ВЕТЕРИНАРИЯ ТИББИЁТИ:
#10(119) 2017
11
ЮҚУМЛИ КАСАЛЛИКЛАР
УДК 619.616.61724.8.559.59
ЕХ.Мамадуллаев, А.Т.Рахимов, М.А.Рўзимурадов,
Ветеринария илмий-тадцицот институты
ТУБЕРКУЛОПРОТЕИН СТАНДАРТИНИНГ
БИОЛОГИК ПАРАМЕТРЛАРИ
Аннотация
В статье приводятся результаты лабораторных испытаний
экспериментальной серии стандарта туберкулопроте- ина,
разработанного в лаборатории по изучению туберкулёза НИИВ
совместно с ООО "Биоветпродукт ".
По результатам исследований препарат стандарт тубер-
кулопротеин является стерильным, нетоксичным, безвредным,
ареактогенным и не оказывает сенсибилизирующего действия на
организм лабораторных животных.
Summary
The article presents the results of laboratory tests of the exper-
imental senes PPD tuberculin diagnostic developed in the laboratory for
the study of the laboratory tuberculosis Scientific-research institute of
veterinary and "Biovetproduct".
According to the research, drug PPD tuberculin is a sterile, non-
toxic, harmless, поп-reactive and did not have a sensitizing effect on the
div of laboratory animals.
Калит сўзлар: штамм, бовис, аллергия, реакция, бактериология, патанатомия, эритма, диагностику.м.
Мавзунинг долзарблиги.
Туберкулёз би- лан
касалланган ҳайвонларни Халқаро Эпизоо- тик Бюро
(ХЭБ) ва Европа Иктасодий Ҳамкорлик Ташкилотлари
(ЕИҲТ) томонидан қабул қилинган услубларга мувофиқ
организмда “Секин типдаги юқори сезувчанлик"ни тери
орасига юбориладиган туберкулин синамалари ёрдамида
аниқлаш қабул қилинган.
Охирги 10 йилликда халқаро ташки доллар то-
монидан туберкулёз билан зарарланган организмни
аниқлаш учун қўлланиладиган ва турли корхоналар
томонидан ишлаб чиқарилаётган ГШД туберкулин
диагностикумларини стандартлаштириш мезонла- ри
қабул
килинди.
Натижада
диагностикумларнинг
касалликни аниклашдаги сифати, махсуслик дара- жаси
такомиллашди. хар хил типдаги парааллергик ва
псевдоаллергик рсакцияларни инкор қилишда муҳим роль
эгаллади.
Шунинг учун республикамизда ишлаб чикарилган
ёки чет давлатлардан келтирилган ПИД туберкулин
диагностикумларини назорат қилиш учун миллий
туберкулопротеин стандарта ишлаб чиқиш ва республика
ветеринария хизматига жорий этиш муҳим аҳамият касб
этади.
Тадқиқот материаллари ва услублари. Ill 1Д
туберкулопротеин стандарта “М.Bovis 8-03” моно-
штаммидан ишлаб чиқарилди. “М.Bovis 8-03” штам- ми
қаттиқ тухумли ёки карто шкали сунъий электив озуқа
муҳитларига кўчирилиб экиб бориш йўли билан
сақланди. Штамм экилган ва озуқа муҳитларида
етиштирилган колониялар хужайраларнинг типик,
культурал, тинкториал ва ферментатив хусусият- лари.
озука мухцтидаги ўсиш тавсифи текшириб борилди. Шу
билан бир каторда штаммнинг тубер- кулиногенлиги.
ифлосланмаганлиги
ва
колония-
нинг
ўсиш
маҳсулдорлиги назорат қилинди. Культурал услуб билан
колонияларнинг ўсиш тезлиги ва ҳосилдорлиги
аниқланди. Бунинг учун электив ва селектив тухум
картошкали Левенштейн-Йенсен, Сотой (суток, синтетик)
ва 4-5% глицеринли МПБ озука мухитларидан
фойдаланилди.
Туберкулинопротеин стандартини тайерлаш учун
бовис штамми аспарагин ва лимон кислотали
модификациялаштирилган Сотой озука мухитидан
фойдаланилди. Бу озуқа муҳита самарали ўсиш
ҳосилдорлигини беради. 1 литр озуқадан 600 мг
туберкулопротеин, 13-14 гр бактериал масса олиш
мумкин. Бундай муҳитда штамм 8 генерацияга кадар
диссоциацияга учрамайди. 45-60 кун давоми- да
термостатда +37° С ҳароратда ўстирилган бактериал
масса автоклавда 2 атм 120° С 1 соат давомида
стерилизация қилиниб фаолсизлантирилди. Культурал
суюқликдан оқсил преципитата центрифуга оркали
ажратиб олинди. Олинган преципитат сувда эриталди ва
олтингугурт нордон аммоний эритмаси ёрдамида қайта
чўктирилди. Сўнг водопровод суви- да туз ва бошқа хил
қўшимчалардан ювиб тозалан- ди. 10% аммиак
эритмасида ишкорсизлантирилди, фильтрланди ва
кадоқланди. Туберкулопротеин стандартини тайёрлаш
учун штаммдан хом ашё ВИТИ туберкулёзни ўрганиш
лабораторияси база- сида тайёрланди. II босқич - хом
ашёдан маҳсулот ишлаб чиқариш ва қадоқлаш
“Биоветпродукт” МЧЖ махсус лабораториясида амалга
оширилди.
Тадқиқот натижалари.
Стандарт туберкулин
сериясини тайёрлаш учун “M.bovis-8-ОЗ” штамми 16-22
кун давомида Левенштейн Йенсен озуқа му хитида
ўстириб олинди ва ҳосил бўлган колониялардан бокс
шароитида суспензия тайёр- ланиб, “Сотой” синтетик
озуқа муҳитига 45-60 кун давомида матрли колбаларда
термостатда +37° С хароратда ўстирилди. Сўнг хосил
бўлган бактериал масса автоклавда 2 атм. +110° С
хароратда стерилизация килиниб фаолсизлантирилди.
Культурал суюқликдан бактериал масса центрифуга
оркали ажратиб олинди. Сўнгра t=+4°C хароратда
ВЕТЕРИНАРИЯ ТИББИЁТИ:
12
#10(119) 2017
ЮКУМЛИ КАСАЛЛИКЛАР
2 хафтагача совутгичда сакланди. Олинган бактери- ал
масса сувда эритилди
ва
кайта олтингугурт
нор-
дон
аммоний эритмаси
ёрдамида
чўктирилди.
Во
допровод
сувида туз ва
бошка
хил қўшимчалардан ювиб тозаланди
хамда 10%
аммиак эритмасида ишқорсизлантирилди
ва
фильтрланди.
Сўнгра
t=+4°C ҳароратда 2
хафтагача
совутгичда
сакланди
Кейинги босқичда стандарт туберкулин
физио
логик
эритма ёрдамида фильтрация орқали
ювиб
олинди ва
флаконларга қадоқланди.
Тайёрланган туберкулопротеиннинг
тажриба
серияси
стандарт кўрсаткичлари - оқсил
микдори.
натрий хлор,
фенол ва глицерин микдори
"Биовст-
продукт” МЧЖ
махсус лабораториясида
текши-
рилди.
Туберкулопротеиннинг стериллиги.
Стерил-
ликни
аниқлаш учун сунъий электив
гўшт-пептон
агар (5-6 см
2
)
ва гўшт пептон
бульонли (100 см
2
)
озука мухитларига 3
тадан намунага
1-1.5 см
2
микдорда намуна экилди ва
термо статда (37-38
С) 10 кун давомида инкубацияда
сакланди
Озика
мухитларида
ёт
микрофлора
ривожланмади.
Инку
бация
даврида
тайёрланган
туберкулопротеиннинг
стериллиги аниқланди
(1-жадвал).
1-жадвалдан кўриниб турибдики. озука мухитларига
экилган
туберкулпротеин намуналари сте- рил экан.
Туберкулопротеиннинг токсик таъсири. Тай-
ёрланган препаратнинг токсик таъсири 3 бош денгиз
чўчқасида синовдан ўтказилди. Бунинг учун денгиз
чўчқаларига 1,0 мл стандарт туберкулин эритмаси тери
остига юборилди ва 10 кун давомида кузатувда сакланди.
Кузатув даврида денгиз чўчқалари орга- низмида ҳеч
қандай клиник ўзгариш кузатилмади (2-жадвал).
2-жадвал.
Туберкулопротеиннинг токсик таъсири
№
Ҳайвон
тури
Бош
сони
Препарат
микдори тери
остига
Кузатув
муддати
Натижа
1
Денгиз
чучқаси
3
1,0
10
Токсик таъсир
йўк
Туберкулопротеиннинг
безарарлиги.
Тубер-
кулопротеиннинг безарарлигини аниқлаш учун 3
бош
денгиз чўчқасида
синов
утказилди. Бунинг
хчун
тайёрланган препаратдан
5,0
мл олинди ва
2500
айл. мин.
тезликда
25
дакиқа
центрифуга
килинди
Центрифутатнинг
юкори
қисми олиб таш- ланди ва
чўкмадан 1.0 мл
дан олиниб,
3 бош денгиз чўчқасига тери
остига
юборилди.
Препарат юбо- рилган ҳайвонлар 42-45
кун
кузатувда сакланди. Кузатув муддати тугагач,
денгиз
чўчкалари патоло- гоанатомик ёрилди ва ички
аъзолари
текширилди. Текшириш натижасида
хайвонлар
ички
аъзоларида хеч қандай патологик
ўзгаршп
кузатилмади.
Патологик намунага Гон усх лида
ишлов
берилди ва Гель-
берг озука муҳитига экилди.
45-60
кун кузатув муд-
датида озуқа мухитида
микроорганизмлар
ўсмади (3-
жадвал).
1-расм. Денгиз
чучкасининг
тери остига
препарат
инъекция
цилиш усули
Туберкулопротеиннинг
безарарлиги
№
Ҳайвон
тури
Бош
сони
Препарат
\шкдори
тери
остига мл
Куза-
тув
муЛ-
гиги
КУН
Пато-
лого-
анатомик
текши
риш
Культ-
урал
текши-
риш
Нати-
жа
1
Денгиз
чуч-
қаси
3
ГО
С-5
Ўзгариш
йўк
Колония
ўсмади Беза-
рар
Туберкулопротеиннинг
реактогенлиги.
Стан-
дартнинг реактогенлиги лирик вазни 400-500 гр бўлган 3
бош альбинос денгиз чўчқаларида текширилди. Бунинг х
чх н денгиз чўчқаларининг қорин девори икки томонидаги
жх н қўл билан юлиб тозаланди. Инъекция жойининг l-
нуқтасига текшири- лаётган туберкулопротеин 500 ТБ 0,1
мл, иккин- чи нхътасига шу дозада назорат туберкулини
тери орасига юборилди Натижаси 24 соатдан сўнг тек-
ширилди. Текшиеишларда туберкулин юборилган
1-жадвал.
№
Озука
муҳити
номи
Муҳит
микдори,
мл
Намуна
микдори,
мл
Намуна
сони
Инкубация
даври (кун)
Стерил-
лиги
1
Гўшт
пептон
агар
5-6
1-1,5 мл
3
10
Микро-
флора
ўсмади
2
Гул гт
пептон
бульон
100
1-1,5 мл
3
10
Микро-
флора
ўсмади
3-жадвал.
Туберкулопротеиннинг стериллиги
ВЕТЕРИНАРИЯ ТИББИЁТИ:
#10(119) 2017
13
жойларда ҳеч қандай реакция кузатилмади (4-жад- вал).
2-расм. Денгиз чўчқаси терисида
реактогенликни аницлаш усули
4-жадвал.
Туберкулопротеиннинг реактогенлигини тек-
шириш натижалари
№ Ҳайвон
тури
Аллерген
тури
Бош
сони
Инъек-
ция
усули
Препа-
рат
миқдо-
ри
Куза-
тув
муд-
дати,
соат
Наш-
жа
1
Денгиз
чўчқаси
Тек-
шири-
лаётган
туберку-
лин
3
Тери
орасига
500 ТБ
0,1 мл
24
ареак-
тоген
2
Денгиз
чўчқаси
Назорат
туберку-
лини
3
Тери
орасига
500 ТБ
0,1 мл
24
ареак-
тоген
Туберкулопротеиннинг
сенсибилизациялаш
хусусияти.
Туберкулопротеиннинг сенсибилизациялаш
хусусияти
илгари
ҳеч
қандай
тажрибаларда
фойдаланил.маган усулда аниқланди. Бунинг учуй соглом,
лирик вазни 350-400 гр 6 бош альбинос денгиз чўчқалари
танлаб олинди. Денгиз чўчқаларидан 3 бошига 0,1 мл 500
ТБ дозада туберкулопротеин препарати ҳар 5 кун оралиқ
билан 3 марта қорин девори тери орасига юборилди.
Қолган 3 бош ҳайвонга назорат сифатида препарат 1 марта
юборилди. Ҳар икки гуруҳ денгиз чўчқалари бўёк билан
белгиланди ва бир қафасда сақланди. Охирги инъекциядан
сўнг 15 кун ўтгач, 6 бош тажриба ва назоратдаги
ҳайвонларга юқорида таъкидланган усулда туберкулин
юборилди. Реакция натижаси 24 соатдан сўнг текширилди
ва инъекция жойида ҳеч қандай реакция йўқлиги
аниқланди.
Бу
туберкулин
диагностику
мининг
сенсибилизациялаш хусусияти йўқлигини билдирди (5-
жадвал).
5-жадвал.
Туберкулопротеиннинг
сенсибилизациялаш
хусусиятини ўрганиш натижалари
№
Ҳа
йв
он
ту
ри
Ал
ле
рг
ен
ту
ри
Бо
ш
с
они
Ин
ъек
ци
я
ус
ул
и
Пр
епа
ра
т
м
иқ
до
ри
Ин
ъек
ци
я
со
ни
На
тиж
а
1
Денгиз
чўчқаси,
тажриба
Текшири-
лаётган
стандарт
туберку-
лин
3
Тери
орасига
500 ТБ
0,1 мл 3 марта
Реак-
ция
йўқ
2
Денгиз
чўчқаси,
назорат
Назорат
туберку-
лини
3
Тери
орасига
500 ТБ
0,1 мл 1 марта
Реак-
ция
йўқ
Хулоса.
Шундай қилиб, ишлаб чикарилган ту-
беркулин диагностикумининг тажриба сериясининг
биологик параметрларини тадқик, килиш ишлари орқали
препарат стерил, токсик хусусиятга эга эмас, лаборатория
ҳайвонлари организми учун безарар, реактоген ва
сенсибилизациялаш хусусиятига эга эмаслиги аниқланди.
Фойдаланилган адабиётлар рўйхати:
1.
Басыбеков С.Д. О неспецифических туберкулиновых
реакциях у крупного рогатого скота в хозяйствах Южного
Казахстана
И
Роль ветеринарной науки в развитии
животноводства
/
Матер, межд. наук, произв. конф.
КазНИВИ. -
Алматы, 2000. - С. 68-70.
2.
Букова. Н.К. Питательная среда ВКГ для ускоренного
выращивания микобактерий
//
Ветеринарная патология. 2004.
-№ 1-2 (9).
-
С. 107-110.
3.
ГОСТ 32306-2013 Туберкулины очищенные (ППД)
для животных. Технические условия ГОСТ 32306-2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ ТУБЕРКУЛИНЫ
ОЧИЩЕННЫЕ (ППД) ДЛЯ ЖИВОТНЫХ Технические
условия Purified tuberculins (PPD) for animals. Specifications.
4.
Ерошенко. Л.А. Использование стандартных сред для
выращивания микобактерий
И
Матер. Всерос. науч; конф, по
проблемам хронических инфекций.
-
Омск, 2001.-С. 161-163.
5.
Зубехина Л.И., Зубехин А.В., Информативность
аллергических реакций на введение туберкулина и си-
мультанной пробы реагирующим животным
И
Роль вет.
науки в разе, жив-ва
/
Матер, межд. науч, произ. конф.
КазНИВИ. - Алматы, 2000. - С. 108-109.
6.
Ибраев А.О., Керимжанова Б.Ф. Неспецифические
реакции на туберкулин для млекопитающих у крупного
рогатого скота в Акмолинской области // Роль вет.науки в
разв. жив-ва
/
Матер, межд. науч, произ. конф. КазНИВИ. -
Алматы, 2000. - С. 110-112,
7.
“Ҳайвонлар туберкулёзининг диагностикаси бўйича
йўриқнома”.
-
Тошкент, 2011. - Б. 30.
ЮҚУМЛИ КАСАЛЛИКЛАР
мит
