DOI: 10.30906/0023-1134-2021-55-6-23-27
© Êîëëåêòèâ àâòîðîâ, 2021
Ø. À. Øîìóðîòîâ
1,*
, Î. Ð. Àõìåäîâ
1
, À. Ñ. Òóðàåâ
1
, Ã. Õ. Ìàìàäóëëàåâ
2
ÏÐÎÒÈÂÎÒÓÁÅÐÊÓËÅÇÍÀß ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÜ È ÔÀÐÌÀÊÎÊÈÍÅÒÈÊÀ
ÏÎËÈÌÅÐÍÛÕ ÊÎÍÚÞÃÀÒÎÂ ÈÇÎÍÈÀÇÈÄÀ È ÝÒÀÌÁÓÒÎËÀ
1
Èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÀÍ ÐÓç, Óçáåêèñòàí, 100170, Òàøêåíò, óë. Ìèðçî Óëóãáåêà, 83.
2
Íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò âåòåðèíàðèè Óçáåêèñòàíà, Óçáåêèñòàí, 140104, Ñàìàðêàíä.
* å-mail: hsha@mail.ru
Âçàèìîäåéñòâèåì äèàëüäåãèä-ïðîèçâîäíîãî ïîëèãàëàêòóðîíîâîé êèñëîòû ïîñëåäîâà-
òåëüíî ñ ãèäðàçèäîì èçîíèêîòèíîâîé êèñëîòû è ýòàìáóòîëîì ïîëó÷åí êîíúþãàò, ñîäåð-
æàùèé ãèäðàçèä èçîíèêîòèíîâîé êèñëîòû, ïðèñîåäèíåííûé ïîñðåäñòâîì àçîìåòèíîâîé
ñâÿçè (20
±
2 ìîëü %), è ýòàìáóòîë, ïðèñîåäèíåííûé èîííîé ñâÿçüþ (25
±
2 ìîëü %). Â
óñëîâèÿõ
in vitro
íà êëèíè÷åñêèõ øòàììàõ
M. tuberculosis
è H37Rv, à òàêæå â óñëîâèÿõ
in
vivo
íà øòàììàõ Humanis è Bovis ïîëó÷åííûé êîíúþãàò ïîêàçàë âûðàæåííóþ ïðîòèâî-
òóáåðêóëåçíóþ àêòèâíîñòü. Ïðè ââåäåíèè êîíúþãàòà êðûñàì òåðàïåâòè÷åñêàÿ êîíöåí-
òðàöèÿ àêòèâíûõ âåùåñòâ (èçîíèàçèäà è ýòàìáóòîëà) â êðîâè ñîõðàíÿëàñü äîëüøå, ÷åì
èõ íèçêîìîëåêóëÿðíûõ àíàëîãîâ, ÷òî óêàçûâàåò íà âîçìîæíîñòü ïðîëîíãèðîâàíèÿ èõ
ïðîòèâîòóáåðêóëåçíîé àêòèâíîñòè.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ïîëèãàëàêòóðîíîâàÿ êèñëîòà; ãèäðàçèä èçîíèêîòèíîâîé êèñëîòû;
ýòàìáóòîë; êîíúþãàò; ïðîòèâîòóáåðêóëåçíàÿ àêòèâíîñòü.
 ñâÿçè ñî ñïåöèôèêîé ëå÷åíèÿ òóáåðêóëåçà — êîì-
ïëåêñíîé òåðàïèåé (îäíîâðåìåííî íåñêîëüêèìè ïðî-
òèâîòóáåðêóëåçíûìè
ïðåïàðàòàìè),
äëèòåëüíîñòüþ
ëå÷åíèÿ, íåîáõîäèìîñòüþ íàçíà÷åíèÿ ìíîãîêðàòíûõ
ïðèåìîâ áîëüøèõ äîç ìåäèêàìåíòîâ è âîçíèêíîâåíèå
èç-çà ýòîãî òîêñèêî-àëëåðãè÷åñêèõ îñëîæíåíèé —
î÷åíü âàæíî íàéòè ñïîñîá ñíèæåíèÿ äîçèðîâêè ïðîòè-
âîòóáåðêóëåçíûõ ïðåïàðàòîâ. Îäíèì èç ïóòåé óëó÷øå-
íèÿ óñëîâèé ëåêàðñòâåííîé òåðàïèè ÿâëÿåòñÿ ñîçäàíèå
è ïðèìåíåíèå ïîëèìåðíûõ ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûõ
ïðåïàðàòîâ ïðîëîíãèðîâàííîãî äåéñòâèÿ. Òàêèå ïðå-
ïàðàòû íå òîëüêî ìîãóò óâåëè÷èòü ñðîêè äåéñòâèÿ òó-
áåðêóëîñòàòèêîâ, íî è óìåíüøèòü èõ ïîáî÷íûå ýôôåê-
òû, ñíèçèòü îáùèé ðàñõîä ïðåïàðàòà. Îäíèì èç ïóòåé
ïîëó÷åíèÿ òàêèõ ìàêðîìîëåêóëÿðíûõ ëåêàðñòâåííûõ
ñèñòåì ÿâëÿåòñÿ âêëþ÷åíèå â ìàêðîìîëåêóëû ïîëèìå-
ðà ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûõ ïðåïàðàòîâ [1 – 3].
 ðàáîòå ñèíòåçèðîâàí ïîëèìåðíûé êîíúþãàò ïîëè-
ãàëàêòóðîíîâîé êèñëîòû (ÏÃÊ) ñ ïðîòèâîòóáåðêóëåç-
íûìè ïðåïàðàòàìè ãèäðàçèäîì èçîíèêîòèíîâîé êè-
ñëîòû (ÈÍÊ) è ýòàìáóòîëîì (ÝÁ) [4, 5]. Ñèíòåç îñóùå-
ñòâëÿëè â íåñêîëüêî ñòàäèé, êîòîðûå ïðåäñòàâëåíû íà
ñõåìå.
Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ õèìè÷åñêàÿ ÷àñòü
 ðàáîòå èñïîëüçîâàíû ãèäðàçèä èçîíêîòèíîâîé êè-
ñëîòû (ÈÍÊ), ýòàìáóòîëà äèãèäðîõëîðèä (ÝÁ) (Becton,
Dickinson and Company Sparks), êîììåð÷åñêèé ïåêòèí
èç êîæóðû öèòðóñîâûõ (Sigma-Aldrich, ÑØÀ) ñî ñòå-
ïåíüþ ýòåðèôèêàöèè 75 %.
ÓÔ-ñïåêòðû ðåãèñòðèðîâàëè íà ñïåêòðîôîòîìåòðå
UV 1280 ïðîèçâîäñòâà ôèðìû Shimadzu (ßïîíèÿ), â
êâàðöåâûõ
êþâåòàõ
òîëùèíîé
1 ñì,
â
îáëàñòè
200 – 500 íì â âîäíûõ ðàñòâîðàõ. ÈÊ-ñïåêòðû çàïèñû-
âàëè íà ïðèáîðå Bruker Vektor-33, â äèàïàçîíå äëèí
âîëí 500 – 4000 ñì
– 1
â òàáëåòêàõ ñ KBr.
Ïåðèîäàòíîå îêèñëåíèå ÏÃÊ. Îëèãîìåð ÏÃÊ
(2 ììîëü) ðàñòâîðèëè â áóôåðíîì ðàñòâîðå (20 ìë) ñ
ðÍ 4,5, äîáàâëÿëè NaIO
4
(2 ììîëü). Ðåàêöèîííóþ
ñìåñü ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå 2 ÷ ïðè 25 °C. Ïðîäóê-
òû ðåàêöèè îñàæäàëè àöåòîíîì. Îñàäîê ïðîìûâàëè
75 % âîäíî-ñïèðòîâûì ðàñòâîðîì äî îòðèöàòåëüíîé
ðåàêöèè íà èîíû IO
4
–
è IO
3
–
. Âûõîä 85 %. Ñòåïåíü
îêèñëåíèÿ 20 – 25 ìîëü % (îïðåäåëÿëè ñïåêòðîôîòî-
ìåòðè÷åñêèì (
l
max
222 íì) è éîäîìåòðè÷åñêèì ìåòî-
äàìè).
Ì
~ 14 êÄà. Ïîëó÷åííûå äèàëüäåãèä-ïðîèçâîä-
íûå ÏÃÊ â òîò æå äåíü èñïîëüçîâàëè äëÿ êîíúþãàöèè
ñ ÈÍÊ. Â ÈÊ-ñïåêòðå ïðèñóòñòâóåò ïîëîñà ïîãëîùå-
íèÿ, õàðàêòåðíàÿ äëÿ äåôîðìàöèîííûõ êîëåáàíèé
ýôèðíûõ
êàðáîíèëüíûõ
ãðóïï
(R-CO-R),
ïðè
1746 ñì
– 1
. Ïîëîñû ïîãëîùåíèÿ ïðè 1612 è 1616,
1614 ñì
– 1
(îêèñëåííûå ôîðìû) îòíîñÿòñÿ ê êîëåáàíè-
ÿì ñâîáîäíîé ãðóïïû ÑÎÎ
–
.
Êîíúþãàò ñ ÈÍÊ. Ê ðàñòâîðó îêèñëåííîé ÏÃÊ
(2 ììîëü), ñîäåðæàùåé ~ 20 ìîëü % îêèñëåííûõ
çâåíüåâ, â âîäå (15 ìë) äîáàâëÿëè ÈÍÊ (0,4 ììîëü).
Ðåàêöèîííóþ ñìåñü ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå 2 ÷ ïðè
25 °C. Ïðîäóêòû ðåàêöèè îñàæäàëè àöåòîíîì, ïðîìû-
âàëè â àïïàðàòå Ñîêñëåòà â òå÷åíèå 3 ÷. Ïðîäóêò âûñó-
øèâàëè ïîä âàêóóìîì. Âûõîä 91 % (ñîäåðæàíèå ÈÍÊ
~ 20 ìîëü %; îïðåäåëåíî ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêèì
ìåòîäîì
l
max
266 íì).
Ì
~ 16 êÄà.  ÈÊ-ñïåêòðàõ èìå-
þòñÿ õàðàêòåðíûå ïîëîñû ïîãëîùåíèÿ âàëåíòíûõ êî-
ëåáàíèé ïðè 3450 – 3400 (NH), 1700 – 1680 (HNC=O),
1560 – 1640 (C=N) è 1550 – 1450 ñì
– 1
(Ñ-Ñ è Ñ-N).
Ì
~ 16 êÄà. Ïîëó÷åííûé êîíúþãàò — òåìíî-æåëòûé
ïîðîøîê, ðàñòâîðèìûé â âîäå.
Êîíúþãàò ñ ÈÍÊ è ÝÁ. Ê ðàñòâîðó êîíúþãàòà
ÏÃÊ-ÈÍÊ (2 ììîëü) â âîäå (20 ìë) äîáàâëÿëè ðàñòâîð
ýòàìáóòîëà äèãèäðîõëîðèäà (2 ììîëü) â âîäå (15 ìë).
Ðåàêöèîííóþ ñìåñü ïåðåìåøèâàëè 1 ÷ ïðè 25 °C, ïî-
ñëå ÷åãî ñòàâèëè íà äèàëèç ïðîòèâ äèñòèëëèðîâàííîé
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 55, ¹ 6, 2021
23
âîäû ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, ïåðèîäè÷åñêè ìå-
íÿÿ âîäó äî òåõ ïîð, ïîêà ðàñòâîð íå ïåðåñòàë äàâàòü
ðåàêöèè íà õëîðèä-èîí ñ AgNO
3
(24 ÷, îáùèé îáúåì
äèôôóçàòà ~ 5 ë). Çàòåì ïðîäóêò ðåàêöèè âûñóøèâàëè
íà ðîòàöèîííîì èñïàðèòåëå. Âûõîä ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ
88 % (ñîäåðæàíèå ÝÁ ~ 25 ìîëü %; îïðåäåëåíî ñïåê-
òðîôîòîìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì, îñíîâàííûì íà âçàè-
ìîäåéñòâèè ÝÁ ñ ðîäàíèäîì ðòóòè â êèñëîé ñðåäå ñ îá-
ðàçîâàíèåì îêðàøåííîãî â êðàñíî-îðàíæåâûé öâåò
ïðîäóêòà ðåàêöèè, êîòîðûé äàåò ïîãëîùåíèå ïðè äëè-
íå âîëíû 457 íì).
Ì
~ 19 êÄà. Ïîëó÷åííûé êîíúþãàò
— êîðè÷íåâûé ïîðîøîê, ðàñòâîðèìûé â âîäå. Â
ÈÊ-ñïåêòðå ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ, êðîìå õàðàêòåðíûõ ïîëîñ
ïîãëîùåíèÿ ãèäðîêñèëüíûõ (3450 ñì
– 1
), êàðáîíèëü-
íûõ ãðóïï (1760 ñì
– 1
), òàêæå èìååòñÿ ïîëîñà ïîãëî-
ùåíèÿ â îáëàñòè 1560 – 1620 ñì
– 1
, îòíîñÿùàÿñÿ ê ïî-
ãëîùåíèþ âòîðè÷íûõ àìèíîãðóïï â ñîëåâîé ôîðìå.
Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ áèîëîãè÷åñêàÿ ÷àñòü
Îïðåäåëåíèå îñòðîé òîêñè÷íîñòè. Îñòðàÿ òîêñè÷-
íîñòü ïîëèìåðíîãî êîíúþãàòà áûëà èçó÷åíà íà áåëûõ
áåñïîðîäíûõ ìûøàõ ìàññîé 18 – 20 ã îáîåãî ïîëà [6].
Ñîåäèíåíèÿ ââîäèëè â êîíöåíòðàöèÿõ 1 è 3 %, â çàâè-
ñèìîñòè îò äîçû, îäíîêðàòíî íàòîùàê âíóòðèáðþøèí-
íî. Äåéñòâèå ñîåäèíåíèé îöåíèâàëè ïî èçìåíåíèþ
ïîâåäåí÷åñêèõ ðåàêöèé, îáùåìó ñîñòîÿíèþ è ãèáåëè
æèâîòíûõ çà 4 ÷ äî è â òå÷åíèå 14 äíåé ïîñëå ââåäåíèÿ
ïðåïàðàòîâ. Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòîâ îáðàáàòûâàëè
ìåòîäîì âàðèàöèîííîé ñòàòèñòèêè. Ðàñ÷åòû ËÄ
50
ïðî-
èçâîäèëè ïî ìåòîäó Ëèò÷ôèëüäà è Óèëüêîêñîíà.
Îïðåäåëåíèå áàêòåðèîñòàòè÷åñêîé àêòèâíîñòè
êîíúþãàòà ïðîâîäèëè â ñîîòâåòñòâèè ñ ìåòîäèêîé,
îïèñàííîé â ðóêîâîäñòâå ïî äîêëèíè÷åñêîìó èçó÷å-
íèþ ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûõ ïðåïàðàòîâ [6] â óñëîâèÿõ
in vitro
íà âèðóëåíòíûõ øòàììàõ ìèêîáàêòåðèé òóáåð-
êóëåçà H37Rv, Bovinus. Èññëåäîâàíèå ïðîâîäèëè ìå-
òîäîì àáñîëþòíûõ êîíöåíòðàöèé ñ ñîäåðæàíèåì ïðå-
ïàðàòîâ íà ïèòàòåëüíîé ñðåäå Ëåâåíøòåéíà — Éåíñå-
íà. Ïîäñ÷¸ò êîëîíèé íà ñðåäå ïðîâîäèëè ÷åðåç 21
äåíü. Êîëè÷åñòâåííàÿ îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîñåâà îñó-
ùåñòâëÿëàñü ïî îáùåïðèíÿòîé òðåõáàëëüíîé ñèñòåìå.
Ðåçóëüòàòû ó÷èòûâàëè ïóòåì åæåäíåâíîãî, íà÷èíàÿ ñ 3
äíÿ èíêóáàöèè, ñðàâíåíèÿ ñðîêîâ ïîÿâëåíèÿ ðîñòà íà
ïèòàòåëüíîé ñðåäå è îöåíêè èíòåíñèâíîñòè ðîñòà êî-
ëîíèé ìèêîáàêòåðèé òóáåðêóëåçà (ÌÁÒ). Îáðàùàëè
âíèìàíèå íà èçìåíåíèå õàðàêòåðèñòèêè êîëîíèé ïðè
ñðàâíåíèè êîíòðîëÿ è îïûòà – èçìåíåíèå êóëüòóðàëü-
íûõ ñâîéñòâ â âèäå ôîðìèðîâàíèÿ âëàæíûõ ãëàäêèõ
êîëîíèé. Èñïîëüçîâàëèñü ñëåäóþùèå êîíöåíòðàöèè
êîíúþãàòà: 5, 10, 20 è 40 ìêã/ìë. Êîíòðîëåì ñëóæèëè
îáðàçöû òåõ æå êóëüòóð ÌÁÒ íà ñðåäàõ áåç ïðåïàðà-
òîâ. Ïðîòèâîòóáåðêóëåçíóþ àêòèâíîñòü êîíúþãàòà
ñðàâíèâàëè ñ ÈÍÊ è ÝÁ â êîíöåíòðàöèè 10 ìêã/ìë. Â
24
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 55, ¹ 6, 2021
H
O
H
O
H
H
H
OH
HO
O
n
m
IO
4
O
H
O
COOH
H
H
H
OH
HO
H
COOH
O
O
O
O
O
COOH
OH
HO
O
O
COOH
O
O
O
O
O
NH
2
NH-
ÈÍÊ
25 °C, 2 ÷
O
O
COOH
OH
HO
COOH
O
O
O
+
O
O
COOH
OH
HO
N
NH
ÈÍÊ
COOH
ÝÁ
+
2HCl ÝÁ
O
COOH
O
O
O
COOH
OH
HO
N
NH
O
+
O
COOH
O
O
O
COO
OH
HO
N
NH
O
+
n
m
HO
n
m
n
m
ÈÍÊ
ÈÍÊ
25 °C, 24 ÷
HO
HO
n
m
n
m
Ñõåìà
1 ñòàäèÿ. Àêòèâàöèÿ ÏÃÊ ðåàêöèåé ïåðèîäàòíîãî îêèñëåíèÿ
ÏÃÊ,
~ 16 êÄà
Ì
Àêòèâèðîâàííàÿ ÏÃÊ,
~ 14 êÄà,
= 20 ± 2 ìîëü %
Ì
g
îê
2 ñòàäèÿ. Õèìè÷åñêîå ñâÿçûâàíèå ÈÍÊ ñ àêòèâèðîâàííîé ÏÃÊ
Àêòèâèðîâàííàÿ ÏÃÊ,
~ 14 êÄà
Ì
Êîíúþãàò ÏÃÊ,
~ 16 êÄà
(ÈÍÊ 20 ± 2 ìîëü %)
Ì
3 ñòàäèÿ. Ïîëó÷åíèå ïîëèìåðíîãî êîìïëåêñà ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ
Êîíúþãàò ÏÃÊ-ÈÍÊ
Êîíúþãàò ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ
(ÈÍÊ = 20 ± 2 ìîëü %, ÝÁ = 25 ± 2 ìîëü %)
óñëîâèÿõ
in vivo
ýêñïåðèìåíòû ïðîâåäåíû íà 30 ìîð-
ñêèõ ñâèíêàõ ìàññîé 350 – 400 ã, èíôèöèðîâàííûõ âè-
ðóëåíòíûìè øòàììàìè ìèêîáàêòåðèè òóáåðêóëåçà
Bovis è Humanis.
Ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå ñâîéñòâà. Èçó÷åíèå ôàð
-
ìàêîêèíåòèêè êîíúþãàòà ïðîâîäèëè íà 56 áåñïîðîä-
íûõ áåëûõ êðûñàõ-ñàìöàõ, ìàññîé òåëà 180 – 200 ã.
Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà — 3 îñîáè. Íà êàæäóþ âðåìåí-
íóþ òî÷êó ïî 5 êðûñ, à òàêæå 3 êðûñû ïîñàæåíû â ìå-
òàáîëè÷åñêèå êàìåðû äëÿ îòáîðà îáðàçöîâ ìî÷è. Èñ-
ïûòóåìûé ïðåïàðàò îïûòíûì æèâîòíûì ââîäèëè ïå-
ðîðàëüíî
îäíîêðàòíî
â
äîçå
5 ìã/êã
(1 ìë
ïðèãîòîâëåííîé ñóñïåíçèè) ñïåöèàëüíûì çîíäîì. ×å-
ðåç 30 ìèí, 1, 2, 3, 5, 15, 24, 30, 48, 54 è 72 ÷ ïîñëå ââå-
äåíèÿ ñîåäèíåíèÿ æèâîòíûõ äåêàïèòèðîâàëè ïîä
ýôèðíûì íàðêîçîì è îòáèðàëè êðîâü è îðãàíû (ëåã-
êèå, ïî÷êè è ïå÷åíü). Òàêæå ñîáèðàëè ìî÷ó ÷åðåç 6, 24,
30, 48, 54, 72, 96 è 120 ÷ ïîñëå ââåäåíèÿ ïðåïàðàòà.
Îðãàíû âçâåøèâàëè è ëèîôèëüíî âûñóøèâàëè. Âûñó-
øåííûå îðãàíû òùàòåëüíî èçìåëü÷àëè è äåëèëè ïîïî-
ëàì íà 2 ðàâíûå ÷àñòè. Êðîâü âûäåðæèâàëè â òå÷åíèå
÷àñà ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå è öåíòðèôóãèðîâàëè
â òå÷åíèå 20 ìèí ïðè 3000 îá/ìèí.  äðóãèõ îáðàçöàõ
ñûâîðîòêè êðîâè îñàæäàëè áåëêè 0,3 Ì òðèõëîðóêñóñ-
íîé êèñëîòîé. Ìî÷ó ñîáèðàëè, èçìåðÿëè îáúåì, îòáè-
ðàëè ïî 1 ìë äëÿ ýêñòðàêöèè è ëèîôèëüíî âûñóøèâà-
ëè. ÈÍÊ, ÝÁ è àöåòèë-ÈÍÊ ýêñòðàãèðîâàëè èç îðãàíîâ
âîäîé 1:2 èç ïå÷åíè è 1:3 èç ëåãêèõ è ïî÷åê (m/v). Ýêñ-
òðàêòû óïàðèâàëè íà ðîòîðíîì èñïàðèòåëå. Êîíöåí-
òðàöèþ ÈÍÊ è åãî ìåòàáîëèòà àöåòèë-ÈÍÊ îïðåäåëÿ-
ëè ìåòîäîì ÂÝÆÕ íà êîëîíêå Zorbax Eclipse XDB C
18
(3
´
100 ìì) [7]. ÝÁ îïðåäåëÿëè ñïåêòðîôîòîìåòðè÷å-
ñêèì ìåòîäîì [8]. Ðàñ÷åòû ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ïà-
ðàìåòðîâ ïðîâîäèëè ïî ïðîãðàììå Borgia.
Ðåçóëüòàòû è èõ îáñóæäåíèå
Îáùèé ïðîöåññ ïîëó÷åíèÿ ïîëèìåðíîãî êîíúþãàòà
îòîáðàæåí íà ñõåìå, ïðåäñòàâëåííîé âûøå. Íà ïåðâîé
ñòàäèè ïðîâîäèëè ôóíêöèîíàëèçàöèþ èñõîäíîãî ïî-
ëèñàõàðèäà ÏÃÊ ïóòåì ïåðèîäàòíîãî îêèñëåíèÿ. Ïðè
ýòîì ïîëó÷èëè äèàëüäåãèä-ïðîèçâîäíûå ÏÃÊ, ñîäåð-
æàùèå 40
±
5 ìîëü % àëüäåãèäíûõ ãðóïï. Äàëåå ïðî-
âîäèëè ðåàêöèþ õèìè÷åñêîãî ïðèñîåäèíåíèÿ ÈÍÊ ñ
ïîëó÷åííûì äèàëüäåãèä-ïðîèçâîäíûì ÏÃÊ ïîñðåäñò-
âîì àçîìåòèíîâîé ñâÿçè. Íà 3 ñòàäèè îñóùåñòâëÿëè
ïðèñîåäèíåíèå ýòàìáóòîëà ïîñðåäñòâîì èîííîé ñâÿçè.
Ñòðóêòóðó ïðîäóêòîâ ðåàêöèè óñòàíàâëèâàëè ñ ïî-
ìîùüþ ÈÊ-, ÓÔ-ñïåêòðîñêîïèè è õèìè÷åñêèìè ìåòî-
äàìè àíàëèçà. Ñîäåðæàíèå äåéñòâóþùèõ âåùåñòâ
(ÈÍÊ è ÝÁ) â ïîëèìåðíîì êîíúþãàòå îïðåäåëÿëè
ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì ïî õàðàêòåðíîìó
ïîãëîùåíèþ ÈÍÊ ïðè äëèíå âîëíû 262 íì [9], ýòàì-
áóòîëà â êîìïëåêñå ñ ðîäàíèäîì ðòóòè ïðè äëèíå âîë-
íû 457 íì [10]. Ïîëó÷åííûé êîíúþãàò ïðåäñòàâëÿåò
ñîáîé àìîðôíûé ïîðîøîê æåëòîâàòî-êîðè÷íåâîãî
öâåòà, ïî ðàñòâîðèìîñòè è äðóãèì õèìè÷åñêèì ñâîé-
ñòâàì îòëè÷àåòñÿ îò èñõîäíûõ ïðåïàðàòîâ ÈÍÊ è ÝÁ.
Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòîâ ïî îïðåäåëåíèþ îñòðîé
òîêñè÷íîñòè ïîêàçàëè, ÷òî ïîëèìåðíûé êîíúþãàò ìå-
íåå òîêñè÷åí ïî ñðàâíåíèþ ñ èñõîäíûìè ÈÍÊ è ÝÁ. Â
÷àñòíîñòè,
ËÄ
50
ïîëèìåðíîãî
êîíúþãàòà
áîëåå
3500 ìã/êã, òîãäà êàê äëÿ ÈÍÊ è ÝÁ ñîñòàâëÿåò 224 è
1290 ìã/êã ñîîòâåòñòâåííî.
Ðåçóëüòàòû òåñòîâ íà ëåêàðñòâåííóþ ÷óâñòâèòåëü-
íîñòü øòàììîâ ÌÁÒ (÷óâñòâèòåëüíûå è óñòîé÷èâûå) ê
èññëåäóåìûì ïðåïàðàòàì ïðèâåäåíû â òàáë. 1.
Êàê âèäíî èç òàáë. 1, êîíúþãàò ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ âî
âñåõ èññëåäóåìûõ êîíöåíòðàöèÿõ, êàê è ÈÍÊ è ÝÁ â
êîíöåíòðàöèè 10 ìêã/ìë, ãóáèòåëüíî äåéñòâóåò íà ÷óâ-
ñòâèòåëüíûå øòàììû ÌÁÒ (H37Rv è äð.). Ðåçèñòåíò-
íûå øòàììû ÌÁÒ â êîíöåíòðàöèè 40 ìêã/ìë ïðîÿâëÿ-
ëè ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê êîíúþãàòó ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ, à â
îñòàëüíûõ ñëó÷àÿõ ïðîÿâëÿëè óñòîé÷èâîñòü â ðàçëè÷-
íîé ñòåïåíè.
Ïðîâåäåíû èññëåäîâàíèÿ ïî èçó÷åíèþ áàêòåðèî-
ñòàòè÷åñêîé àêòèâíîñòè êîíúþãàòà ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ ïî
ñðàâíåíèè ñ ÈÍÊ â óñëîâèÿõ
in vivo
. Èññëåäîâàíèå
ïðîâîäèëè íà êðîëèêàõ ïîðîäû øèíøèëëà, çàðàæåí-
íûõ âèðóëåíòíûìè øòàììàìè ìèêîáàêòåðèè òóáåðêó-
ëåçà Humanis è Bovis. Áàêòåðèîñòàòè÷åñêóþ àêòèâ-
íîñòü ñîåäèíåíèé îöåíèâàëè ïî èíäåêñó ïîðàæåíèÿ
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 55, ¹ 6, 2021
25
Ò à á ë è ö à 1
Îöåíêà ðîñòà êëèíè÷åñêèõ øòàììîâ ÌÁÒ ñ ðàçíîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòüþ íà ñðåäàõ ñ êîíúþãàòîì ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ â êîí-
öåíòðàöèè 5, 10, 20 è 40 ìêã/ìë â ñðàâíåíèè ñ êîíòðîëåì (áåç ñîåäèíåíèé) è íà ñðåäàõ ñ ÈÍÊ è ÝÁ â êîíöåíòðàöèè 10 ìêã/ìë
Ïðåïàðàò
Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðà-
öèÿ ñîåäèíåíèé,
ìêã/ìë
H37Rv
×óâñòâèòåëüíûå øòàììû
Óñòîé÷èâûå øòàììû
16294
(ïàöèåíò)
16947
(ïàöèåíò)
11748
(ïàöèåíò)
11891
(ïàöèåíò)
ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ
40
–
–
–
–
–
20
–
–
–
+
++
10
–
–
–
++
+++
5
–
–
–
++
+++
ÝÁ
10
–
–
–
+++
+++
ÈÍÊ
10
–
–
–
+++
+++
«-» — ÷óâñòâèòåëüíûå; «+» — îò åäèíè÷íûõ äî 20 ÊÎÅ — «ñêóäíîå» áàêòåðèîâûäåëåíèå, áàêòåðèîñêîïè÷åñêè ìèêîáàêòåðèè íå îïðåäåëÿþòñÿ;
«++» — îò 21 äî 100 ÊÎÅ — «óìåðåííîå» áàêòåðèîâûäåëåíèå, áàêòåðèîñêîïè÷åñêè îïðåäåëÿþòñÿ åäèíè÷íûå ìèêîáàêòåðèè â êàæäîì ïîëå çðåíèÿ
èëè åäèíè÷íûå â ïðåïàðàòå; «+++» — áîëåå 100 ÊÎÅ — «îáèëüíîå» áàêòåðèîâûäåëåíèå, áàêòåðèîñêîïè÷åñêè îïðåäåëÿåòñÿ 10 è áîëåå ìèêîáàêòå-
ðèé â êàæäîì ïîëå çðåíèÿ.
âíóòðåííèõ îðãàíîâ, êîòîðóþ îïðåäåëÿëè ïî ìåòîäó
Ð. Âîéòåêà (ïîðàæåíèþ ñåëåçåíêè) [11]:
ÈÑ
ÌÑ
ÌÒ
=
×
100 %,
ãäå ÈÑ — èíäåêñ ïîðàæåíèÿ ñåëåçåíêè; ÌÑ — ìàññà
ñåëåçåíêè; ÌÒ — ìàññà òåëà.
Ðåçóëüòàòû ïîêàçàëè (ðèñóíîê), ÷òî ïîëèìåðíûé
êîíúþãàò ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ ïðîÿâëÿåò âûðàæåííóþ ïðî-
òèâîòóáåðêóëåçíóþ àêòèâíîñòü, èíäåêñ ïîðàæåíèÿ ñå-
ëåçåíêè ó íåãî ñîñòàâèë 1,0 % (Humanis) è 0,2 %
(Bovis); ïðè ëå÷åíèè èçîíèàçèäîì èíäåêñ ïîðàæåíèÿ
æèâîòíûõ ñîñòàâèë 1,9 % (Humanis) è 1,6 % (Bovis). Ó
êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ èíäåêñ ïîðàæåíèå ðàâåí 5,4 %
(Humanis) è 4,8 % (Bovis).
Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîêèíåòèêè ïîëèìåðíîãî êîíú-
þãàòà ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ ïðîâîäèëè íà áåñïîðîäíûõ áå-
ëûõ êðûñàõ-ñàìöàõ. Ðåçóëüòàòû ïîêàçàëè, ÷òî ïîñëå
ïåðîðàëüíîãî ââåäåíèÿ êîíüþãàòà ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ òåðà-
ïåâòè÷åñêèå êîíöåíòðàöèè äåéñòâóþùèõ âåùåñòâ
(ÈÍÊ è ÝÁ) â êðîâè è îðãàíàõ (ëåãêèõ, ïå÷åíè, ïî÷êàõ,
ñåëåçåíêå) ñîõðàíÿåòñÿ â òå÷åíèå 48 ÷, à ïðè ââåäåíèè
ÈÍÊ è ÝÁ â ÷èñòîì âèäå äàííàÿ êîíöåíòðàöèÿ âå-
ùåñòâ ñîõðàíÿåòñÿ â áàêòåðèîñòàòè÷åñêèõ ïðåäåëàõ äî
12 ÷.
Ñëåäóåò îòìåòèò, ÷òî ïðè ââåäåíèè ÷èñòîãî ÈÍÊ â
îðãàíèçì åãî çíà÷èòåëüíàÿ ÷àñòü ìåòàáîëèçèðóåòñÿ â
ïå÷åíè äî àöåòèëèçîíèàçèäà ñ ïîìîùüþ àðèëàìèí-
N
-àöåòèëòðàíñôåðàçû âòîðîãî òèïà (NAT2). Àöåòèëè-
çîíèàçèä íå ïðîÿâëÿåò ïðîòèâîòóáåðêóëåçíóþ àêòèâ-
íîñòü è â äàëüíåéøåì ãèäðîëèçóåòñÿ äî èçîíèêîòèíî-
âîé êèñëîòû è àöåòèëãèäðàçèíà. Ïîñëåäíèé ìåòàáîëè-
çèðóåòñÿ
äî
äèàöåòèëãèäðàçèíà
è
ìîæåò
áûòü
êîíâåðòèðîâàí ïå÷åíî÷íûìè ìèêðîñîìàëüíûìè ôåð-
ìåíòàìè äî ðåàêöèîííî ñïîñîáíîãî âåùåñòâà (âåðîÿò-
íî, ãèäðàçèí), êîòîðûé âûçûâàåò ÈÍÊ-èíäóöèðóåìóþ
ãåïàòîòîêñè÷íîñòü [7]. Ïðè ââåäåíèè êîíúþãàòà õèìè-
÷åñêè ñâÿçàííàÿ ñ ìàêðîìîëåêóëîé ÈÍÊ â îðãàíèçìå
íà 50 % ìåíüøå ìåòàáîëèçèðóåòñÿ â òåðàïåâòè÷åñêè
íåàêòèâíûé àöåòèëèçîíèàçèä. Âåðîÿòíî, ýòî ñâÿçàíî ñ
ìàêðîìîëåêóëÿðíîé ïðèðîäîé è, ïðåäïîëîæèòåëüíî,
íàõîæäåíèåì â îðãàíèçìå â âèäå êîìïëåêñíûõ îëèãî-
ìåðîâ.
Íà îñíîâå ïîëó÷åííûõ äàííûõ ïî êîëè÷åñòâó èçî-
íèàçèäà, ýòàìáóòîëà â ñûâîðîòêå êðîâè êðûñ ïðîâåäå-
íû ðàñ÷åòû ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ â ïðî-
ãðàììå Borgia [12]. Ðåçóëüòàòû ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 2.
Êàê âèäíî èç òàáë. 2, ïðè ââåäåíèè êîíúþãàòà ïåðè-
îä ïîëóâûâåäåíèÿ óâåëè÷èâàåòñÿ äëÿ îáîèõ ïðåïàðà-
òîâ ÈÍÊ è ÝÁ, ñêîðîñòü ýëèìèíàöèè óìåíüøàåòñÿ,
ïðè ýòîì óâåëè÷èâàåòñÿ ïåðèîä ïîëóàáñîðáöèè è
óìåíüøàåòñÿ ñêîðîñòü àáñîðáöèè. Äëÿ ÝÁ íå ìåíÿåòñÿ
ðàâíîâåñíàÿ ìàêñèìàëüíàÿ êîíöåíòðàöèÿ, äëÿ ÈÍÊ è
åãî ïîëèìåðíîãî àíàëîãà ðàâíîâåñíàÿ ìàêñèìàëüíàÿ
êîíöåíòðàöèÿ óìåíüøàåòñÿ íà 75 %.
 ñîñòàâå êîíúþãàòà îáùèé êëèðåíñ äëÿ ÈÍÊ È ÝÁ
óâåëè÷èâàåòñÿ íà 250 è 320 % ñîîòâåòñòâåííî. Ïîäîá-
íàÿ ðàçíèöà â âåëè÷èíå êëèðåíñà ñâÿçàíà ñ áîëüøåé
áèîäîñòóïíîñòüþ ïðåïàðàòîâ â ñîñòàâå êîíúþãàòà.
Òàêèì îáðàçîì, â ðåçóëüòàòå ïðîâåäåííûõ èññëåäî-
âàíèé
ïîëó÷åíû
âûñîêîìîëåêóëÿðíûå
êîíúþãàòû
ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ (ÈÍÊ ~ 20 ìîëü % è ÝÁ ~ 25 ìîëü %),
îáëàäàþùèå âûðàæåííîé ïðîòèâîòóáåðêóëåçíîé àê-
òèâíîñòüþ è íèçêîé òîêñè÷íîñòüþ ïî ñðàâíåíèþ ñ èñ-
26
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 55, ¹ 6, 2021
Ò à á ë è ö à 2
Ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå ïàðàìåòðû êîíúþãàòà ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ (
n
= 5,
Ð
< 0,05 ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ)
Ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèé ïàðàìåòð
Ïðåïàðàò ñðàâíåíèÿ*
Êîíúþãàò ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ
ÈÍÊ
ÝÁ
ÈÍÊ
ÝÁ
Ïåðèîä ïîëóàáñîðáöèè
Ò
1/2
(
K
a
), ìèí
108,281
468,243
175,221
959,834
Ïåðèîä ïîëóâûâåäåíèÿ
Ò
1
/(
K
el
), ìèí
693,000
1420,08
742,765
2887,50
Êîíñòàíòà àáñîðáöèè
K
a
0,00640
0,00148
0,00396
0,00072
Êîíñòàíòà ñêîðîñòè ýëèìèíàöèè
K
el
0,00100
0,00049
0,00093
0,00024
Ïåðèîä ïîëóäîñòèæåíèÿ ðàâíîâåñíîé êîíöåíòðàöèè
T
1/2
C
ss max
, ìèí
0,290
0,366
0,341
0,366
Ðàâíîâåñíàÿ êîíöåíòðàöèÿ
C
ss max
, ìêã/ìë
0,426
0,001
0,117
0,000
Îáúåì ðàñïðåäåëåíèÿ
V
d
, ìë
2173,90
47559,3
5763,53
305574
Îáùèé êëèðåíñ
Cl
t
, ìë/ìèí
2,174
23,209
5,377
73,338
Ïëîùàäü ïîä êðèâîé “êîíöåíòðàöèÿ — âðåìÿ”
AUG
230001
468,243
92982,2
6817,8
*
— ïðåïàðàò ñðàâíåíèÿ: ìåõàíè÷åñêàÿ ñìåñü ÈÍÊ (45 %) è ÝÁ (55 %).
7
6
5
4
3
2
1
0
IS, %
I
I
I
II
II
II
1
2
3
4
5
6
Èíäåêñ
ïîðàæåíèÿ
æèâîòíûõ
ïðè
ââåäåíèè:
1
,
2
—
ÏÃÊ-ÈÍÊ-ÝÁ;
3
,
4
— ÈÍÊ;
5
,
6
— êîíòðîëü (áåç ââåäåíèÿ ïðå-
ïàðàòîâ) (
n
= 5, *
Ð
< 0,05 ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ); I – Hu-
manis, II – Bovis.
õîäíûìè ïðåïàðàòàìè ÈÍÊ è ÝÁ. Ïðè ââåäåíèè êîíú-
þãàòà êðûñàì òåðàïåâòè÷åñêàÿ êîíöåíòðàöèÿ àêòèâ-
íûõ âåùåñòâ (èçîíèàçèäà è ýòàìáóòîëà) â êðîâè
ñîõðàíÿëàñü äîëüøå, ÷åì èõ íèçêîìîëåêóëÿðíûõ àíà-
ëîãîâ, ÷òî óêàçûâàåò íà âîçìîæíîñòü ïðîëîíãèðîâà-
íèÿ èõ ïðîòèâîòóáåðêóëåçíîé àêòèâíîñòè.
Ë È Ò Å ÐÀ Ò Ó ÐÀ
1. Í. À. Ïëàòý, À. Å. Âàñèëüåâ,
Âûñîêîìîëåê. ñîåä.
, 24À(4),
675 – 695 (1982).
2. Å. Ô. Ïàíàðèí,
Ñèíòåç
,
ñòðóêòóðà è ñâîéñòâà ïîëèìåðîâ
,
Íàóêà, Ëåíèíãðàä (1989), ññ. 187 – 198.
3. Ø. À. Øîìóðîòîâ, Ý. À. Ìóðîäîâ, À. Ñ. Òóðàåâ,
Õèì. ðàñò.
ñûðüÿ
, ¹ 2, 25 – 28 (2006).
4. Ø. À. Øîìóðîòîâ, Ã. Õ. Ìàìàäóëëàåâ, À. Ñ. Òóðàåâ,
Æóðí.
áèîìåä. õèì.
, ¹ 1, 45 – 49 (2016).
5. Ïàòåíò ÐÓç 05630,
Îôèö. áþëë
., 6 (168) (2016).
6. Â. Â. Åðîõèíà,
Êóëüòóðàëüíûå ìåòîäû äèàãíîñòèêè òó-
áåðêóëåçà
, Ìåäèöèíà, Ìîñêâà (2008), ññ. 164 – 179.
7. J. O. Svensson, A. Muchtar, O. Ericsson,
J. Chromatogr.
, 341,
193 – 197 (1985).
8. À. È. Ñëèâêèí, Â. Ô. Ñåëåìåíåâ, Å. À. Ñóõîâåðõîâà,
Ôèçè-
êî-õèìè÷åñêèå è áèîëîãè÷åñêèå ìåòîäû îöåíêè êà÷åñòâà
ëåêàðñòâåííûõ
ñðåäñòâ
,
ÂÃÓ,
Âîðîíåæ
(1999),
ññ. 215 – 218.
9. Ø. À. Øîìóðîòîâ, Î. Ð. Àõìåäîâ, À. Ñ. Òóðàåâ,
Ôàðì. âå-
ñòíèê Óçáåêèñòàíà
, ¹ 1, 44 – 49 (2016).
10. Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ÌÓÊ 4.1.1643-03, 1 – 8 (2003).
11. Ò. Í. ßùåíêî, È. Ñ. Ìå÷åâà,
Ðóêîâîäñòâî ïî ëàáîðàòîðíî-
ìó èññëåäîâàíèþ ïðè òóáåðêóëåçå
, Ìåäèöèíà, Ìîñêâà
(1973), ññ. 53 – 77.
12. USC*Pack P. C. Collection Clinical Research Programs, Uni-
versity of Southern California, School of Medicine, Los Ange-
les, Version 10.7 (1995).
Ïîñòóïèëà 14.02.21
ANTITUBERCULOSIS ACTIVITY AND PHARMACOKINETICS OF POLYMER CONJUGATES
OF ISONIAZID AND ETHAMBUTOL
Sh. A. Shomurotov
1,*
, O. R. Akhmedov
1
, A. S. Turaev
1
, and G. Kh. Mamadullaev
2
1
Institute of Bioorganic Chemistry, Academy of Sciences of the Republic of Uzbekistan, Tashkent, 100170 Uzbekistan
2
Scientific Research Institute of Veterinary Medicine, Samarkand, 140104 Uzbekistan
* e-mail: hsha@mail.ru
The interaction of the dialdehyde derivative of polygalacturonic acid with isonicotinic acid hydrazide and ethambutol results in a conjugate containing isoni-
cotinic acid hydrazide linked with a hydrazone bond (20
±
2 mol %) and ionically bonded ethambutol (25
±
2 mol %). The obtained conjugate showed pro-
nounced anti-tuberculosis activity both
in vitro
experiments on clinical strains of
M. tuberculosis
and H37Rv, as well as
in vivo
on human and bovine strains.
Pharmacokinetic studies showed that, upon introduction of the conjugate, the therapeutic concentration of active substances (isoniazid and ethambutol) in the
blood was retained longer than their low molecular weight analogs, thereby exhibiting a prolonged anti-tuberculosis effect.
Keywords: polygalacturonic acid; isonicotinic acid hydrazide; ethambutol; conjugate; anti-tuberculosis activity.
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 55, ¹ 6, 2021
27
