196
УДК 619.616.615.724.8.559.59
ИЗУЧЕНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ
ПРЕПАРАТА «РИФИЗОСТРЕП» ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ
МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА
Г. X. Мамадуллаев,
доктор ветеринарных наук
У. М. Файзиев,
соискатель
О. К. Джуракулов,
докторант
А. Т. Тухлиев,
соискатель
Научно-исследовательский институт ветеринарии, пос. Тайляк, Республика Узбекистан
Резюме. В
статье приведены результаты лабораторных испытаний нового противотуберкулезного
препарата «Рифизостреп». Препарат испытан прямым и непрямым бактериологическими методами, а также
в организме морских свинок, зараженных микобактериями туберкулеза типа
М. tuberculosis.
Результаты
опытов обобщены по данным бактериологических и патологоанатомических исследований и были под-
тверждены достаточной антимикробной эффективностью препарата «Рифизостреп» против микобактерий
туберкулеза.
Ключевые слова:
рифизостреп, микобактерия,
М. bovis, М. tuberculosis,
вирулент, бактерицид, ту-
беркулинизация, патанатомия, бактериология, аллергия, диагноз.
Summary.
The results of article is a laboratory researches of a new antituberculous drug «Rifizostrep». The
drug is tested direct and indirect by bacteriological methods and on organism of common porpoises infected
mycobacterium tuberculosis of type
M. tuberculosis.
Results of experiences are generalised according to bacte-
riological and pathanatomical researches and was is reached sufficient antimicrobial efficiency of a drug «Rifi-
zostrep» against mycobacterium tuberculosis.
Keywords:
Rifizostrep, mycobacterium,
M. tuberculosis, M. bovis, M. tuberculosis,
virulentus, bactericid,
bacteriological, allergy, diagnosis.
Введение.
Туберкулез представляет большую угрозу человечества с древних времен. По этой причине
туберкулез отнесен в число глобальных социально значимых заболеваний
[6].
Последние годы существует проблема моно- и полирезистентности микобактерий туберкулеза по
отношению к
различным
лекарственным препаратам, что приводит к затруднению их лекарственной
терапии. Длительное
и
нерациональное применение бактериальных препаратов, а также комбинации
туберкулеза с ВИЧ-инфекцией могут приводить к различным осложнениям. Причина распространения
туберкулеза в большей степени связана с возрастанием резистентности и мультирезистентности
микобактерий
М. tuberculosis
по отношению к одному или нескольким лекарственным средствам
(изониазид, рифампицин) [2, 4].
В связи с вышеизложенным создание новых комбинированных лекарственных средств против
возбудителей туберкулеза является актуальной проблемой современной медицины и ветеринарии [1]. В
данном направлении учеными лаборатории туберкулеза Узбекского научно-исследовательского института
ветеринарии создана новая комбинированная форма противотуберкулезного препарата, способствующая
повышению воздействия по отношению к моно- и полирезистентным микобактериям, а также снижению их
отрицательного действия на организм. На основе известного противотуберкулезного препарата - гидразида
изоникотиновой кислоты (изониазид), создана его комбинированная форма.
Целью
настоящей работы было установление эффективности разработанного препарата при
in vitro
и
in
vivo
экспериментах [3].
Материалы и методы.
Препарат «Рифизостреп» была исследована на предмет ее действия на штаммы
М. bovis
и
М. tuberculosis.
Колонии штаммов микобактерий исследованы
непосредственным и
посредственным
бактериологическим методом [5].
Для этого были приготовлены 0,5- и 1%-е
стерильные
растворы препарата. На приготовленных
концентрациях препарата в течение
определенного
времени были инкубированы
197
бактериальные колонии
М. bovis
и
М. tuberculosis,
которые далее обрабатывались методом Гон-Левенштейн
- Сумиоши и после очищения от остатков препарата были посеяны в стерильные питательные среды
Гельберга
(непосредственный метод).
При
посредственном методе
проводили пересев предварительно
выделенных культур микобактерий туберкулеза на среды, содержащие лекарственный препарат. В качестве
контроля использовали
М. bovis
и
М. tuberculosis
на питательной среде, не содержавшей препарат.
Наблюдения проводилось в течение 90 дней.
Для изучения противотуберкулезной активности препарата в живом организме
(in vivo)
проведены
эксперименты на 15 морских свинках. Перед началом опыта морских свинок исследовали на туберкулез
аллергически с ППД-туберкулином. Морским свинкам подкожно был введен ППД-туберкулин в дозе 0,1
мл/25 ТЕ. Результаты реакции были определены через 48 ч при помощи кутиметра. Для эксперимента
подобрали животных, не реагирующих на аллерген (табл. 1).
Таблица 1.
Схема опыта по изучению специфической активности препарата «Рифизостреп» на
морских свинках
№ гр.
Кол-во
голов
Вид микобактерий
Доза заражения
мг/кг
Доза препарата
мг/кг
Способ введения
препарата
Интервал
применения
1
9
М. tuberculosis
№ 7880
0,03
10
«Рифизостреп»
подкожно
5 дней
2
3
М. tuberculosis
№ 7880
0,03
10
Изониазид
Per os
5 дней
3
3
М tuberculosis
№ 7880
0,03
Контрольная
группа
Без препарата
—
После этого всех опытных и контрольных групп морских свинок заражали штаммом
М. tuberculosis
№
7880 подкожно в дозе 0,03 мг/кг. На 24-й день после заражения через каждые 5 дней 1 раз животным
подкожно вводили рифизостреп. Опыты продолжались 90 дней.
Результаты исследований.
Результаты определения антибактериальной активности препарата
«Рифизостреп» бактериологическим методом приведены в табл. 1.
В непосредственном методе
исследований живые колонии микобактерии, обработанные препаратом
и бактериоскопически окрашенные по методу Циля - Нильсена в мазках под микроскопом, не обнаружены
палочки микобактерий (увеличение 12 х 90 и 12 х 100). Обнаружены только деструктурные элементы клеток,
окрашенные в синий цвет, тогда как в контрольных мазках (без препарата) обнаружены туберкулезные
палочки, окрашенные в ярко красный цвет.
Таблица 2.
Антибактериальная активности препарата «Рифизостреп»
№
Вид МВТ
Конц,
препарата,
%
Срок
инкубации
Результат
№
Вид
микобактерий
Кони,
препарата, %
Срок
инкубации
Результат
Непосредственный метод
Посредственный метод
1
М. tuberc.
№
7880
М. bovis
8-03
0,5
30 мин.
1 ч
3 ч
1 сут
-
1
М. tuberc.
№
2520,
М. bovis
149
0,5
0
-
2
М. tuberc.
№
7880
М. bovis
8-03
1.0
30 мин.
1 ч
3 ч
1 сут
-
2
М. tuberc.
№ 2520,
М. bovis
149
1,0
0
3
М. tuberc.
№ 7880
М. bovis
8-03
Конт-
рольная
—
+
3
М. tuberc.
№
2520,
М. bovis
149
Конт-
рольная
—
+
Примечание. - (минус)
-
отсутствие роста колонии микобактерий; (плюс). - рост колонии микобактерий.
198
При
посредственном методе
обработке колоний микобактерий проводили пересев предварительно
выделенных культур микобактерий туберкулеза на среды, содержащие лекарственный препарат. Как видно
из данных табл.
1,
культуры микобактерий, посеянные на питательные среды с добавлением 0,5- и 1,0%-й
концентрации препарата, ни в одном образце в пробирках рост микобактерий туберкулеза не наблюдался.
Проведенные исследования свидетельствуют о том, что препарат «Рифизостреп» оказывает положительное
бактерицидное и бактериостатическое действие на микобактерии вирулентного туберкулеза.
Далее нами проведены эксперименты по изучению противотуберкулезной активности препарата
«Рифизостреп» на 15 морских свинках (табл. 2). Через 24 дня после заражения животным 1-й группы из 9
голов парентерально вводили препарат, 2-й опытной группе из 3 голов перорально применяли препарат
изониазид, 3-я группа контрольно-зараженные (см. табл. 1).
После завершения срока исследований были проведены вскрытия всех морских свинок и исследованы
патологоанатомически [3].
При вскрытии морских свинок, зараженных
М. tuberculosis
№ 7880, с последующим их лечением
препаратом «Рифизостреп» при забое во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружены
видимые патологические изменения специфичные для туберкулеза.
При забое морских свинок, зараженных
M.tuberculosis
№ 7880, с последующим их лечением препаратом
«Изониазид», в легких и печени морских свинок обнаружено увеличение органа в объеме, 2-3 белых
некротических очагов, в других паренхиматозных органах и лимфатических узлах заметных патологических
туберкулезных изменений не обнаружено.
При исследовании внутренних органов контрольной группы обнаружены казеознонекротические очаги
тотального характера. Так же обнаружено увеличение объема печени в 2-3 раза, а паренхима на 50 %
подвергалась казеозному некрозу. В селезенке и почках обнаружены аналогичные изменения.
Заключение.
В
in vitro
опытах против возбудителей туберкулеза препарат «Рифизостреп» обладал
высокой бактериостатической и бактерицидной активностью.
Установлено, что у зараженных туберкулезом морских свинок после применения препарата
«Рифизостреп» в организме туберкулез не развивается.
В контрольной группе морских свинок, зараженных возбудителем туберкулеза, не получивших препарат
«Рифизостреп», наблюдалось выраженное диффузное развитие казеознонекротического очага туберкулеза.
Препарат «Рифизостреп» по сравнении с изониазидом проявляет ярко выраженную антимикробную
активность, что открывает перспективы продолжения исследований в данном направлении.
Список использованных источников
1.
Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны
в
ветеринарии / В. Ф. Ковалев, И. Б. Волков [и др.]. -
М.: АГРОПРОМИЗДАТ, 1988.-222 с.
2.
Лечение туберкулеза: рекомендации для национальных программ. - ВОЗ. - Женева, 1998. - Пер. с
англ. - 88 с.
3.
Рекомендация по лабораторной диагностике туберкулеза.
-
Омск, 1988. - 64 с.
4.
Рекомендации по лечению резистентных форм туберкулеза. - ВОЗ. - Женева, 1998. - Пер.
с
англ. - 47
с.
5.
Ященко, Т. Н., Мечева И. С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе
/
Т. Н.
Ященко, И. С. Мечева. - М.
:
Медицина, 1973.
-
С. 53-77.
6.
Espinal, М. A. The global situation of MDR-TB
//
Tuberculosis. - 2003. - Vol. 83. - P. 44-45.
