STOMATOLOGIYA
СОВРЕМЕННЫЙ ПОДХОД К
ДИАГНОСТИКЕ ПАРОДОНТИТОВ:
ПОЛИМЕРИЗАЦИОННАЯ ЦЕПНАЯ
РЕАКЦИЯ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ
Х.П. Камилов,
К.А.Тахирова
Ташкентский государственный стоматологический
институт, Узбекистан
Summary
At present, it is believed that the synergistic interaction of
microorganisms included in the biofilm community of the
periodontal pocket, primarily the main representatives ofthe
periodontal pathogenic microflora, is of paramount
importance in the development of periodontal inflammatory
diseases, against the background of a decrease in the
nonspecific antimicrobial protection ofthe macroorganism.
An effective solution in the diagnosis of dysbiotic disorders in
the oral cavity is the use ofthe technology of guantitative real-
time PCR analysis «PARODONTOSKRIN».
Актуальность. Пародонтит является многофакторным
и многобактериальным заболеванием опорных тканей
зубов, инициированных нарушениями в поддесневой
биопленке и принимающий участие в гомеостазе.
Симптомы болезни включают десневой отек и
кровотечение, образование углубленных карманов
периодонта, и воспалительное разрушение периодон-
тальной связки и альвеолярной кости. Наконец, неле-
ченый пародонтит может привести к потере зубов.
Разрушение ткани приводит к защитной реакции
против бактериального заражения. Прогрессирование
пародонтита характеризуется увеличением под
десневой бактериальной нагрузки и трансформациями
доминирования
грамположительных
бактерий
к
большинству грамотрицательных бактерий. Бактерии,
связанные с пародонтитом, были разделены на две ос-
новных групп с цветовой кодировкой, так как эти бак-
терии неоднократно встречаются вместе при пародон-
титах. «Красный комплекс» пародонтопатогенов, в том
числе Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis и
Treponema denticola , имеют особенно сильную ас-
социацию с пародонтитом, связанную с клиническими
параметрами, такими как глубина кармана, зондиро-
вание, кровотечение при зондировании. «Оранжевый
комплекс» включает в себя типичные пародонтопато-
гены, связанные с углублением пародонтальных кар-
манов, например, Prevotella интермедиа. Кроме того,
Aggregatibacter actinomycetemcomitans входит в число
бактерий, участвующих в патологии быстро прогресси-
рующих пародонтитов[1,3,4].
Существуют многочисленные способы для обнару-
жения и определения бактерий пародонта, например,
культивирование микроорганизмов, конкретных видов
ДНК - зондов, или обычной конечной точки полимери-
зационная цепная реакция (ПЦР). Все эти методы имеют
ограничение для точного измерения концентрации
специфических бактерий. В большинстве предыдущих
исследований о количестве пародонтальных бактерий
используется слюна, поддесневой зубной налет, как
образец материала. Тем не менее, количество исследо-
ваний изучающих бактериальную концентрацию, опре-
деляемую кПЦР и особенно комбинации нескольких
бактерий ограничено [2,5,9]. Кроме того, количество
бактерий в этих исследованиях было относительно
ограничено.
Десневая жидкость является перспективным диа-
гностическим материалом. Последние десятилетия ши-
роко проанализированы биомаркеры здоровья и бо-
лезни [4,6]. Образцы для исследования могут быть взяты
без стоматологических медицинских специалистов или
даже самими пациентами. Относительные уровни паро-
донтальных патогенов, по некоторым исследованиям [7]
похожи в слюне и ротовой жидкости. Кроме того, слюна
отражает общие условия во рту; в дополнение к
поверхности зубов и зубодесневым карманам, паро-
донтальные патогены также могут быть найдены на языке
и слизистой оболочке полости рта.
Цель исследования. Цель данной работы состояла в
исследовании концентрации основных пародонто-па-
тогенов и изучении их значения в диагностике паро-
донтита.
Материалы и методы
В данном исследовании были исследованы четыре
важных вида пародонто-патогенов, Р. gingivalis, Т.
80
В ПОМОЩЬ ПРАКТИКУЮЩЕМУ ВРАЧУ
forsythensis, Р. intermedia и A.actinomycetemcomitans у 50
лиц, перенесших детальное обследование пародонта.
Материалом
исследования
послужила
десневая
жидкость, взятая с предполагаемой зоны поражения. Для
выделения ДНК использовались наборы реагентов
ПРОБА-НК-ПЛЮС, ПРОБА-ГС-ПЛЮС. Оборудование,
применяемое при проведении анализа - приборы серии
ДТ производства ООО «НПО ДНК- ТЕХНОЛОГИЯ»
(ДТлайтДТпрайм. ДТ-96) с четырьмя каналами детекции.
Учет и интерпретация результатов реакции осу-
ществлялись автоматически. Результаты были проа-
нализированы в режиме реального времени КПЦР
системы и бактериальные концентрации были вычис-
лены из стандартных кривых, полученных из серийных
разведений (1x10-5-1 нг) эталонных штаммов. Массы
бактериальных геномов были вычислены из данных
геномных размеров и конечные результаты выражены
как геномные эквиваленты (GE) / мл десневой жидкости.
Результаты и обсуждение
Были изучены четыре основные пародонтальные
бактерии с помощью количественной ПЦР в реальном
времени (КПЦР). Концентрация в слюне Porphyromonas
gingivalis, Tannerella forsythensis и Prevotella интермедиа,
а также сумма концентраций четырех бактерий, была
выше у пациентов со средне-тяжелым пародонтитом по
сравнению с людьми с легкой степенью заболевания.
Концентрация
слюнных
Aggregatibacter
actinomycetemcomitans существенно не различалась
между субъектами с легкой и средне-тяжелой степенью
поражения пародонта. В логистической регрессии с
поправкой на возраст, пол, наличие диабета, количество
зубов, имплантатов, высокие концентрации в слюне Р.
gingivalis, Т. forsythensis и Р. intermedia были отмечены у
пациентов со средне-тяжелой степенью пародонтита.
При
взгляде
на
различные
клинические
и
рентгенографические параметры пародонтита, высокие
концентрации Р. gingivalis и Т. forsythensis были связаны с
глубиной пародонтальных карманов 4-5 мм, >6 мм, и
альвеолярной потерей костной массы. Высокий уровень
Т. forsythensis был связан также с кровотечением при
зондировании. Сочетание четырех бактерий, то есть,
индекс бактериальной нагрузки, был связан со средне-
тяжелой степенью пародонтита (OR) 2,40 (95% ДИ 1.39-
4.13). Когда A. actinomycetemcomitans был исключен из
комбинации бактерий, показатели улучшились до 2,61
(95% ДИ 1.51-4.52). Диагностика десневой жидкости при
пародонтите
имеет
потенциал,
особенно
в
крупномасштабных исследованиях населения, при
пропаганде здорового образа жизни. Совокупная стра-
тегия оказывается полезной при анализе бактерий в ка-
честве маркеров пародонтита.
Испытуемых разделили на две группы, основываясь
на их пародонтальном диагнозе: легкая и средне-тяжелая
степень пародонтита. Испытуемые со средне-тяжелой
степенью пародонтита были старше, среди них больше
курящих мужчин, с большим количеством удаленных
зубов, по сравнению с пациентами с легкой степенью
пародонтита. R gingivalis, Т. forsythensis и Р. intermedia , а
также сумма концентраций четырех бактерий, была выше
у пациентов со средне-тяжелой степенью пародонтита.
Концентрация A.actinomycetemcomitans существенно не
отличалась в двух группах.
Результаты проведенных нами исследований указы-
вают на то, что концентрация Р. gingivalis, Т. forsythensis и
Р. intermedia связана с наличием пародонтита. Сочетание
Р. gingivalis и Т. forsythensis имело самую сильную связь с
пародонтитом по сравнению с четырьмя патогенами
анализируемыми по отдельности и в комбинации.
Результаты не зависят от возраста, пола, курения, наличия
сахарного диабета, ИБС, а также от количества зубов и
имплантатов.
Список литературы
1.
Арутюнов
С.Д.,
Верткий
АЛ,
Зайратьянц,
Плескановская А.М. Две стороны одной проблемы:
остеопороз в практике врача стоматолога,
пародонтит в практике врача терапевта
//Ортодонтия. - 200/. -№4.-С.8-12.
2.
Белоусов Н.Н. Причины широкого распространения
тяжелых форм воспалительных заболеваний
пародонта // Пародонтология. - 2005. -Т.36, №3,-
С.26-29.
3.
Кожокеева В.А., Павкина ТА. Обращаемость взрослого
населения с бо
лезнями
пародонта
в
стоматологические
поликлиники г. Бишкек.// Наука и новые технологии.
Бишкек. -№1.-2010- с. 126-129.
4.
Boutaga К., Savelkoul Р Н. М., Winkel £ G., van Winkelhoff
A. J. Comparison of subgingival bacterial sampling with
oral lavage for detection and quantification of periodontal
pathogens by real-time polymerase chain reaction/J.
Periodontol-200/.-№/8-P79-86.
5.
Buhlin K., Mdntyld P, Paju S., Peltola J. S., Nieminen M. S.,
Sinisalo J., et al. Periodontitis is associated with
angiographically verified coronary artery disease/J. Clin.
Periodontal.- 2011.-N38.-P 100/-W14.
6.
Costa P P, TrevisanG. L., Macedo G. 0., PaliotoD. B., Souza
S. L
. S.,
GrisiM. F. M., et al. Salivary lnterleukin-6, Matrix
Metalloproteinase-8, and Osteoprotegerin in patients with
periodontitis and diabetes/J. Periodontal. - 2010-№81.-P.
384-391.
7.
Giannobile W. /., McDevitt J. T., Niedbala P. S., Malamud
D. Translational and clinical applications of salivary
diagnostics/ Adv. Dent. Pes.-2011.-№ 23.-P. 375-380.
8.
Gursoy U. K., Kdndnen £, Pussinen P J., Tervahartiala T.,
Hyvdrinen K., Suominen A. L, et al. Use of host- and
bacteria-derived salivary markers in detection of
periodontitis: a cumulative approach/ Dis. Markers.-
2011.-№ 30.-P. 299-305.
9.
Hadrian H, Andrukhov 0., Berti K., Leitner S., Kierstein S.,
Moritz A., et al. Microbial analysis of subgingival plague
samples compared to that of whole saliva in patients with
81
