ЖНАЕУ
2011
178
6.
Высоцкий А.Э.
Контаминация молочно - товарных ферм микобактериями и
средства её снижения [Текст]: автореф. дис. ...канд. вет. наук: 16.00.03
/
А.Э. Высоцкий',
[РУП БНИИЭВ].
-
Минск, 2002.
-
20 с.
7.
Шаров А.Н.
Аллергическая диагностика туберкулёза сельскохозяйственных
животных
-
современное состояние [Текст]
/
А.Н. Шаров
/
100 лет Курской б/ф и агробиол.
пром. России. Тез. докл. науч.-произв. конф.
-
Курск, 1996.-С. 344-348.
8.
Иванова Н.А.
Туберкулинизация кроликов [Текст]
/
Н.А. Иванова, А.С. Соколова
//
Ветеринария.
-
1988. - № 4.
-
С. 64-65.
УДК 619:636. 982.2 + 615.7
Г.Х. Мамадуллаев
Зав. лабораторией по изучению туберкулеза, к.вет.н., ст.науч.сотрудник
Узбекский научно-исследовательский институт ветеринарии г. Самарканд
Рецензент - член редколеги «BicnuK ЖНАЕУ», д.вет.н. О.Ю. Гал ат ю к
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ АЛЛЕРГОДИАГНОСТИКУМА
«ИЭКВМ ТУБЕРКУЛИН» ПРОИЗВОДСТВА «ДП ВЕТЕРИНАРНАЯ МЕДИЦИНА»
В статье приводятся результаты сравнительного изучения эффективности ИЭКВМ-
туберкулина (Украина) и ППД-туберкулина (Россия). Результаты лабораторных экспериментов
показали, что оба туберкулина по физико-химическим показателям отличаются мало. В
лабораторных опытах на морских свинках специфическая активность ИЭКВМ-туберкулина
составляла 49,504 ME. Сравнительные производственные испытания, проведенные в хозяйствах,
неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота, показали, что при симультанной
туберкулинизации у реагирующего поголовья при внутрикожном введении ИЭКВМ- туберкулина
в
дозе 0,1 см
3
5000 ТЕ размеры толщины кожной складки составляпи
в
среднем 4,6 мм, при
введении ППД-туберкулина (Россия)
-
3,8 мм.
Постановление проблемы и задания, анализ последних исследований.
Известно, что борьба с туберкулезом основывается, главным образом, на санитарно-
зоогигиенических мероприятиях, улучшении кормления, регулярном исследовании и
выявлении больных животных при помощи туберкулина. От его качества и правильного
применения во многом зависит ликвидация туберкулеза среди сельскохозяйственных
животных, в том числе
и
птиц [1; 2; 4]. Внутрикожная туберкулиновая проба является
основным методом прижизненной диагностики туберкулеза у животных, которая
используется для контроля за благополучием по туберкулезу стад крупного рогатого
скота,
а
также для выявления больных туберкулезом животных при оздоровлении
неблагополучных хозяйств [3]. Своевременная диагностика болезни и выяснение причин
сенсибилизации организма во многом зависят от качества
©
Мамадуллаев Г.Х.
ЖНАЕУ
179
уготовляемого туберкулина [5]. Диагностическая ценность туберкулина зависит
:т
его
физико-химических свойств, которые в значительной степени гбуславливаются методом
приготовления и очистки препарата. В туберкулине -еобходимы не только
высокоспецифические субстанции, но и компоненты, :5ладающие сенсибилизирующим
действием на макроорганизм [2; 6].
Современные методы стандартизации туберкулинов основаны на определении
уровня
биологической
активности
испытуемого
препарата
в
отношении
соответствующего эталона с постановки кожных проб. При этом следует учитывать
свойства самого препарата, а также степень сенсибилизации и опецифичность
аллергического ответа макроорганизма на туберкулин [2; 7].
В связи с этим работы многих исследователей посвящены разработке новых ■■
совершенствованию имеющихся средств диагностики туберкулеза животных и ~гиц.
Учитывая то, что до настоящего времени производство зллергодиагностикумов у нас в
Республике налаживается, пока приходится окупать его в других странах. В свою очередь,
препараты, поступающие из-за рубежа, требуют тщательной проверки их активности,
специфичности и других параметров. В нашей Республике для аллергической
диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в основном применяется ППД-
туберкулин производства Курской биофабрики в дозе 0,2 см
3
. 10000
ТЕ [2].
В странах
Европы и в других ’эсударствах применяется 5000
ТЕ
доза туберкулина. У ученых нет
единого мнения об образовании неспецифических реакций при применении повышенных
доз
туберкулина. По данным некоторых исследователей, 10000 и 500&ТЕ дозы
туберкулина дают аналогичные результаты [2; 4].
В связи с этим перед нами стояла задача провести сравнительное испытание -
уберкулезного
аллергодиагностикума
ИЭКВМ-туберкулин
производства
«ДП
Ветеринарная Медицина» (Украина).
Объекты и методика исследований.
Согласно постановления ГГУ ветеринарии
Республики Узбекистан № 7 от 26 ноября 2004 г. нами составлен проект исследований по
сравнительному испытанию ППД-туберкулина для млекопитающих, производства ДП
«Ветеринарная медицина» ИЭКВМ Украина), завезенного в Республику Узбекистан
23.06.2004
г.,
серии № 1676/ 151, изготовленной 08.01.2004 г. Лабораторно-
производственные испытания препарата проводили согласно ТУ (технические условия)
изготовителя.
Для контроля туберкулина готовый препарат проверяли на внешний вид,
растворимость и однородность в растворе, стерильность, вакуум в ампулах и плотность
укупорки флаконов, безвредность на лабораторных животных, теактогенность,
специфическую активность на морских свинках и отсутствие :енсибилизирующих
свойств на морских свинках в сравнении с контрольной серией, стандартизованной по
международному стандарту ППД-туберкулина для млекопитающих.
ЖНАЕУ
2011
180
Стерильность препарата проверяли высевом на питательные среды МПА и МПБ.
Реактогенность препарата проверяли на морских свинках. При этом на месте
введения препарата не должно быть какого-либо воспалительного процесса.
Сенсибилизирующую особенность исследовали также на здоровых морских
свинках, после предварительного введения туберкулина с интервалом 5 дней. При этом
в нем должна отсутствовать реакция организма на повторное введение препарата.
Специфическую активность препарата определяли, сравнивая ее с активностью,
туберкулина контрольной серии на морских свинках, иммунизированных
микобактерией БЦЖ.
В качестве контроля и сравнения использовали ППД-туберкулин производства
Курской биофабрики (Россия).
Производственное испытание препарата проводили в АР Каракалпакстан в -
районах в 2 неблагополучных по туберкулезу хозяйствах на 186 головах крупного
рогатого скота. Для этого животным внутрикожно на депилированные участки с левой
стороны в среднюю треть шеи вводили 0,1 см
3
(5000 ТЕ) ИЭКВМ-туберкулинна, с
правой стороны шеи аналогично вводили 0,2 см
3
(10000 ТЕ) ППД-туберкулинна
Курской биофабрики. Для внутрикожного введения аллергенов использовали
безыгольные инъекторы БИ-7. Учет реакции проводили при помощи кутиметра через
72 часа после введения.
Результаты исследований
Определение внешнего вида исследуемого
туберкулина проводили визуально. Препарат представляет собой прозрачную светло-
коричневого цвета жидкость без механических примесей.
Стерильность туберкулина определяли путем высева образца препарата на
питательные среды МПА и МПБ и инкубирования в термостате при температуре 37° С
в течение 14 дней. Результаты высева показали, что препарат является стерильным.
Для определения реактогенности препарата у трех здоровых морских свинок-
альбиносов с живым весом 300-350 г по бокам в области живота выбривали шерсть, место
инъекции обрабатывали 70-процентным спиртом и
%
внутрикожно вводили с одной
стороны тела туберкулин испытуемой серии в дозе 500 ME в объеме 0,1 см
3
, с другой -
контрольной серии туберкулина в той же дозе. Через 24 часа проверяли опытных
животных, и на месте инъекции не было обнаружено никаких патологических изменений.
Для определения сенсибилизирующих свойств препарата брали 6 здоровых
морских свинок с живым весом 300-350 г, которые не были использованы ни в каких
опытах. Трем морским свинкам внутрикожно вводили трижды по 500 ME туберкулина
в объеме 0,1 см
3
с интервалом в 5 суток. Всех животных содержали в одной клетке.
Через 15 суток после последней инъекции препарата трем
ЖНАЕУ
2011
181
опытным и трем контрольным животным повторно внутрикожно вводили
исследуемый препарат в дозе 500 ME в объеме 0,1 см
3
. Учет реакции проводили через
24 часа после инъекции туберкулина. Было установлено, что на месте введения
препарата отсутствовали патологические изменения.
Определение специфической активности в международных единицах (ME)
туберкулина испытуемой серии проводили, сравнивая с туберкулином контрольной
серии на сенсибилизированных вакцинным штаммом БЦЖ на 11 морских свинках.
Морским свинкам-альбиносам внутримышечно вводили
1
мг взвеси живой культуры
вакцины БЦЖ - на стерильном физиологическом растворе в объеме 1 см’ (Вакцина БЦЖ
производство АО «УзФармпром» ГАК, Узбиофарм». Срок хранения - 2 года. Серия 151,
КК 875). Место инъекции зыбрили и обработали 70-градусным спиртом. Через 30 дней
после иммунизации
всех
животных исследовали испытуемым туберкулином. В качестве
контроля применяли ППД-туберкулин производства России.
Рабочие разведения аллергенов согласно ТУ приготовили следующим □разом:
приготовили смесь из 5 ампул туберкулина. 1 см
3
туберкулина .ереносили в пробирку с 9
см
3
стерильного физиологического раствора и еремешивали. Из этой пробирки 1 см
3
туберкулина перенесли в другую робирку с 4 см
3
физиологического раствора и таким
образом получили первое тазведение туберкулина. Из второй пробирки
1
см
3
раствора
туберкулина “ереносили в пробирку с 9 см
3
физиологического раствора и таким образом
“олучили второе разведение туберкулина.
Таким же методом приготовили 3 и 4 разведения контрольной серии уберкулина,
содержащие в 1 см
3
1000 и 100 ME соответственно.
Для приготовления разведений туберкулина контрольной серии -спользовали 5
флаконов аллергена с таким расчетом, чтобы в 1 см’ содержалось 50000 ME.
Подготовленный аллерген в разных разведениях вводили щутрикожно каждой морской
свинке в депилированные места кожи в дозе 0,1 . по два разведения с каждой стороны
тела в условные места инъекций а, б, в, ■ Расстояния между инъекциями составляло 40
мм.
Каждое разведение туберкулина вводили, используя отдельные шприцы, а
с^+ Л^е
животное метили несмываемой краской.
Интенсивность реакции определили через 24 часа после введения аллергенов -•тем
учета диаметров папулы, образовавшейся на месте введения туберкулина, -ззмеры папул
перерисовали на целлофан с обозначением мест инъекций.
Активность туберкулина (А) в международных единицах (ME) вычисляли по эормуле
А
=
(dp d
2
)
х
50000, где d, - сумма средних диаметров папул на испытуемую серию, мм;
d
2
- сумма средних диаметров папул на контрольную .ерию туберкулина, мм; 50000 -
количество ME в 1 см
3
основного раствора
-
беркулина контрольной серии.
ЖНАЕУ
2011
182
Таблица 1.
Результаты определения специфической активности ИЭКВМ-
туберкулина на морских свинках
№ п/п Место метки
Интенсивность реакции на туберкулин (мм)
1
2
3
4
1.
Метка не
наносится
7,2
-
14
9,6
2.
Голова
15
9
25
15
3.
Спина
17
8
7
4.
Хвост
19,5
10
18
12
5.
Метка не
наносится
18
8,4
19,5
11,2
6.
Голова
12
4
8,8
2,8
7.
Спина
10
5
10,5
8,8
8.
Голова
14
10
13,5
4,8
9.
Метка не
наносится
18
8,8
12
4
10.
Г олова
11
7
18
15
11.
Спина
22,5
14
18
5
Итого
166,2
83,8
164,3
88,2
d, = 166,2 + 83,8 = 250,0 мм, d
2
= 164,3 + 88,2 = 252,5 мм.
А =(250,0 : 252,5) х 50000 = 49504 ME
Результаты определения специфической активности ИЭКВМ-туберкулина в
опытах на морских свинках показали, что она составила 49504 ME.
Производственное
испытание
ИЭКВМ-туберкулина
на
специфическую
активность проводили в 2-х неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота
хозяйствах. В качестве контроля использовали ППД-туберкулин Курской биофабрики
симультанно. Согласно инструкции испытание проводили в плане "ч диагностических
исследований на туберкулез. Для этого с левой стороны средней трети шеи вводили
внутрикожно в дозе 0,1 мл ИЭКВМ-туберкулин, с правой стороны - ППД-туберкулин в
дозе 0,2 см
3
на голову. Учет реакции на аллергены проводили через 72 часа после
введения. Результаты исследований приведены в таблице 2, где указаны только
реагирующие на аллергены животные.
ЖНАЕУ
183
Таблица 2.
Результаты определения специфической активности ИЭКВМ-
туберкулина на крупном рогатом скоте в 1-м хозяйстве
№ Пол ж-х Ин в. №
ИЭКВМ туберкулин
ППД туберкулин
До
введе-
ния, (в
мм)
Через
72 часа
, (в мм)
Раз-
ница ,
(в мм)
Резуль-
тат
До
введе-
ния , (в
мм)
Через
72 часа
, (в мм)
Разница ,
(в мм)
Резуль-
тат
1.
телка
3
5
7
2
отр.
5
7
2
Отр.
2.
телка
1
8
14
6
Полож
8
13
5
Полож.
3.
телка
6
9
13
4
Полож
9
14
5
Полож.
4.
корова
60 а)
7
11
4
Полож
7
12
5
Полож.
5.
корова
33
10
12
2
отр.
10
12
2
Отр.
6.
корова
60 б)
7
12
5
Полож
7
8
1
Отр.
7.
корова
43
7
12
5
Полож
7
12
5
Полож.
8.
корова
60 в)
10
14
4
Полож
10
14
4
Полож.
9.
корова
10
8
15
7
Полож
8
И
3
Полож.
10.
корова
830
7
12
5
Полож
7
10
3
Полож.
Как видно из таблицы 2, в первом хозяйстве выявлено 7 голов, положительно
реагирующих на аллергены животных. Интенсивность кожной реакции при введении
ИЭКВМ-туберкулина составила у положительно реагирующих животных в среднем 3,9
мм, а при введении ИПД-туберкулйна Курской биофабрики этот показатель равен 3,5 мм.
Таблица 3.
Результаты определения специфической активности ИЭКВМ-
туберкулина на крупном рогатом скоте во 2-м хозяйстве
№
Пол
ж-х
Инв.№
ИЭКВМ-туберкулин
ППД-туберкулин
До
введения
(в мм)
Через 72
часа (в
мм)
Разница
(в мм)
Резуль
тат
До
введения
(в мм)
Через ■
72 часа
(в мм)
Разница (в
мм)
Результат
I.
корова
60
8
13
5
Полож.
8
13
5
Полож.
телка
4
7
13
5
Полож.
7
14
7
Полож.
3.
телка
30
6
7
I
Отр.
6
6
0
Отр.
4.
корова
00660
9
13
4
Полож.
9
12
3
Полож.
5.
корова
40
7
11
4
Полож.
7
11
4
Полож.
6.
корова
31
9
21
12
Полож.
9
20
И
Полож.
Во 2-м хозяйстве было обнаружено 6 голов животных, положительно реагирующих
на аллергены. Средняя интенсивность кожной реакции при использовании ИЭКВМ-
туберкулина составила 5,3 мм, а при использовании туберкулина Курской биофабрики -
4,1 мм.
ЖНАЕУ
2011
184
После этого из каждого хозяйства выборочно проводили вынужденный
комиссионный забой по 2 головы из числа реагирующих животных. При
патологоанатомических исследованиях у всех животных были выявлены характерные
для туберкулеза патологические изменения.
Выводы и перспективы дальнейших исследований
1.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что ИЭКВМ-
туберкулин по физико-химическим параметрам соответствует требованиям ТУ.
2.
Установлено, что специфическая активность аллергенов на морских свинках
равнялась на 49504 ME.
3.
В производственных испытаниях на крупном рогатом скоте определено, что
ИЭКВМ-туберкулин в дозе 0,1 см
1 2 3 4 5 6 7
5000 ME по выявляемое™ не уступает ППД-
туберкулину производства Курской биофабрики.
4.
ДП «Ветеринарная медицина» ИЭКВМ-туберкулин в дозе 0,1 см
3
5000 ME
можно широко применять для аллергической диагностики туберкулеза крупного
рогатого скота в животноводческих хозяйствах.
Литература
1
Мамадуллаев ГХ.
Профилактика туберкулеза животных /
Г.Х. Мамадуллаев
И
Сельское хозяйство Узбекистана. - 2006,- №
1
.
—
С. 28-30.
2
Мамадуллаев ГХ.
Значение дозы и введения ППД-туберкулина для
млекопитающих при диагностике туберкулеза крупного-«рогатого скота
/
Г.Х.
Мамадуллаев, ГВ. Ни
И
Научное обеспечение ветеринарного благополучия
животноводства Узбекистана: тез. докл. науч. конф. 70-летию образования УзНИВИ.
- Самарканд, 1996.
-
С.
1
11-112.
3
Назаров С О.
О комплексном исследовании ППД-туберкулина крупного
рогатого скота
/
С.О. Назаров
//
Кишоварз ТАУ. - 2002. -№ 3.
-
С. 13-15.
4 Туберкулёз сельскохозяйственных животных
/
под. ред.
В.П. Шишкова,
B.
П. Урбана. -
М.: В О Агропромиздат, 1991. - 246 с.
5
Тургенбаев К.А.
Аллерген для диагностики туберкулеза /
К.А. Тургенбаев,
C.О. Кадыров, С.А. Тамгабаева
И
Актуальные проблемы болезней животных в
современных условиях: материалы междунар. науч, практ. конф., посвященной 60-
летию Таджикского НИВИ.
-
Душанбе,
-
2003. - С.
Т1-'19.
6 Туткышбай И.А.
Перспективы использования разных туберкулинов для
совершенствования аллергической диагностики туберкулеза животных /
НА.
Туткышбай
//
Вестник с.-х. науки Казахстана. - Алматы, 2005. - № 6.
-
С. 53-54.
7
Туткышбай И. А.
Совершенствование аллергической диагностики и
искоренения туберкулеза крупного рогатого скота /
НА. Туткышбай И
Мат. науч.
