Микробиологический мониторинг гнойной раны при флегмонах челюстно-лицевой области у детей при различных методах диагностики

Биология ва тиббиёт муаммолари, 2016, №4 (91) 117

УДК: 616.716.8-002-085.835

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ГНОЙНОЙ РАНЫ ПРИ ФЛЕГМОНАХ

ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ У ДЕТЕЙ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДАХ ДИАГНОСТИКИ

С.С. ШАДИЕВ, Х.Т. ХУДОЙБЕРДИЕВ

Самаркандский Государственный медицинский институт, Республика Узбекистан, г. Самарканд

БОЛАЛАР ЮЗ-ЖАҒ СОҲАСИ ФЛЕГМОНАЛАРИ ЙИРИНГЛИ ЯРАЛАРИНИ ҲАР ХИЛ

УСУЛЛАРДА ТАШҲИСЛАШНИНГ МИКРОБИОЛОГИК МОНИТОРИНГИ

С.С. ШАДИЕВ, Х.Т. ХУДОЙБЕРДИЕВ

Самарқанд Давлат медицина институти, Ўзбекистон Республикаси, Самарқанд

MICROBIOLOGICAL MONITORING OF THE PURULENT WOUND IN PHLEGMON OF THE

MAXILLA-FACIAL AREAS IN CHILDREN WITH DIFFERENT METHODS OF DIAGNOSTICS

S.S. SHADIEV, Kh.T. KHUDOYBERDIEV

Samarkand State Medical Institute, Republic of Uzbekistan, Samarkand

Йирингли яра ажралмаларини бактериологик ва газ суюқлик хроматографияси (ГСХ) усулларида

комплекс таҳлил ўтказилди. Бактериологик текширувда штаммларнинг асосий миқдори облигат спора

ҳосил қилмайдиган анаэроб микроорганизмлардан (34,6%), иборат бўлиб улар факультатив- анаэробли,

аэроб ва замбуруглардан (22,7%) устун турадилар. Яллиғланишнинг нормергик турида микроб

ассоциациялари асосан 4-6 турдаги микроорганизмлардан (61,3%) иборат бўлган бўлса, гипергик турда

6-8 тур (90,3%), гиперергик турдаги яллиғланишда 3-4 турдан иборат бўлган. ГСХ усулидаги

текширувларга асосан: Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Clostridium, Actinomyces,

Corynebacterium, Bacteroides, Nocardiopsis, Nocardia, Propionibacterium jensenii, Streptococcus

thermophilus, St. salivarius, St. mutans, аниқланди, бошқа турдаги микроорганизмлар эса кам учради. ГСХ

усули юқори информатив бўлиб тезкорлиги бўйича микробиологик усулдан устун туради.

Калит сўзлар.

Юз-жағ соҳаси

флегмоналари, микроб ассоциациялари, ёғ кислоталари, газли

хроматография.

It was carried out complex analysis of the discharge of purulent wounds and bacteriological methods of

GLC. It was found that small number of strains were presented by asporogenous anaerobic bacteria (34.6%),

which prevailed over the facultative-anaerobic, aerobic forms and fungi (22.7%) during bacteriological exami-

nation. In normergic type of inflammatory reaction microbial associations were often presented by 4-6 species

of microorganisms (61.3%),in hypergic type to 6-8 species (90.3%), in hyperergic type of 3-4 species. When

GLC

method of investigation in the test samples prevailed: Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Clos-

tridium, Actinomyces, Corynebacterium, Bacteroides, Nocardiopsis, Nocardia, Propionibacterium jensenii,

Streptococcus thermophilus, St. salivarius, St. mutans, other species of microorganisms occurred in smaller

numbers. GLC method is more informative and on expressiveness exceeds microbiological method.

Keywords.

Phlegmon of the maxilla-facial area, microbial associations, fatty acids, gas chromatog-

raphy.

Актуальность.

Больные с острыми неспе-

цифическими гнойно-воспалительными заболева-

ниями челюстно-лицевой области составляют от

40 до 60% от общего числа пациентов, обратив-

шихся за хирургической стоматологической по-

мощью [2,5]. Воспалительные процессы челюст-

но-лицевой области часто приводят к таким

осложнениям, как распространение процесса в

окружающие ткани, остеомиелиты челюстей, сеп-

сис, тромбоз кавернозного синуса и т.д. [2,9,10].

Проблема совершенствования методов и средств

профилактики, диагностики и лечения таких

больных остаётся одной из наиболее актуальных

задач современной стоматологии. Применяемые

на сегодняшний день в клинической практике ме-

тоды диагностики инфекции имеют определенные

ограничения и недостатки. Существенным недо-

статком классического бактериологического ис-

следования, помимо дороговизны и длительности

(7-10 дней), является невозможность оценить роль

некультивируемых микроорганизмов в инфекци-

онно-воспалительном процессе, прежде всего –

анаэробов [4,5,7].

На сегодняшний день существует альтерна-

тивный более информативный способ определе-

ния микробных сообществ методом газо-

жидкостной хроматографией (ГЖХ). В основе

метода лежит высокоточное определение специ-

фических маркерных молекул, входящих в состав

клеточных липидов микроорганизмов, метод поз-

воляет проводить ускоренную (менее двух часов)

индикацию микроорганизмов [1,3,6,7,11].

Целью исследования

явилось микробиоло-

гический мониторинг гнойной раны при флегмо-

нах челюстно-лицевой области у детей при раз-

личных методах диагностики.

Материал и методы исследования

.

К ис-

следованиям были привлечены 69 больных детей

(девочек 24, мальчиков 45) с флегмонами челюст-

но-лицевой области различных локализаций ле-

чившихся в отделении челюстно-лицевой хирур-

Микробиологический мониторинг гнойной раны при флегмонах челюстно-лицевой области у…

118 Проблемы биологии и медицины, 2016, №4 (91)

гии Областного многопрофильного детского ме-

дицинского центра города Самарканда.

В качестве материала использовались отде-

ляемое из раны после вскрытия флегмон ЧЛО.

Забор материала осуществлялся в асептических

условиях. Проведен комплексный анализ бакте-

риологическим, и ГЖХ методами. Микробиоло-

гическое исследование проводилось по стандарт-

ной методике [1]. Газожидкостной хроматографи-

ей определяли маркеры микроорганизмов – жир-

ных кислот в виде их метиловых эфиров. Непо-

движная фаза – 15% лестосил на хроматоне NA-

W c размером частиц 0,150-0,250 мм, колонка

стеклянная размером 0,04х1,00м; расход газоно-

сителя – азота – 32 мл/мин; детектор – пламенно-

ионизационный, соотношение азот: водород: воз-

дух=1:1:10, объем вводимой пробы – 2-3 мкл гек-

сановый эктракт метиловых эфиров жирных кис-

лот. Идентификация жирных кислот – маркеров в

микроорганизме осуществляли методом «свиде-

телей» и на основе метода структурно-групповых

составляющих [3,6], а количественный анализ –

методом абсолютной калибровки [7,8]. Статисти-

ческая обработка данных проведена с использо-

ванием пакета прикладных программ Statistica 6.0.

Результаты исследования.

При бактерио-

логическом исследовании гнойной раны у детей с

флегмонами ЧЛО высевалась следующая микро-

флора: - Бактероидов в 13,2 %, Пептострептокок-

ков - в 9,58 %, Фузобактерий - в 5,01%, Стафило-

кокков - 8,27%, Облигатно-анаэробных бактерий -

34,64%, Микроаэрофильных стрептококков -

6,53%, Пропионибактерий - 2,83%, Энтеробакте-

рий - 1,74%, Neisseriaspp - 0,43%, Факультативно-

анаэробных и аэробных бактерий - 17,64% (см.

табл.1).

Наибольшее количество штаммов было

представлено облигатными неспорообразующими

анаэробными микроорганизмами (34,64%), кото-

рые вместе с близкими к ним по своим свойствам

микроаэрофильными стафилококками (6,53%)

составили абсолютное преобладание над факуль-

тативно- анаэробными, аэробными формами и

грибами

(22,65%).

Облигатные

неспоро-

образующие анаэробы были выделены у всех бак-

териологически обследованных больных (100%).

Таблица 1.

Микробиоценоз гнойного экссудата при флегмонах ЧЛО при бактериологическом исследовании

Род и вид возбудителей

Число штаммов

%

Бактероидов (всего)

61 (14; 45; 2)

13,2 (3,02; 9,73;0,43)

Prevotella melanino genica

22 (8; 12; 2)

4,76 (1,73; 2,6;0,43)

P. capillosus

18 (3; 15; 0)

3.89 (0,64; 3,24;0)

P. oralis

13 (2; 11; 0)

2,81 (0,43; 2,38;0)

B. fragilys

3 (0; 3; 0)

0,64 (0; 0,64; 0)

B. imiformis

5 (1; 4; 0)

1,08 (022; 0,86;0)

Пептострептококков (всего)

44 (13;26;5)

9,58 (2,83;5,66;1,09)

P.anaerobius

21 (7;10;4)

4,58 (1,53;2,18;0,89)

S.intermedius

16 (4;11;1 )

3,48 (0,87;2,39;0,22)

P.micros

7 (2 ;5;0)

1,52 (0,43;1,09;0)

Фузобактерий (всего)

23 (12; 9; 2)

5,01 (2,61; 1,97;0,43)

F. nucleatum

13 (4; 8; 1)

2,83 (0,88; 1,74; 0,21)

F. necroforum

10 (8; 1; 1)

2,18 (1,74; 0,22; 0,22)

Стафилококков(всего)

38 (10;26;2)

8,27 (2,18;5,66;0,43)

Staphylococcus aureus

17 (4;12;1)

3,7 (0,87;2,61,8;0,22)

S.epidermidis

21 (6 ;14;1)

4,57 (1,3;3,04;0,22)

Облигатно-анаэробных бактерий (всего)

159 (41;112;6)

34,64 (8,93;24,4;1,3)

Микроаэрофильных стрептококков (всего)

30 (14;16;0)

6,53 (3,05;3,48;0)

Streptococcus, sangius

7 (4;3;0)

1,52 (0,87;0,65;0)

S.milled

15 (5;10;0)

3,27 (1,09;2,18;0)

S.mitis

8 (5;3;0)

1,74 (1,09;0,65;0)

Пропионибактерии

13 (3;10;0)

2,83 (0,65;2,18;0)

Enterobacteriaceae (всего)

8 (2;6;0)

1, 74 (0,44 ;1,3;0)

Escherichia coli

4 (1;3;0)

0, 87 (0,22;0,65;0)

Enterobacter spp.

3 (1;2;0

0,65 (0,22;0,43;0)

Proteus spp.

1 (0;1;0)

0,22 (0;0,22;0)

Neisseria spp. (всего )

2 (0;2;0)

0, 43 (0;0,43;0)

Факультативно-анаэробных и аэробных бактерий (всего)

81 (28;47;6)

17,64 (6,09;10,24; 1,4)

Всего штаммов

459

100%

Примечание: Цифры, приведенные внутри каждых скобок, обозначают значения данного показателя при нормер-

гическом, гипергическом или гиперергическом типах течения воспалительной реакции

.

С.С. Шадиев, Х.Т. Худойбердиев

Биология ва тиббиёт муаммолари, 2016, №4 (91) 119

Таблица 2.

Результаты определения маркеров микроорганизмов из содержимого гнойной раны методом ГЖХ

N

Вид микроорганизма

Маркер

Содержание*

1

Lactobacillus, Streptococcus, Clostridium

Миристиновая (14:0)

Y=4,73*10

5

*x

2

Staphylococcus, Bacillus

Антеизононадекановая кислота

(a19)

Y=1,38*10

5

*x

Антеизотридекановая

Y=1,52*10

5

*x

3

Pseudomonas stutzeri

Пентадекановая (15:0)

Y=2,61*10

5

*x

4

Corynebacterium, Bacteroides, Nocardiopsis,

Nocardia

Антеизогептадекановая (а17:0)

Y=2,51*10

5

*x

6

Actinomyces

Эйкозановая (20:0)

Y=4,21*10

5

*x

Propionibacterium jensenii, Streptococcus ther-

mophilus, St. salivarius, St. mutans, Actinomyces Эйкозеновая (20:1)

Y=1,58*10

5

*x

Francisella

Бегеновая (21:0)

Y=0,17*10

5

*x

Mycobacterium

Гептадеценовая кислота (С

17:1

)

Y=0,37*10

5

*x

микроэукариоты

Тетракозановая (24:0)

Y=0,58*10

5

*x

Enbacteriwn, Clostridium

Октадеценовый (18:1а)

Y=0,44*10

5

*x

7

Грибы рода Candida

Гептадеценовая кислота (С

17:1

)

Y=0,37*10

5

*x

8

Enterococcus faecalis

Циклононадекановая кислота

(19cyc)

Y=8,23*10

5

*x

Примечание: * Y – содержание маркера в микроорганизме; x – высота пика в хроматограмме, мм.

Они находились как в ассоциациях между

собой (27 посевов - 22,3%), но чаще в ассоциаци-

ях с факультативными анаэробными и аэробными

формами (81 посев - 66,9%). Количество выде-

ленных видов микроорганизмов различалось у

больных с различными типами течения воспали-

тельной реакции. Так, при нормергическом типе

воспалительной реакции микробные ассоциации

чаще были представлены 4-6 видами микроорга-

низмов (61,3%).

Среди облигатных неспорообразующих

анаэробов преобладали пептострептококки и бак-

тероиды. Часто выделялись фузобактерии

(F.necroforum и F.nucleatum), микроаэрофильные

стрептококки (S.milleri, S.mitis). Реже выделялись

стафилококки и пропионебактерии. В целом, если

при нормергическом типе течения воспалитель-

ной реакции выделялось меньшее количество ви-

дов микробов (3-4 вида), то они были преимуще-

ственно представлены ассоциациями облигатных

неспорообразующих анаэробных бактерий, то

есть наиболее патогенных форм.

При гипергическом типе течения воспали-

тельной реакции количество выделенных видов

микробов в ассоциациях увеличивалось по срав-

нению с нормергией до 6-8 видов (90,3%). В еди-

ничных случаях обнаруживалось 3-5 видов

(9,7%). Среди данных бактерий преобладали бак-

тероиды и пептострептококки. Часто выделялись

B. capillosus, B. melaninogenicus, P. lanceolatus, S.

intermedius. Чаще чем при нормергическом типе

воспаления выделялись анаэробные актиномице-

ты в патогенных формах. При гиперергическом

типе течения воспалительной реакции микробный

пейзаж в трех случаях был представлен тремя, а в

двух случаях четырьмя видами. Половину штам-

мов составили облигатные неспорообразующие

анаэробные бактерии, среди которых преобладали

пептострептококки и фузобактерии, а другую по-

ловину - стафилококки, в основном S. aureus и S.

epidermidis, в ассоциациях обладающие значи-

тельной степенью патогенности.

Наличие микрофлоры определено также по

усовершенствованной методике методом ГЖХ.

Полученные качественные и количественные ре-

зультаты представлены в таблице 2.

Как видно из данных табл. 2, для каждого

микроорганизма характерна свой маркер в виде

определенной жирной килоты, содержание кото-

рого определяется по аналитической зависимости,

приведенной в табл. В количественном выраже-

нии в исследуемых пробах преобладали:

Enterococcus,

Lactobacillus,

Streptococcus,

Clostridium,

Actinomyces,

Corynebacterium,

Bacteroides,

Nocardiopsis,

Nocardia,

Propionibacterium

jensenii,

Streptococcus

thermophilus, St. salivarius, St. mutans, остальные

виды микроорганизмов встречались в меньшем

количестве.

Выводы:

1.

Недостатком классического бактериологиче-

ского исследования, помимо дороговизны и дли-

тельности (7-10 дней), является невозможность

оценить роль некультивируемых микроорганиз-

мов в инфекционно-воспалительном процессе

2.

Метод ГЖХ определения микроорганизмов,

основанной на выялении их маркеров в раневом

экссудате, является информативным, позволяет

выявить микроорганизмы которые не выявляются

при традиционном методе исследования и по экс-

Микробиологический мониторинг гнойной раны при флегмонах челюстно-лицевой области у…

120 Проблемы биологии и медицины, 2016, №4 (91)

прессивности превосходит микробиологический

метод.

Литература:

1.

Ариповский А. В., Колесник П. О., Веждел

М. И., Титов В. Н. Метод подготовки проб для

газохроматографического определения жирных

кислот без предварительной экстракции липи-

дов//Клиническая лабораторная диагностика. –

2012. – №. 1. – С. 3-6.

2.

Блатун Л.А. Флегмоны и абсцессы - совре-

менные возможности лечения / Л.А.Блатун // Ле-

чащий врач. - 2002. - № 1-2. - С.30-40.

3.

Дутов А.А. Хроматография в практической

медицине //Забайкальский медицинский вестник.

– 2002. – № 1.– С.31-37.

4.

Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская

микробиология, иммунология и вирусология. –

СПб.: СпецЛит., 2008. – 767 с

5.

Кравченко В.В., Лещенко И.Г. Диагностика и

лечение гнойной стома- тологической инфекции:

Монография. - Самара: ГП «Перспектива», 2003. -

с.28.

6.

Мухамадиев Н. К., Ибатова Ш.М. Газохрома-

тографическое изучение жирных кислот в сыво-

ротки крови детей, больных рахитом //Труды 2-го

Западноукраинского симпозиума по адсорбции и

хроматографии.-Львов. - 2000.- С. 211-214.

7.

Осипов

Г.А.

Хромато-масс-

спектрометрический анализ микроорганизмов и

их сообществ в клинических пробах при инфек-

циях и дисбиозах. /Химический анализ в меди-

цинской диагностике. – М.: Наука, 2010. – С. 293–

368

8.

Осипов Г.А., Родионов Г.Г. Применение ме-

тода масс-спектрометрии микробных маркеров в

клинической практике // Лабораторная диагно-

стика - Спецвыпуск . Лаборатория - №2, 2013. –

С. 68-73.

9.

Соловьев М.М. Абсцессы, флегмоны головы

и шеи / М.М.Соловьев, О.П.Болшаков. - М.: Изд-

во МЕДпресс, 2001. - 229 с.

10.

Супиев Т.К. Гнойно-воспалительные заболе-

вания челюстно-лицевой области / Т.К.Супиев. -

М.: Изд-во МЕДпресс, 2001. - 160 с.

11.

Shadiev S.S., Azimov M.I. Relationship of the

parameters of endogenous intoxication with fatty ac-

ids in patients with phlegmons of the maxillofacial

region //

Ukrainian Journal of Surgery. - 2013.- N

2(21). – P. 102-106.

12.

Schulz M., Schmoldt A. Therapevtic and toxic

bloodconcentrations of more than 800 drugs and oth-

er xenobiotics(review) // Pharmazie. – 2003. – Vol.

58. – P.447-474.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ

ГНОЙНОЙ РАНЫ ПРИ ФЛЕГМОНАХ

ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ У

ДЕТЕЙ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДАХ

ДИАГНОСТИКИ

С.С. ШАДИЕВ, Х.Т. ХУДОЙБЕРДИЕВ

Самаркандский Государственный медицинский

институт, Республика Узбекистан, г. Самарканд

Проведен комплексный анализ отделяемого

гнойной раны бактериологическим и ГЖХ мето-

дами. Выявлено, что при бактериологическом

исследовании наибольшее количество штаммов

было представлено облигатными неспорообразу-

ющими анаэробными микроорганизмами (34,6%),

которые преобладали над факультативно- анаэ-

робными, аэробными формами и грибами (22,7%).

При нормергическом типе воспалительной реак-

ции микробные ассоциации чаще были представ-

лены 4-6 видами микроорганизмов (61,3%). При

гипергическом типе до 6-8 видов (90,3%). При

гиперергическом типе 3-4 видами. При ГЖХ ме-

тоде исследования в исследуемых пробах преоб-

ладали: Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus,

Clostridium,

Actinomyces,

Corynebacterium,

Bacteroides,

Nocardiopsis,

Nocardia,

Propionibacterium

jensenii,

Streptococcus

thermophilus, St. salivarius, St. mutans, остальные

виды микроорганизмов встречались в меньшем

количестве. Метод ГЖХ является более инфор-

мативным и по экспрессивности превосходит

микробиологический метод.

Ключевые слова.

Флегмоны челюстно-

лицевой области, микробные ассоциации, жирные

кислоты, газовая хроматография.