40
Stomatologiya
Annotation
We examined 17 children with congenital cleft lip
and palate and studied the quantitative and qualitative
composition of the microflora of the oral cavity and
the indices of local protection factors. Based on the
obtained microbiological data, which showed a significant
immunodeficiency in the oral cavity in patients with cleft
lip and palate, according to that the surgeon have pay
more attention to role of preoperative preparation of these
patients.
Аннотация
Нами обследованы 17 детей больных врожденной
расщелиной губы и неба и изучено количественный и
качественный состав микрофлоры полости рта и по
-
казатели местных факторов защиты.Основываясь на
полученных микробиологических данных, которая по
-
казала достоверный иммунодефицит в полости рта у
больных детей страдающих расщелиной губы и неба,
позволяют рекомендовать хирургу стоматологу о необ
-
ходимости усиление роли предоперационной подготов
-
ки этих больных.
Современный этап развития челюстно-лицевой
хирургии характеризуется внедрением новых эффек
-
тивных мер диагностики, лечения и профилактики, что
стало возможным благодаря открытиям, сделанным
при изучении механизмов формирования патологиче
-
ских состоянии. В значительной мере это обусловлено
интенсивным развитием медицинской микробиологии,
молекулярной биологии и генетики.
Известно, что бактерии, грибы и вирусы нарушают
нормальные процессы в организме хозяина, приводя к
заболеваниям двумя основными путями – «прямым»
и «опосредованным». При прямом пути, повреждения
возникают вследствие непосредственного действия
микроба или его токсинов на мишень в организме хо
-
зяина. При этом изменяются свойства мишени, что и
представляет собой основной результат. Так, например,
вирусы, размножаясь в клетках, вызывают их гибель,
что нарушает работу тканей. Токсины бактерии блоки
-
руют передачу сигналов в синапсах или синтез белка
в клетках, и их действие приводит к той клинической
картине, которая имеет соответствующее названия.
Прямое действие, связанное с активностью раз
-
ных бактериальных экзо- и эндотоксинов, исторически
было открыто раньше, лучше изучена и поэтому кажет
-
ся более понятным.
Опосредованное действие микробов на организм
открыто сравнительно недавно, но, как оказалось, в той
или иной мере, присуще всем инфекциям и при многих
является ведущим в формировании клинической карти
-
ны. Опосредованное действие подразумевает, что ми
-
кробные продукты заставляют особым образом («неа
-
декватно») работать собственные клетки или органы. В
ответ на воздействия микробных факторов наши клетки
выделяют биологически активные вещества, которые
атакуют собственные системы и органы и, по сути, ста
-
новятся основными повреждающими агентами.(1)
Врожденная расщелина губы и неба является одной
из распространенных аномалии развития челюстно-ли
-
цевой области. По данным статистических исследова
-
ний, сохраняется высокий уровень распространенности
данной патологии у новорожденных детей.(2, 3, 4)
При этой болезни, характер микрофлоры и иммун
-
ный ответ полости рта у детей имеет свои особые чер
-
ты, которые в большей степени обусловлены местны
-
ми анатомо-функциональными особенностями тканей
в целом и несостоятельностью иммунокомпетентных
клеток в частности и вносящие существенный вклад в
развитие и течение, как до операционного, так и после
-
операционного раневого процесса.(5, 6)
Исходя из вышеизложенного, мы поставили перед
собою цель изучить количественный и качественный
состав микрофлоры полости рта и показатели мест
-
ных факторов защиты у больных детей, страдающих с
врожденной расщелиной губы и неба, до операции.
Материалы и методы исследования
Для решения поставленной цели, нами обследова
-
ны 17 детей больных врожденной расщелиной губы и
неба. Первоначально у этих детей забирали материал
из пораженного участка используя для этого стериль
-
ные тампоны которые помещали в сахарный бульон. Из
этого материала в лаборатории проводили посев в диф
-
ференциально-диагностические питательные среды.
У этих же больных детях забирали ротовую жидкость
методом смыва со слизистой оболочки полости рта.
БИОЛОГИЯ ПОЛОСТИ РТА
У ДЕТЕЙ, СТРАДАЮЩИХ С
ВРОЖДЕННОЙ РАСЩЕЛИ
-
НОЙ ГУБЫ И НЁБА
УДК: 616.21:378.17 (091) (571.1)
Дусмухамедов Д.М., Юлдашев А.А.,
Мухамедов И.М., Дусмухамедова А.Ф.
Ташкентский государственный
стоматологический институт
41
детская стоматология
Из этого материала в лаборатории готовили ряд серий
-
ных разведении, в последующем из них определенный
объём засевали на поверхность дифференциально-ди
-
агностических питательных сред. Для этого нами ис
-
пользованы высоко-селективные питательные среды
производства индийской фирмы Hei Media, такие как:
среда Блаурокка, среда МРС-4, кровяной агар с азидом
Nа, молочно-солевой агар, эскулиновый агар, среда Са
-
буро.
Посевы на кровяном агаре, Эндо, молочно-солевом
агаре, и среде Сабуро культивировали в обычных усло
-
виях 18-24 часа, при температуре 370С, а культивиро
-
вание посевов для выделения анаэробов осуществляли
в анаэростате путем использования газогенераторных
патронов в условиях термостата. По истечении указан
-
ных сроков, засеянные чашки вынимали из термостата,
производили подсчет выросших колонии, определяли
групповую и видовую принадлежность изолированных
колоний микробов на основе данных микроскопии маз
-
ков окрашенных по Грамму, характера роста на высо
-
ко-селективных питательных средах. Количество ми
-
кробов каждого вида выражали в lg KOE/мл.
Учитывая многочисленные литературные данные
о болезнетворной роли условно-патогенной флоры, у
выделенных представителей микрофлоры полости рта
определяли наличие факторов патогенности. В этих
целях использовали общепринятые тесты, так с их по
-
мощью определяли гемолитическую свойство, плазмо
-
коагулирующую способность, лецитиназную, фибри
-
нолитическую активность.
Параллельно с микробиологическими исследова
-
ниями у одних и тех же больных детях, страдающих
врожденной расщелиной губы и неба, изучали местные
факторы защиты полости рта, таких как: фагоцитарную
активность, уровень лизоцима и титр иммуноглобулина
класса А секреторной фракции (sIgА).
Для определения фагоцитарной активности нейтро
-
филов в ротовой жидкости, забор и обработка слюны
проводили по методу Антонова А.В.(1996).(7). Для это
-
го отобранную ротовую жидкость очищали, промывали
буферным раствором и центрифугировали при 1000 об/
мин в течении 10 минут, осадочную жидкость сливали,
а к осадку добавляли взвеси частиц латекса (5*108в
1мл) диаметром 0,8 мкм. Смесь инкубировали во влаж
-
ной камере 30 мин при температуре 370С во встряхи
-
вателе. В последующем из этой смеси готовили мазки,
окрашивали по Романовскому Гимза. Подсчитывали в
мазке не менее 100 нейтрофилов с латексом и без него,
в каждом препарате определяли показатель фагацитоза
из числа сосчитанных и выражали в процентах (%).
Активность лизоцима в ротовой жидкости опреде
-
лялась нами при помощи способа предложенного Али
-
евым Ш.Р.(1994), в модификации Антонова А.Н.(2004),
которая включала в себя использование стерильных
бумажных дисков (7, 8). В этих целях, забор ротовой
жидкости забирали натощак в стерильные пробирки,
в последующем брали пинцетом бумажные диски из
фильтровальной бумаги (схожие с антибиотиковыми)
и тщательно пропитывали их в ротовой жидкости. По
-
сле чего эти диски укладывали на поверхность пита
-
тельного агара Мюллер-Хинтона
в чашках Петри, засеянных газо
-
ном суточной культуры M.luteus,
штамм №003596 (126) националь
-
ная коллекция микроорганизмов
инфекции человека НИИЭМИЗ
МЗ РУз, посевы инкубировали в
термостате при температуре 370С,
активость лизоцима в ротовой
жидкости определяли по методу
диффузии в агаре и выражали в
мг/%.
Определении иммуноглобули
-
на класса А секреторной фракции.
Эти исследования проведены пу
-
тем использования иммунофер
-
ментного анализа. ИФА – это вы
-
явление антигенов с помощью
соответствующих им антител,
коньюгированных с фермен
-
том-меткой пероксидазой хрена,
β-галактозидазой или щелочной
фасфатазой. При этом, после сое
-
динения антигена с меченой фер
-
ментом иммуной сывороткой в
№
Группы микробов
Количество микробов в 1 мл слю
-
ны
норма
у больных до
операции
Р
1 Общее количество анаэробов
5,80±0,4
4,30±0,2
2 Лактобактерии
4,75±0,3
2,15±0,3
3 Пептострептококки
3,90±0,3
5,0±0,2
4 Общее количество аэробов
5,55±0,4
7,11±0,5
5 Стафилокок золотистый
0
2,0±0,1
6 Стафилокок эпидермальный
4,40±0,3
5,0±0,4
7 Стрептокок саливариус
4,70±0,4
2,15±0,3
8 Стрептокок мутанс
2,40±0,2
3,15±0,2
9 Стрептокок митис
2,80±0,2
4,30±0,2
10 Эширихии ЛП
1,45±0,1
0
11 Эширихии ЛН
0
2,30±0,2
12 Протеи
1,45±0,1
3,11±0,2
13 Клебсиелла
1,0±0,01
2,10±0,1
14 Грибы ряда Кандида
2,15±0,1
4,11±0,3
Таблица 1.
Характеристика микрофлоры ротовой жидкости у де
-
тей с расщелиной верхней губы и неба (lg М±m КОЕ/мл)
42
Stomatologiya
смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщи
-
пляется ферментом, и его продукты деградации вызы
-
вают химическую модификацию хромогена, при этом
хромоген меняетсвой цвет – интенсивность окраски
прямо пропорциален количеству связавшихся молекул
антигена и антител.
Результаты исследования
Известно, что неотъемлемой частью микроэкоси
-
стемы полости рта является нормофлора. При этом,
микрофлора полости рта расматривается как первичная
мишень для любого фактора, который прямо или опо
-
средственно влияет на адгезию и колонизационную ре
-
зистентность резидентной, транзитарной и добавочной
микрофлоры. (8, 9)
При этом важнейшими экологическими детерми
-
нантами, вызывающие обитания в этом отделе пище
-
варительного тракта микробов, является состояние
зубочелюстной системы, пища, окислительно-востано
-
вительный потенциал, степень резистентности слизи
-
стых оболочек полости рта.
Исследование бактериальной колонизации в поло
-
сти рта у здоровых детей позволило установить, что
несмотря на значительный диапазон вариации, микро
-
флора детей, проживающих в условиях Узбекистана,
характеризуется относительным стабильным постоян
-
ством.
Нами также проведено изучение количественных и
качественных параметров микробов обитающих в по
-
Таблица 2.
Характеристика флоры поражен
-
ного участка у детей больных врожденной рас
-
щелиной губы и неба.
Рис.1.
Характеристика местных факторов защиты полости рта у детей больных с врожденной
расщелиной губы и неба: А) Норма Б) Больные
Таблица 3.
Показатели местных факторов за
-
щиты полости рта у детей с расщелиной верх
-
ней губы и неба.
лости рта, как у здоровых, так и больных детей стра
-
дающих врожденной расщелиной губы и неба. Полу
-
ченные данные при этих исследованиях приведены в
таблице 1. Из таблицы видно, что в норме у здоровых
детей микрофлора полости рта довольноразнообразна.
При этом в анаэробной группе микробов преоблада
-
ют лактобактерии их количество составило lg 4,75±0,3
КОЕ/мл.
Интересно отметить, что общее количество анаэро
-
бов и факультативной группы микробов у здоровых де
-
тей почти одинакова. В факультативной группе микро
-
бов доминирующее положение занимают стафилококки
и стрептококки, при этом среди стрептококков наиболь
-
шую картину составляют Str.Salivarius.
Наряду с этими исследованиями нами также про
-
ведены количественные и качественные исследования
микрофлоры ротовой жидкости у детей с врожденной
расщелиной верхней губы и неба до операции. Полу
-
ченные данные при этих исследованиях представлены
в таблице№1. Как видно из таблицы, в микроэкологии
полости рта у больных детей, до операции наблюдают
-
ся существенные сдвиги, как в анаэробных, так и в фа
-
культативной флоре. Так, в анаэробной флоре отмеча
-
ется их достоверное снижение, особенно это выражено
у лактобактерии, их количество составило lg 2,15±0,2
KOE/мл., это более чем на 2-порядка ниже контроль
-
ных данных.
В то же время, наиболее выраженные достоверные
сдвиги происходят в факультативной группе микро
-
бов. Так, среди грамположительной кокковой флоры
№ Выделенные группы
микробов
количество
%
встре
-
чаемо
-
сти
1
Str.pyogenes
7,60±0,5
90,0
2
Enterobacter
6,10±0,3
20,0
3
Staph.aureus
7,85±0,7
30,0
4
St.epidermidis
6,15±0,2
40,0
5
Грибы рода Candida
5,30±0,3
50,0
№
Показатели
Норма
У больных
до операции
1
Титр лизоцима,
мг %
19,80±0,60
10,1±0,2
2
Показатель
фагоцитоза, %
59,1±1,60
31,2±2,5
3
Уровень секре
-
торного имму
-
ноглобулина
(sIgA) г/л
2,0±0,30
0,9±0,01
43
детская стоматология
наглядно видно снижение количества Str.salivarius и
Str.mutans. Однако в кокковой флоре настораживает
другое, это появление роста штаммов золотистого ста
-
филококка, так как именно она имеет большой набор
ферментов патогенности, который видимо и будет опре
-
делять мониторинг состояния полости рта. Среди гра
-
мотрицательной флоры полости рта отмечено возрас
-
тание лактозонегативных штаммов эшерихии и протея.
Как и следовало ожидать, особенно достоверно высоко
высевались штаммы грибов рода Candida их количе
-
ство почти на 2-порядка выше нормы, и составила lg
4,11±0,3 КОЕ/мл.
Наряду с этими микробиологическими исследова
-
ниями, нами проведено исследование у одних и тех же
больных состояние флоры из участка расщелины. По
-
лученные данные приведены в таблице 2, из которой
видно, что здесь флора также разнообразна и выделя
-
ются как правило, чаще всего высеваются их ассоци
-
ации.
При этом среди грамположительной флоры наи
-
большие данные составляют штаммы патогенного
стафилококка которые составили lg 7,55±0,7 КОЕ/см2.
При анализе частоты встречаемости микробов, оказа
-
лось штаммы Str.pyogenes(90%), и самое низкое часто
-
ту составили штаммы Enterobacter(20%).
Таким образом, проведенные микробиологические
исследования у детей больных с врожденной расщели
-
ной губы и неба свидетельствуют, что у этих детей в
полости рта наблюдается синдром избыточного роста
микробов. При этом если у здоровых детей в полости
доминирующее положение занимают стрептококки и
лактобактерии, то у больных детей картина полностью
меняется и превалирующими штаммами у них стано
-
вятся грибы рода Candida и стафилококки.
Наряду с количественным и качественным анали
-
зами микроэкологии полости рта у детей больных с
врожденной расщелиной губы и неба, нами проведено
изучение состояния местных факторов защиты ротовой
полости. При этом в основном изучали титр лизоцима,
показатель фагоцитоза и уровень секретерного имму
-
ноглобулина класса А(sIgA). Полученные данные при
этих исследованиях представлены в рис. 1, таблица 3.
Из рисунка и таблицы видно, что у больных детей
с врожденной расщелиной губы и неба в полости рта
отмечается иммунодефицит по всем изучаемым пара
-
метрам. При этом титр лизоцима у этих больных со
-
ставил 10,1±0,2мг/%, показатель фагоцитоза составил
31,2±2,мг/5%, уровень секреторного иммуноглобулина
был равен 0,9±0,01г/л. Основываясь на этих цифрах
можно предположить, что среди всех изучаемых па
-
раметрах наибольший дефицит составляет показатель
фагоцитоза. По всей видимости, аномальный процесс,
т.е. врожденная расщелина губы и неба, оказывает им
-
мунодепрессивное действие, которая отражается на
местных факторах защиты полости рта. Вполне оче
-
видно, что снижение в целом всех показателей местных
факторов защиты, как клеточного, так и гуморального,
и приводит к синдрому избыточного роста микробов в
полости рта.
Таким образом, основываясь на полученных микро
-
биологических данных, где выявлено развитие дисбио
-
за, а также изучение местных факторов защиты, которая
показала достоверный иммунодефицит в полости рта у
больных детей страдающих расщелиной губы и неба,
позволяют рекомендовать хирургу стоматологу необхо
-
димость усиления роли предоперационной подготовки
этих больных, что, несомненно, позволит снизить ча
-
стоту послеоперационных осложнений у этих больных.
Выводы
У больных детей страдающих врожденной расщели
-
ной губы и неба в ротовой полости происходит разви
-
тие дисбиоза, характерной особенности которого явля
-
ется снижения анаэробной группы, а в факультативной
группе появляются рост патогенного стафилококка и
увеличения грамотрицательной флоры.
Изучения у этих же детей состояния местных фак
-
торов защиты, а именно: титр лизоцима, показатель
фагацитоза и уровень секреторного иммуноглобулина
класса А (sIgA), отмечено развитие иммунодефицита
по всем параметрам, но особенно резко снижено пока
-
затель фагоцитоза
Список литературы
1. В.В.Тец «Микроорганизмы и антибиотики»//
Учебное пособие, Санкт Петербург 2011г.
2. А.Е.Нестерова и др. «К вопросу об эффектив
-
ности применения материала «Биоосс» в комплекс
-
ном лечении больных с врожденной расщелиной губы и
неба»// Научный вестник 2010, стр. 32.
3. Азимов А.М. «Оптимизация заживления раны
при пластике врожденных дефектов неба у детей бак
-
териальными лизатами»// Автореферат, дисс. к.м.н.,
2007.
4. Дусмухамедов М.З. «Клинико-лабораторная
оценка состояния здоровья детей с врожденной рас
-
щелиной неба»// Российский стоматологический жур
-
нал. -2005. - № 5. - С. 30-33.
5. Фоменко И.В. «25 летний опыт комплексного
лечения детей с расщелиной губы и неба в условиях Вол
-
гограда/ Волгоград, ВолгГМУ, 2007.
6. N.M. Nakou «Periodontal condition and
microbiological profile of cleft lip and palate patients//
European Archives of Pediatric Dentistry of Congress,
2008
7. Антонов А.В. «Клиническая иммунология//
Учебное пособие, Москва, 1996.
8. Алиев Ш.Р. «Способ определения лизоцима в
слюне у пациентов// Рац.предложения, 1994
9. Правосудова Н.А. «Микробиология полости
рта»// Учебное пособие, Пенза 2013.
10. Царев В.Н. «Микробиология и иммунология по
-
лости рта»// Учебник, Москва 2016.
