А.,

Арчакову А.И и Любимцевой О.Н. Определение

активности

ингибиторов

протеаз:

α1-

протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина в

биологическом

материале

проводили

унифицированным энзиматическим методом

Нартиковой В.Ф. и Пасхиной Т.С.

Статистическую обработку результатов ис-

следований осуществляли с использованием ком-

пьютерных программы и «Statistic 6». При обра-

ботке результатов исследования вычисляли зна-

чение средней величины и стандартную ошибку

средней. Достоверность различий между группа-

ми оценивали с использованием t-критерия Стью-

дента. Разброс показателей, отображенный в гра-

фиках, представлен с доверительным интервалом

для р<0,05.

Результаты и их обсуждение.

В ходе про-

веденной работы выявлено, что при развитии

кандидозного стоматита наблюдается активация

процессов протеолиза, выраженность активации

зависит от клинической формы и тяжести процес-

са на СОПР. Так, у пациентов с острым пораже-

нием СОПР (острый псевдомембранозный и эри-

тематозный и кандидозные стоматиты) актив-

ность калликреина в ротовой жидкости превыша-

ла значения контроля на 135,80%(Р ≤ 0,05)-

141,97%(Р ≤ 0,05); прекалликреина – 112,02%(Р ≤

0,05) - 110,59%4(Р ≤ 0,05); нейтрофильной эласта-

зы – на 80,0%(Р ≤ 0,05) - 60,0%(Р ≤ 0,05); ка-

тепсина–на 119.35%(Р≤0,05)-132,26% (Р≤0,05);

общая протеолитическая активность ротовой

жидкости возрастала на 140,79%(Р ≤ 0,05) -

152,26%(Р≤0,05). Необходимо отметить, что у

пациентов с хроническим течением патологии

активность протеолитических ферментов в рото-

вой жидкости была значимо (Р ≤ 0,05) ниже соот-

ветствующих величин острых форм заболевания.

При этом при хроническом гиперпластическом и

эритематозном кандидозных стоматитах уровни

увеличения показателей протеолиза относительно

контроля

составили

соответственно

87,65%(Р≤0,05) - 82,09%(Р≤0,05); 48,99%(Р≤0,05)

- 45,00%(Р≤0,05); 40,0 % (Р≤0,05)– 40,0 %

(Р≤0,05); 70,97%(Р≤0,05) - 58,06%(Р≤0,05);

65,79%(Р≤0,05)-51,32%(Р≤0,05). Максимальное

увеличение протеолитических процессов реги-

стрировалось у пациентов с обострением хрони-

ческих форм заболевания, соответствующие уве-

личения

составили

196,91%(Р≤0,05);

162,12%(Р≤0,05); 100,0% (Р≤0,05); 251,61%

(Р≤0,05) и 264,47% (Р≤0,05).

Протеиназы слюны: калликреин, катепсины

в норме характеризует низкий уровень активно-

сти, так как в слюне отсутствуют ингибиторные

протеиназы белковой природы, которые гидроли-

зируют белки подобно трипсину, обладают и эс-

теразной активностью.

Повышение активности нейтрофильной

эластазы в ротовой жидкости является прогности-

чески неблагоприятным маркером активности

воспалительного процесса. Ткани организма за-

щищены от действия протеаз ингибиторами про-

теолиза. Соотношение этих систем взаимопроти-

воположного действия находится в строгом дина-

мическом равновесии и каждой из них отводится

чрезвычайная роль в жизнедеятельности организ-

ма. Ингибиторы протеолиза задерживают преж-

девременную активацию протеаз, защищая ткани

от протеолиза микробными ферментами, регули-

руя свертывающую систему крови и фибринолиз,

влияя на артериальное давление и проницаемость

сосудов. Очевидно, что изучение активности ин-

гибиторов протеолиза поможет составить наибо-

лее

полную

картину

роли

протеиназ-

ингибиторной системы в развитии кандидозного

стоматита полости рта.

У пациентова с кандидозным стоматитом в

ротовой жидкости наблюдается разнонаправлен-

ные изменения активности ингибиторов протеи-

наз: повышение при острых и снижение при хро-

нических формах кандидоза СОПР. При остром

поражении СОПР (острый псевдомембранозный и

эритематозный и кандидозные стоматиты) актив-

ность α1 – ПГ и α2 – МГ увеличены соответ-

ственно на 82,61%(Р≤0,05)-83,33%(Р≤0,05) и

78,26%(Р≤0,05)-66,67%(Р≤0,05); при хроническом

гиперпластическом и эритематозном кандидоз-

ных стоматитах уровни снижения показателей

активности ингибиторов протеиназ относительно

контроля составили контроля 21,74% (Р≤0,05) -

33,33%

(Р≤0,05)

и

17,39%(Р≤0,05)

-

С.Х. Юсупалиходжаева, О.Е. Бекжанова

Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №3 (102) 115

16,67%(Р≤0,05). Максимальная активность сни-

жения ингибиторов протеиназ установлена у па-

циентов с обострением хронических форм забо-

левания-47,83%(Р≤0,05) - 66,67% (Р≤0,05) (табл.

1). Ингибиторы протеолитических ферментов

обеспечивают защиту от протеиназ бактериально-

го происхождения. При остром псевдомем-

бранозном и эритематозном и кандидозных сто-

матитах рост протеолитической активности со-

провождается аналогичным ростом ингибиторов

протеиназ, которые, скорее всего, способны ком-

пенсировать увеличение активности протеиназ

(рис. 1). При хронизации процесса на локальном

уровне отмечается формирование выраженного

дисбаланса в изучаемой системе, который харак-

теризуется дальнейшим ростом протеолитической

активности на фоне снижения ингибиторов про-

теиназ.

Таблица 1.

Показатели каллекреин-ингибиторной системы ротовой жидкости у пациентов

с кандидозным стоматитом

№

Показатель

контроль

В 37.00 кандидозный стоматит

В 37.00

В 37.01

В 37.02

В 37.03

Обострение

хронического

кандидоза

1 Калликреин

мед/мл

1,62±0,07

3,82±0,14

●

3,92±0,16

●

3,04±0,12

◦*

2,95±0,13

◦*

4,81±0,22

●◦*

2 Прекалликреин

мед/мл

34,11±1,67 72,32±2,65

●

71,81±3,01

●

50,82±2,33

◦*

49,46±2,38

◦*

85,41±2,65

●◦*

3

Лейкоцитарная

эластаза нМ/мин

/мл

0,05±0,01 0,09±0,002

●

0,08±0,001

●

0,07±0,001

◦*

0,007±0,001

◦*

0,10±0,03

●◦*

4 Катепсин УЕ/мл

0,31±0,01

0,68±0,02

●

0,72±0,03

●

0,53±0,02

◦*

0,49±0,01

◦*

1,09±0,04

●◦*

5

Общая протео-

литическая ак-

тивность мк

моль/ мин мл

0,76±0,02

1,83±0,04

●

1,92±0,06

●

1,26±0,04

◦*

1,15±0,03

◦*

2,77±0,12

●◦*

6 α 1-ПГ/UE/мл

0,23±0,05

0,42±0,02

●

0,41±0,01

●

0,18±0,006

◦*

0,19±0,002

◦*

0,11±0,09

●◦*

7 α 2-МГ/UE/мл

0,06±0,001 0,11±0,001

●

0,10±0,001

●

0,04±0,001

◦*

0,05±0,001

◦*

0,02±0,001

●◦*

Примечание: ● - Р ˂ 0,05 по отношению к контролю; *- Р ˂ 0,05 по отношению к острой форме; ◦-

Р ˂ 0,05 по отношению к хронической форме

Рис. 1

. Динамика показателей протеиназ-ингибиторной системы ротовой жидкости у пациентов с раз-

личными клиническими течениями кандидозного стоматита СОПР (в% по отношению к контролю)

Изучение биомаркеров протеолиза – антипротеолиза в развитии кандидозного стоматита …

116 2018, №3 (102) Проблемы биологии и медицины

Полученные данные о снижении содержа-

ния антипротеиназного потенциала дают основа-

ние полагать, что при прогрессии хронизации

кандидозного поражения процесса возникает вы-

раженное истощение защитных свойств локаль-

ной антипротеиназной системы, которое может

быть связано как с чрезмерным потреблением ин-

гибиторов протеиназ в очаге воспаления, так и с

уменьшением синтеза и секреции местных инги-

биторов вследствие повреждения слизистой обо-

лочки [4,7,9]. Таким образом, полученные резуль-

таты исследования показателей неспецифических

протеиназ и их эндогенных ингибиторов при кан-

дидозном поражении СОПР в ротовой жидкости

позволяют оценить степень выраженности воспа-

лительного процесса, риск хронизации и обостре-

ния хронического поражения. Таким образом,

уровень реагирования калликреин-кининовой си-

стемы зависит от длительности заболевания. По-

добные изменения активности калликреин-

кининовой системы свидетельствуют об адапта-

ционно-приспособительном характере физиоло-

гических изменений при хроническом течении,

активации системы с адекватным ответом систе-

мы ингибирования при остром поражении с

включением системы «протеиназы — ингибиторы

протеиназ» и срыве адаптационных механизмов

при обострении хронического процесса. В резуль-

тате проведённых исследований установлена

важная роль калликреиновой системы, активно-

сти протеолитических процессов и снижения ин-

гибиторов протеолиза в патогенезе воспаления

инициированного кандидозным поражением

СОПР.

Выводы

.

Протеиназы и их ингибиторы иг-

рают важную роль в патогенезе кандидозного по-

ражения СОПР. Увеличение калликреина, пре-

калликреина, общей протеолилитческая актив-

ность, катепсина и эластазы в ротовой жидкости

инициирует системный уровень воспалительного

процесса. Повышение активности а1 - протеи-

назного ингибитора, а2 - макроглобулина являет-

ся компенсаторной реакцией на активацию про-

теиназ при остром течении процесса. При низкой

активности антипротеиназных ингибиторов воз-

растает риск хронизации процесса СОПР

Литература:

1.

Александрова Н.А. Взаимодействие энтеро-

кокков, кандид и мукозальных эпителиоциттов в

экспериментальных

системах:

Автореф.дис.

к.м.н.Нижний-Новгород, 2017. – 25с.

2.

Довнар А.Г. Кандидоз слизистой оболочки по-

лости рта. Подходы к терапии./ А.Г. Довнар, Л.А.

Казеко, Л.Л. Александрова // Стоматологический

журнал. – 2017. – №2. – С.137–140.

3.

Казеко Л.А. Грибковая инфекция ротовой по-

лости. Часть I / Л.А. Казеко, Л.Л. Александрова,

А.Г. Довнар // Медицинский журнал. – 2014. - №

1. – C. 21-25.

4.

Кочнева Е. В. Определение факторов патоген-

ности грибов Candida albicans и их роль в разви-

тие инфекционного процесса / Е. В. Кочнева //

Актуальные вопросы современной медицины:

сборник научных трудов по итогам межвузовской

ежегодной заочной научно-практической конфе-

ренции с международным участием, Екатерин-

бург, март 2014 г. / ИЦРОН. – Екатеринбург,

2014. – С. 110–113

5.

Николенко М.В., Тимохина Т.Х Новый подход

к изучению биологической активности Сandida

krusei //Вестник Тюменского государственного

университета. 2012. - №6. - С.164 – 170.

6.

Сахарук Н.А., Козловская В.В. Кандидоз:

этиология, клиника, диагностика, лечение. Ви-

тебск, 2010. - 191 с.

7.

Kaplan A.P, Joseph K. Pathogenic mechanisms of

bradykinin mediated diseases: dysregulation of an

innate inflammatory pathway.

Adv Immunol

(2014)

121:41–89. doi:10.1016/B978-0-12-800100-4.00002-

7

8.

Czokato-Plichta M., Skibinska E., Kosiorek P.,

Musial W.J. Kallikrein-kinin system activation and

its interaction with other plasma hemostatic compo-

nents in the coronary artery disease // Rocz. Acad.

Med. Bialymst. – 2011.- V.46. – P. 209-224.

9.

Csuka D, Veszeli N, Imreh E, Zotter Z, Skopal J,

Prohaszka Z, et al. Comprehensive study into the ac-

tivation of the plasma enzyme systems during attacks

of hereditary angioedema due to C1-inhibitor defi-

ciency.

Orphanet J Rare Dis

(2015) 10:132.

doi:10.1186/s13023-015-0351-5.

ИЗУЧЕНИЕ БИОМАРКЕРОВ ПРОТЕОЛИЗА

– АНТИПРОТЕОЛИЗА В РАЗВИТИИ

КАНДИДОЗНОГО СТОМАТИТА

ПОЛОСТИ РТА

С.Х. ЮСУПАЛИХОДЖАЕВА,

О.Е. БЕКЖАНОВА

Протеиназы и их ингибиторы играют важ-

ную роль в патогенезе кандидозного поражения

СОПР. Увеличение калликреина, прекалликреина,

общей протеолилитческая активность, катепсина

и эластазы в ротовой жидкости инициирует си-

стемный уровень воспалительного процесса. По-

вышение активности а1 - протеиназного ингиби-

тора, а2 - макроглобулина является компенсатор-

ной реакцией на активацию протеиназ при остром

течении процесса. При низкой активности анти-

протеиназных ингибиторов возрастает риск хро-

низации процесса СОПР.

Ключевые слова

:

кандидоз, слизистая обо-

лочка полости рта, кандидозный стоматит, био-

маркеры.