150 Проблемы биологии и медицины, 2015, №1 (82)
УДК: 617.7 –001.17+599.325.1– 001.5
ОСОБЕННОСТИ УЛЬТРАСТРУКТУРНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В РОГОВИЦЕ КРОЛИКОВ ПРИ
ЕЕ ОЖОГАХ ЩЕЛОЧЬЮ И КОРРЕКЦИЕЙ ЭНТЕРОСОРБЕНТОМ «ПОЛИСОРБ»
Т.И. РОМАНЮК
ГВУЗ «Тернопольский государственный медицинский университет им. И.Я. Горбачевского МЗ
Украины»
«ПОЛИСОРБ» ЭНТЕРОСОРБЕНТИ ЁРДАМИДА ИШҚОР БИЛАН КУЙГАН ҚУЁНЛАР
ШОХ ПАРДАСИНИНГ КОРРЕКЦИЯСИДАН СЎНГ УЛЬТРАСТРУКТУРАЛИ
ЎЗГАРИШЛАРИНИНГ ХУСУСИЯТЛАРИ
Т.И. РОМАНЮК
Украина ССВ И.Я. Горбачевский номидаги Тернополь Давлат медицина университети
FEATURES OF ULTRASTRUCTURAL CHANGES IN THE CORNEA OF RABBITS AT ITS
BURNS ALKALI AND CORRECTION BY THE ENTEROSORBENT OF "POLISORB"
T.I. ROMANYUK
HSEI “I.Ya. Gorbachevsky Ternopil State Medical University of Ministry of Public Health of Ukraine”
Тажриба 30та қуёнда бажарилди, улар бир қисмининг шох пардасига ишқор билан куйдирилиб,
айримларига эса куйишдан сўнг конъюктива халтаси «Полисорб» сорбенти эритмаси билан ювилди.
Шох пардада қупол деструктив ўзгаришлар куйдиришни амалга оширгандан сўнг биринчи соатларда
рўй берди ва тажриба якунлагунча ривожланиб борди. Куйиш травмасидан 1 соатдан сўнг шох парда
олдинги эпителийсининг гомогенлашган тўқимаси фонида унинг марказида чуқур деструктив ўзга-
риш белгилари бўлган хужайралар аниқланди. Шох парда хусусий моддаси ҳам деструкцияга учра-
ганлиги аниқланди. Коллаген фибрил толаларининг очилиши ва фрагментацияси кузатилди, шунинг-
дек уларнинг параллел ориентацияси йўқолди. «Полисорб» воситаси билан коррекция қилинган хай-
вонларда коррекция қилинмаган хайвонларга нисбатан деструктив ўзгаришлар камроқ бўлди. Куйиш
травмасидан 1 соатдан сўнг шох парда олдинги эпителийсининг марказидаги чуқур деструктив ўзга-
ришлар конъюктиванинг «Полисорб» сорбенти билан ишлов берилмаган хайвонлардаги ўзгаришлар
билан бир хиллиги аниқланди. Шунинг билан бирга кўпинча структурали элементларини қисман
сақлаб қолган хужайралар ҳам аниқланди. Шох парданинг хусусий моддасига келганда эса деструк-
тив ўзгаришлар камлиги маълум бўлди. Коррекция қилинмаган хайвонлар шох пардасининг хамма
қаватларида деструктив ўзгаришлар ривожланиши давом этиб куйдиришни амалга оширгандан 24
соатдан сўнг максимал авжига етди. Деструкция кузатилгандан 12 соатдан сўнг жарохатланган шох
парда эпителиоцитларидан ташқари чекка зоналарида ҳам чуқур ўзгаришлар кузатилди. Хужайрала-
раро сохалар кенгайиб, вакуолизациялашган. Тўлиқ дезорганизацияга хусусий модда чалинди. Бу-
лардан фарқли улароқ, куйиш амалга оширилгандан 12 соатдан сўнг «Полисорб» сорбенти эритмаси
билан конъюктива ювилган хайвонларда дегидратацион жараён ривожланиши бошланганлиги куза-
тилди. Стабил морфологик кўринишда куйдириш амалга оширилган соханинг чекка сохаларида
сақланиб қолган ва дистрофик ўзгаришлари кам бўлган функционал актив эпителиоцитлар аниқлан-
ди. 24 соатдан сўнг куз структураларининг кейинги тикланиш белгилари борлиги кузатилди.
Калит сўзлар:
шох парда
,
куйиш
,
ёй
,
ультраструктура, коррекция.
30 rabbits took part at the experiment. Cornea of some of them was burned with alkali; conjunctival sac
of the others was washed with the “Polisorb” sorbent solution after the combustion. Gross destructive chang-
es in cornea arose already after the combustion and progressed till the end of the experiment. An hour after
the combustion in the setting of homogenized tissue of the cornea frontal epithelium we also found cells with
signs of gross destructive damages in its central parts. Cornea proper substance was destructed as well. De-
fibring and fragmentation of collagen fibrillas was also discovered, their parallel orientation was getting lost.
Changes in the group of animals, which were treated with “Polisorb”, were less significant than in the group
of animals without correction. In an hour after the combustion the destructive changes in the frontal epitheli-
um were almost the same as in the group of animals whose conjunctiva was not treated with “Polisorb”
sorbent. Though, we discovered cells with partially residual structural elements more often. Destructive
changes in the cornea proper substance were moderate. In the group of animals without correction destruc-
tive changes in all layers of cornea progressed even later, their maximum development occurred in 24 hours
after the combustion. In as little as 12 hours after the investigation start not only epithelial cells of the injured
part of the cornea, but also its marginal area incurred obvious destruction. Intercellular spaces were exagger-
Т.И. Романюк
Биология ва тиббиёт муаммолари, 2015, №1 (82) 151
ated and vacuolated. The proper substance was completely disorganized. In the contrast, in 12 hours after the
combustion dehydration processes began to take off in the cornea of the animals whose conjunctive sac was
washed with “Polisorb” sorbent. When morphological pattern at the combustion area was steady, we discov-
ered residual and functionally active epithelial cells with moderately destructive changes in the marginal ar-
ea. The eye structure was regenerating during 24 hours of the investigation.
Key
words
:
cornea, combustion, alkali, ultrastructure, correction.
Введение.
Ожоги глаз - сложная и много-
факторная проблема. В их патогенезе задейство-
ваны различные механизмы: как деструктивные,
так и регенераторные [1, 2, 3]. Поэтому при ле-
чении большое значение придается первой неот-
ложной помощи. Ее суть заключается в макси-
мальном и быстром удалении химического ве-
щества с роговицы, конъюнктивального мешка,
век с целью уменьшения повреждения тканей
глаза [4, 5, 6, 7, 8, 9]. Эффективным при этом
может быть использование фосфат-буферных
нейтрализаторов, а также сорбции и детоксика-
ции с применением различных материалов с вы-
сокой способностью поглощения химических
веществ [10]. В то же время бывают ситуации,
когда природа ожогового вещества не установ-
лена (кислота или щелочь). Поэтому нужны уни-
версальные средства с нейтрализующими свой-
ствами. Таким средством может стать сорбент
«Полисорб».
Цель исследования:
по результатами уль-
траструктурных исследований установить эф-
фективность применения сорбента «Полисорб» в
качестве средства для оказания первой помощи
при ожогах роговицы щелочью.
Материал и методы.
Эксперименты вы-
полнены на 30 кроликах возрастом в 2 года и с
массой тела от 2,5 до 3,0 кг. Из них 6 животных
составляли интактную контрольную группу. 12
кроликам наносили ожоги роговицы щелочью -
10% NaOH, другим 12 животным через 5 минут
после нанесения ожога осуществляли промыва-
ние конъюнктивального мешка раствором сор-
бента «Полисорб». Выведение животных из экс-
перимента осуществляли путем введения боль-
ших доз концентрированного тиопентала натрия
(из расчета 25 мг / 1 кг) через 1, 6, 12 и 24 часа
после начала эксперимента. Для ультраструк-
турных исследований забирали кусочки рогови-
цы, которые фиксировали в 2,5% растворе глю-
таральдегиду с активной реакцией среды рН 7,3-
7,4, приготовленном на фосфатном буфере Мил-
лонига. Фиксированный материал через 50-60
минут переносили в буферный раствор и промы-
вали в течение 20-30 минут. Постфиксацию
осуществляли 1% раствором четырехокиси ос-
мия на буфере Миллонига в течение 60 минут,
после чего проводили дегидратацию в спиртах и
ацетоне, заливали в смесь эпоксидных смол и
аралдита. Ультратонкие срезы, изготовленные на
ультрамикротомах УМПТ-7, окрашивали 1%
водным раствором уранилацетата, контрастиро-
вали цитратом свинца и изучали в электронном
микроскопе ПЭМ-125К.
Все экспериментальные исследования про-
водились с соблюдением «Правил проведения
работ с использованием экспериментальных жи-
вотных».
Результаты исследования и их обсужде-
ние.
Грубые деструктивные изменения в рого-
вице экспериментальных животных возникали
уже в первые часы после нанесения ожогов и
прогрессировали до завершения эксперимента.
Так, через час после нанесения ожоговой травмы
на фоне гомогенизированной ткани переднего
эпителия роговицы в ее центральных отделах,
выявлялись остатки клеток с признаками глубо-
ких деструктивных нарушений. Их овальная
форма нарушалась, цитоплазма становилась го-
могенизированной с разрушенными органеллами
и формированием на их месте многочисленных
вакуолей. В пикнотически измененных ядрах
наблюдалась конденсация гетерохроматина. Пе-
ринуклеарные пространства были неравномер-
ными и заметно расширенными (рис. 1).
Собственное вещество роговицы также под-
вергалось деструкции. При этом наблюдалось
розволокнение и фрагментация коллагеновых
фибрилл, терялась их параллельная ориентация.
Фибробласты были заметно увеличенными в
размерах за счет значительного расширения пе-
ринуклеарных пространств. Их ядра апоптотиче-
ски фрагментировались, а цитоплазма диффузно
просветлялась и, практически, не содержала ор-
ганелл. Все эти явления прогрессивно нарастали
и до следующего, шести часового, срока наблю-
дения (рис. 2).
Значительно менее выраженными по срав-
нению с некорригированной животными были
изменения, наблюдавшиеся у животных, кото-
рым проводили промывание конъюнктивы рас
твором препарата «Полисорб». На 1-й час после
нанесения ожога изменения деструктивного
плана в переднем эпителии животных данной
серии эксперимента были практически идентич-
ными с такими, которые наблюдались у живот-
ных без обработки сорбентом «Полисорб», вме-
сте с тем, у них чаще встречались клетки с ча-
стично сохранившимися структурными элемен-
тами. Что касается собственного вещества рого-
Особенности ультраструктурных изменений в роговице кроликов при ее ожогах щелочью ...
152 Проблемы биологии и медицины, 2015, №1 (82)
вицы, то деструктивные изменения в нем были
умеренными. Розволокнение и фрагментация
коллагеновых фибрилл носили зональный харак-
тер и не проникали на всю глубину. Сохранен-
ные фибробласты были несколько увеличенны-
ми за счет незначительного расширения пери-
нуклеарных пространств. Ядра таких клеток
имели неровные контуры кариолемы, в цито-
плазме выявлялись как сохраненые, так и вакуо-
лизированные органеллы. Особых изменений у
данной группы животных не было обнаружено и
в шестичасовой срок. То есть, в результате
устранения выраженного повреждающего дей-
ствия щелочи сравнительно менее выраженными
были отечные, дистрофические и деструктивные
явления.
У животных без коррекции деструктивные
изменения во всех слоях роговицы продолжали
прогрессировать и в последующие сроки наблю-
дения, набирая своего максимального развития к
концу первых суток, то есть через 24 часа с мо-
мента нанесения ожога. Уже через 12 часов от
начала наблюдения выраженным деструктивным
изменениям подвергались не только эпителио-
циты непосредственно пораженной части рого-
вицы, но и ее краевой зоны, расположенной воз-
ле лимба, которая на момент нанесения ожога
еще находилась за пределами непосредственного
влияния ожогового фактора. Клетки эпителиаль-
ного покрова роговицы в таких местах прогрес-
сивно уменьшались в размерах, истончался слой
их цитоплазмы, которая одновременно станови-
лась просветленной и содержала многочислен-
ные вакуоли на месте разрушенных органелл.
Ядра приобретали выраженный пикнотический
вид с инвагинациями кариолемы и конденсацией
хроматина. Межклеточные промежутки были
расширенными и вакуолизированными. Многие
клетки находилась в состоянии апоптоза и
некроза (рис. 3). Полной дезорганизации подвер-
галось собственное вещество роговицы. При
электоронно-микроскопичному
исследовании
оно представляло собой смесь обрывков колла-
геновых волокон, остатков фиброластов и их
органелл, которые визуализировались на фоне
просветленных полей (рис. 4).
В отличие от этого, 12-часовой срок после
ожога роговицы у животных с промыванием
конъюнктивального мешка сорбентом «Поли-
сорб», характеризовался началом развития де-
гидратационных процессов. При стабильности
морфологической картины в зоне нанесения
ожога, в краевой области вокруг него можно бы-
ло наблюдать практически сохраненые и функ-
ционально активные эпителиоциты с умеренны-
ми дистрофическими изменениями органелл.
Часть митохондрий сохраняла обычные размеры
с оконтуриванием кристами и электронноплот-
ным матриксом. Канальцы гранулярной эндо-
плазматической сети местами выглядели не-
сколько расширенными. Ядра таких клеток были
правильной овально-округлой формы, содержа-
ли 1-2 ядрышки и равномерно распределенный
хроматин (рис. 5). Для 24-часового срока наблю-
дения характерным было дальнейшее восстанов-
ление структур глаза. Хотя передний эпителий
продолжал еще находиться в состоянии деструк-
ции, в собственном веществе роговицы уже
наблюдались и регенераторные процессы. Менее
выраженной по сравнению с некорригированной
животными была дезорганизация и фрагмента-
ция коллагеновых волокон (рис. 6). Фиброциты
хотя и были с признаками выраженных дистро-
фических изменений, однако в большинстве
случаев сохраняли свою структурную организа-
цию. В дистрофически измененных клетках ядра
имели неровные контуры кариолемы, для них
была характерной конденсация хроматина в виде
отдельных комочков, в цитоплазме содержались
как сохраненые, так и частично разрушенные
органеллы. Вместе с тем, можно было наблю-
дать клетки с повышенной функциональной ак-
тивностью которая проявлялась выравниванием
контуров ядер, увеличением количества элек-
тронноплотных митохондрий и канальцев гра-
нулярной эндоплазматической сети (рис. 7).
Таким образом, проведенные ультраструк-
турные исследования роговицы кролика после
нанесения ожога щелочью позволили установить
выраженные прогрессирующие деструктивные
изменения во всех ее слоях, которые возникали
не только в зоне непосредственного поражения,
но и распространялись на окружающие ее участ-
ки. Применение раствора сорбента «Полисорб»
для промывания конъюнктивального мешка при
ожогах роговицы щелочами позволяет предот-
вратить грубые структурне изменения и создать
более благоприятные условия для регенератор-
ных процессов.
Выводы.
1. Ожоги роговицы щелочью приводят к ее
глубоким прогрессирующим деструктивным из-
менениям.
2. Применение в качестве первой помощи
для промывания конъюнктивы раствора сорбен-
та «Полисорб» позволяет значительно умень-
шить ожоговое действие щелочи и тем самым
предупредить глубокие структурные изменения
роговицы и создать более благоприятные усло-
вия для регенераторных процессов.
Перспективы дальнейших исследований.
Полученные результаты дают основания для
продолжения дальнейших исследований воз-
Т.И. Романюк
Биология ва тиббиёт муаммолари, 2015, №1 (82) 153
можностей использования данного препарата в
клинических условиях.
Литература:
1.
Чаланова Р.И. Дезадаптивный тип индивиду-
альной адренергической иммунореактивности
организма на ожоговую травму глаза (второе
сообщение) / Р.И. Чаланова // Офтальмол. журн.
– 2010. – №4. – С. 37–41.
2.
Чаланова Р.И. Практическая значимость кли-
нико–иммунологической
оценки
стресс–
реактивности
организма
для
офтальмо–
комбустиологии (третье сообщение) / Р.И. Чала-
нова, Т.В. Дегтяренко // Офтальмол. журн. –
2010. – № 6. – С. 31–36.
3.
Чаланова Р.И. Уровень Т–адренорецепции и
толерантность организма к аутоантигенам рого-
вицы при ожоговой травме глаз / Р.И. Чаланова,
Т.В. Дегтяренко // Офтальмол. журн. – 2004. – №
6. – С. 33–36.
4.
Черныш
В.Ф. Ожоги глаз состояние пробле-
мы и новые подходы / В.Ф.
Черныш
, Э.В. Бойко.
– СПб.:
ВМедА
, 2008. – 135 с.
5.
Шкромида М. І. Лікування хімічних опіків
очей в сучасних умовах / М.І. Шкромида, М.Д.
Вершиніна, О.М. Панько, О.М. Мохур // Наук.
конф. офтальмол., присвячена 90–річчю акад.
Н.О. Пучківської, 18–19 трав. : тези доп. – Одеса,
1998. – С. 201–203.
6.
Якименко С.А. Стан надання спеціалізованої
допомоги потерпілим з опіками очей в Україні /
С.А Якименко // Офтальмол. журн. – 2008. – №
6. – С. 79–83.
7.
Якименко С.А. Трансплантація консервованої
амніотичної оболонки в лікуванні опіків очей
важкого ступеня / С.А. Якименко, О.І. Бузник //
Офтальмол. журн. – 2007. – № 5. – С. 40–43.
8.
Пучковская Н. А. Ожоги глаз / Н.А. Пучков-
ская, С.А. Якименко, В.М. Непомящая – М. :
Медицина, 2001. – 272 с.
9.
Sotozono C. Cytokine expression in the alkali–
burned cornea. / C. Sotozono, J. He, Y. Matsumoto
[et al.] // Current Eye Research. 1997. – V. 16, № 4.
– P. 670–676.
10. Чередниченко Л.П. Первая помощь при ожо-
говой травме роговицы и конъюнктивы / Л.П.
Чередниченко, Л.В. Яковлева, Г.В. Кореняк [и
др.] // Ожоги глаз и их последствия: науч.–практ.
конф., 23–24 мар.: материалы. – М., 1997. – С.
29.
ОСОБЕННОСТИ УЛЬТРАСТРУКТУРНЫХ
ИЗМЕНЕНИЙ В РОГОВИЦЕ КРОЛИКОВ
ПРИ ЕЕ ОЖОГАХ ЩЕЛОЧЬЮ И
КОРРЕКЦИЕЙ ЭНТЕРОСОРБЕНТОМ
«ПОЛИСОРБ»
Т.И. РОМАНЮК
ГВУЗ «Тернопольский государственный меди-
цинский университет им. И.Я. Горбачевского МЗ
Украины»
Эксперименты выполнены на 30 кроликах,
части из которых наносили ожоги роговицы ще-
лочью, а другим после ожога осуществляли про-
мывание конъюнктивального мешка раствором
сорбента «Полисорб». Грубые деструктивные
изменения в роговице возникали уже в первые
часы после нанесения ожогов и прогрессировали
до завершения эксперимента. Через 1 час после
ожоговой травмы на фоне гомогенизированной
ткани переднего эпителия роговицы в ее цен-
тральных отделах выявлялись также клетки с
признаками глубоких деструктивных наруше-
ний. Собственное вещества роговицы также
подвергалось деструкции. Наблюдалось розво-
локнение и фрагментация коллагеновых фиб-
рилл, терялась их параллельная ориентация. Ме-
нее выраженными по сравнению с некорригиро-
ванными животными были изменения у живот-
ных которым проводили коррекцию препаратом
«Полисорб». Через час после нанесения ожога
изменения деструктивного плана в переднем
эпителии были практически идентичны с таки-
ми, которые проявлялись у животных без обра-
ботки конъюнктивы сорбентом «Полисорб».
Вместе с тем, чаще встречались клетки с частич-
но сохранившимися структурными элементами.
Что касается собственного вещества роговицы,
то деструктивные изменения в нем были уме-
ренными. У животных без коррекции деструк-
тивные изменения во всех слоях роговицы про-
должали прогрессировать и в последующие сро-
ки, набирая своего максимального развития че-
рез 24 часа с момента нанесения ожога. Уже че-
рез 12 часов от начала наблюдения выраженной
деструкции подлежали не только эпителиоциты
пораженной части роговицы, но и ее краевой
зоны. Межклеточные промежутки были расши-
ренными и вакуолизированными. Полной дезор-
ганизации подвергалась собственная вещество.
В отличие от этого, 12-часовой срок после ожога
роговицы у животных с промыванием конъюнк-
тивального мешка сорбентом «Полисорб» харак-
теризовался началом развития дегидратацион-
ных процессов. При стабильности морфологиче-
ской картины в зоне нанесения ожога, в краевой
области можно было наблюдать сохранённые и
функционально активные эпителиоциты с уме-
ренными дистрофическими изменениями. Для
24-часового срока наблюдения было характер-
ным дальнейшее восстановление структур глаза.
Ключевые слова:
роговица, ожог, луг, уль-
траструктура, коррекция
