52 Проблемы биологии и медицины, 2015, №4.1 (85)
УДК: 616-056.3.-
616.233-008.41
ОЦЕНКА СВЯЗИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА FcεRIβ C АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
Ш.Х. ЗИЯДУЛЛАЕВ
Самаркандский Государственный медицинский институт, Республика Узбекистан. г. Самарканд
АЛЛЕРГИК БРОНХИАЛ АСТМА КАСАЛЛИГИНИНГ FcεRIβ ГЕН ПОЛИМОРФИЗМИ БИЛАН
БОҒЛИҚЛИГИНИ БАҲОЛАШ
Ш.Х. ЗИЯДУЛЛАЕВ
Самарқанд Давлат медицина институти, Ўзбекистон Республикаси, Самарқанд
ESTIMATE RELATIONS POLYMORPHISM GENE FcεRIβ WITH ALLERGIC ASTHMA
Sh.Kh. ZIYADULLAEV
Samarkand State Medical Institute, Republic of Uzbekistan, Samarkand
Значимым претендентом на роль основного гена предрасположен-ности к БА является ген FcεRIβ. Изучено распре-
деление частот аллелей и генотипов 109T/C полиморфизма гена FcεRIβ при аллергической БА. Результаты свидетельству-
ют, что маркерами повышенного риска развития аллергической БА являются генотип FcεRIβ-109T/T и аллель FcεRIβ-109T.
Ключевые слова:
бронхиальная
астма, генетический полиморфизм, Узбекская популяция.
Important candidate for the major gene predisposition to asthma is completely gene FcεRIβ. The distribution of alleles and
genotypes 109T/C polymorphism in allergic asthma FcεRIβ. The results show that markers of increased risk of allergic asthma are
genotype FcεRIβ-109T/T allele and FcεRIβ-109T.
Keywords:
asthma, genetic polymorphism, Uzbek population.
Введение.
В настоящее время бронхиальная
астма (БА) рассматривается как мультифакториаль-
ное полигенное заболевание, передача которого
потомству осуществляется группой генов [1,2]. Исхо-
дя из современных знаний о природе мультифактори-
альных заболеваний предполагается, что совокуп-
ность генов, отвечающих за формирование подвер-
женности к ним, образует сеть связанных между со-
бой элементов, эффекты взаимодействия которых на
уровне белковых продуктов определяют биохимиче-
скую индивидуальность человека [3]. Взаимодей-
ствие повышенного уровня антиген-специфичного
IgE с FcεRIβ играет центральную роль в патогенезе
БА [4,7]. Было высказано предположение, что моле-
кулярные варианты FcεRIβ могут благоприятствовать
развитию атопического состояния за счет усиления
высвобождения медиаторов воспаления тучными
клетками или стимуляции экспрессии ИЛ-4 и CD40-
лиганда [5,6]. Следовательно, изучение ассоциации
полиморфизмов гена FcεRIβ с конкретными клиниче-
скими формами БА, может явиться основой для раз-
работки комплекса лечебно-профилактических меро-
приятий данной патологии.
Материал и методы.
Соответственно постав-
ленной цели нами изучены особенности распределе-
ния частот аллелей и генотипов полиморфного вари-
анта гена β-цепи высокоаффинного рецептора IgE у
больных с аллергической БА и здоровых индивидов
узбекской национальности. Верификация диагноза
БА проводилась согласно международной классифи-
кации ВОЗ (Х-пересмотр, МКБ-10) и в соответствии с
диагностическими критериями GINA, 2006. Кон-
трольную группу составили 46 практически здоровых
лиц узбекской национальности. В контингенте 103
пациентов с аллергической астмой и 46 здоровых лиц
узбекской национальности
проведено
генотипирова-
ние полиморфного локуса C109T гена FcεRIβ. Геном-
ная ДНК была выделена из лимфоцитов перифериче-
ской крови с использованием набора реагентов для
выделения ДНК Diatom™ DNA Prep 200. Суперна-
тант с ДНК далее подвергался непосредственно гено-
типированию путем ПЦР-амплификации. Типирова-
ние образцов ДНК проводили с использованием спе-
цифических олигонуклеотидных праймеров (Forward
5'-GTG GGG ACA ATT CCA GAA GA-3' Reverse - 5'-
CCG AGC TGT CCA GGA ATA AA-3'). Олигонук-
леотиды были синтезированы компанией IDT
(Integrated DNA Technologies, Iowa, США). Постанов-
ку ПЦР осуществляли в стерильных условиях в спе-
циально отведенной комнате. Все манипуляции про-
водили на льду. ПЦР-анализ проводили с использо-
ванием набора реагентов для ПЦР амплификации
ДНК GenePak™ PCR Core. Программы амплифика-
ции были строго специфичны: 5 мин предваритель-
ной денатурации при 94°С, 35 циклов; 94°С - 30с,
55°С - 45с, 72°С - 1мин; элонгация при 72°С в тече-
ние 7 мин. Размер аллели (п.о.) 382. Затем ПЦР-
продукты подвергались рестрикционному анализу с
использованием специфической рестриктазы Tru9I.
Температура инкубации t-65°С. Детекция ПДРФ-
продуктов и генотипирование проводили с использо-
ванием горизонтальной или вертикальной элетрофо-
резной системы в 2% агарозном геле или в 6% акри-
ламидном геле. Для дальнейшей обработки данные
электрофореза были переведены в цифровой формат.
Молекулярный вес продуктов определяли при помо-
щи молекулярного маркера, шаги которого составля-
ли 100 п.н., начальная отметка 100 п.н. По гену
FcεR1β вес ПЦР-продукта до проведения рестрикци-
онной реакции составлял 382 п.н. После рестрикци-
онной реакции были получены следующие продукты:
221 п.н., 182 п.н. и 161 п.н. Полиморфизмы 109С/C,
109С/T и 109T/T определялись следующим образом:
при наличии двух продуктов весом 221 и 182 п.н. –
генотип считался за гомозиготный 109С/C; двух про-
дуктов 221 и 161 п.н. - гомозиготный 109T/T; а при
наличии трех продуктов 221, 182, 161 п.н. - генотип
рассматривался как гетерозигота 109С/T.
Оценка связи полиморфизма гена fcεriβ c аллергической бронхиальной астмой
Проблемы биологии и медицины, 2015, №4.1 (85)
53
Рис. 1.
Пример электрофореграммы результатов ПДРФ анализа гена FcεRIβ (109С/T полиморфизм) с 45-го по
74-ой исследуемые образцы.
Таблица 1.
Распределение частот аллелей 109С/T полиморфизма гена FcεRIβ у больных аллергической астмой и здоровых
индивидов
Полиморфизм
Группы
N
Аллель
χ
2
Р
Va
lue
109С/T
109С
109T
Контроль
46
49-53,3%
43-46,7%
26,0
0,000
Таблица 2.
Распределение частот генотипов 109С/T полиморфизма гена FcεRIβ у больных аллергической астмой и здоро-
вых индивидов
Полиморфизм
Группы
N
Генотипы
Χ
2
Р
VALUE
OR
109С/T
109С/T
109С/С
109Т/T
Контроль
46
13–28,3%
18- 39,1%
15-32,6%
27,7
0,000
3,68
Аллергическая астма
103
31-30,1%
6-5,8%
66-64,1%
Результаты электрофореза ПЦР-продуктов у
обследуемых больных БА по гену FcεR1β показаны
на рис. 1. Статистический анализ ассоциации изучен-
ных генов с развитием заболевания выполнен с при-
менением программного обеспечения «BIOSTAT»,
вычисляя критерий - χ
2
, Р
Value
, OR.
Результаты исследования.
При анализе ча-
стот аллелей 109С/T полиморфизма гена FcεRIβ
(табл.1) обнаружено, что аллель 109T в группе боль-
ных аллергической астмой встречается достоверно
чаще, чем в группе практически здоровых лиц (79,1%
по сравнению с 46,7%, соответственно, χ
2
=26,0,
р=0,000).
При изучении полиморфизма генотипов
(табл.2) показывает, что в группе пациентов с аллер-
гической астмой частота гомозиготного варианта
109Т/T гена существенно превышает показатели кон-
трольной группы здоровых лиц (64,1% против 32,6%,
соответственно, χ
2
=27,7, р=0,000). При этом частота
гомозиготного варианта 109С/С в группе больных
аллергической астмой была заметно ниже уровня,
характерного для здоровой части обследованной по-
пуляции лиц (5,8% по сравнению с 39,1%). Частота
гетерозиготного варианта 109С/T гена FcεRIβ в этой
группе больных почти не отличался от контрольной
группы.
Проведенный анализ особенностей распреде-
ления частот аллелей и генотипов полиморфизма
109С/T гена FcεRIβ, показал наличие статистически
достоверных различий аллеля 109Т и генотипа
109Т/Т в группе больных аллергической астмой в
сравнении с контрольной группой здоровых лиц.
Заключение.
Таким образом, результаты мо-
лекулярно-генетического исследования, показали
важность полиморфного варианта гена FcεRIβ, в
формирование генетической структуры предраспо-
ложенности к аллергической БА в узбекской популя-
ции. Полученные данные свидетельствуют, что мар-
керами повышенного риска развития аллергической
формы бронхиальной астмы у лиц узбекской этниче-
ской принадлежности являются генотип FcεRIβ-
109T/T и аллель FcεRIβ-109T, маркерами пониженно-
го риска – FcεRIβ-109C/C и аллель FcεRIβ-109C.
Литература:
1.
Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г., Петрова М.А. и др.
Генетические факторы предрасположенности к брон-
хиальной астме. Генетика 2001, 37№1: 107–111.
2.
Колчанов Н.А., Ананько Е.А., Колпаков Ф.А. и др.
Генные сети. Молекулярная биология 2000, 34№4:
533–544.
3.
Пузырев В.П. Генетика мультифакториальных
заболеваний: между прошлым и будущим. Мед. гене-
тика 2003, 2№12: 498–508.
4.
Hill M.R, Cookson W.O.C.M. A new variant of the β
subunit of the high-affinity receptor for immunoglobulin
E (FceRI-β E237G): associations with measures of atopy
and bronchial hyperresponsiveness. Hum. Mol. Genet.
1996, 5: 959–962.
5.
Hopkin J. Molecular genetics of the high affinity IgE
receptor // Monogr. Allergy. 1996. V. 33. P. 97–108.
6.
Shirakawa T., Li A., Dubowitz M. Association be-
tween atopy and variants of the beta subunit of the high
affinity immunoglobulin E receptor. Nat. Genet. 1994, 7:
125–129.
7.
Shirakawa T., Mao X.-Q., Sasaki S. et al. Association
between atopic asthma and a coding variant of FcεRIβ in
a Japanese population. Hum. Mol. Genet. 1996, 5: 1129–
1130.
