ПРОБЛЕМЫ
БИОЛОГИИ
И
МЕДИЦИНЫ
3 (66) 2011
56
В
настоящее
время
активно
разрабатываются
молекулярные
основы
предиктивной
медици
-
ны
.
Концептуальную
основу
предиктивной
медицины
составляют
представления
о
генетиче
-
ском
полиморфизме
[1,2,6].
Генетическим
исследованиям
мультифакториальных
заболеваний
во
многом
способствует
детальное
описание
патогенеза
изучаемых
болезней
.
Зная
молекуляр
-
ные
механизмы
формирования
заболеваний
,
можно
наметить
гены
,
белковые
продукты
кото
-
рых
имеют
в
этом
наибольшее
значение
.
Такие
гены
будут
являться
«
кандидатами
»
на
роль
генов
подверженности
к
заболеванию
.
Изучение
их
изменчивости
в
связи
с
патологическими
состояниями
позволит
выявить
наследственные
молекулярные
особенности
,
предрасполагаю
-
щие
к
развитию
болезни
.
Молекулярные
и
клеточные
механизмы
реализации
атопических
со
-
стояний
сегодня
достаточно
хорошо
изучены
.
Важная
роль
здесь
принадлежит
цитокинам
[7,9,10,11,12],
ответственным
за
гуморальный
иммунитет
,
факторам
антигенного
распознава
-
ния
[5],
рецепторам
лимфоцитов
,
ферментам
метаболизма
[3,4,8]
воспалительных
медиаторов
и
т
.
д
.
Среди
множества
генов
-
кандидатов
,
представляют
интерес
ген
Fc
ε
RI
β
являющийся
важ
-
ным
компонентом
наследственной
составляющей
подверженности
к
бронхиальной
астме
и
атопии
[13,14].
В
связи
с
этим
целью
настоящего
исследования
явилось
изучить
ассоциацию
бронхиальной
астмы
,
обусловленную
влиянием
полиморфизма
гена
Fc
ε
RI
β
в
узбекской
популяции
для
со
-
вершенствования
диагностики
и
оптимизации
терапии
.
Материалы
и
методы
.
Соответственно
поставленной
цели
нами
изучены
распределения
частот
аллелей
и
геноти
-
пов
полиморфного
варианта
гена
β
-
цепи
высокоаффинного
рецептора
IgE (Fc
ε
RI
β
)
у
больных
в
общей
группе
и
с
различными
фенотипическими
вариантами
бронхиальной
астмой
и
здоро
-
вых
индивидов
узбекской
национальности
.
Обследовано
более
150
подростков
и
юношей
,
страдающих
бронхиальной
астмой
в
возрасте
от
12
до
19
лет
.
Контрольную
группу
составили
48
практически
здоровых
лиц
узбекской
национальности
.
Больные
бронхиальной
астмой
рас
-
пределялись
по
группам
согласно
международной
классификации
ВОЗ
(
Х
-
пересмотр
,
МКБ
-
10)
и
в
соответствии
с
диагностическими
критериями
Глобальной
стратегии
лечения
и
профи
-
лактики
бронхиальной
астмы
(GINA, 2006)
и
критериями
отечественных
программных
доку
-
ментов
по
диагностике
,
лечению
и
профилактике
БА
.
Анализ
полиморфного
варианта
гена
FcepsilonRI
β
осуществляли
методом
полимеразной
цепной
реакции
синтеза
ДНК
(
ПЦР
)
на
амплификаторе
и
ПДРФ
-
анализом
с
последующим
электрофорезом
в
полиакриламидном
геле
.
Выделение
ДНК
проводилось
по
стандартному
протоколу
выделения
ДНК
с
использовани
-
ем
набора
реагентов
Diatom™ DNA Prep 200.
Геномная
ДНК
визуализировалась
в
0,9%
ага
-
розном
геле
и
ее
концентрация
оценивалась
визуально
путем
сравнения
со
стандартной
кон
-
центрацией
маркера
-
ДНК
фага
лямбда
и
разводилась
до
рабочей
концентрации
10
нг
/
мкл
.
Зиядуллаев
Ш
.
Х
.
РОЛЬ
ГЕНА
ВЫСОКОАФФИННОГО
РЕЦЕПТОРА
IgE
В
ФОРМИРОВАНИИ
ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ
К
БРОНХИАЛЬНОЙ
АСТМЕ
В
УЗБЕКСКОЙ
ПОПУЛЯЦИИ
Самаркандский
государственный
медицинский
институт
Рисунок
.
Пример
электрофореграммы
результатов
ПДРФ
анализа
гена
Fc
ε
RI
β
(109
С
/T
поли
-
морфизм
)
с
45-
го
по
74-
ой
исследуемые
образцы
.
ПРОБЛЕМЫ
БИОЛОГИИ
И
МЕДИЦИНЫ
3 (66) 2011
57
Супернатант
с
ДНК
далее
подвергался
непосредственно
генотипированию
путем
ПЦР
-
амплификации
с
использование
двух
пар
специфических
олигонуклеотидных
праймеров
с
участками
гена
Fc
ε
RI
β
- Forward – 5'-GTG GGG ACA ATT CCA GAA GA-3', Reverse – 5'-CCG
AGC TGT CCA GGA ATA AA-3'.
Олигонуклеотиды
были
синтезированы
компанией
IDT
(Integrated DNA Technologies, Iowa,
США
).
Продукты
ПЦР
-
амплификации
подвергали
рест
-
рикционному
анализу
с
использованием
специфической
эндонуклеаз
рестрикции
Tru9I.
Тем
-
пература
инкубации
составляла
65°
С
.
Рестриктазы
производства
«
СибЭнзим
» (
Россия
).
Про
-
грамма
амплификации
: 5
мин
предварительной
денатурации
при
94 °
С
, 35
циклов
; 94 °
С
- 30
с
,
55 °
С
- 45
с
, 72 °
С
- 1
мин
;
элонгация
при
72 °
С
в
течение
7
мин
.
Детекция
ПДРФ
-
продуктов
и
генотипирование
проводили
с
использованием
горизонталь
-
ной
или
вертикальной
элетрофорезной
системы
в
2%
агарозном
геле
или
в
6%
акриламидном
геле
.
Для
фотодокументации
гели
окрашивались
в
течение
короткого
времени
(3-5
мин
.)
рас
-
твором
бромистого
этидия
с
концентрацией
0,1
мкг
/
мл
,
промывали
в
проточной
воде
(15-20
мин
.)
и
фотодокументировали
при
помощи
Alpha Imager 3400 (Alpha Innotec,
США
).
Для
даль
-
нейшей
обработки
данные
электрофореза
были
переведены
в
цифровой
формат
и
введены
таб
-
лицы
Microsoft Excel.
Данные
исследования
проводились
в
Центре
Геномных
Технологий
Института
Биохимии
АН
РУз
(
директор
Мухамедов
Р
.
С
.).
Статистическая
обработка
полученных
результатов
проводилась
на
персональном
компью
-
тере
с
использованием
программы
BIOSTAT.EXE.
Результаты
исследований
.
Проведенный
анализ
распределения
частот
аллелей
и
генотипов
полиморфного
варианта
-
109
С
/T
гена
Fc
ε
RI
β
выявил
тенденцию
к
накоплению
гомозиготного
генотипа
109
Т
/T
и
аллеля
109
Т
при
статистически
недостоверном
отличии
между
общей
группой
больных
БА
и
кон
-
трольной
выборкой
в
узбекской
популяции
.
Различия
в
распределении
частот
аллелей
и
генотипов
полиморфного
локуса
- 109
С
/T
гена
Fc
ε
RI
β
были
достоверными
и
между
группами
больных
с
аллергической
формой
БА
и
здоро
-
вых
индивидов
узбекской
этнической
принадлежности
.
Ассоциация
с
аллергической
формой
БА
была
определена
для
генотипа
Fc
ε
RI
β
-109T/T
и
аллеля
Fc
ε
RI
β
-109T.
Гомозиготный
гено
-
тип
Fc
ε
RI
β
-109C/C
и
аллель
Fc
ε
RI
β
-109C
являются
маркерами
пониженного
риска
развития
аллергической
формы
БА
у
узбеков
.
Следует
отметить
,
что
высокая
степень
сцепления
гено
-
типа
Fc
ε
RI
β
-109T/T
и
аллеля
Fc
ε
RI
β
-109T
отмечалась
с
наследственной
отягощенностью
забо
-
левания
.
Анализ
распределения
частот
аллелей
и
генотипов
полиморфного
варианта
- 109
С
/T
гена
Fc
ε
RI
β
не
выявил
достоверных
отличий
между
контрольной
выборкой
и
группами
с
раз
-
личной
клинико
-
патогенетической
формой
заболевания
.
Полученные
данные
свидетельствуют
,
что
маркерами
повышенного
риска
развития
аллер
-
гической
формы
бронхиальной
астмы
у
подростков
узбекской
этнической
принадлежности
являются
генотип
Fc
ε
RI
β
-109T/T
и
аллель
Fc
ε
RI
β
-109T,
маркерами
пониженного
риска
–
Fc
ε
RI
β
-109C/C
и
аллель
Fc
ε
RI
β
-109C.
Таким
образом
,
проведено
молекулярно
-
генетическое
исследование
БА
,
в
результате
кото
-
рого
показан
вклад
полиморфного
варианта
гена
Fc
ε
RI
β
,
в
формирование
генетической
струк
-
туры
предрасположенности
к
бронхиальной
астме
в
узбекской
популяции
.
Использованная
литература
1.
Иващенко
Т
.
Э
.,
Сиделева
О
.
Г
.,
Петрова
М
.
А
.
и
др
.
Генетические
факторы
предрасположенности
к
бронхиальной
астме
.
Генетика
2001, 37
№
1: 107–111.
2.
Колчанов
Н
.
А
.,
Ананько
Е
.
А
.,
Колпаков
Ф
.
А
.
и
др
.
Генные
сети
.
Молекулярная
биология
2000, 34
Таблица
1.
Распределение
частот
аллелей
и
генотипов
109
С
/T
полиморфизма
гена
Fc
ε
RI
β
при
БА
.
груп
-
пы
N
аллель
генотипы
Χ
2
Р
Val
ue
OR
Odds
Ratio
109
С
109T
109
С
/
T
109
С
/
С
109
Т
/T
109
С
/T
Кон
-
троль
46
49-
106,5%
43-
93,5%
13-
28,2%
18 -
39,1%
15 –
32,6%
27.72
.00
0
3.6
1.19-4.4
АБА
103
43-
20,8%.
153-
79,1%
31-
30,1%
6-
5,8%
66-
64,1%
Полимор
-
физм
ПРОБЛЕМЫ
БИОЛОГИИ
И
МЕДИЦИНЫ
3 (66) 2011
58
№
4: 533–544.
3.
Ляхович
В
.
В
.,
Вавилин
В
.
А
.,
Макарова
С
.
И
.
Роль
ферментов
биотрансформации
в
предрасположен
-
ности
к
БА
и
формировании
особенностей
ее
клинического
фенотипа
.
Вестник
РАМН
2000, 12: 36–
41.
4.
Ляхович
В
.
В
.,
Гавалов
С
.
М
.,
Вавилин
В
.
А
.
и
др
.
Полиморфизм
генов
ферментов
биотрансформации
и
особенности
бронхиальной
астмы
у
детей
.
Пульмонология
2002, 12
№
2: 31–38.
5.
Медуницын
Н
.
В
.,
Алексеев
Л
.
П
.
Система
Ir
антигенов
.-
Москва
, 1987: 174.
6.
Пузырев
В
.
П
.
Генетика
мультифакториальных
заболеваний
:
между
прошлым
и
будущим
.
Мед
.
ге
-
нетика
2003, 2
№
12: 498–508.
7.
Пузырев
В
.
П
.,
Фрейдин
М
.
Б
.,
Огородова
Л
.
М
.,
Кобякова
О
.
С
.
Взаимосвязь
полиморфных
вариан
-
тов
генов
интерлейкинов
и
их
рецепторов
с
атопической
бронхиальной
астмой
.
Мед
.
генетика
2002,
1
№
2: 86–92.
8.
Сафронова
О
.
Г
.,
Вавилин
В
.
А
.,
Ляпунова
А
.
А
.
Взаимосвязь
между
полиморфизмом
глутатионовой
S-
трансферазы
Р
1
и
бронхиальной
астмой
и
атопическим
дерматитом
.
Бюллетень
эксперим
.
биол
.
и
мед
. 2003, 136.
№
.1: 73–75.
9.
Фрейдин
М
.
Б
.
Роль
генов
интерлейкинов
и
их
рецепторов
в
формировании
предраположенности
к
атопической
бронхиальной
астме
.
Томск
, 2001, 21.
10.
Фрейдин
М
.
Б
.,
Брагина
Е
.
Ю
.,
Петровкий
Ф
.
И
.
и
др
.
Анализ
связи
полиморфизма
генов
GSTT1
,
GSTM1
,
CYP2C19
и
CYP2E1
с
атопией
у
жителей
г
.
Томска
.
Мед
.
иммунол
. 2003, 5: 107–112.
11.
Фрейдин
М
.
Б
.,
Огородова
Л
.
М
.,
Пузырев
В
.
П
.
Вклад
полиморфизма
генов
интерлейкинов
в
измен
-
чивость
количественных
факторов
риска
атопической
бронхиальной
астмы
.
Мед
.
генетика
. 2003, 3:
130–135.
12.
Фрейдин
М
.
Б
.,
Пузырев
В
.
П
.,
Огородова
Л
.
М
.
и
др
.
Оценка
ассоциации
полиморфизма
Т
113
М
гена
IL9
с
бронхиальной
астмой
.
Генетика
2000, 4: 559–561.
13. Hill M.R, Cookson W.O.C.M. A new variant of the
β
subunit of the high-affinity receptor for immu-
noglobulin E (FceRI-
β
E237G): associations with measures of atopy and bronchial hyperresponsiveness.
Hum. Mol. Genet. 1996, 5: 959–962.
14. Hopkin J. Molecular genetics of the high affinity IgE receptor // Monogr. Allergy. 1996. V. 33. P. 97–108.
