Биология ва тиббиёт муаммолари, 2015, №4.1 (85) 125
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК: 616.37-008.64
ИЗМЕНЕНИЕ СЕКРЕТОРНОЙ АКТИВНОСТИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ
ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ
В.П. АСКАРЬЯНЦ, А.С. ФАЗЫЛДЖАНОВА, Б.Б. НИГМАНОВ, Ш.А. АДХАМОВ У.А. ЮЛДАШЕВ
Ташкентский Педиатрический Медицинский институт, Республика Узбекистан, г. Ташкент
Изменение желудочной секреции под воздей-
ствием пестицидов отражается на деятельности под-
желудочной железы, функционально тесно связанной
с желудком. Не исключено также, что пестициды мо-
гут оказать непосредственное влияние на ацинарный
аппарат поджелудочной железы.
В литературе имеются некоторые сведения о
влиянии хлорорганических соединений (ХОС) на
внешнесекреторную функцию поджелудочной желе-
зы.
Материалы и методы.
Эксперименты прово-
дились на белых крысах. О функциональном состоя-
нии поджелудочной железы судили по активности
основных панкреатических ферментов: липазы по
Г.К.Шлыгину и соавт.(1963), амилазы по Смит-Рою в
модификации А.М.Уголева (1969) и протеаз по мето-
ду Гросса в содержимом кишечника и в гомогенате
железы. Животных (300) разделили на 5 групп, одна
из которых служила контролем, а крысам 2, 3, 4, 5-ой
групп вводили масляный раствор ГХЦГ внутрижелу-
дочно в дозах
1
/
3
,
1
/
5
,
1
/
20
,
1
/
50
ЛД
50
соответственно
(ЛД
50
=мг/кг).
Первая доза вводилась однократно, остальные
– ежедневно до конца исследований. Контрольные
крысы получали соответствующее количество масла.
Полученные результаты. Через 6 часов после
однократного введения препарата отмечалось сниже-
ние активности основных панкреатических фермен-
тов в содержимом тонкой кишки крыс. Активность
амилазы, липазы и протеаз была соответственно на
72, 42 и 35% ниже, чем у контрольных животных.
Эти изменения можно рассматривать как результат
угнетения активности липазы и амилазы в гомогена-
тах органа. Причем, как и в химусе, в большей степе-
ни снижалась амилолитическая активность. Следова-
тельно, не смотря на уменьшение секреции основных
панкреатических ферментов, в первые часы после
введения крысам ГХЦГ, их активность в железе угне-
тается, что можно расценивать как свидетельство
снижения интенсивности синтеза ферментов в аци-
нарных клетках (1).
Через 24 часа после введения препарата актив-
ность липазы, протеаз и амилазы в кишечном содер-
жимом продолжали оставаться достоверно снижен-
ными. В гомогенатах поджелудочной железы под-
опытных и контрольных животных активность этих
ферментов была практически одинаковой (табл.1).
Таким образом, затравка животных относительно
большой дозой ГХЦГ вызывает угнетение секреции
основных панкреатических ферментов и некоторое
снижение интенсивности их синтеза в поджелудоч-
ной железе (4). Многократное введение крысам ГХЦГ
в дозе
1
/
5
ДЛ
50
в течение 20 дней вызывало увеличе-
ние активности протеаз в химусе (табл.2). К 5-му дню
суммарная активность этих ферментов у подопытных
животных была в 2 раза выше, чем у контрольных
животных. К концу наблюдений (на 20-й день введе-
ния препарата) протеолитическая активность химуса
у подопытных и контрольных животных была прак-
тически одинаковой. Изменения активности липазы и
амилазы при введении ГХЦГ в дозе
1
/
5
ДЛ
50
были во
многом сходны между собой и противоположны
сдвигам протеолитической активности.
Таблица 1.
Изменение активности ферментов в гомогенате поджелудочной железы и тонкой кишки после однократного
введения ГХЦГ в дозе
1
/5
ЛД
50
Ферменты
Время исследований
Липаза
Протеазы
Амилаза
Химус
(ед.)
Гомогенат
(ед/г)
Химус(ед.)
Гомогенат
(ед/г)
Химус(мг/мин.)
Гомогенат
(мг/г/мин.)
Через 6 часов
830±100
480 ±90
15760 ± 2140
14000± 2040
2500± 320
1650± 280
11930 ± 1110
12860± 1190
3080 ± 470
880 ± 180
91500± 12610
62850± 7460
Через 24часа
950 ± 80
440± 50
30900 ± 1330
27860 ± 2160
2110 ± 230
1170 ± 140
23430 ± 1110
21320 ± 1500
2150± 200
830± 120
34270 ± 1080
33720± 1350
Таблица 2.
Фермент
Срок введения
препарата (1-е
сутки)
Срок введения
препарата (3-и
сутки)
Срок введения
препарата (5-е
сутки)
Срок введения
препарата (10-е
сутки)
Срок введения
препарата (20-е
сутки)
Липаза
(ед/г)
20140 ± 2370
6510 ± 1330
9560 ± 1400
10110 ± 850
18270 ± 440
17260 ± 3070
18440 ± 700
21090 ± 2660
8110 ± 680
8800 ± 720
Протеазы
(ед/г)
38410 ±5770
24450 ±3280
26710 ±3740
22340 ± 1469
10320 ±810
10970 ±2470
13280 ±1050
12070 ± 1580
7520 ±1170
14590 ±2020
Амилаза
(ед/г)
7800 ±7100
25000 ± 830
70000 ±520
26000 ±2400
16700 ± 2730
12550 ± 2440
17700 ± 1370
16050 ± 2150
31990 ± 2270
49640 ± 2780
Изменение секреторной активности поджелудочной железы при воздействии…
126 Проблемы биологии и медицины, 2015, №4.1 (85)
На второй день введения ГХЦГ наблюдалась
тенденция снижения активности этих ферментов.
Степень угнетения липолитической и амилолитиче-
ской активности на 3-й день уже была достоверной. В
дальнейшем наблюдалось повышение активности
этих ферментов, и к 5-му дню исследований липоли-
тическая, а к 10-му дню и амилолитическая активно-
сти возрастали до уровня контрольных крыс. Рост
активности этих ферментов продолжался до конца
экспериментов, и к двадцатому дню активность липа-
зы была на 84%, а амилазы на 64% выше контроля
(табл.2).
Активность ферментов в гомогенате поджелу-
дочной железы крыс, получавших ГХЦГ в дозе
1
/
5
ЛД
50
, в начале экспериментов снижалась. Амилоли-
тическая активность на 3-й день введения препарата у
подопытных животных снизилась в 3 раза по сравне-
нию с контрольными. Примерно на этом уровне она
оставалась у крыс, получавших ГХЦГ в течение 3-х
дней. На 5-,10-й дни активность амилазы в ткани
поджелудочной железы возрастала, и уже не отлича-
лась от таковой. У контрольных, а к 20-му дню была
достоверно выше, чем у крыс, не получавших препа-
рат. Липолитическая активность снижалась только
через 24 часа после введения ядохимикатов, затем
восстанавливалась, и до конца исследований не отли-
чалась от контроля. В первый день введения ГХЦГ
отмечалась тенденция снижения протеолитической
активности ткани железы; на 3-й, 5-й и 10-й дни ис-
следований эта активность существенно не менялась,
а к 20-му дню возрастала примерно в 2 раза по срав-
нению с контролем.
Сопоставляя динамику изменений активности
панкреатических ферментов в химусе и гомогенатах
железы, можно предположить, что уменьшение сек-
реции амилазы и липазы в первые дни эксперимента
обусловлено снижением интенсивности их синтеза в
ацинарных клетках. К концу исследований фермен-
тообразовательная функция железы восстанавливает-
ся или даже возрастает, и выделение амилазы и липа-
зы в полость тонкой кишки увеличивается. Некото-
рые изменения показателей внешнесекреторной
функции поджелудочной железы можно отметить и
при длительном введении ГХЦГ в дозе
1
/
20
ЛД
50
. На
15-й день опыта достоверно снижалась липолитиче-
ская активность химуса; протеолитическая и амило-
литическая активности не изменялись. В дальнейшем
активность липазы повышалась, и к 60-му дню на
67% превышала контрольный уровень. К третьему и
четвертому месяцам активность этого фермента в
химусе подопытных и контрольных животных стано-
вилась одинаковой. Активность протеаз имела тен-
денцию к снижению в конце второго месяца и к по-
вышению в конце четвертого. На 4-м месяце отмеча-
лась тенденция к повышению амилолитической ак-
тивности. К концу же исследований (на 180-й день)
активность всех трех ферментов в химусе была на
контрольном уровне. У подопытных животных, ис-
пользованных в этой серии экспериментов, в течение
первого месяца наблюдались признаки угнетения
ферментообразовательной функции поджелудочной
железы. В частности, на 15-й день введения ГХЦГ в
дозе
1
/
20
ЛД
50
достоверно угнеталась липолитическая
активность ткани железы, а протеолитическая актив-
ность проявляла явную тенденцию к снижению на 15-
й и 30-й дни. Амилолитическая активность до конца
4-го месяца не изменялась, затем резко возрастала, и
на 180-й день в 2 раза превышала контрольный уро-
вень. К концу экспериментов заметно повышались
также липолитическая и протеолитическая активно-
сти, которые в более ранние сроки не изменялись.
Результаты этих исследований позволяют заключить,
что при длительном отравлении ГХЦГ в дозе
1
/
20
ЛД
50
вначале отмечается некоторое угнетение секреции и
синтеза панкреатических ферментов, затем деятель-
ность железы нормализуется, а к концу исследований
заметно повышается интенсивность ферментообразо-
вательных процессов. Самая малая из применявшихся
нами доз ядохимиката (
1
/
50
ЛД
50
) вызывала наимень-
шие изменения в деятельности поджелудочной желе-
зы при длительном введении. В 1-й месяц отмечалась
определенная тенденция к снижению липолитической
и протеолитической активности в химусе и ткани же-
лезы, амилолитическая активность, напротив, возрас-
тала. В последующем достоверных различий в актив-
ности ферментов химуса и гомогената поджелудоч-
ной железы у подопытных и контрольных животных
не было, но прослеживалась тенденция к возрастанию
активности ферментов при действии малой дозы ядо-
химиката.
Выводы
: Таким образом, результаты всех про-
веденных с ГХЦГ экспериментов позволяют заклю-
чить, что он вызывает заметные сдвиги внешнесекре-
торной функции поджелудочной железы, направлен-
ность и глубина которых зависит от дозы препарата и
длительности его введения.
Литература:
1.
Афцелиус Б.А. Анатомия клетки, М, 1998.
2.
Закиров У.Б., Кадыров У.З., Миртурсунова С.З.,
Гулямов Т.Д. Экзосекреторная функция поджелудоч-
ной железы при воздействии различных доз гек-
сахлорциклогексана. «Фармакология и токсиколо-
гия», 1976, №1, с.455-458.
3.
Коротько Г.Ф., Розин Д.Г. Влияние центральных
нейротропных препаратов на дифференцированность
панкреатического ферментовыделения. «Бюллетень
экспериментальной биологии и медицины», 1976,
т.81, №1, с.6-9.
4.
Уголев А.М. Пищеварение и его приспособитель-
ная эволюция, М., 1976.
5.
Уголев А.М., Тимофеева Н.М. Определение пеп-
тидазной активности. В кн.: Исследование пищевари-
тельного аппарата у человека. Л., Изд-во «Наука»,
1996, с. 178-181.
6.
David A., Joseph L., Regulation in small intestinal
protein metabolism. Gastroenterology. 2011, v.24. №1, p.
471-476.
7.
Liphin M. Cell proliferation on the gastrointestinal
trakt of man. Fed Proc. 2010. v.24. №1, part 1, p.10-15.
Биология ва тиббиёт муаммолари, 2015, №4.1 (85) 127
УДК: 616-005.1-08-089:541,6:539,23
ОЦЕНКА ГЕМОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ Na – Са – КМЦ В УСЛОВИЯХ IN VITRO
Б.А. ИСМАИЛОВ, З.Р. ХАЙБУЛИНА, М.М. АЛИМОВ
Республиканский специализированный Центр хирургии им. акад. В.Вахидова,
Республика Узбекистан, г. Ташкент
Введение.
В современной хирургии вопрос
остановки паренхиматозного кровотечения остается
нерешенным. Существующие способы остановки
местного кровотечения: механические, термические,
химические и фармакологические имеют свои огра-
ничения и не лишены недостатков [1–4]. Токсич-
ность, травматичность, антигенные свойства, а так же
местно-раздражающее действие способствуют воспа-
лительному процессу, некрозу паренхимы органов,
что предрасполагает к развитию инфекции [5]. Сфера
эффективного применения кровоостанавливающих
средств местного действия будет расширяться, заме-
няя традиционные хирургические манипуляции при
остановке кровотечения аппликационной процедурой
[6]. Применение местных гемостатических средств из
биосовместимых, биоразлагаемых полимеров откры-
вает перспективы надежного гемостаза наряду с ми-
нимальным повреждением тканей.
Одним из полимеров отвечающим данным
требованиям является карбоксиметилцеллюлоза. В
литературе описываются ее высокая биоинертность и
противоспаечная активность [7,8]. Карбоксиметил-
целлюлоза в форме геля на протяжении многих лет
используется в качестве барьерного средства («Мезо-
гель») для профилактики спаечного процесса брюш-
ной полости [9,8]. Степень замещения (СЗ) показыва-
ет количество гидроксильных групп в ста звеньях
молекулы карбоксиметилцеллюлозы, в которых во-
дород замещен группой OCH2COONa. Степень по-
лимеризации отражает число звеньев в макромолеку-
ле реагента. Na-карбоксиметилцеллюлоза (Na-КМЦ)
представляет собой мелкозернистый порошкообраз-
ный, содержащий волокна, материал. КМЦ
натриевая
соль при растворении в воде образует вязкие бес-
цветные растворы, характеризуемые псевдопластич-
ностью, а также тиксотропией (способность восста-
навливать исходную структуру, разрушенную меха-
ническим воздействием). В водных растворах Na-
КМЦ является поверхностно-активным веществом,
при этом натриевая соль КМЦ отлично совмещается с
другими эфирами целлюлозы, растворимыми в воде,
а также природными и синтетическими полимерами и
многими солями щелочных, щелочноземельных ме-
таллов и аммония. Натриевая соль карбоксиметил-
целлюлозы повышает вязкость, влияет на реологию
или свойства текучести водной системы. Она являет-
ся суспендирующим, пленкообразующим, связую-
щим и водоудерживающим агентом.
Целью исследований
является о
ценка гемо-
статических свойств имплантата на основе Na – Са –
КМЦ.
Материал и методы исследования.
В каче-
стве исследуемого материала использована натрий
КМЦ с различной степенью замещения ее кальцием.
В наших исследованиях изучали воздействия
Na-Ca-КМЦ на гемостатические свойства цельной
крови. Исследования выполнены с нативной кровью
20-ти здоровых доноров – добровольцев.
Оценка ге-
мостатических свойств имплантата проводилась в
условиях in vitro.
Параметры гемостаза в крови доноров опреде-
ляли согласно современной номенклатуре методов
лабораторной диагностики, используя глобальные
(скрининговые) методы, включавшие в себя подсчет
активированного частичного тромбопластинового
времени (АЧТВ), протромбинового времени (ПВ),
концентрации фибриногена. Исходно параметры ге-
мостаза у доноров соответствовали референс интер-
валам.
Изучение свойств имплантата проводили пу-
тем инкубации с донорской плазмой in vitro. Для
определения АЧТВ, ПВ использовали цитратную
бедную тромбоцитами донорскую плазму. Кровь за-
бирали натощак в пластиковую пробирку, содержа-
щую 3,8% раствор цитрата натрия трехзамещенного в
соотношении 9:1, центрифугировали при 3000 об/мин
в течение 15 минут. Непосредственно после центри-
фугирования отбирали плазму для исследования.
В исследовании пленку Na – Са – КМЦ разме-
ром 1см
2
помещали в пробирку, содержащую 2,0 мл
плазмы, инкубировали 5 сек, после чего забирали 0,1
мл для определения АЧТВ; 0,1 мл - для ПВ; 1,0 мл -
для фибриногена.
Контрольные пробы исследовали аналогично
без добавления пленки.
АЧТВ, ПВ определяли по стандартный мето-
дике, используя наборы «АЧТВ-тест», «Техпластин-
тест» (содержит стандартизированный по МИЧ тром-
бопластин), «Тромбо-тест» производства «Техноло-
гия-стандарт», Россия. Общий фибриноген определя-
ли гравиметрически по Р. А. Рутберг (1972) с исполь-
зованием хлорида кальция 5,54% и раствора техпла-
стина.
Результаты исследований.
В контрольных
пробах плазмы АПТВ составило 38,3± 1,2 сек. В при-
сутствии пленки
Na-Ca-КМЦ происходило укороче-
ние АЧТВ в 2,1 раза по сравнению с контролем (Диа-
грамма 1).
ПВ позволяет оценить факторы протромбино-
вого комплекса – II, Y, YII, X. В контрольных пробах
плазмы ПВ составило 14,2±0,8с. В присутствии плен-
ки
Na-Ca-КМЦ происходило укорочение ПВ в 3,1
раза (Диаграмм 2).
Содержание фибриногена при добавлении
пленки достоверно не отличалось от такового в кон-
трольной плазме.
Оценка гемостатической активности Na – Са – КМЦ в условиях in vitro
128 Проблемы биологии и медицины, 2015, №4.1 (85)
Диаграмма1
– гемостатическая активность имплантата
Na-Ca-КМЦ с воздействием на
активированное частич-
ное тромбопластиновое время
*Р ˂ 0,05 по отношение контролю.
Диаграмма 2
- гемостатическая активность имплантата
Na-Ca-КМЦ с воздействием на протромбиновое время
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Na-Ca-КМЦ
контроль
ПВ, с
ПВ, с
*Р ˂ 0,05 по отношение контролю.
Полученные результаты укорочения АЧТВ
вместе с ПВ свидетельствуют об активации сверты-
вания крови в целом, как по внутреннему (с участием
YIII IX XI факторов), так и по внешнему механизму
(с участием YII фактора) с активацией всего ком-
плекса протромбиназы (II,V,X). Эффект пленки мо-
жет быть обусловлен присутствием ионов кальция –
IV плазменный фактор, участвующий во всех фазах
коагуляционного гемостаза, чем и обусловлен эффект
усиления свертывания крови.
Полученные результаты указывают на усиле-
ние процесса свертывания донорской крови in vitro в
присутствии поликомпозиционного полимера на ос-
нове производных целлюлозы, возможно, за счет ак-
тивации внешнего и внутреннего пути коагуляцион-
ного гемостаза в присутствии ионов кальция. Нали-
чие подобных свойств у гемостатической пленки
Na-
Ca-КМЦ
открывает перспективу его использования в
качестве гемостатического импланта в хирургии.
Таким образом, проведенные нами исследова-
ния показали, что в присутствии гемостатической
пленки на основе производных целлюлозы
Na-Ca-
КМЦ
повышается общая коагуляционная активность
цельной крови in vitro, что указывает на наличие ге-
мостатических свойств у данного имплантата.
Б.А. Исмаилов, З.Р. Хайбулина, М.М. Алимов
Биология ва тиббиёт муаммолари, 2015, №4.1 (85) 129
Литература:
1.
Журавлев, В.А. Гемостаз при больших и предель-
но больших резекциях печени / В.А. Журавлев, В.М.
Русинов // Анналы хирургической гепато- логии. –
2005. - Т. 10, № 3. - С. 129-136.
2.
Fluorescent biodegradable PLGA particles with nar-
row size distributions: preparation by means of selective
centrifugation / Gaumet, R. Gurny, F. Delie // Int. J.
Pharm. – 2007 (342) – 222–230.
3.
Bone tissue engineering: state of the art and future
trends / A.J. Salgado, O.P. Coutinho, R.L. Reis // Mac-
romol. Biosci – 2004 (4) – 743–765.
4.
Гемостатические средства местного действия (об-
зор) / Г.Г. Белозерская, В.А. Макаров, Е.А. Жидков и
др. // Химико-фармацевтический журнал. -2006 . -
№7. -С. 9-15.
5.
Gabay, M. Absorbable hemostatic agents / M. Gabay
// Am. J. Health Syst. Pharm. - 2006. - Vol. 63, № 7. - P.
1244-1253.
6.
Аппликационное средство гемостаза при капил-
лярно — паренхиматозном кровотечении / Г.Г. Бело-
зерская, В.А. Макаров, Р.К. Абоянц и др. // Хирургия.
- 2004. - № 9. - С. 55-59.
7.
Эффективность антиспаечного средства с барьер-
ным действием «Мезогель» после рассечения спаек у
пациентов с острой спаечной кишечной непроходи-
мостью / Б.С. Суковатых, А.Д. Мясников, А.И. Бежин
и др. // Вестник хирургии. - 2008. - № 5. - С. 29-36.
8.
Arion, H. Carboxymethylcellulose hydrogel-filled
breast implants. Our experience in 15 years / H. Arion //
Ann. Chir. Plast. Esthet. - 2001. - Vol. 46, № l . -P . 55-
59.
9.
Ахаладзе, Г.Г. Применение препаратов фибрино-
вого клея в гепатобил- диарной хирургии / Г.Г. Аха-
ладзе // Consilium medicum: Журнал доказательной
медицины для практикующих врачей [Электронный
ресурс]. —№ 6 - С. 320-322.
